多粘菌素脂质纳米颗粒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及包含至少一种来自多粘菌素家族的抗生素的脂质纳米颗粒，包含所述 纳米颗粒的药物组合物，及所述纳米颗粒在预防和/或治疗呼吸树感染(respiratory tree infection)中的应用。 现有技术
[0002] 对由多药抗性革兰氏阴性细菌的（MDRGNB)引起、例如由铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)引起的慢性感染及复发性感染具有最大影响的疾病之一是囊 性纤维化。运种细菌的持久性，除其他原因外，与其在生物膜上的生长有关，所述生物膜由 附在表面的细菌群体结构组成，被由细菌自身分泌的保护层包被，且提供更有效地抵抗杀 虫剂和抗生素的能力，承受相当高剂量的抗菌产品，并造成肺功能损害。
[0003] 用于治疗运些感染的某些抗生素具有副作用，所W使用微米系统或者纳米系统施 用所述抗生素值得特别关注。文献描述了包含某些所述抗生素的运种系统的不同应用，如 文件US2009169635,其描述了用于全身施用的聚醋型生物降解性聚合纳米颗粒。
[0004] 鉴于抗菌或者抗生素制剂在肺中局部浓度是成功清除细菌的最重要的因素，肺泡 和支气管上皮似乎是用于药物释放最令人感兴趣的位置。
[0005] 通过施用气溶胶和粉末将抗生素直接施用到下呼吸树具有潜在的优势，从而通过 在感染发生的肺泡位置的沉积可W获得更高的局部浓度，所W吸入的药物可W减少系统不 良反应的发生，因为施用的剂量减少。
[0006] 多粘菌素是抗生素家族，其在20世纪50年代和20世纪60年代上市但随后被弃用， 因其副作用和其他特异性针对革兰氏阴性细菌的抗生素的出现(Shedding light on the use of colistin : sti 11 gaps to be filled.Enfermedades Infecciosas y Microbiolog化Cl化ica，2011，第29卷，第4期）。近年来，由于由MDRGNB细菌引起的感染的增 加与治疗药替代物的缺乏，来自多粘菌素家族的抗生素的使用再次增长。然而，关于其功效 和安全性的极少可得的临床数据，使其难W保证现今使用的剂量方案是否是最适合的。
[0007] 鉴于此数据，因此，有必要开发克服现有技术状况缺陷的用于治疗呼吸树感染的 药物。
【发明内容】
[000引本发明开发了包含至少一种来自多粘菌素家族的抗生素的脂质纳米颗粒，该脂质 纳米颗粒可W附着至呼吸道粘膜层或由细菌本身产生的生物膜，或者与呼吸道粘膜层或由 细菌本身产生的生物膜相互作用，运有利于W较低的抗生素治疗剂量获得最优的最小抑菌 浓度结果。
[0009] 本发明的纳米颗粒免受过早降解，并且进一步表现出抗生素持续释放至肺泡和支 气管上皮细胞。
[0010] 因此，本发明的一个方面是提供一种脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒包含至少 一种来自多粘菌素家族的抗生素、包含一种或多种脂质的脂质部分（lipid fraction)，所 述脂质选自甘油一醋和/或甘油二醋和/或甘油=醋和/或脂肪酸和/或其混合物。
[0011] 本发明的另一方面设及药物组合物，该药物组合物包含W上定义的脂质纳米颗粒 与一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。
[0012] 本发明的另一方面设及制备W上定义的脂质纳米颗粒的方法，所述方法包括W下 步骤：
[0013] a)在有机溶剂中制备具有脂质部分W及至少一种抗生素的溶液/混合物。
[0014] b)制备具有一种或多种表面活性剂的水溶液。
[0015] C)混合油相a)和水相b)，W获得乳液。
[0016] d)使溶剂蒸发。
[0017] e)利用离屯、和/或超滤冲洗所获得的纳米颗粒。
[0018] 本发明的另一方面设及W上定义的脂质纳米颗粒，其用作药物。
[0019] 本发明的另一方面设及制备W上定义的脂质纳米颗粒的方法，所述方法包括W下 步骤：
[0020] a)通过加热至略高于固体脂质的烙点的溫度而制备脂质和至少一种抗生素的混 合物。
[0021 ] b)制备具有一种或多种表面活性剂的水溶液。
[0022] C)加热水溶液b)至与油相a)相同的溫度。
[0023] d)将水相b)添加至油相a)并且混合W获得乳液。
[0024] e)保持在5°C±3°C的溫度，直至脂质再结晶，产生纳米颗粒。
[0025] f)利用离屯、和/或超滤冲洗W获得纳米颗粒。
[0026] 本发明的脂质纳米颗粒可用于治疗感染，特别是呼吸树感染。因此，本发明的另一 方面设及W上定义的脂质纳米颗粒，其用作药物。
[0027] 本发明的另一方面设及W上定义的脂质纳米颗粒，其用于治疗和/或预防呼吸树 感染。因此运一方面设及W上定义的脂质纳米颗粒在制备用于治疗和/或预防感染的药物 中的应用，所述感染优选为呼吸树感染，优选为由铜绿假单胞菌和/或相关物种和/或对多 粘菌素敏感的微生物引起。
[0028] 本发明的另一方面设及治疗和/或预防感染的方法，所述感染优选为呼吸树感染， 优选为由铜绿假单胞菌和/或相关物种和/或对多粘菌素敏感的微生物引起，所述方法包括 对需要所述治疗和/或预防的受试对象(包括人类)施用治疗有效量的W上定义的脂质纳米 颗粒，与药学上可接受的赋形剂或载体。
[0029] 在此意义上，发明人进行的研究已经证明了所述脂质纳米颗粒，W及药物组合物 和/或包括所述纳米颗粒的药物的下述能力：：
[0030] -获得具有持续和/或受调节的释放效果的抗生素的稳定脂质纳米颗粒，
[0031] -保护抗生素免受过早降解，
[0032] -获得适合施用于呼吸树的颗粒大小，
[0033] -具有穿透由细菌自身产生的生物膜的能力，及
[0034] -获得比游离的抗生素更好的安全性和功效。
[0035] 基于本发明的附图和详细描述，本发明运些优点和特点和其他优点和特点将会更 加明显。
【附图说明】：
[0036] 图1:显示加载有抗生素的脂质纳米颗粒的图形描述，其中脂质部分包括室溫下为 固体的脂质。
[0037] 图2:显示装载有抗生素的脂质纳米颗粒的图形描述，其中脂质部分包括室溫下为 固体的脂质和室溫下为液体的脂质。
[0038] 图3:显示本发明的脂质纳米颗粒的实施方式的显微图像。
[0039] 图4:显示脂质纳米颗粒的抗生素经时释放曲线。
[0040] 图5:显示对CDl小鼠施用后，巧光微球的肺部分布图像。
【具体实施方式】
[0041] 发明人开发的脂质纳米颗粒包含至少一种来自多粘菌素家族的抗生素、包含一种 或多种脂质的脂质部分和一种或多种表面活性剂，所述脂质部分选自由甘油一醋和/或甘 油二醋和/或甘油=醋和/或脂肪酸和/或其混合物组成的组。
[0042] 在本发明的情况下，术语"脂质纳米颗粒"指包括脂质和/或亲脂核的母体 (ma化ix)，优选为固体脂质核，其可W包含含有液态脂质的纳米小室（nanocompadment)， 由包封装核屯、的亲水相包围。
[0043] 包含在本发明的范围内的纳米颗粒包括在室溫下的固体脂质（也被称为固体脂质 纳米颗粒），W及纳米结构的脂质载体，其包含室溫下为固体的脂质和为液体的脂质的混合 物。
[0044] 在【具体实施方式】中，本发明的纳米颗粒的特征在于具有的平均大小为约IOnm~约 1 OOOnm，优选为约1 OOnm~约500nm。
[0045] "平均大小"理解为本发明的脂质纳米颗粒群体的平均直径。平均大小可W通过本 领域技术人员已知的标准方法测量并且例如描述于下述实施例部分。
[0046] 颗粒大小是决定抗生素持续释放的因素之一。通常，位于纳米颗粒表面的抗生素 是首先被释放的。纳米颗粒大小越小，其具有比相互作用表面越大，所W会有更大的初始抗 生素释放。
[0047] 在另一个实施方式中，纳米颗粒具有表面电荷(根据Zeta电位测量），其量度可为 约-30mV~约-5mV，优选为-30mV~-16mV。通常，表面电荷是影响脂质纳米颗粒稳定性的参 数之一。它们带负电或者正电的事实将会有利于纳米颗粒之间的排斥力W预防结块，表现 出更好的分散性质。
[0048] 考虑到存在于由细菌自身产生的生物膜和/或存在在肺粘膜上的细菌膜的脂多糖 的正电荷，本发明的纳米颗粒的表面负电荷有利于纳米颗粒-细菌结合，优化在作用部位的 纳米颗粒的保留和粘附，有利于抗生素更好的持续和治疗效果。
[0049] 在另一个实施方式中，本发明的纳米颗粒具有的多分散指数(polydispersity index，PDI)值等于或者小于0.5。所述指数提供一种关于存在于混合物中的纳米颗粒大小 的多样性的思路。它越接近于零，纳米颗粒越均匀，其指示生产批次的均匀大小分布。
[0050] 纳米颗粒的平均大小，Zeta电位和PDI值主要受脂质成分的量、受表面活性剂的量 和受制备方法的参数影响，所述制备方法参数如揽拌的强度和类型，两相的溫度或者混合 相的持续时间。
[0051] 脂质部分
[0052] 在【具体实施方式】中，本发明的脂质纳米颗粒包含形成纳米颗粒核的一部分的至少 一种室溫下为固体的脂质作为脂质部分。
[0053] 出于本发明的目的，室溫为20-25°C。然而，在本发明的背景下，"室溫下为固体的 脂质"理解为脂质在45°C下依然保持固体形式，可W是饱和的或不饱和的。该定义可W包 括，但不限于，甘油立醋(例如立硬脂酸甘油醋），和/或甘油一醋或甘油二醋(例如甘油一醋