重组creg蛋白抑制高血压血管重塑的医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及E1A激活基因阻遏子（CREG)蛋白的医药用途，具体涉及CREG蛋白用 于制备对高血压和/或高血压性血管重塑具有明确抑制作用的药物的用途。本发明还涉及 表达CREG蛋白的重组载体或重组细胞在制备用于预防和/或治疗高血压和/或高血压性 血管重塑的药物中的用途。本发明还涉及含有CREG蛋白、表达CREG蛋白的重组载体或重 组细胞、或者能够抑制CREG蛋白表达下调的制剂的组合物，以及含有检测CREG蛋白表达水 平的试剂的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 高血压病以动脉血压升高为特征，是危害人类健康的主要疾病之一，我国人群目 前的患病率高达18. 8%，知晓率为30. 6%，治疗率为24. 7%，但平均控制率仅为6. 1%。高 血压血管重塑是指长期高血压环境下动脉血管结构和功能的适应性改变，是高血压病的一 种显著性病理特征，也是导致高血压许多机体并发症如动脉粥样硬化，脑卒中及心、肾功 能衰竭的主要原因之一。近年来的研究发现，细胞外基质（extracellularmatrix,ECM) 合成增加是血管重塑过程中的关键环节，有充足的证据表明，血管平滑肌细胞（vascular smoothmusclecells，VSMCs)和其他血管壁细胞（如血管外膜成纤维细胞，adventitial fibr〇blastS，AFS等）均参与其中。但遗憾的是，迄今为止，血管重塑形成机制尚不明确，目 前的研究成果还没有形成有效的药物和器械以防止血管重塑的发生。
[0003] 肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensinsystem,RAS)是肾脏和心血管功 能的主要调节系统，包括血管紧张素（angiotensin，Ang)I、AngII、AngIII、AngIV、 Angl-7、血管紧张素转换酶（angiotensinconvertingenzyme,ACE)以及ACE2 等多种成 分。AngII作为RAS中重要的因子，可通过内分泌、旁分泌和自分泌等方式发挥其多重性生 物功能，如诱导炎症反应、影响细胞增殖及迁移、促进ECM合成等。ACE2是2000年通过克隆 技术新发现的与人类ACE相关的羧肽酶，可以降解AngII产生具有血管舒张活性和抗增生 作用的Angl-7,提供一个与AngII抗衡的系统，ACE2高表达于血管内皮细胞，但在产生ECM 的关键细胞VSMCs和心脏成纤维细胞也有表达。
[0004]E1A激活基因阻遏子（cellularrepressorofElA-stimulatedgenes，CREG)是 一个1998年发现的参与维持组织及细胞成熟分化稳态的重要调控因子（VealE，MolCell Biol, 1998 ;18(9) :5032-5041)。但目前尚没有CREG蛋白用于治疗高血压或抑制高血压血 管重塑的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明通过大量实验证明，外源性AngII诱导VSMCs中CREG基因表达下调，CREG 基因表达下调加重AngII诱导的血压升高和血管重塑，CREG基因过表达可通过上调ACE2 表达对抗AngII诱发的血压升高和血管重塑，外源性CREG蛋白可对抗AngII诱导的血压 升高和血管重塑，由此完成了本发明。
[0006] 本发明第一方面涉及E1A激活基因阻遏子（CREG)蛋白在制备用于预防和/或治 疗高血压和/或高血压性血管重塑的药物中的用途。
[0007] 本发明第二方面涉及表达CREG蛋白的重组载体或重组细胞在制备用于预防和/ 或治疗高血压和/或高血压性血管重塑的药物中的用途；其中所述重组细胞含有表达CREG 蛋白的重组载体，所述重组载体含有编码CREG蛋白的核苷酸序列。
[0008] 根据本发明第二方面任一项的用途，其中所述的重组载体为重组腺病毒载体。
[0009] 在本发明的实施方案中，在本发明的实施方案中，其中所述的重组腺病毒载体为 人腺病毒5型Ad5-CREG，其于2008年1月2日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC，武 汉，武汉大学），保藏号为CCTCC一V200801。该保藏信息已在中国专利CN101475961A中 公开。
[0010] 本发明还涉及能够抑制CREG蛋白表达下调的制剂在制备用于预防和/或治疗高 血压和/或高血压性血管重塑的药物中的用途。
[0011] 在本发明中，所述能够抑制CREG蛋白表达下调的制剂例如包括能够和下调CREG 蛋白表达水平的制剂结合以抑制该制剂功能的制剂。在本发明的实施方案中，所述能够抑 制CREG蛋白表达下调的制剂例如为能够和AngII结合以抑制AngII功能的制剂。
[0012] 本发明还涉及检测CREG蛋白表达水平的试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂 盒用于诊断高血压和/或高血压性血管重塑。
[0013] 本发明还涉及组合物，其含有CREG蛋白、表达CREG蛋白的重组载体或重组细胞、 或者能够抑制CREG蛋白表达下调的制剂，以及任选的药学上可接受的载体或赋形剂，所述 组合物用于预防和/或治疗高血压和/或高血压性血管重塑；其中所述重组细胞含有表达 ACE2蛋白的重组载体，所述重组载体（例如重组腺病毒载体）含有编码ACE2蛋白的核苷酸 序列。
[0014] 本发明还涉及试剂盒，其含有检测CREG蛋白表达水平的试剂，所述试剂盒用于诊 断高血压和/或高血压性血管重塑。
[0015] 本发明还涉及血管紧张素II用于下调组织/细胞（离体的或在体的）中CREG蛋 白表达水平的用途。
[0016] 本发明还涉及CREG蛋白用于上调组织/细胞（离体的或在体的）中血管紧张素 转化酶2表达水平的用途。
[0017] 在本发明中，所述CREG蛋白（即人E1A激活基因阻遏子蛋白，cellularrepressor ofElA-stimulatedgene)既包括具有完整序列的CREG蛋白，也包括具有CREG蛋白功能的 只含有部分序列的CREG蛋白。
[0018] 在本发明的实施方案中，所述CREG蛋白的GenBank号为NP_003842. 1。在本发明 的实施方案中，所述CREG基因的GenBank号为NM_003581. 2。
[0019] 在本发明的实施方案中，其中所述的重组腺病毒载体为人腺病毒5型Ad5 -CREG， 其于2008年1月2日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC，武汉，武汉大学），保藏号 为CCTCC-V200801。该保藏信息已在中国专利CN101475961A中公开。
[0020] 在本发明中，所述高血压是指收缩压彡140mmHg，和/或舒张压彡90mmHg。
[0021 ] 在本发明中，所述高血压性血管重塑是指长期高血压环境下动脉血管结构和功能 的适应性改变，主要表现为血管平滑肌细胞增生、肥大，中膜增厚、胶原沉积、顺应性下降， 是高血压病的一种显著性病理特征。
[0022] 在本发明中，所述预防和/或治疗高血压性血管重塑是指抑制或减缓高血压性血 管重塑的发生、抑制或减缓高血压性血管重塑的进展、和/或逆转高血压性血管重塑的病 理改变。
[0023] 在本发明的实施方案中，其中所述高血压和/或高血压性血管重塑是指血管紧张 素II(AngII)诱导的或者和AngII相关的高血压和/或高血压性血管重塑。
[0024] 在本发明中，所述载体例如为原核表达载体、真核表达载体、噬菌体载体或病 毒载体。其中所述原核表达载体例如为PET载体、PGEX载体，所述真核表达载体例如为 pcDNA3.1、pEGFP-Cl、pPIC9K，所述噬菌体载体例如为λ噬菌体载体λgt、λgt-λB，所述 病毒载体例如为逆转录病毒、慢病毒、腺病毒或腺相关病毒载体。
[0025] 在本发明的实施方案中，其中所述的重组载体为重组腺病毒载体。
[0026] 在本发明的实施方案中，所述重组腺病毒载体为Ad-CREG-GFP。
[0027] 在本发明中，所述细胞可以为原核细胞或真核细胞。所述真核细胞例如为哺乳动 物细胞。所述细胞可以通过向原核细胞或真核细胞中引入重组载体而得到。
[0028] 在本发明中，所述原核细胞例如可以为大肠杆菌DH5a、JM109、ToplO等，所述真 核细胞例如可以为CH0细胞、293T细胞、血管平滑肌细胞等，所述哺乳动物例如可以为大 鼠、小鼠、犬、小型猪、猴、人等。
[0029] 在本发明中，可以利用本领域所知的任何种类的转染方法获得转染有特定核酸或 载体的宿主细胞，例如，可通过电穿孔或显微注射将核酸引入细胞中；或者，可使用脂转染 试剂如FuGENE6、X_tremeGENE和LipofectAmine;或者，可通过基于逆转录病毒、慢病毒、腺 病毒和腺相关病毒的适当病毒病毒载体将核酸引入细胞中。
[0030] 在本发明中，可以通过本领域公知的方法检测CREG蛋白的表达水平，例如通过扩 增CREG蛋白的mRNA并进行定量或者Western blot来检测CREG蛋白的表达水平。
[0031] 在本发明中，所述蛋白的表达水平是指mRNA的水平或者蛋白的水平。
[0032] 在本发明中，所述上调/下调组织/细胞中蛋白的表达是指提高或降低组织/细 胞中蛋白质水平或mRNA水平的至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%， 或者提高大于100%。其中所述的上调或下调是与未干预的组织/细胞例如转染对照载体 组的组织/细胞进行比较。
【附图说明】
[0033] 图1.AngII诱导小鼠血压升高和血管重塑，同时下调血管壁中CREG表达.
[0034] ⑷应用微渗透泵给予小鼠AngII(1. 5mgAkg·(!))刺激14d，导致小鼠血压明显 升高，血管壁增厚明显。左图为给予小鼠AngII刺激0(1、3(1、7(1、10(1、12(1和14(1后血压变化 情况。右图为未给予AngII处理和给予AngII处理14d后小鼠主动脉血管HE染