[0065] 80只健康雄性昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、联苯双酯（阳性对照)组、波棱 瓜子乙酸乙酯提取物、脂肪油及组分配伍1:1、组分配伍1:2、组分配伍2:1组，每组10只。 [0066]波棱瓜子各给药组小鼠每天分别按体重ig波棱瓜子HS0(7ml/kg)、HE(0.35g/kg)、 组分配伍I: I (HS03 · 5ml/kg+HEO · 18g/kg)、组分配伍1:2(HS02 · 35ml/kg+HEO · 23g/kg)、组分 配伍2: l(HS04.66ml/kg+HE0.12g/kg);阳性对照组小鼠 ig0.2g/kg联苯双酯；联苯双酯及乙 酸乙酯各剂量组均用0.5 % CMC-Na溶液混悬和溶解；正常组与模型组小鼠 i g2OmL/kg的 0.5 % CMC-Na溶液;连续ig8d，采用一次性尾静脉注射ConA建立免疫性肝损伤小鼠模型：末 次给药（已禁食9h)lh后，除正常组外，其余小鼠尾静脉注射30mg/kg ConA13Sh后，称量小鼠 体重，摘眼球取血，分离血清，检测ALT、AST、N0各项指标;眼球取血后立即处死小鼠并剖取 肝脏、脾脏，滤纸檫试，称重，计算肝脏、脾脏脏器指数(脏器重量/体重X 100%);剪取部分 肝脏组织，用冷生理盐水制成10%的肝匀浆，离心，取上清液，检测TP、S0D、MDA各项指标;剪 取各组小鼠的肝脏相同部位肝组织(肝左叶），10%甲醛(PBS配制）固定，HE染色，光镜下观 察肝组织损伤程度。
[0067]统计学处理:所得数据均采用± s表示，用SPSS17.0软件进行方差分析及独立样本 T检验，肝脏组织的炎性坏死程度根据等级分组评分后，采用Riditu检验进行统计学处理。P <0.05或P〈0.01认为有显著性差异。
[0068] 3.实验结果
[0069] 1)波棱瓜子有效组分配伍对脏器指数的影响，实验结果见表1。
[0070] 表1波棱瓜有效组分配伍对免疫性肝损伤小鼠脏器指数的影响（土S，n = 10)
[0072] 与模型组相比 **P<〇 · 01 ;*P<〇 · 05
[0073] 表1结果显示，与空白对照组相比，模型组小鼠的肝脏、脾脏指数显著升高（P< 0.01 )，提示造模成功;与模型组相比，波棱瓜子各给药组均能显著降低小鼠肝脾脏器指数， 其中组分配伍2:1组两种原料药协同增效，与模型组相比具有极显著差异。由以上结果可 得:波棱瓜子各给药组均能减轻免疫性肝损伤小鼠肝脏水肿程度，以组分配伍2:1组药效最 佳。
[0074] 2)波棱瓜子有效组分配伍对血清中ALT、AST、LDH含量的影响，结果见表2。
[0075]表2波棱瓜子有效组分配伍对免疫性肝损伤小鼠血清中酶活性及NO含量的影响 (.1 士 s，n=l.〇)
[0077] 与模型组相比 #P<〇 · 01 ;*P<〇 · 05
[0078] 表2结果显示，模型组小鼠血清中ALT、AST及NO含量较正常组明显升高(P<0.01)， 说明造模成功。波棱瓜子各给药组小鼠血清中ALT、AST及NO含量与模型组相比均显著性降 低（Ρ<0·01，Ρ<0·05)。
[0079] 由以上结果可得:波棱瓜子各给药组均能显著降低免疫性肝损伤小鼠血清中转氨 酶活性及NO含量，其中配伍2:1组两种原料药协同增效，药效最佳，说明有效组分按2:1配伍 时不仅对小鼠起到了保肝降酶的作用，并且在肝发生病变时能迅速调节免疫，减少炎症介 质等毒害物质的释放，从而减轻肝脏炎性细胞的浸润。
[0080] 3)波棱瓜子有效组分配伍对肝脏匀浆中S0D、MDA含量的影响，结果见表3。
[0081 ]表3波棱瓜子有效组分配伍对免疫性肝损伤小鼠肝脏匀浆中S0D、MDA含量的影响 (I 士ssn=lQ):
[0083] 与模型组相比 **P<〇 · 01 ;*P<〇 · 05
[0084] 表3结果显示，模型组小鼠肝脏匀浆中SOD活性较正常组显著降低(P<0.01);MDA 含量较正常组显著升高(p<0.01)，说明造模成功。波棱瓜子各治疗组均能显著升高免疫性 肝损伤小鼠小鼠肝脏匀浆SOD活性，降低小鼠肝脏匀浆中MDA含量(P<0.01，P<0.05)。
[0085] 由以上结果可得:波棱瓜子乙酸乙酯提取物，脂肪油及各配伍组能显著提高免疫 性肝损伤小鼠体内SOD水平，并降低MDA含量，具有清除氧自由基、增强机体抗氧化的能力， 从而保护肝细胞生物膜，避免或减少肝细胞核固缩或崩解，其中，组分配伍2:1组两种原料 药协同增效，药效最佳，甚至比联苯双酯更好。
[0086] 4)波棱瓜子有效组分配伍对肝脏组织病理学变化的影响
[0087]正常组:光镜下小鼠肝组织结构完整，肝细胞以中央静脉为中心向四周呈条索状、 放射状整齐排列，肝小叶结构完整，肝细胞分界清，大小较一致，核1-2个，呈圆形、类圆形， 位于细胞中央，胞质丰富，肝窦排列规则，汇管区清晰。
[0088] 模型组：小鼠肝组织结构完整，肝窦扩张充血，肝细胞胞质内有空泡状的物质，将 肝细胞的细胞核挤压到细胞一侧;肝细胞结构不清晰，细胞核浓缩深染，胞浆分界不清，呈 蛋白样的均质红染。
[0089] 阳性药组:小鼠肝组织结构完整，病变主要以肝细胞水肿、炎性浸润与脂肪变性为 主，肝细胞损伤程度较模型组明显减轻。
[0090] 组分配伍2:1组：小鼠病变基本同阳性药组，肝细胞水肿与炎性浸润较阳性药组 轻。
[0091]乙酸乙酯提取物、脂肪油、组分配伍1:1、1:2组:小鼠病变主要以肝细胞水肿、炎性 浸润与脂肪变性为主，程度明显较2:1配伍组重。肝脏组织病理切片见图1。
[0092] 8组小鼠肝脏组织的炎性坏死程度根据等级分组评分后，采用Riditu检验进行统 计学处理，模型组与空白组、阳性对照组及波棱瓜子多糖给药组比较，均有显著差异。结果 见表5。
[0093]表5波棱瓜子有效组分配伍对免疫性肝损伤小鼠肝细胞水肿(炎细胞浸润)分级的 影响(η = 10)
[0095] 与模型组相比 #Ρ<〇 · 01 ;*Ρ<〇 · 05
[0096] 表6波棱瓜子有效组分配伍对免疫性肝损伤小鼠脂肪变性分级的影响(η = 10)
[0098] 与模型组相比 #Ρ<〇 · 01 ;*Ρ<〇 · 05
[0099] 由以上结果可得:模型组肝脏病变同空白组比较在肝细胞水肿、炎性浸润及脂肪 变性两类病变上有显著性差异，提示造模成功，波棱瓜子脂肪油及乙酸乙酯提取物各剂量 能不同程度的改善免疫性肝损伤小鼠肝组织病理学改变，其中，组分配伍2:1组小鼠肝脏肝 细胞水肿、炎性浸润程度比阳性药组小鼠较轻;脂肪变性与阳性药组小鼠相当。
[0100] 综上，波棱瓜子脂肪油及乙酸乙酯提取物均具有清除自由基、抗氧化、抗炎以及保 肝降酶的活性，对免疫性肝损伤小鼠有显著的疗效，其中，组分配伍2:1时药效最佳。
[0101] 本发明药物组合物由波棱瓜子脂肪油及乙酸乙酯提取物按照特定配比组成，两种 原料药协同增效，显著提高了保肝护肝药效，能够有效治疗免疫性肝损伤，起保肝降酶、清 除自由基、抗氧化、抗炎的作用。本发明药物组合物抗肝损伤疗效优于单一组分用药，符合 中药多成分、多靶点的特性，为临床保肝护肝提供了一种高效、价廉、方便、安全的新药物， 具有广阔的市场前景。
【主权项】
1. 一种保肝护肝的药物组合物，其特征在于：它包含下述重量配比的原料制备而成的 制剂： 波棱瓜子脂肪油1份、波棱瓜子乙酸乙酯提取物0.5-2份； 其中，波棱瓜子脂肪油中9,12,15-十八碳三烯酸的质量百分含量不低于12.08%，9， 12-十八碳二烯酸的质量百分含量不低于22.90%，9_十八碳烯酸的质量百分含量不低于 29.00% ； 其中，波棱瓜子乙酸乙酯提取物中总木脂素的质量百分含量不低于45.5%。2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于:它包含下述重量配比的原料制备而 成的制剂： 波棱瓜子脂肪油1份、波棱瓜子乙酸乙酯提取物〇. 5份。3. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于：它是由波棱瓜子脂肪油及乙酸 乙酯提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成的制剂。4. 根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于:所述制剂为散剂、口服液体剂、颗粒 剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、丸剂或滴丸剂。5. 制备权利要求1-4任意一项所述的药物组合物的方法，其特征在于:包括如下步骤： a、 脱脂:取波棱瓜子干燥品粉碎，加入石油醚，在60-90°C下水浴回流，离心，减压回收 石油醚得脂肪油； b、 水浴加热回流提取：将上述脱脂后的残渣挥干后，加入95%v/v乙醇，加热回流，冷 却，收集提取液，离心，取上清液减压浓缩，得浸膏； c、 再脱脂:步骤b的浸膏分层后将上层绿色油状物弃去，洗涤下层黄色固体； d、 萃取:脱脂后的黄色固体经水分散后用乙酸乙酯萃取至上层萃取液呈无色，合并多 次萃取液，干燥，即得波棱瓜子乙酸乙酯提取物； e、 取步骤a的脂肪油与步骤d的乙酸乙酯提取物混合，加入药学上可接受的辅料或辅助 性成分制备成药学上常用的制剂。6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于： 步骤a中，波棱瓜子与石油醚的料液比为1:8,提取两次，每次提取时间分别为2h、1.5h， 水浴回流温度为80°C; 步骤b中，依次加入10、8、6倍量95%v/v乙醇，提取三次，每次提取时间分别为2h、1.5h、 1.5h，合并提取液，3000-4000r/min离心5min，减压浓缩至lml浓缩药液相当于lg原料药，水 浴回流温度为78°C; 步骤c中，加入石油醚离心洗涤下层黄色固体至石油醚呈无色； 步骤d中，用乙酸乙酯萃取3~6次。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于:步骤b中，离心转速为3500r/min。8. 权利要求1-4任意一项所述的药物组合物在制备保肝护肝的药物中的用途。9. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于:所述的药物是治疗免疫性肝损伤的药物。10. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于:所述的药物是保肝降酶、清除自由基、抗 氧化、抗炎的药物。
【专利摘要】本发明提供了一种保肝护肝的药物组合物，它包含下述重量配比的原料制备而成的制剂：波棱瓜子脂肪油1份、波棱瓜子乙酸乙酯提取物0.5-2份。本发明还提供了所述药物组合物的制备方法和用途。本发明药物组合物由波棱瓜子脂肪油及乙酸乙酯提取物按照特定配比组成，两种原料药协同增效，显著提高了保肝护肝药效，能够有效治疗免疫性肝损伤，起保肝降酶、清除自由基、抗氧化、抗炎的作用。本发明药物组合物抗肝损伤疗效优于单一组分用药，符合中药多成分、多靶点的特性，为临床保肝护肝提供了一种高效、价廉、方便、安全的新药物，具有广阔的市场前景。
【IPC分类】A61P29/00, A61P1/16, A61P39/06, A61K36/42
【公开号】CN105434503
【申请号】CN201511028451
【发明人】张梅, 刘美琳, 李杨, 董佳悦, 安太勇
【申请人】成都中医药大学
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月31日