miR-223-3p或miR-885-5p模拟物在制备治疗急性痛风性关节炎药物中的应用
【专利说明】m i R-223-3p或m i R-885-5p模拟物在制备治疗急性痛风性关节炎药物中的应用
技术领域
[0001]本发明涉及生物医药工程及痛风疾病治疗技术领域，尤其涉及一种内源性非编码小RNA模拟物的新用途，具体涉及miR-223-3p和miR-885-5p模拟物及其用途，具体为制备治疗急性痛风性关节炎药物中的应用。
【背景技术】
[0002]痛风是嘌呤代谢障碍、血尿酸升高引起的单钠尿酸盐结晶在关节或组织内沉积所致的痛风性关节炎和慢性痛风石等疾病，与高尿酸血症直接相关。痛风不仅能够引起关节肿胀及组织损伤，而且可增加心脑血管、肾脏等疾病风险。HUA也与多种疾病存在密切关系，如房颤等。急性痛风性关节炎是痛风的主要临床表现，也是原发性痛风的常见首发症状。流行病学研究显示全球痛风的患病率正在逐年增加，目前在1%_2%左右。
[0003]急性痛风性关节炎作为痛风发病的一个重要阶段，也是一个重要的治疗阶段，如果能够及时控制其发作症状，减少发作次数，不但可以减轻患者的痛苦，而且能够有效延缓疾病的进程;但目前对于急性痛风性关节炎尚缺乏有效治疗。目前，临床上治疗急性痛风性关节炎的常用药物仍是秋水仙碱、非留体类抗炎药及糖皮质激素等。但上述药物不能明显缓解病情和减轻患者的痛苦，而且长期应用不良反应明显。最近研发的靶向药物IL-Ιβ拮抗剂(如Canakinumab、Anakinra等)虽较传统药物有较好效果，但其副作用亦明显增多。因此，寻找一种安全、有效的急性痛风性关节炎治疗药物，是当今医学界亟待解决的问题。
[0004]在急性痛风性关节炎发病机制中，NLRP3炎性体和趋化因子有重要作用;前者激活后可导致IL-Ιβ的释放，而趋化因子可以趋化更多中性粒细胞及单核巨噬细胞到病灶部位引发炎症级联放大反应。见1^3炎症体是由11^3(1111(31601^(16-13；[11(1;[1^ oligomerizat1ndomain(NOD)-1ike receptor containing pyrin domain 3)、ASC(apoptosis-associatedspeck-like protein containing CARD)和procaspase-1 组成的蛋白复合物，参与多种炎症性疾病的发病过程。趋化因子是一类可诱导的、分泌型的前炎症细胞因子，对白细胞及淋巴细胞起特异性趋化吸引作用。趋化因子受体通过与相应配体结合对多种炎症细胞进行趋化和激活，引起一系列生物学效应。目前研究已发现了许多趋化因子参与了急性痛风性关节炎的发病过程，其中CCL2(Chemokine ligand 2)，亦称为单核细胞趋化蛋白I (Monocytechemotactic protein-1，MCP_1)，是痛风性关节炎中研究最多的一种趋化因子，其在急性痛风性关节炎中的作用已被广泛认可。
[0005]MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码的RNA，长约18-25nt，高度保守，主要通过与特SmRNA 3 ’ -UTR结合在转录后水平调节靶基因的表达，从而参与细胞分化、生长、凋亡、代谢等功能。目如已发现有5000多种mi RNAs，而且编码表达蛋白的基因中60%以上是受各种miRNAs调控的。miRNAs在很多疾病中有重要作用，例如肿瘤、炎症性疾病等。miRNAs具有高度的保守性和表达的时空特异性，不同的疾病会有不同的mi RNAs特异性表达谱。机体内组织、器官的代谢异常或器质性病变可能导致特定疾病状态下某些血清miRNAs表达水平特异性地升高或降低。虽然miRNAs是当前学术界的研究热点，其在炎症性疾病中的关键调控作用也已被很多研究证实，但目前有关miRNAs在痛风发病机制中作用的研究甚少，也没有研究对miRNAs在痛风治疗中的作用进行研究分析。在miRNAs层面调控关键因子(如NLRP3和趋化因子等)的表达，缓解炎症反应，极有可能为治疗急性痛风性关节炎提供一种新思路和新方法。目前国内外文献及专利数据库均无用miRNA抑制物或模拟物治疗急性痛风性关节炎的报道。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点，寻求设计提供一种有效治疗急性痛风性关节炎的新药物，该组合药物以miR-223-3p和miR-885-5p模拟物为核心原料，具有治疗痛风的作用，可抑制关键炎症因子表达，抑制关节液及血清中IL-Ιβ等炎症因子的分泌，从而达到治疗急性痛风性关节炎的效果。
[0007]为了实现上述目的，本发明涉及的药物以miR-223-3p和miR-885-5p模拟物二者中的一种为核心原料，以海藻酸钠纳米级微囊为载体。
[0008]本发明采用如下技术方案:
[0009]本发明的miR-223-3p或miR-885-5p模拟物在制备治疗急性痛风性关节炎药物中的应用。
[0010]所述的miR-223-3p模拟物的核苷酸序列为:5，-UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA-3，。
[0011 ]所述的miR-885-5p模拟物的核苷酸序列为:5，-UCCAUUACACUACCCUGCCUCU-3，。
[0012]制备该药物的过程如下:
[0013]首先采用常规的公知工艺方法合成miR-223-3p和miR-885-5p模拟物；
[0014]然后采用常规的公知工艺方法合成海藻酸钠纳米级微囊，将上述miR-223_3p或miR-885-5p模拟物二者中的一种合成到海藻酸钠纳米级微囊中；
[0015]最后采用常规的公知工艺方法将上述miR纳米微囊物进一步制成稳定的液体制剂或粉状制剂，再加工成形即可。
[0016]本发明的积极效果如下:
[0017]本发明与现有技术相比，miR-223-3p和miR-885-5p模拟物纳米微囊具有疗效快、靶向性强、副作用少、安全性高等优点，是治疗急性痛风性关节炎的新型靶向药物，将极大的造福于社会大众。
【附图说明】
[0018]图1关节腔内注射miR-223-3p模拟物纳米微囊可明显改变滑膜细胞中miR-223-3p的表达水平的不意图(*，〈0.05versus the Control group；#,<0.05versus the Controlgroup)o
[0019]图2关节腔内注射miR-885-5p模拟物纳米微囊可明显改变滑膜细胞中miR-885-5p的表达水平的不意图(*，〈0.05versus the Control group；#,<0.05versus the Controlgroup)o
[0020]图3miR-223-3p mimic纳米微囊可有效减轻关节肿胀程度的示意图(Blankcontrol,空白对照组;miRNA inhibitor ,miRNA抑制物组;miRNA mimic ,miRNA模拟物组；Model group,痛风性关节炎模型组;Colchicine,秋水仙碱组)。
[0021 ] 图4 miR-223-3p模拟物和miR-885-5p模拟物纳米微囊可明显降低IL-Ιβ表达水平的示意图。
[0022]图5miR-223-3p模拟物和miR-885-5p模拟物纳米微囊对急性痛风性关节炎大鼠滑膜组织病理学的影响的示意图(HE染色，10 X 20倍光镜下(A，空白对照组;B ,miRNA抑制物组;C，miR-223-3p模拟物组;D，痛风性关节炎模型组;E，秋水仙碱组;F，miR-885_5p模拟物组)。
【具体实施方式】
[0023]下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
[0024]实施例l:miR-223-3p模拟物和miR-885-5p模拟物纳米微囊对急性痛风性关节炎大鼠模型的治疗作用
[0025]1.SD大鼠急性痛风性关节炎分组及造模方法
[0026]实验动物为6-8周龄，SPF级SD大鼠，体重180_220g，105只，均为雄性。使用前适应性喂养I周，自由摄食饮水，饮食、饮水、活动正常即开始实验。将105只SD雄性大鼠随机分为7组，分别为miRNA模拟物组、miRNA抑制物组、白藜芦醇组(200mg/kg,Sigma)、mmiRNA模拟物+白藜芦醇组，秋水仙碱组、空白对照组、阴性对照组，每组15只大鼠，各组大鼠在相同条件下摄水饮食。
[0027]2.药品与试剂:选用白藜芦醇(Sigma公司，HPLC法测定纯度均2 98% )，大鼠用药剂量参照人鼠体表面积转换换算公式;秋水仙碱组用秋水仙碱，用注射用水配制成10%溶液备用；首先采用常规的公知工艺方法合成miR-223-3p和miR-885-5p模拟物，具体miRNA核苷酸序