0、260、250、240、230、220、210、 200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、90、80、70、60、50、45、40、35、30、25、20、 15、10、5、1、0.50、0.45、0.40、0.35、0.30、0.25、0.20、0.15、0.1、0.05、0.015或0.011111。若多 于一种不同碱性氨基酸或其衍生物存在于所述组合物或溶液中（如本文下述），上述鉴定的 浓度表示碱性氨基酸或其衍生物的总浓度。若仅使用一种碱性氨基酸或其衍生物，则碱性 氨基酸或其衍生物的总浓度与所述氨基酸的浓度同义。应理解碱性氨基酸或其衍生物可作 为添加剂(还称为赋形剂、助溶剂、共溶质）、作为固体(待溶于混合物）、作为(浓缩的）水性 溶液加入含病毒组分和其聚集体的组合物或溶液中，所述水性溶液是在水中或缓冲液中或 针对含有所述碱性氨基酸或其衍生物的水或缓冲液通过例如透析来交换而获得。
[0041] 根据病毒特性，本领域技术人员可调节浓度达到所需的防止或减少聚集的效果。 例如，对于脊髓灰质炎病毒来说，碱性氨基酸或其衍生物的浓度优选不超过IOOmM或不超过 ISOmMo
[0042] 优选的碱性氨基酸是精氨酸，更优选心精氨酸。含病毒组分和其聚集体的组合物 或溶液中的^精氨酸的优选浓度为0.01-1000111]\1、0.015-1000111]\1、0.05-1000111]\1、0.1-1000mM、0.5-1000mM、0.8-lOOOmM、l-1000mM、0.l-900mM、0.8-900mM、l-900mM、0.l-800mM、 0.8-800mM、0.1-700mM、0.5-700mM、l-600mM、5-500mM、10-400mM、15-300mM、20-200mM、25-200111]\1、30-200111]\1、35-200111]\1、40-200111]\1、45-200111]\1、50-300111]\1、或70-2501111。在脊髓灰质炎病 毒的情况中150mM获得良好结果，流感病毒的情况中350mM获得良好结果。
[0043] 精氨酸的优选衍生物或产物是脈基下胺。含病毒组分和其聚集体的组合物或溶液 中的脈基下胺的优选浓度为 0.01-1000mM、0.015-1000mM、0.05-1000mM、0.1-1000mM、0.5-1000mM、0.8-lOOOmM、l-1000mM、0.l-900mM、0.8-900mM、l-900mM、0.l-800mM、0.8-800mM、 0.1-700mM、0.5-700mM、l-600mM、5-500mM、10-400mM、15-300mM、20-200mM、25-200mM、30-200111]\1、35-200111]\1、40-200111]\1、45-200111]\1、50-300111]\1、或70-250111]\1。100111]\1和25111]\1获得良好结果。
[0044] 优选的另一碱性氨基酸是赖氨酸，更优选心赖氨酸。含病毒组分和其聚集体的组 合物或溶液中的心赖氨酸的优选浓度为0.01-1000111]?、0.015-1000111]\1、0.05-1000111]\1、0.1-1000mM、0.5-1000mM、0.8-lOOOmM、l-1000mM、0.l-900mM、0.8-900mM、l-900mM、0.l-800mM、 0.8-800mM、0.1-700mM、0.5-700mM、l-600mM、5-500mM、10-400mM、15-300mM、20-200mM、25-200111]\1、30-2001111、35-200111]\1、40-200111]\1、45-2001111、50-300111]\1、或100-2501111。1501111和75111]\1获 得良好结果。
[004引含碱性氨基酸或其衍生物的溶液优选为中性抑，例如范围为6.0-8.0或6.5-7.5的 pH，或约7.0的pH。更优选地，所述溶液的抑低于所用碱性氨基酸的的pH。该溶液优选包含缓 冲液W维持pH在所示值。原则上，溶液中可使用任何药学上可接受的缓冲液，其优选在所示 pH值范围中具有有效缓冲能力。缓冲液优选Wo. 5-lOOmM的浓度存在，更优选l-75mM，最优 选 2-40mM，例如 20 或 40mM。
[0046] 用于溶液中的合适缓冲液包括但不限于Mc 11 va ine缓冲液(0.1M巧樣酸和0.2M憐 酸氨二钢的混合物）、巧樣酸盐缓冲液、憐酸缓冲液、肥PES缓冲液、PIPES缓冲液和组氨酸缓 冲液。
[0047] 更优选地，本文所用各碱性氨基酸或其衍生物优选缓冲至抑7。更优选所述缓冲液 是浓度为20或40mM的憐酸缓冲液。
[0048] 然而，本发明还涵盖不需要缓冲液或无缓冲液的情况。该情况中，所述组合物或溶 液包含下述成分或由其组成:病毒组分和本文限定的碱性氨基酸或其衍生物且不含其它缓 冲液。优选所述组合物或溶液由病毒组分和本文限定的碱性氨基酸组成。
[0049] 本发明涵盖如下内容：多于一种碱性氨基酸和/或多于一种其衍生物用于本发明 方法中，W防止和/或减少病毒组分的聚集。碱性氨基酸的优选组合是含精氨酸、赖氨酸和 组氨酸的组合。本发明还涵盖在本发明方法的给定步骤（即上游加工、下游加工步骤、灭活 步骤和/或配制步骤）中使用给定碱性氨基酸或其衍生物W及在该相同方法的其他步骤中 使用不同碱性氨基酸或其衍生物。例如脈基下胺可加入浓缩材料中，而精氨酸可在下游纯 化步骤中使用，例如色谱步骤中。
[0050] 可在所述方法的任何步骤期间添加或存在碱性氨基酸，且其可W但不必须在所述 方法的所有步骤期间存在。需要时，通过过滤、色谱或透析，碱性氨基酸可容易地被移除或 替换(参见实施例6)。
[0051 ] 病毒组分
[0052] 本文所用"病毒组分"表示生物学剂，在将其W优选药学上可接受的形式施用于哺 乳动物(尤其是人)时具有生理活性或激活生理相应。病毒组分可由宿主生物体生产或可从 其获得，所述宿主生物体例如动物、植物、细菌或真菌。病毒组分可为基于蛋白的试剂、即包 含蛋白质材料(例如蛋白质、多肤和肤)的试剂。病毒组分还可包含或由核酸组成，所述核酸 例如DNA、RNA或核酸类似物。病毒组分还可包含膜脂质例如OMV's、脂质体、病毒体。
[0053] 优选的病毒组分包含或病毒或病毒体或由其组成，优选感染哺乳动物的病毒，优 选感染人类的病毒。所述病的可为包膜病毒但优选未包膜病毒。应理解本文术语"病毒"或 "病毒组分"包括天然存在(例如天然分离物）的野生型W及"人工"减毒、突变、嵌合、假型和 缺陷型病毒。术语"病毒"或"病毒组分"还包括重组病毒，即用重组DNA技术构建的病毒，例 如缺陷型病毒，例如缺少(部分)一种、多种或所有病毒基因，W及基因治疗载体，其中部分 基因组由一种或多种感兴趣的基因替代。
[0054] 优选实施方式中，病毒组分是病毒颗粒。本发明所用术语"病毒颗粒"包括完整病 毒体W及病毒样颗粒，其大小和/或衣壳组分与对应野生型病毒体相同或相似，但不含完整 病毒基因组或不含核酸和/或缺少病毒核屯、蛋白（例如核蛋白）（的全部补体）。
[0055] 本发明方法和组合物可用的病毒组分优选来自病毒，所述病毒选自小核糖核酸病 毒和负链ssRNA病毒，包括正粘病毒和副粘病毒。
[0056] 优选的小核糖核酸病毒是肠道病毒。
[0057] 肠道病毒是小核糖核酸病毒科的成员，其为一较大且变异多的小RNA病毒组，特征 为单正链基因组RNA。所有肠道病毒都含约7500碱基的基因组，且已知具有高突变率，运是 由于其低保真度复制和频繁重组。感染宿主细胞后，所述基因组W加帽非依赖方式翻译为 单一多蛋白，随后通过病毒编码的蛋白酶加工为结构衣壳蛋白和非结构蛋白，其主要参与 病毒复制。肠道病毒属包括下属12个种:肠道病毒A( W前称为人类肠道病毒A)、肠道病毒B (W前称为人类肠道病毒B)、肠道病毒C( W前称为人类肠道病毒C)、肠道病毒D( W前称为人 类肠道病毒D)、肠道病毒E( W前称为牛肠道病毒组A)、肠道病毒F( W前称为牛肠道病毒组 B)、肠道病毒G( W前称为猪肠道病毒B)、肠道病毒H( W前称为猿肠道病毒A)、肠道病毒J、鼻 病毒A( W前称为人类鼻病毒A)、鼻病毒B( W前称为人类鼻病毒B)和鼻病毒C( W前称为人类 鼻病毒C)。运12个种之内是如下血清型：
[005引柯萨奇病毒：
[0059] -血清型 CV-A2、CV-A3、CV-A4、CV-A5、CV-A6、CV-A7、CV-A8、CV-A10、CV-A12、CV-A14 和CV-A16(肠道病毒A种下发现）。
[0060] -血清型CV-B1、CV-B2、CV-B3、CV-B4、CV-B5、CV-B6和CV-A9 (肠道病毒B种下发现）。
[0061] -血清型 CV-Al、〇^-411、〇^-413、〇^-417、〇^-419、〇^-420、〇^-421、〇^-422和(：￥-八24 (肠道病毒C种下发现）。
[0062] 艾柯病毒：
[0063] -血清型 E-1、E-2、E-3、E-4、E-5、E-6、E-7、E-9、E-11、E-12、E-13、E-14、E-15、E-16、 ￡-17、6-18、6-19、6-20、6-21、6-24、6-25、6-26、6-27、6-29、6-30、6-31、6-32、和6-33(肠道 病毒B种下）。
[0064] 肠道病毒：
[0065] -EV-A71、EV-A76、EV-A89、EV-A90、EV-A91、EV-A92、EV-A114、EV-A119、SV19、SV43、 5￥46和日413型(肠道病毒4种下发现）。
[0066 ] -EV-B69、EV-B73、EV-B74、EV-B75、EV-B77、EV-B78、EV-B79、EV-B80、EV-B81、EV- B82、EV-B83、EV-B84、EV-B85、EV-B86、EV-B87、EV-B88、EV-B93、EV-B97、EV-B98、EV-B100、 EV-B101、EV-B106、EV-B107、EV-B110和SA5型（肠道病毒B种下发现）。
[0067] -typesEV-C95、EV-C96、EV-C99、EV-C102、EV-C104、EV-C105、EV-C109、EV-C116、 EV-Cl 17和EV-Cl 18(肠道病毒巧巾下发现）.
[006引-typeSEV-D68、EV-D70、EV-D94、EV-D111 和EV-D120 (肠道病毒D种下发现）.
[0069] -types:EV-HU肠道病毒巧巾下发现）.
[0070] -types :5￥6、6￥-1103、6￥-1108、6￥-1112、6￥-1115和6￥-1121(肠道病毒巧中下发 现).
[00川人类鼻病毒：
[0072 ] -HRV-A1、HRV-A2、HRV-A7、HRV-A8、HRV-A9、皿V-A10、HRV-A11、HRV-A12、HRV-A13、 HRV-A15、HRV-A16、HRV-A18、HRV-A19、HRV-A20、HRV-A21、HRV-A22、HRV-A23、HRV-A24、HRV-A25、HRV-A28、HRV-A29、HRV-A30、HRV-A31、HRV-A32、HRV-A33、HRV-A：M、HRV-A36、HRV-A38、 HRV-A39、HRV-A40、HRV-A41、HRV-A43、HRV-A44、HRV-A45、HRV-A46、HRV-A47、HRV-A49、HRV-A50、HRV-A51、HRV-A53、HRV-A54、HRV-A55、HRV-A56、HRV-A57、HRV-A58、HRV-A59、HRV-A60、 HRV-A61、HRV-A62、HRV-A63、HRV-A64、HRV-A65、HRV-A66、HRV-A67、HRV-A68、HRV-A71、HRV-A73、HRV-A74、HRV-A75、HRV-A76、HRV-A77、HRV-A78、HRV-A80、HRV-A81、HRV-A82、HRV-A85、 HRV-A88、HRV-A89、HRV-A90、HRV-A94、HRV-A95、HRV-A96、HRV-A98、HRV-A100、HRV-A101、 HRV-A102和HRV-A103型(鼻病毒A种下发现）。
[0073] -type SHRV-B3、HRV-B4、HRV-B5、HRV-B6、HRV-B14、HRV-B17、HRV-B26、HRV-B27、 HRV-B35、HRV-B37、HRV-B42、HRV-B48、HRV-B52、HRV-B69、HRV-B70、HRV-B72、HRV-B79、HRV-B83、HRV-B84、HRV-B86、HRV-B91、HRV-B92、HRV-B93、HRV-B97、和HRV-B99 型（鼻病毒 B种下发 现)。
[0074 ] -HRV-C1、HRV-C2、HRV-C3、HRV-C4、HRV-C5、皿V-C6、皿V-C7、HRV-C8、HRV-C9、HRV- CIO、HRV-C11、HRV-C12、HRV-C13、HRV-C14、HRV-C15、HRV-C16、HRV-C17、HRV-C18、HRV-C19、 HRV-C20、HRV-C21、HRV-C22、HRV-C23、HRV-C24、HRV-C25、HRV-C26、HRV-C27、HRV-C28、HRV-C29、HRV-C30、HRV-C31、HRV-C32、HRV-C33、HRV-C34、HRV-C35、HRV-C36、HRV-C37、HRV-C38、 HRV-C39、HRV-C40、HRV-C41、HRV-C42、HRV-C43、HRV-C44、HRV-C45、HRV-C46、HRV-C47、HRV-C48、HRV-C49、HRV-C50和HRV-C51型（鼻病毒巧巾下发现）。
[0075] 脊髓灰质炎病毒：
[0076] -血清型PV-UPV-2、和PV-3(肠道病毒巧巾下发现）。
[OOW]优选的肠道病毒包括柯萨奇A病毒、柯萨奇B病毒、艾柯病毒和肠道病毒68、69、70、 71和73(例如EV-D68、EV-B69、EV-D70和EV-A71型）。最优选病毒为脊髓灰质炎病毒。病毒组 分可包括脊髓灰质炎病毒血清型1、2和3的一种或多种，但优选所述病毒组分包含所有=种 脊髓灰质炎病毒血清型1、2和3。合适的血清型1脊髓灰质炎病毒株系包括但不限于Sabin 1、Mahoney、Rrunenders、BrunhildeXHAT和Cox株系的一种或多种。合适的血清型2脊髓灰 质炎病毒株系包括但不限于Sabin 2、MEF-1和Lansing株系的一种或多种。合适的血清型3 脊髓灰质炎病毒株系包括但不限于Sabin 3、Saukett H和G和Leon株系的一种或多种。优选 的实施方式中，病毒组分是或包括S价灭活脊髓灰质炎疫苗，例如Salk-IPV,其针对1型包 含灭活的脊髓灰质炎病毒Mahoney株、针对2型包含灭活的脊髓灰质炎病毒MEF-I株且针对3 型包含灭活的脊髓灰质炎病毒Saukett株，或者例如SlPV,其包含灭活的脊髓灰质炎病毒 Sabin-l、-2和-3株系（van Wezel et al,1978;Montagnon et al,1983&1984)〇VLP(病毒样 颗粒)页涵盖在本发明范围中。
[0078] 在其他实施方式中，病毒是负链ssRNA病毒(Mononegavirales)。负链ssRNA病毒包 括下述病毒：
[0079] 玻那病毒科(Bornaviridae):
[0080] 玻那病毒属(Bornavirus) 玻那病病毒
[0081 ]弹状病毒科(化abdoviridae):
[0082] 弹状病毒属(Vesiculovirus) 印第安纳州水泡性口炎病毒
[0083] 狂犬病病毒属(Lyssavirus) 狂犬病病毒
[0084] 短暂热病毒属化地emerovirus) 牛暂时热病毒
[00化]粒外弹状病毒属(Novirhabdovirus) 传染性造血组织坏死病病毒
[0086] 纤丝病毒科(Filoviridae):
[0087] 马尔堡病毒属(Marburgvirus) 维多利亚湖马尔堡病毒
[0088] 埃博拉病毒属化bolavirus) 伊尔埃博拉病毒
[0089] 副粘病毒科(Paramyxoviridae):
[0090] 副粘病毒亚科(Paramyxovirinae):
[0091] 腮腺炎病毒属(Rubulavirus) 流行性腮腺炎病毒
[0092] 禽副粘病毒属(Avulavirus) 新城疫病毒
[0093] 呼吸道病毒属(Respirovirus) 仙台病毒
[0094] 亨尼帕病毒属化enipavirus) 亨德拉病毒
[0095] 麻疹病毒属(Morbillivirus) 麻疹病毒
[0096] 肺炎病毒亚科(Pneumovirinae):
[0097] 肺炎病毒属(Pne^ovirus) 人呼吸道合胞病毒
[0098] 偏肺病毒属(Metapneumovirus) 禽流感偏肺病毒
[0099] 正粘病毒科((Irthomyxoviridae):
[0100] 甲型流感病毒属（InfIuenzavirus A) 甲型流感病毒
[0101] 乙型流感病毒属（InfIuenzavirus B) 乙型流感病毒
[0102] 丙型流感病毒属（InfIuenzavirus C) 丙型流感病毒
[0103] 托高±病毒属属(Thogotovirus) 托高±病毒
[0104] 娃传贫病毒属（Isavirus) 传染性娃鱼贫血病毒
[0105] 布尼亚病毒科(Bunyaviridae):
[0106] 正布尼亚病毒属(Odhobunyavirus) 布尼安维拉病毒
[0107] 汉坦病毒属化antavirus) 汉坦病毒
[010引内罗病毒属(Nairovirus) 达格毕病毒
[0109] 白略病毒属(Phlebovirus) 裂谷热病毒
[0110] 沙粒病毒科(Arenaviridae):
[0111] 沙粒病毒属(Arenavirus) 淋己细胞性脉络丛脑膜炎病毒
[0112] 优选的负链ssRNA病毒是属于副粘病毒科或正粘病毒科的病毒。副粘病毒科的优 选病毒是如上所列的属于副粘病毒属或肺炎病毒亚科的病毒。优选的肺炎病毒是呼吸道合 胞病毒(RSV)，更优选人或牛RSV。人RSV可为亚组A或B病毒，优选为临床分离物，更优选为体 外未充分传代的分离物(优选传代少于1〇、8、6或5次）。优选(人或牛)RSV病毒是病毒基因组 的病毒，其中所述病毒基因组含有缺失或失活的G附着蛋白