一种保肝护肝的药物组合物及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种保肝护肝的药物组合物及其制备方法和用途，属药物领域。
【背景技术】
[0002] 乙型肝炎是目前世界上危害最为严重的传染性疾病之一，在我国有约1.2亿个无 症状携带者，在免疫力降低情况下容易转化为HBV慢性患者。HBV慢性感染可持续数十年，患 者肝组织反复损伤，进行性发展为肝硬化和肝癌。乙型肝炎肝损伤主要由免疫介导。在肝脏 局部，肝细胞受HBV感染后激活免疫系统，产生炎症与化学趋化因子，将炎症、淋巴细胞活化 并募集至肝脏，这些炎症和淋巴细胞的浸润如果导致过强的免疫反应，则最终引起肝组织 的损伤。因此，调节机体免疫反应和抑制肝脏炎症是乙型肝炎治疗的重要策略之一。
[0003] 目前，市场上治疗乙肝的药物众多，但其中疗效肯定，副作用小的药物却为数不 多。中药(藏药)在改善肝功能，抑制乙肝病毒的复制，调整患者的免疫功能，阻断和逆转肝 纤维化等方面显示出独特的疗效，通过其多成分、多靶点、多环节的整合调节作用解决慢性 复杂多因素疾病的治疗问题具有主要由单体成分构成的西药无法比拟的优势。波棱瓜子是 藏药中治疗肝病的首选药物之一，在治疗肝病的过程中得到了广泛的应用。因此对藏药波 棱瓜子的开发应用，也为治疗乙型肝炎提供了新的可能。
[0004] 据报道，波棱瓜子用于抗肝损伤的有效部位包括:波棱瓜子脂肪油、波棱瓜子氯仿 提取物、水提取物以及乙酸乙酯提取物等;用于抗肝损伤的化合物包括:波棱素、木脂素、多 糖等。申请号:200610073116.3，发明名称:波棱瓜子提取物、其滴丸剂及制备方法和应用公 开了一种用于抗肝炎病毒的波棱瓜子提取物。
[0005] 目前，将波棱瓜子抗肝损伤有效部位在不同剂量下配伍使用尚未见报道，因此通 过波棱瓜子有效物质基础的最优组合，增强其疗效，扩大临床应用，为临床治疗肝损伤开发 新的药物具有十分重要的意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的技术方案在于提供一种保肝护肝的药物组合物及其制备方法和用途。
[0007] 本发明提供了一种保肝护肝的药物组合物，它包含下述重量配比的原料制备而 成的制剂：
[0008] 波棱瓜子脂肪油1份、波棱瓜子乙酸乙酯提取物0.5-2份；
[0009] 其中，采用气相色谱-质谱(GC-MS)分析法对藏药波棱瓜子脂肪油成分进行分析， 得到波棱瓜子脂肪油中9，12，15_十八碳三烯酸（（亚麻酸）的质量百分含量不低于12.08%， 9,12-十八碳二烯酸(亚油酸）的质量百分含量不低于22.90%，9_十八碳烯酸(油酸)的质量 百分含量不低于29.00% ;
[0010]通过紫外分光光度法测定波棱瓜子乙酸乙酯提取物中总木脂素的质量百分含量 不低于45.5%。
[0011]优选地，所述的药物组合物包含下述重量配比的原料制备而成的制剂：
[0012]波棱瓜子脂肪油1份、波棱瓜子乙酸乙酯提取物0.5份。
[0013]其中，所述的药物组合物是由波棱瓜子脂肪油及乙酸乙酯提取物为活性成分，加 入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成的制剂。
[0014] 其中，所述制剂为散剂、口服液体剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、丸剂或滴 丸剂。
[0015] 本发明提供了制备所述药物组合物的方法，包括如下步骤：
[0016] a、脱脂:取波棱瓜子干燥品粉碎，加入石油醚，在60_90°C下水浴回流，离心，减压 回收石油醚得脂肪油；
[0017] b、水浴加热回流提取:将上述脱脂后的残渣挥干后，加入95%v/v乙醇，加热回流， 冷却，收集提取液，离心，取上清液减压浓缩，得浸膏；
[0018] c、再脱脂:步骤b的浸膏分层后将上层绿色油状物弃去，洗涤下层黄色固体；
[0019] d、萃取:脱脂后的黄色固体经水分散后用乙酸乙酯萃取至上层萃取液呈无色，合 并多次萃取液，干燥，即得波棱瓜子乙酸乙酯提取物；
[0020] e、取步骤a的脂肪油与步骤d的乙酸乙酯提取物混合，加入药学上可接受的辅料或 辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
[0021] 其中，步骤a中，波棱瓜子与石油醚的料液比为1:8,提取两次，每次提取时间分别 为2h、1.5h，水浴回流温度为80°C;
[0022] 步骤b中，依次加入10、8、6倍量95% v/v乙醇，提取三次，每次提取时间分别为2h、 1.5h、l .5h，合并提取液，3000-4000r/min离心5min，减压浓缩至Iml浓缩药液相当于Ig原料 药，水浴回流温度为78°C;
[0023] 步骤c中，加入石油醚离心洗涤下层黄色固体至石油醚呈无色；
[0024] 步骤d中，用乙酸乙酯萃取3~6次。
[0025] 优选地，步骤b中，离心转速为3500r/min。
[0026] 本发明还提供了所述药物组合物在制备保肝护肝的药物中的用途。
[0027] 其中，所述的药物是治疗免疫性肝损伤的药物。
[0028] 其中，所述的药物是保肝降酶的药物。
[0029] 其中，所述的药物是清除自由基、抗氧化、抗炎的药物。
[0030] 本发明药物组合物由波棱瓜子脂肪油及乙酸乙酯提取物按照特定配比组成，两种 原料药协同增效，显著提高了保肝护肝药效，能够有效治疗免疫性肝损伤，起保肝降酶、清 除自由基、抗氧化、抗炎的作用。本发明药物组合物抗肝损伤疗效优于单一组分用药，符合 中药多成分、多靶点的特性，为临床保肝护肝提供了一种高效、价廉、方便、安全的新药物， 具有广阔的市场前景。
【附图说明】
[0031] 图1各组小鼠肝组织HE染色病理切片
[0032] 图中：A:空白组B:模型组C:阳性对照组D脂肪油组E:乙酸乙酯组F:组分配伍1:1组 G:组分配伍1:2组H:组分配伍2:1组
[0033]以下通过【具体实施方式】对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领 域技术人员根据本发明作出的各种改变和替换，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发 明所附权利要求的范围。
【具体实施方式】
[0034]实施例1本发明药物组合物的制备
[0035] a、脱脂:取波棱瓜子干燥品粉碎，加入8倍量石油醚，在80°C下水浴回流2h、1.5h， 冷却，离心，减压回收石油醚得脂肪油。其提取率约为35.0%。
[0036] b、水浴加热回流提取:将上述脱脂后的波棱瓜子残渣挥干后，依次加入10、8、6倍 量95 % v/v乙醇，78°C下水浴回流各提取2h、1.5h、1.5h，冷却，收集合并3次提取液，3500r/ min离心5min，收集上层清液，将上清液减压浓缩至每1ml药液相当于Ig原料药。
[0037] c、再脱脂：浸膏分层后将上层绿色油状物弃去，用石油醚离心洗涤下层黄色固体 至石油醚无色。
[0038] d、萃取:脱脂后的黄色固体水分散后用乙酸乙酯进行萃取，萃取3~6次，合并多次 萃取液，干燥即得波棱瓜子乙酸乙酯提取物。计算其提取率约为1.25%。
[0039] e、取步骤a的脂肪油和步骤d的乙酸乙酯提取物按照2:1混合，即得。
[0040]实施例2本发明药物组合物的制备
[00411 a、脱脂:取波棱瓜子干燥品粉碎，加入8倍量石油醚，在60°C下水浴回流2h、1.5h， 冷却，离心，减压回收石油醚得脂肪油。其提取率约为35.0%。
[0042] b、水浴加热回流提取:将上述脱脂后的波棱瓜子残渣挥干后，依次加入10、8、6倍 量95 % v/v乙醇，78°C下水浴回流各提取2h、1.5h、1.5h，冷却，收集合并3次提取液，3000r/ min离心5min，收集上层清液，将上清液减压浓缩至每1ml药液相当于Ig原料药。
[0043] c、再脱脂：浸膏分层后将上层绿色油状物弃去，用石油醚离心洗涤下层黄色固体 至石油醚无色。
[0044] d、萃取:脱脂后的黄色固体水分散后用乙酸乙酯进行萃取，萃取3~6次，合并多次 萃取液，干燥即得波棱瓜子乙酸乙酯提取物。计算其提取率约为1.25%。
[0045] e、取步骤a的脂肪油和步骤d的乙酸乙酯提取物按照1:1混合，即得。
[0046]实施例3本发明药物组合物的制备
[0047] a、脱脂:取波棱瓜子干燥品粉碎，加入8倍量石油醚，在90°C下水浴回流2h、1.5h， 冷却，离心，减压回收石油醚得脂肪油。其提取率约为35.0%。
[0048] b、水浴加热回流提取:将上述脱脂后的波棱瓜子残渣挥干后，依次加入10、8、6倍 量95 % v/v乙醇，78°C下水浴回流各提取2h、1.5h、1.5h，冷却，收集合并3次提取液，4000r/ min离心5min，收集上层清液，将上清液减压浓缩至每1ml药液相当于Ig原料药。
[0049] c、再脱脂：浸膏分层后将上层绿色油状物弃去，用石油醚离心洗涤下层黄色固体 至石油醚无色。
[0050] d、萃取:脱脂后的黄色固体水分散后用乙酸乙酯进行萃取，萃取3~6次，合并多次 萃取液，干燥即得波棱瓜子乙酸乙酯提取物。计算其提取率约为1.25%。
[0051] e、取步骤a的脂肪油和步骤d的乙酸乙酯提取物按照1:2混合，即得。
[0052]以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。
[0053]实验例1波棱瓜子有效组分配伍对ConA致免疫性肝损伤小鼠肝脏的保护作用的药 效学实验
[0054] 1.实验药品及试剂
[0055] 波棱瓜子脂肪油：由实验例1制备，给药组剂量(按小鼠体重给药)为7ml/kg，相当 于生药量的20g/kg;
[0056] 波棱瓜子乙酸乙酯提取物：由实验例1制备，给药组剂量（按小鼠体重给药）为 0.35g/kg,相当于生药量的28g/kg;
[0057] 其中，Iml波棱瓜子脂肪油的质量为0.05g。
[0058] 波棱瓜子脂肪油与乙酸乙酯提取物不同配伍比例:波棱瓜子HSO与HE有效组分配 伍1:1组(简称组分配伍1:1组），HS0给药剂量为3.5ml/kg，HE给药剂量为0.175g/kg;波棱瓜 子HSO与HE有效组分配伍1: 2组（简称组分配伍1:2组），HS0给药剂量为2.345ml/kg，HE给药 剂量为0.233g/kg;波棱瓜子HSO与HE有效组分配伍2:1组(简称组分配伍2:1组），HS0给药剂 量为4.655ml/kg，HE给药剂量为0.116g/kg;各给药组均在同等剂量下给药。
[0059] 上述乙酸乙酯提取物用0.5%CMC_Na溶液混悬配制备用；
[0060]联苯双酯滴丸，由浙江医药股份有限公司万邦德制药厂提供；
[0061 ] 刀豆球蛋白A(ConA)，购自美国Sigma公司；
[0062]丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶（AST)、超氧化物歧化酶（Τ'-sod) 、 丙二醛 (MDA) 、 总蛋白 （TP) 、 一氧化氮 (NO) 试剂盒 ，均购由 南京建成生物工程研究所提 供；
[0063]无菌磷酸缓冲液(PBS)，由Bioroc公司提供。
[0064] 2.实验方法