Hemorrhagic Fever. 2014.PLOS Neglected Tropical Diseases. 8, e2804.]。现在研究认为，阿比朵尔是通过干扰clathrin通路阻断病毒进入过 程。虽然针对阿比朵尔对多种病毒感染有抑制作用，但经文献检索未见有对其抗丝状病毒 (包括埃博拉病毒和马尔堡病毒）活性的报道。
[0010] 本发明是基于应用埃博拉病毒感染模型对1600个上市药物进行普筛，发现阿比 朵尔可阻断EB0V感染宿主细胞。我们又应用马尔堡病毒感染模型评价了阿比朵尔，发现该 药物也可有效抑制马尔堡病毒的感染。我们判断阿比朵尔具有可阻断丝状病毒的感染的作 用。
【发明内容】
[0011] 本发明解决的技术问题是，提供阿比朵尔在制备预防或治疗抗丝状病毒的药物中 的应用。
[0012] 所述的丝状病毒包括但不限定于马尔堡病毒。
[0013] 所述的丝状病毒包括但不限定于埃博拉病毒。
[0014] 所述的埃博拉病毒为扎伊尔型、苏丹型、莱斯顿型、科特迪瓦型和本迪布焦型。优 选为扎伊尔型、苏丹型。
[0015] 具体而言，为解决的本发明的技术问题，采用如下技术方案：
[0016] 本发明提供了如结构式（I)所示的阿比朵尔在预防或治疗抗丝状病毒的药物中 的应用
[0017]
[0018]
[0019]
[0020] 上述的应用中，所述的药物是以结构式（I)所示的阿比朵尔作为有效成分的药物 组合物
[0021] 上述的应用中，所述的药物组合物还含有其它的抗病毒药。
[0022] 上述的应用中，所述的丝状病毒包括埃博拉病毒和马尔堡病毒。
[0023] 本发明再一方面还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合 物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固 体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其 药物组合物中的含量通常为〇. 1-95重量％。
[0024] 本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道 或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、 阴道、直肠等。
[0025] 给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂（包 括真溶液和胶体溶液）、乳剂（包括ο/w型、w/o型和复乳）、混悬剂、注射剂（包括水针剂、 粉针剂和输液）、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂（包括普通片、肠溶 片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片）、胶囊剂（包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊）、 颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气（粉）雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软 膏剂、凝胶剂、糊剂等。
[0026] 本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种 微粒给药系统。
[0027] 为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀 释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳 糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙 醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶 浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡 波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维 素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙 烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂 酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
[0028] 还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双 层片和多层片。
[0029] 为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混 合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合 剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀 释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
[0030] 为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物 作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶 剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、 氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干 粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
[0031] 此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加 剂。
[0032] 本发明的发明人发现阿比朵尔可特异性的阻断丝状病毒感染宿主细胞。还可以和 其他的抗病毒药物进行联合用药。
[0033] 为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给 药方法给药。
[0034] 本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程 度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化 合物的每天的合适剂量范围为〇. 001-150mg/kg体重，优选为0. l-100mg/kg体重，更优选为 l-60mg/kg体重，最优选为2-30mg/kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单 位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
[0035] 本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。 当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
[0036] 有益技术效果
[0037] 阿比朵尔已在临床使用，其安全性、药物代谢特性、毒副作用已经明确。而此次发 现这个药物抗丝状病毒的新用途将可快速使其应用于高危病毒感染，缓解疫情。
【附图说明】
[0038] 图1.埃博拉病毒和马尔堡病毒感染模型
[0039] 图2.阿比朵尔阻断扎伊尔型埃博拉病毒感染活性。
[0040] 图3.阿比朵尔阻断苏丹型埃博拉病毒感染活性。
[0041] 图4.阿比朵尔阻断马尔堡病毒感染活性。
[0042] 图5.丝状病毒基因进化树。
【具体实施方式】
[0043] 实施例1.筛选模型的原理
[0044] 丝状病毒进入宿主细胞是病毒感染的第一步，抑制病毒的进入就可有效阻断病毒 感染。丝状病毒包膜表面的糖蛋白（Glycoprotein，GP)是丝状病毒进入过程的关键蛋白。
[0045] 我们合成了扎伊尔型埃博拉病毒的包膜GP基因（EBOV-Zaire GP，Gene Accession No. LI 1365)、苏丹型埃博拉病毒包膜 GP 基因（ElBOV-Sudan GP, Gene Accession No. FJ968794.1)和马尔堡病毒包膜 GP 基因 （Marburg GP, Gene Accession No. NC_001608. 3)。通过共转染表达GP蛋白质粒和pNL4-3-Luc-R E，可获得丝状 病毒GP为外壳包裹HIV核心的EB0V重组病毒EBOV-GP/HIV[Manicassamy B, Wang J, Jiang H, Rong L. Comprehensive analysis of ebola virus GPlin viral entry. J Virol. 2005 ;79:4793-805.]和 Marburg 重组病毒 MGP/HIV[Manicassamy B, Wang J, et al.Characterization of Marburg virus glycoprotein in viral entry. Virology. 2007 ;358:79-88]。该病毒颗粒具有以下特点：1)病毒对宿主细胞的选择性取决 于GP的特性；2)由于HIV载体上en V、nef和vpr基因缺失，因此该病毒只能一次性进入宿 主细胞并且不能复制，所以该病毒是安全的；3)该HIV载体上带有一个荧光素酶报告基因， 因此被感染的细胞会表达荧光素酶，通过检测荧光素酶活性就可标示细胞被病毒感染的程 度。模型构建结果见图1。
[0046] 实施例2.实验方法
[0047] 在本发明中应用了 EBOV-Zaire (Gene Accession No. L11365)、EBOV-Sudan (Gene Accession No. FJ968794. 1)和 Marburg(Gene Accession No. NC_001608. 3)对阿比朵尔抗 丝状病毒感染进行药理活性评价：
[0048] 重组病毒制备[Manicassamy B, Wang J, Jiang H, Rong L. Comprehensive analysis of ebola virus GPlin viral entry. J Virol. 2005 ;79:4793_805·]:共转染 2 μ g pcDNA3. 1/EB0V-Zaire GP 质粒（或 2 μ g pcDNA3. 1/EB0V-Sudan GP 质粒或 2 μ g pcDNA3. 1/Marburg GP 质粒）和 2 μ g pNL4-3-Luc-R E 质粒至 293T 细胞，转染后 48h 收 集上清，上清液经0.45 μ m滤膜过滤，该上清中含有EBOV-Zaire GP/HIV病毒颗粒（或 EBOV-Sudan GP/HIV病毒颗粒或Marburg GP/HIV病毒颗粒），该重组病毒可用于感染。
[0049] 感染[Manicassamy B, Wang J, Jiang H, RongL. Comprehensive analysis of ebola virus GPlin viral entry. J Virol. 2005 ;79:4793-805.]:感染前一天，按每孔 6 X 104个细胞的密度将293细胞接种到24孔板上。用DMS0溶解阳性对照化合物或待筛选 化合物，感染前15分钟加入细胞培养液中，以DMS0溶剂作空白对照。加入适宜稀释度的病 毒液感染细胞。感染48小时后，弃去上清，然后向被感染的细胞每孔加入50 μ 1细胞裂解 液（Promega)裂解细胞，将30μ 1荧光素酶底物（Promega)与20μ 1细胞裂解液混合后用 FB15荧光检测器（Sirius)仪器测定细胞荧光素酶的相对活性，其活性的强弱反映了病毒 的感染的水平。结果显示，阿比朵尔可有效抑制丝状病毒对宿主细胞的感染，结果见表1，量 效曲线见图2-4。
[0050] 表1阿比朵尔对EBOV-Zaire重组病毒感染的作用
[0051]
【主权项】
1. 如结构式（I)所示的阿比朵尔在制备预防或治疗抗丝状病毒的药物中的应用2. 根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的药物是以结构式⑴所示的阿比朵尔作 为有效成分的药物组合物3. 根据权利要求2的应用，其特征在于，所述的药物组合物还含有其它的抗病毒药。4. 根据权利要求1-3中任一项的应用，其特征在于，所述的丝状病毒为埃博拉病毒。5. 根据权利要求4的应用，其特征在于，所述的埃博拉病毒为扎伊尔型、苏丹型、莱斯 顿型、科特迪瓦型和本迪布焦型。6. 根据权利要求1-3任一项的应用，其特征在于，所述的丝状病毒为马尔堡病毒。
【专利摘要】本发明公开了阿比朵尔在抗丝状病毒感染方面的应用。本发明包含阿比朵尔对丝状病毒感染的预防或治疗中的应用或与其他抗病毒药物的联合应用。
【IPC分类】A61P31/14, A61K31/4045
【公开号】CN105616404
【申请号】CN201410584970
【发明人】郭颖, 陈勍, 霸明宇, 唐克
【申请人】中国医学科学院药物研究所
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2014年10月27日