复合带鱼四肽颗粒及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种纳米磁性Fe3〇4复合带鱼四肽颗粒及其制备方法，属于药物领域。【背景技术】
[0002]纳米技术(Nanotechnology)是21世纪的新兴技术。随着纳米技术的快速发展，纳 米材料因其独特性质在光学、磁学、化妆品、催化、制药和医学等领域中的应用日益增多，纳 米材料为包括肿瘤在内的多种疾病的诊治提供了崭新的解决途径和借鉴价值。而磁性纳米 颗粒因其生物相容性以及较强的磁响应性等优异的性能被广泛地应用于药物缓释、生物医 学等领域。在磁性纳米颗粒中，由于Fe304具有低毒性、超顺磁性、制备方法多样、形貌多样以 及易于修饰改性等许多优点，使得其被广泛地应用于磁共振成像以及药物释放等生物医学 领域。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种具有超顺磁性且分布均 勾的纳米磁性Fe3〇4复合带鱼四肽颗粒；
[0004]本发明的另一目的是提供上述纳米磁性Fe304复合带鱼四肽颗粒的制备方法；
[0005]本发明的又一目的是提供上述纳米磁性Fe304复合带鱼四肽颗粒的应用。
[0006]本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：
[0007] -种纳米磁性Fe3〇4复合带鱼四肽颗粒的制备方法，以磁性的Fe3〇4颗粒和带鱼四 肽为的原料，将带鱼四肽氨基化修饰后，再与磁性的Fe304颗粒混合，负载于磁性的Fe304颗 粒表面。
[0008] 带鱼四肽的氨基酸序列为:Gln-Ala-Glu-Gly。带鱼四肽的编码基因如序列表中序 列1所示，抗菌带鱼四肽如序列表中序列2所示。
[0009]作为优选方案，上述的纳米磁性Fe3〇4复合带鱼四肽颗粒的制备方法，包括如下步 骤：
[0010] 1)带鱼四肽的氨基化修饰
[0011] 将带鱼四肽溶于无水乙醇中，得到表面氨基化的四肽乙醇，用水稀释得到四肽乙 醇水溶液后备用；
[0012] 2)包覆
[0013]向步骤1)得到的四肽乙醇水溶液中边搅拌边滴入Fe3〇4磁性纳米颗粒溶液中，再在 磁力搅拌下反应2h后，纯化，即可。
[0014] 优选的，所述步骤1)中，带鱼四肽:无水乙醇为5mg:0.07ml;
[00巧]优选的，所述步骤1)中，稀释时，每5mg带鱼四肽形成的四肽乙醇用水稀释至50ml。 [0016] 优选的，所述步骤2)中，所述Fe3〇4磁性纳米颗粒溶液为浓度是40_50wt%的水溶液 或者乙醇溶液，进一步优选浓度是45wt%的乙醇溶液。
[0017]优选的，所述步骤2)中，所述四肽乙醇溶液与Fe304磁性纳米颗粒溶液之间的比例 关系为:每5mg带鱼四肽形成的四肽乙醇水溶液对应40mlFe3〇4磁性纳米颗粒溶液；
[0018] 优选的，所述步骤2)中，30min内，将步骤1)中得到的5mg带鱼四肽形成的四肽乙醇 水溶液逐滴滴入到40mlFe3〇4磁性纳米颗粒溶液中。
[0019]优选的，所述步骤2)中，所述磁力搅拌的转速为600rpm;
[0020] 优选的，所述步骤2)中，所述纯化过程为:将反应后物料以3000rpm离心40min，倒 掉上清液，加入蒸馏水，超声分散，重复3次。
[0021 ]上述方法制备的纳米磁性Fe3〇4复合带鱼四肽颗粒，以具有磁性的Fe3〇4纳米颗粒 为核心，表面包覆有带鱼四肽，颗粒粒径为15-25nm，呈边缘无定形的球形。
[0022]优选的，所述带鱼四肽与Fe304颗粒的质量比为1:1.5。
[0023]优选的，所述带鱼四肽的甲基、亚甲基、酮基与Fe304磁性纳米颗粒之间存在化学键 的结合。
[0024]-种纳米磁性Fe304复合带鱼四肽颗粒的应用，用于抑制癌细胞的生长；
[0025]优选的，所述的纳米磁性Fe3〇4复合带鱼四肽颗粒的应用，同时与交变磁场结合作 用于癌细胞；
[0026]进一步优选的，所述的纳米磁性Fe3〇4复合带鱼四肽颗粒使用pH范围是6.5~9。
[0027]本发明以具有磁性的纳米Fe3〇4颗粒为核心，负载经表面氨基化修饰以后具有抑制 肿瘤增殖作用的带鱼四肽，使该磁性纳米颗粒具有良好的水溶性、分散性和生物相容性，成 为比较理想的供药载体。所得产品磁性纳米带鱼铁肽颗粒具有超顺磁性、分散性更好，适合 于在生物体系中应用。当外加磁场达到±l〇〇〇〇〇e时，磁性纳米带鱼铁肽的磁化强度达到饱 和，达57.5emu·gd。具体参见以下实施例中的实验分析。
【附图说明】
[0028]图1是带鱼四肽的AFM照片；
[0029]图2是铁肽微粒(本发明磁性纳米带鱼铁肽的简要表述，以下同）的AFM照片；
[0030]图3是Fe304纳米颗粒、铁肽微粒的磁滞回线；
[0031]图4是流式细胞仪检测的CW-2细胞增殖周期图谱(空白对照）；
[0032]图5是流式细胞仪检测的非磁场条件下0.2yg/mL磁性纳米铁肽的作用下CW-2细 胞增殖周期图谱；
[0033]图6是流式细胞仪检测的交变磁场条件下0.2yg/mL磁性纳米铁肽的作用下CW-2 细胞增殖周期图谱。
【具体实施方式】
[0034]以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用 于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0035]实施例1:
[0036]为了说明本发明的实质，申请人进行了如下实验。
[0037] 1实验材料及设备
[0038]带鱼四肽:Gln-Ala-Glu-Gly，纯度在95%以上，Gln-Ala-Glu-Gly的编码基因如序 列表中序列1所示，抗菌带鱼四肽如序列表中序列2所示。；
[0039]Fe304磁性纳米颗粒:购于重庆威斯腾公司。
[0040] 2纳米带鱼铁肽微粒的制备
[0041] 取5mg的四肽溶解于0.07ml的无水乙醇中，得到表面氨基化的四肽乙醇，稀释至 50ml置于分液漏斗中，30min内逐滴滴入到搅拌的40mlFe3〇4磁性纳米颗粒溶液中，在磁力 搅拌中转速为600rpm搅拌反应2h，最后以3000rpm离心40min，倒掉上清液，加入蒸馏水，超 声分散，重复3次，纯化的纳米铁肽微粒分散在水中，4°C冷藏备用。
[0042] 3纳米带鱼铁肽的结构分析
[0043] 3.1原子力显微镜测试(AFM)
[0044]通过AFM测试每一层的高度成像（四维图）、相位图像、扫描图像，图1为带鱼四肽微 粒原子力显微镜测试结果，图2为带鱼四肽与Fe3〇4的混合比例均为1:1.5时的原子力显微镜 测试结果，由图可知带鱼四肽分布不均匀，颗粒感较强，样品较粗糙，而带鱼四肽与Fe3〇4微 粒则分布较均匀，而且很平坦，由于四肽的胶黏作用，Fe304与四肽形成了团聚，可以清楚的 观察到Fe3〇4_四肽纳米复合物颗粒大约15-25nm左右。
[0045] 3.2磁性能测量
[0046]用振动样品磁强计(VSM)在磁场范围-10k0e~10k0e内，于室温下测定了样品的 磁性。图3分别为Fe304纳米颗粒、纳米带鱼铁肽的磁滞回线。从图中可以看出，所制备样品的 磁滞回线与一般的磁性材料不同。一般磁性材料的磁滞回线通常是两条不重合的磁化曲 线，组成一个闭合的环形回