黄芪在制备促进IFN-γ分泌的药物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及黄巧的新用途，特别设及黄巧在制备具有促进IFN-T分泌的药物中的 应用。
【背景技术】
[0002] IFN-丫是一种具有高度生物学活性的糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多 方面的功能，使许多常规药物治疗无效的疾病或体质弱、免疫功能低下的病人使用IFN-T 治疗后，收到良好的治疗效果，越来越受到人们的广泛关注。由于外源性基因工程产品的半 衰期短，要达到治疗水平必须持续大剂量注射，由此会产生一系列的毒副作用直接利 用外源性的IFN-丫有很大的风险，而且进入血液中的IFN-丫很难通过各种屏障作用到达组 织细胞。因此增加机体内源性IFN-丫的含量具有更重要的意义。然而IFN-丫是诱生蛋白，正 常细胞一般不自发产生，只具有合成的潜能。
[0003] 有报道指出，电针刺激后被认为不合成IFN- 丫的神经细胞内IFN- 丫样免疫阳性反 应物质的表达显著提高。Wei在老龄小鼠脑MVECs内检测到了 IFN-丫 mRNA的表达。运些结果 为我们的研究提供了试验依据。但至今未见中药激活RIMVECs分泌IFN-丫的报道。因此，研 究诱导具有合成IFN-丫潜能的机体细胞产生IFN-丫的方法、寻找高效的中药刺激物、尤其 探寻能使MVECs分泌IFN- 丫的方法和药物，对相关疾病的防治具有十分重大的意义。
【发明内容】
[0004] 本发明设及黄巧的新用途，特别设及黄巧在制备具有促进IFN-T分泌的药物中的 应用。
[0005] 本发明目的是通过如下技术方案实现的：
[0006] 黄巧在制备促进IFN-丫分泌的药物的用途，所述的黄巧的制剂为:水煎液或含有 黄巧甲巧或/和黄巧多糖的制剂黄琴水煎液或含有黄巧甲巧或/和黄巧多糖的制剂。
[0007] 所述的水煎液的制备方法为:加入黄巧重量8-10倍量的水，浸泡，煎煮0.5~化，过 滤既得。
[000引加入黄巧重量10倍量的水，浸泡，煎煮化，过滤，除菌既得。
[0009] 所述的促进IFN- 丫分泌诱导是指通过所述的促进IFN- 丫分泌诱导是指丫诱导 RIMVECs产生IFN-丫。
[0010] 本发明的有益效果为：
[0011] 1、通过黄巧诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-丫的研究发现：当黄巧药液 浓度为25mg/L~3200mg/L时产生增殖效应，增殖率从30.81 %~49.53 %，与对照组相比，浓 度为25mg/L和3200mg/L时增殖效果显著(P<0.05)，当浓度在400mg/L时增殖效果最佳。 [00 12] 2、通过黄巧甲巧和黄琴多糖诱导RIMVECs分泌IFN-丫的研究发现:黄巧甲巧2扣g/ mL组和黄巧多糖25iig/mL组表现一致，在化、1化、2地时诱导RIMVECs分泌IFN- 丫量与空白对 照组相比较均有所增加，但化时诱导量差异不显著（P〉〇. 05)，1化时诱导量差异显著（P< 0.05)，24h时差异极显著(P<0.01);黄巧甲巧50yg/mL组与对照组比较在化和12h检测时能 显著诱导RIMVECs分泌IFN-丫（P<0.05)，在2地能极显著诱导RIMVECs分泌IFN-丫（P<0.01); 黄巧多糖50yg/mL组与对照组比较化和Mh检测时能显著诱导RIMVECs分泌IFN-丫（P< 0.05)，在1化能极显著诱导RIMVECs分泌IFN- 丫（P<0.0 l)。
【附图说明】
[0013] 图1为不同浓度黄巧药液对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-丫的影响（n = 5);
[0014] 图姻2黄巧甲巧对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-丫的影响(n = 5);
[001引图3为黄巧多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-丫的影响（n = 5);
【具体实施方式】
[0016] W下实验例和实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0017]实验例1:黄巧诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-丫的研究
[0018] 1、黄巧水煎液的制备:采用实施例4制成的样品。
[0019] 2、细胞分组与处理
[0020] MTT试验:试验分为试验组(黄巧水煎液处理RIMVECs，共设11个浓度梯度，各剂量 段设6个平行孔)和对照组(未经处理的RIMVECs，设6个平行孔）。细胞孔中加入含有黄巧药 液的的DMEM维持培养液，使其终浓度依次为25.6、12.8、6.4、3.2、1.6g/L、800、400、200、 100、50、25mg/L，对照组加入不含中药药液的维持培养基。
[0021] IFN- 丫检巧U:取生长至汇合状态的第二代RIMVECs，0.05 %膜蛋白酶-0.005 %邸TA 溶液消化吹打脱壁，调整密度为2X105cells/mL，接种于96孔板中，静置培养至80%汇合， 将培养基更换为DMEM维持培养基，解育过夜，吸弃维持培养基，加入含有黄巧药液的DMEM维 持培养液，使其终浓度依次为30、6、1、0.1111肖/111^空白对照组加入不含黄巧药液的维持培养 基，每组五孔重复。解育化、1化、2地后检测IFN- 丫。
[0022] 3、MTT法测定细胞增殖活性
[0023] 取经不同浓度黄巧处理2地的细胞孔，加入5mg/mL的MTT 2化L，继续培养地，各孔 加DMSOlO化L，室溫避光震荡IOmin，使结晶充分溶解后于酶标仪上测定490皿处每孔的吸光 度值。
[0024] 4、采样
[0025] 将细胞置于37°C、5%C02培养箱中继续培养，1化时采集细胞上清液。采集的样品 经3000r/min离屯、lOmin，将离屯、后的细胞上清液无菌分装于0.6mL的离屯、管中，置于-80°C 保存备用。
[00%] 5、IFN-丫的化ISA检测
[0027] IFN-丫的测定(双抗夹屯、化ISA法)严格按照试剂盒说明书进行操作，步骤简述如 下：
[00%] (1)将所有样品、标准品溶液和酶标板取出，恢复至室溫后，每孔加入10化L样品或 者标准品溶液，其中每一浓度的标准品溶液做2孔重复，最后另取2孔做空白显色孔，不加任 何样品或标准品溶液，加完后用封板胶纸封住酶标板，37°C溫箱解育90min。
[0029] (2)甩去酶标板内液体，用洗涂液浸洗4次。
[0030] (3)每孔加入10化L 37°C预热的生物素化抗体工作液，空白显色对照孔不加液体， 轻敲板壁混匀，用封板胶纸封住酶标板，37°C溫箱解育60min。
[0031 ] (4)甩去酶标板内液体，用洗涂液浸洗4次。
[0032] (5)每孔加入10化L 37°C预热的酶结合物工作液，空白显色对照孔不加液体，轻敲 板壁混匀，用封板胶纸封住酶标板，37°C溫箱解育30min。
[0033] (6)甩去酶标板内液体，用洗涂液浸洗4次。
[0034] (7)每孔加入100化37°C预热的显色剂，孔内液体立即转为蓝色，37°C避光反应 20min。
[0035] (8)每孔加入10化L 37°C预热的终止液，轻敲板壁混匀，孔内液体由蓝色转为黄 色。
[0036] (9)立即用酶标仪测定A450值。
[0037] (10)绘制标准曲线，计算各孔样品浓度值。
[0038] 6、数据处理
[0039] 根据测定A值，分别计算各检测孔的浓度值，根据每一样品重复孔的浓度，计算其 平均值和标准差，试验数据W灵±8表示，MTT试验计算细胞增殖率，组间进行t检验差异显著 性分析。
[0040] 7、结果与分析
[0041 ] MTT结果见下表1。从表中可看出，当黄巧药液浓度为25mg/L~3200mg/L时产生增 殖效应，增殖率从30.81 %~49.53 %，与对照组相比，浓度为25mg/L和3200mg/L时增殖效果 显著(P<0.05)，当浓度在400mg/L时增殖效果最佳;其后，随着药物浓度的继续增加细胞增 殖率下降，但仍显著高于对照组；当黄巧药液浓度为6400mg/L~25600mg/L时细胞的增殖率 为负数，在-15.09~-50.95%之间，即抑制细胞的增殖，其中6400mg/L浓度组与对照组相比 抑制效果显著(P<0.05)，12800mg/L和25600mg/L浓度组与对照组相比抑制效果极显著(P< 0.0 l)。该结果表明了黄巧在一定浓度范围内具有促进RIMVECs增殖的作用。
[0042]表1不同浓度黄巧药液作用大鼠肠黏膜微血管内皮细胞2地的增殖效应(n = 6)
[0044] 与对照组相比，冲<0.05，*冲<0.0 l
[0045] IFN- 丫的测定结果见图1，可W看出，同对照组比较，黄巧0 . Img/mL组