一种可降解生物创伤敷料的制备方法及所得产品的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种可降解生物创伤敷料的制备方法及所得产品，步骤是：将透明质酸钠与纤维素衍生物先在碱性条件下交联，再在酸性条件下交联，所得交联凝胶透析、纯化、制粒，与壳聚糖水溶液混合均匀，除去气泡，倒入模具中，干燥，得可降解生物创伤敷料。本发明方法安全性高，操作简便，交联体系一步制备，仅通过调节pH值便可完成二步交联，大大缩短交联时间，便于工业化生产。所得产品生物相容性好、安全性高、适用于轻度到重度渗液性皮肤创伤的吸液、护创和修复，防止二次伤害，便于更换，使用方便。
【专利说明】
一种可降解生物创伤敷料的制备方法及所得产品
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种可降解生物创伤敷料的制备方法及所得产品，该敷料适用于轻度 到重度渗液性皮肤创伤的吸液、护创和修复，属于创伤敷料技术领域。
【背景技术】
[0002] 人体的皮肤是与外界环境接触的屏障，当由于创伤或疾病等因素造成皮肤缺损 时，常常造成创面水分、电解质及蛋白质丢失，开放的创面还增加了感染的机率，早期有效 的封闭创面可以减少并发症的发生。
[0003] 创伤敷料是一类可以起到暂时保护伤口、防止感染、促进愈合的医用材料。据权威 机构统计，2012年世界创伤敷料市场的规模在117亿美元，预计2021年将达到185亿美元， 2013~2021年期间的年增长率在7%左右。目前创伤敷料主要集中在手术后伤口护理、烧 伤、外部创伤和长期不愈性溃疡等4个方面。早期的敷料材料有普通敷料(纱布)和合成敷料 如尼龙、聚乳酸、有机硅等，这些材料力学性能突出，但在抵御细菌入侵，与机体的相容性， 透气、透湿性等方面存在显著缺陷，而生物敷料恰恰可以很好地弥补传统敷料的不足，具有 广阔的应用市场。
[0004] 理想的创面敷料应有以下特点：一定的透水透气性，较少热量和电解质的损失，减 少蛋白质的丢失，加速伤口愈合，降低疼痛的感觉，无毒性，无刺激，无抗原性，生物相容性 好，并能缓慢降解，贴在皮肤上还应具有一定的强度和弹性，且具有广泛的适用性。透明质 酸(Hyaluronic Acid，简称HA，又称玻璃酸)是广泛存在于人和动物体内的一种天然物质， 由葡萄糖醛酸和乙酰氨基己糖组成双糖单位聚合而成的一种高分子黏多糖，无种属差异 性，具有良好的生物相容性，具有促进创伤愈合、保水、加快恢复皮肤组织、减少疤痕、增强 免疫力等功能，可降解，符合作为理想创面敷料的要求。
[0005] 目前常用于制备创伤敷料的生物类材料主要有胶原、纤维素衍生物和壳聚糖等。 胶原是一种蛋白质，有较强的抗原性，可能会引起严重的过敏反应，而且它是构成结缔组 织、瘢痕组织的主要成分，大面积的胶原海绵敷料，由于创面组织容易长入海绵孔隙内，造 成脱模困难，并易在创面残留海绵碎肩，增加疤痕;壳聚糖具有良好的生物相容性，可被生 物体内的溶菌酶分解，生成的氨基葡萄糖可被组织逐渐吸收，还具有消炎、止血、镇痛、抑 菌、促进伤口愈合等作用；纤维素衍生物具有良好的生物相容性，止血性能良好，但是对细 菌生长无抑制作用。
[0006]
【申请人】一直致力于创伤敷料的研究，在2014年
【申请人】申请了 一种生物可吸收止血 膜，其公开号为CN103920182A，该止血膜应用于手术止血及慢性愈合创伤止血，采用透明质 酸、纤维素衍生物在碱性环境下进行交联，而后加入的海藻酸钠仅参与酸性交联，与少量未 交联的基团仅形成酯键，海藻酸钠具有抗菌功效，因其参与交联反应，紧密结合于三维交联 结构中，起效时间延缓，作用时间延长，对于手术中置于体内止血吸液更具优势。
[0007] 2 0 1 3年
【申请人】申请了一种手术用防粘连膜的制备方法，其公开号为 CN103055353B，采用透明质酸钠以及纤维素衍生物交联而成，恒温烘箱干燥成型，成品为无 色透明，结构致密的薄片状，交联度较大，置于体内创伤脏器上能够在创伤部位维持较长时 间，从而起到防粘连作用，该产品应用于手术中防粘连，机械强度佳，完全降解时间长，并不 适用于体表止血、吸液护创。
[0008] 公开号为CN1533751A的专利中提到了一种止血的创伤敷料及其制备方法，涉及一 种包含氧化纤维素针织物和多孔水溶性或水溶胀性聚合物基质的柔软止血贴剂以及一种 制备该织物和创伤敷料的方法。该发明中，氧化纤维素作为该止血辅料的骨架可用于轻度 至中度止血，对于渗液量较大的创伤并不适用，其他水溶性或水溶胀性聚合物分散于其中， 吸收血液后不易保持形态稳定，很容易散落粘附在创伤部位，且该专利中提到的创伤敷料 无法长时间稳固的粘附于创伤部位，不方便使用和更换。
[0009] 公开号为CN102210884A的专利中提到了一种抗菌促愈创伤敷料的制备方法。通过 细菌纤维素/透明质酸负载纳米银制备复合膜，发挥细菌纤维素基体的高柔韧性、肌肤良好 的附着性的同时具有对伤口抗菌促愈作用，可用于制备多功能药物性创伤敷料从而加速伤 口修复。该发明在产物过滤分离的过程中需要乙醇溶液洗涤，增加了产物中有机溶剂残留 的风险，与创伤部位接触时有可能会产生不良影响。已商品化的细菌纤维素敷料仅见于 2003年上市、由美国Xylos公司生产的Xcell，但是大规模生产细菌纤维素敷料生产成本太 高，此外负载的纳米银颗粒虽然具有显著杀菌作用，但其不是人体内源物质，也不能被生物 降解，使用中具有一定风险。
【发明内容】
[0010] 针对现有技术中存在的不足，本发明提供了一种可降解生物创伤敷料的制备方 法，还提供了按照该方法所得的可降解生物创伤敷料。本发明方法安全性高，操作简便，交 联体系一步制备，仅通过调节pH值便可完成二步交联，大大缩短交联时间，便于工业化生 产。所得产品生物相容性好、安全性高、适用于轻度到重度渗液性皮肤创伤的吸液、护创和 修复，防止二次伤害，便于更换，使用方便。
[0011] 本发明是通过以下措施实现的：
[0012] -种可降解生物创伤敷料的制备方法，包括以下步骤：
[0013] (1)调节水的pH值至10~12，加入交联剂，混合均匀得混合溶液；
[0014] (2)将透明质酸钠与纤维素衍生物溶于上述混合溶液中，混合均匀并使生物多糖 充分溶解，进行碱性交联；
[0015] ⑶碱性交联后，调节反应体系pH值至3~5,进行酸性交联；
[0016] (4)酸性交联后，将交联所得的凝胶进行透析、纯化、制粒，得到细致均匀的交联凝 胶颗粒；
[0017] (5)将水溶性壳聚糖或水溶性壳聚糖衍生物溶于水中，制得壳聚糖水溶液，将该水 溶液与步骤(4)的交联凝胶颗粒混合均匀，并除去气泡，得到复合凝胶；
[0018] (6)将复合凝胶倒入模具中，干燥，即得可降解生物创伤敷料。
[0019] 上述方法制得的可降解生物创伤敷料，简称敷料，步骤(6)后，还可以包括将所得 的干燥敷料加压成膜剂或者直接研磨成粉剂的步骤。其中，加压成膜使用时，优选带有背 衬，即将加压形成的薄膜与背衬粘合，敷料与背称结合应用方便，可粘附于创伤部位。具有 背衬的可降解生物敷料中，背衬材料起到固定与增加机械强度的作用，根据需要可以制成 不同的形状，便于不同部位创伤的护理，可以较长时间稳固的粘附于创伤部位，无需使用其 他二级敷料固定，使用方便，易于更换，实用性大大提升。而不具背称的粉末敷料更适用于 浅表渗液量较少的创伤，可以直接敷于创口，使用方便。
[0020] 进一步的，为了保护功能性有效成分，避免其被外部环境污染，将膜与背衬材料粘 合后，可以在膜的另一面(未与背衬材料粘合的一面)再覆盖一层保护膜，然后包装、灭菌， 使敷料更加安全、有效。本发明所用的背衬材料可以为任何可以用于伤口护理的背衬材料， 例如无纺布、医用聚氨酯薄膜等。本发明所用的保护膜也可以是任何医药用保护膜。优选 的，为了便于固定和更换，所用背衬材料优先选用带有尼龙搭扣、胶带、胶布、子母扣、绑带 等便于固定和更换的背衬材料。
[0021] 进一步的，本发明所用的纤维素衍生物为带有羟基或羧基活性基团的纤维素衍生 物，例如羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素钠等。
[0022]进一步的，本发明所用的水溶性壳聚糖指的是能够溶于水的壳聚糖，例如低分子 量的壳聚糖。所用的水溶性壳聚糖衍生物指的是对壳聚糖进行改性使其能够溶于水，但没 有改变壳聚糖杀菌消炎功能的壳聚糖衍生物，例如羧甲基壳聚糖、壳聚糖盐酸盐等。
[0023] 进一步的，所述透明质酸钠的分子量优选为500kD~1500kD。
[0024] 本发明将人体内源物质透明质酸钠与成膜性优异的纤维素衍生物作为交联体系 先后在碱性和酸性环境中进行二次交联，通过碱性交联和酸性交联的程度，使交联所得的 三维立体结构比单次交联稳定性更好，孔隙更为丰富，保水性更为优异，更有利于壳聚糖的 进入，增大了敷料的吸液量。
[0025] 上述步骤（1)中，所述交联剂为现有技术中公开的任意可以完成透明质酸钠与纤 维素衍生物交联的交联剂，优选为1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)。
[0026] 上述步骤（1)中，交联剂的加入量占透明质酸钠和纤维素衍生物总质量的0.2~ 4%。水为交联反应的溶剂，本领域技术人员可以根据需要调整其用量。
[0027] 上述步骤(1)中，所用的水优选为去离子水。可以用NaOH等碱调节水的pH。
[0028] 上述步骤(2)中，透明质酸钠与纤维素衍生物的质量比为1:0.25~0.25:1，优选为 1:2-4〇
[0029] 上述步骤(2)中，通过控制交联时间对交联结构的性能进行优化，经试验得到，碱 性交联的时间为2~6h、酸性交联的时间为8~14h时，所得三维交联立体结构的性能更佳。
[0030] 上述步骤(2)和(3)中，碱性交联和酸性交联的温度均为30°C~40°C。
[0031] 上述步骤(3)中，可以用HC1等酸调节体系的pH。
[0032] 上述方法中，透明质酸和纤维素衍生物先在碱性环境下交联，再在酸性环境下交 联，交联后透析纯化、制粒，再与水溶性壳聚糖或壳聚糖衍生物溶液充分混合，倒入模具中 铺膜除气泡，然后干燥成膜。交联过程原料一次性加入，且壳聚糖或其衍生物不进行交联， 交联过程比专利CN103920182A大大简化，形成的功能性有效成分质量和功效也更好。
[0033] 上述步骤(4)中，将交联所得的凝胶倒入透析袋中，放入磷酸盐缓冲液或纯水中进 行透析、纯化。
[0034] 上述步骤(4)中，制粒所用筛网一般为60-120目。
[0035]上述步骤(5)中，将水溶性壳聚糖或水溶性壳聚糖衍生物溶于纯水中制得壳聚糖 水溶液。为了使壳聚糖更好的与交联凝胶混合均匀，壳聚糖水溶液的浓度为2~10wt%。
[0036] 上述方法中，透明质酸钠与水溶性壳聚糖或水溶性壳聚糖衍生物的质量比为1: 0.2~0.5:1，优选为2:1~1:2。
[0037] 进一步的，步骤(6)中，干燥采用恒温烘箱干燥或真空冷冻干燥，干燥所得的有效 成分可以制成薄膜，也可以制成粉末。采用不同方式得到的有效成分具有不同的饱和吸液 量以及吸液速度，可分别适用于轻度、重度渗液性创伤。恒温干燥所得薄膜透明致密，呈微 黄色，真空冷冻干燥所得的薄膜呈白色疏松海绵状，与恒温干燥相比，真空冷冻干燥所得薄 膜更为疏松柔软，孔结构更为丰富，吸液量更大，水溶性壳聚糖或壳聚糖衍生物更易释放， 可快速作用于创面，止血迅速，因此，优选采用真空冷冻的方式进行干燥。
[0038] 优选的，真空冷冻干燥采用梯度升温的方式进行，具体为:先在-40Γ~_50°C预冻 抽真空，然后依次于_30°C~-10°C ;0°C~15°C进行真空冷冻干燥。
[0039] 本发明敷料具有杀菌、消炎、止血、吸收渗液、修复创伤等多种功效、并可促进伤口 愈合，其以透明质酸钠、纤维素衍生物、水溶性壳聚糖(或水溶性壳聚糖衍生物)三者为制备 原料，经过二次交联、纯化、制粒、混合干燥等技术处理后，三者不仅充分发挥了各自的功 效，且交联结构大大增加了敷料结构的稳定性，三维立体结构能够快速起到吸液止血的作 用，壳聚糖直接分散在透明质酸钠与纤维素衍生物交联而成的保水性优异的多孔结构中， 可快速到达创伤部位，较长时间发挥消炎杀菌的功效。因此按照该方法得到的可降解生物 创伤敷料也在本发明保护范围之内。
[0040] 进一步的，采用医用级粘合剂将三维交联的膜与透气性能良好的背衬层粘合，医 用级粘合剂优选采用高黏胶，更优选采用医用压敏胶。将膜与背衬层用医用级粘合剂粘合 后，优选在25_40°C下充分固化，使膜与背衬层粘合牢固。
[0041] 本发明敷料优选将功能性有效成分制成薄膜粘于背衬材料上使用，生物相容性 好，可生物降解，安全有效，无免疫原性，迅速吸收渗出液，快速止血、抗菌消炎，不会与创面 粘连，不会产生二次创伤，有益于伤口愈合，可以适合于各种渗液性皮肤创伤。薄膜在背衬 材料上粘贴的部位、大小、形状都可以按需调整。
[0042] 本发明采用透明质酸钠和纤维素衍生物为主要成分，水溶性壳聚糖或壳聚糖衍生 物为主要消炎功能成分制备而成，透明质酸钠和纤维素衍生物先后在碱性、酸性环境下交 联而成，形成醚键和酯键两种交联键;交联结束后采用纯化水将交联凝胶充分纯化，并制 粒，获得均匀的凝胶颗粒，从而保证产品良好的物理形态及功效;将壳聚糖水溶液加入均匀 凝胶颗粒中混合均匀，并除去气泡，得到复合凝胶，采用干燥成型，壳聚糖或壳聚糖其衍生 物不经交联，均匀分散在透明质酸钠和纤维素衍生物交联而成的保水性极佳的三维交联结 构中，对于创伤部位的消炎抗菌作用更加迅速持久。本发明方法安全性高，操作简便，交联 体系一步制备，仅通过调节pH值便可完成二步交联，大大缩短交联时间，便于工业化生产。 具有以下有益效果：
[0043] (1)本发明以透明质酸钠和纤维素衍生物为主要成分，添加具有显著抑菌消炎效 果的壳聚糖或其衍生物分散在交联的保水三维结构中，可获得质地均一的生物多糖功能 层，生物相容性好，无免疫原性，各成分均可生物降解，安全性高，并可更加快速持久的发挥 消炎杀菌功效；
[0044] (2)本发明制备的创伤敷料透水、透气且能控制水分蒸发，明显减轻了创面的渗 出，能防止体液和水分的损失且不会造成敷料与创面之间的积液，减轻疼痛;敷料具有优异 的吸收渗液、止血、加速愈合、抑菌抗炎的功能，同时敷料的吸液容量可调，适用于轻度至重 度渗液性皮肤创伤的吸液、护创和修复，吸液护创效果显著，适用范围更广；
[0045] (3)本发明通过对凝胶制粒和梯度真空冷冻干燥，所得敷料均匀柔软、一致性佳， 生物相容性好、安全性高，使用时呈溶胀状态，柔软且具有橡胶弹力，减轻外来因素对创面 损伤细胞及组织的刺激和机械损伤，可维持创面适宜湿度，为伤口提供湿性坏境，不会与创 面粘连，消除创面的干、紧、痛、痒等感觉，不会产生二次创伤，适用于轻度到重度渗液性皮 肤创伤的吸液、护创和修复，对于创伤部位的消炎抗菌作用迅速，便于更换，使用方便。
[0046] (4)本发明成本低，工艺周期短，不使用有机溶剂，污染小，耗能低，且原料可大批 量生产，易于实现产业化。
【具体实施方式】
[0047] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。如无特别说明，下述 实施例中的浓度均为质量浓度。
[0048] 实施例1
[0049] 为了考察壳聚糖或其衍生物以及不同纤维素衍生物对于本发明可降解生物创伤 敷料的影响，在本实施例中同时制备几种不同组成的可降解生物创伤敷料。
[0050] 可降解生物创伤敷料的制备方法为：
[0051 ] (1)调节去离子水pH值至10,加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)，混合均匀得混 合溶液，1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚加入量占透明质酸钠和纤维素衍生物总质量的1%，透明 质酸钠和纤维素衍生物充分溶于去离子水中，浓度为5% ;
[0052] (2)将透明质酸钠（1000kD)与羧甲基纤维素钠(A组），或者将透明质酸钠（1000kD) 与羟乙基纤维素钠(B组），或者将透明质酸钠（1000kD)(C组），或者将透明质酸钠（1000kD) 与羧甲基纤维素钠(D组），或者将透明质酸钠（1000kD)与羧甲基纤维素钠(E组)溶于混合溶 液中，混合均匀并使生物多糖充分溶解，40°C反应进行碱性交联，交联6h;
[0053] (3)碱性交联后，调节反应体系pH值至5,40°C下进行酸性交联，交联8h;
[0054] (4)碱酸交联后，将A组、B组、C组、D组、E组交联后的凝胶分别倒入透析袋中，放入 磷酸盐缓冲液中充分透析纯化；
[0055] (5)将纯化后交联凝胶过60~120目筛网制粒；
[0056] (6)将水溶性壳聚糖溶于纯水中，制备2%的壳聚糖溶液，将海藻酸钠溶于纯水中， 制备2%的海藻酸钠溶液;将壳聚糖溶液分别与A组、B组、C组纯化制粒后的交联凝胶充分混 合，并除气泡，备用，将海藻酸钠溶液与E组纯化后的交联凝胶充分混合，并除气泡，备用;D 组交联凝胶不做处理；
[0057] (7)将步骤(6)处理得到的A组、B组、C组、E组复合凝胶和步骤(4)处理得到的D组交 联凝胶分别倒入模具中，在-40°C~-50°C预冻抽空后，先后于-30°C~-10°C、0°C~15°C进 行梯度温度真空冷冻干燥成型，加压成膜；
[0058] (8)采用医用压敏胶将步骤(7)所得膜分别与透气性能良好的无纺布或医用聚氨 酯薄膜粘合，并在40°C下充分固化，使粘合牢固，另外在膜的另一侧覆保护膜；
[0059] (9)将步骤(8)制得的产品包装后终端辐照灭菌，即得可降解生物创伤敷料。
[0060] 上述制备方法中，透明质酸钠:纤维素衍生物：水溶性壳聚糖/海藻酸钠的质量比 均为1:0.25:0.2。所得的可降解生物创伤敷料中功能性有效成分原料如下:A组:透明质酸 钠/水溶性壳聚糖/羧甲基纤维素钠，B组:透明质酸钠/水溶性壳聚糖/羟乙基纤维素钠 ，C 组:透明质酸钠/水溶性壳聚糖，D组:透明质酸钠/羧甲基纤维素钠，E组:透明质酸钠/水溶 性壳聚糖/海藻酸钠。
[0061]下面，选用健康新西兰兔进行体表创伤止血护创促愈试验，以比较5组敷料的差 异，试验时同时以传统创伤敷料作为阳性对照。
[0062] 1、试验方法如下：
[0063] 新西兰兔，36只，按性别、体重随机分为A、B、C、D、E以及对照组共六组，每组6只，雌 雄各半，先以脱毛剂对家兔背部脱毛，24h后以1%戊巴比妥钠30mg/kg耳缘静脉注射麻醉。 无菌条件下使用7号注射器针头在脱毛区皮肤型划伤（以渗血而无明显出血为度），A、B、 C、D、E五组分别采用上述五种功能成分各异的敷料置于创伤部位，对照组采用传统棉纱敷 料，前30s每隔5s观察伤口的流血情况，30s后每隔30秒观察伤口的流血情况，用滤纸条轻轻 蘸吸直至血液不再渗出，即滤纸条上不再沾有血液为止，记录所需时间即出血时间。超过 15min仍未止血的，按压止血，出血时间以15min计。使用纱布绷带腹部缠绕固定。12小时后 去掉外敷物，记录创面情况，用生理盐水清洗，更换外敷物，每日1次，连续3天。3天后去掉外 敷受试物，使创面自然恢复，每日观察记录创面情况，连续12天，每天观察动物整理情况及 受损区的红肿、结痂、脱痂等情况。
[0064] 2、试验结果
[0065]各组敷料使用效果见表1。从表中可以看出：A、B、C、D、E五组敷料止血、消炎、促愈 的效果均显著优于传统创伤敷料;采用本发明透明质酸钠/纤维素衍生物/水溶性壳聚糖组 合的A组、B组敷料机械性能优异，柔韧性佳止血效果好，3d后伤口愈合良好，未有炎症反应； 而D、E组在止血、消炎、促愈合方面的效果差于A、B组，3d时伤口红肿，产生轻微炎症反应。 [0066]此外，在使用过程中观察，A、B、D、E组敷料柔软，与皮肤贴合性好，使用时结构稳 定，可维持适宜的机械强度，易更换，不会造成二次伤害。C组功能性有效成分质硬，易造成 二次伤害，与皮肤贴合性差，贴敷于伤口后易散开、不易更换，敷料残留明显。
[0067]综合产品功能性及机械性评价，A、B组敷料优势显著。
[0068]表1生物创伤敷料效果观察
[0070] 实施例2
[0071] 为了考察干燥方式以及背称材质对于本发明可降解生物创伤敷料的影响，在本实 施例中同时制备4种可降解生物创伤敷料。
[0072] 可降解生物创伤敷料的制备方法为：
[0073] (1)调节去离子水pH值至12,加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀得混合溶 液，1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚加入量占透明质酸钠和纤维素衍生物总质量的2%，透明质酸 钠和纤维素衍生物充分溶于去离子水中，浓度为2% ;
[0074] (2)将透明质酸钠(500kD)与羧甲基纤维素钠溶于混合溶液中，混合均匀并使生物 多糖充分溶解，30°C反应进行碱性交联，交联6h;
[0075] (3)碱性交联后，调节反应体系pH值至3,30°C下进行酸性交联，交联10h;
[0076] (4)酸性交联后，将交联后的凝胶倒入透析袋中，放入纯水中充分透析纯化；
[0077] (5)将纯化后凝胶过60~120目筛网制粒；
[0078] (6)将羧甲基壳聚糖溶于纯水中，制备2%的壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液与纯化制 粒后的交联凝胶充分混合，并除气泡，备用；
[0079] (7)将步骤(6)处理得到的复合凝胶倒入模具中，在-40°C~-50°C预冻抽空后，先 后于-30°C~-10°C、(TC~15°C梯度变温真空冷冻干燥成型，加压成膜(A组），或者放入烘箱 40°C干燥成型(B组）；
[0080] (8)采用医用压敏胶将步骤(7)所得A组膜分别与透气性能良好的高弹透性无纺布 (A1组)或医用聚氨酯薄膜(A2组)粘合，采用医用压敏胶将B组膜分别与透气性能良好的高 弹透性无纺布(B1组)或医用聚氨酯薄膜(B2组)粘合，粘合后均在25°C下充分固化，使粘合 牢固，另外在膜的另一侧覆保护膜；
[0081] (9)将步骤(8)制得的产品包装后终端辐照灭菌，即得可降解生物创伤敷料。
[0082] 上述制备方法中，透明质酸钠:羧甲基纤维素钠:羧甲基壳聚糖的质量比为1:4: 2， 所得四种敷料有以下不同：A1组：真空冷冻干燥/高弹透性无纺布背称，A2组:真空冷冻干 燥/医用聚氨酯背称，B1组:烘箱干燥/高弹透性无纺布背称，B2组:烘箱干燥/医用聚氨酯背 称。
[0083]选用健康Wistar大鼠进行股动脉止血试验，以比较4组敷料的差异。
[0084] 1、试验方法：
[0085] 大鼠50只，随机分为医用透明质酸钠无菌海绵六142,81，82四组以及模型对照组， 每组10只。大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠30mg/kg，麻醉成功后，常规脱毛、消毒铺巾，剥离股 动脉，用动脉夹夹住近心端，结扎远心端，将动脉横向剪开占直径2/3的切口。打开动脉夹， 擦去喷出的血液，分别将A1，A2，Bl，B2以及传统棉纱敷料置于切口，同时将精确称重的纱布 盖在止血材料上，用150g砝码压lmin之后每30s观察一次出血情况，以移去砝码后lOmin不 再出血为"止血"，记录止血时间。用分析天平精确称量止血前后止血材料与纱布的质量，计 算出血量。
[0086] 2、试验结果
[0087]各组敷料使用效果见表2,从表中可以看出，采用真空冷冻干燥和烘箱干燥的敷料 均有益于创伤，止血、消炎效果均很好，但真空冷冻干燥所得敷料的吸液速度和吸液量明显 优于烘箱干燥成型的敷料。由于两种干燥方式所得敷料饱和吸液量不同，因此可以适用于 不同深度及液体渗出量的创伤。而背称的不同材质不会对敷料效果造成显著影响。
[0088]表2生物创伤敷料效果观察
[0090] 实施例3
[0091] 在本实施例中，采用1500kD透明质酸钠、水溶性壳聚糖、羧甲基纤维素钠制备可降 解生物创伤敷料，各成分用量关系如表3所示。
[0092] 表3成分配比
[0094]制备方法如下：
[0095] (1)调节去离子水pH值至11，加入1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀得混合溶 液，透明质酸钠和纤维素衍生物充分溶于去离子水中，浓度为5% ;
[0096] (2)将透明质酸钠与羧甲基纤维素钠溶于混合溶液中，混合均匀并使生物多糖充 分溶解，35 °C反应进行碱性交联，交联2h;
[0097] (3)碱性交联后，调节反应体系pH值至3,35°C下进行酸性交联，交联8h;
[0098] (4)碱酸交联后，将交联后的凝胶倒入透析袋中，放入磷酸盐缓冲液中充分透析纯 化；
[0099] (5)将纯化后凝胶过60~120目筛网制粒；
[0100] (6)将水溶性壳聚糖溶于纯水中，制备10 %的壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液与纯化制 粒后的交联凝胶充分混合，并除气泡，备用；
[0101] (7)将步骤(6)处理得到的复合凝胶倒入模具中，在-40°c~-50°c预冻抽空后，先 后于-30°C~-10°C、(TC~15°C进行梯度温度真空冷冻干燥成型，加压成膜；
[0102] (8)采用医用压敏胶将步骤(7)所得膜与透气性能良好的医用聚氨酯薄膜粘合，粘 合后在40°C下充分固化，使粘合牢固，另外在膜的另一侧覆保护膜；
[0103] (9)将步骤(8)制得的产品包装后终端辐照灭菌，即得可降解生物创伤敷料。
[0104] 下面，选用健康新西兰兔进行体表创伤止血护创促愈试验，以比较这9组敷料的差 异。1、试验方法：
[0105] 选用新西兰兔，36只，每组4只，耳部脱毛后，轻弹几下。距左耳尖部6cm用消毒的手 术刀片横向划破耳缘静脉，以明显出血为度，擦拭创面，将相应受试物覆盖创面，并且开始 计。每隔15sec用滤纸条轻轻蘸吸直至滤纸条上不再沾有血液为止，记录所需时间即为有效 止血时间。本试验采用自身对照的方法，以相同力度在距右耳尖部6cm用消毒的手术刀片横 向划破耳缘静脉，仅使用医用纱布止血，记录有效止血时间。在试验过程中，观察各组止血 材料在不大力按压的情况下能否与伤口贴合，以考察在静脉出血时供试品与组织的粘附 性。2、试验结果
[0106] 试验结果见下表4,几组创伤敷料与自身对照相比均具有显著的止血吸液护创的 效果。此外，试验过程中，通过ABC组的对比、DEF组的对比、GHI组的对比可以看出，交联剂加 入量多则相同大小创伤敷料吸液量大，颗粒感强，粘附性小。通过ADG组的对比、BEH组的对 比、CFI组的对比可以看出，随着纤维素衍生物加入比重增加，创伤敷料机械强度更好，柔韧 性强;随着透明质酸钠比重增加，创伤敷料吸液能力增强，机械强度降低。因此，BDDE用量优 选占透明质酸钠和纤维素衍生物总质量的2.5%，透明质酸钠:水溶性壳聚糖:羧甲基纤维 素钠的质量比优选为1:2: 2。
[0107] 表4新西兰兔耳静脉创伤愈合效果观察
[0109] 实施例4
[0110] 在本实施例中，采用2000kD透明质酸钠，透明质酸钠/羧甲基纤维素钠/羧甲基壳 聚糖的质量比为1: 2:1，1，4_丁二醇二缩水甘油醚加入量占透明质酸钠和纤维素衍生物总 质量的1.5%。制备步骤为：
[0111] (1)调节去离子水pH值至10,加入1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀得混合溶 液；
[0112] (2)将透明质酸钠与羧甲基纤维素钠溶于混合溶液中，混合均匀并使生物多糖充 分溶解，35 °C反应进行碱性交联，交联6h;
[0113] (3)碱性交联后，调节反应体系pH值至3,35°C下进行酸性交联，交联14h;
[0114] (4)碱酸交联后，将交联后的凝胶倒入透析袋中，放入纯水中充分透析纯化；
[0115] (5)将纯化后凝胶过60~120目筛网制粒；
[0116] (6)将羧甲基壳聚糖溶于纯水中，制备8%的壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液与纯化制 粒后的交联凝胶充分混合，并除气泡，备用；
[0117] (7)将步骤(6)处理得到的复合凝胶倒入模具中，在-40°C~-50°C预冻抽空后，先 后于-30°C~_10°C、0°C~15°C进行梯度温度真空冷冻干燥成型；
[0118] (8)将步骤(7)成型后的产物加压成膜，在无纺布背称涂高黏胶，将该膜均匀铺于 高黏胶上，在35°C下充分固化，使膜与无纺布复合在一起，所得产品进行切割，包装后终端 辐照灭菌，得可降解生物创伤敷料A;将步骤(7)干燥成型后的产物碾压成粉末，辐照灭菌， 得可降解生物创伤敷料B。
[0119]下面，选用健康新西兰兔进行体表创伤止血护创促愈试验，以比较这2组敷料的差 异，试验方法参照实施例1。
[0120] A、B两种创伤敷料使用效果见下表5,从表中可以看出，A、B两种敷料均能快速止 血、Id后观察，伤口愈合情况均良好，护创促愈效果都很好，本试验为出血量较少的静脉出 血止血，若出血量较大，粉末状敷料附着在创伤部位附着性差，容易分散掉落，止血、消炎、 促愈效果会降低。
[0121] 表5
[0123] 实施例5
[0124] 参照公开号CN103920182A中的交联方法进行敷料的制备，透明质酸钠:羧甲基纤 维素钠:羧甲基壳聚糖的质量比为1:4:2,步骤如下：
[0125] (1)调节去离子水pH值至12，加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀得混合溶 液，1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚加入量占透明质酸钠和纤维素衍生物总质量的2.5%;
[0126] (2)将透明质酸钠(500kD)与羧甲基纤维素钠溶于混合溶液中，混合均匀并使生物 多糖充分溶解，30°C反应进行碱性交联，交联4h;
[0127] (3)将羧甲基壳聚糖溶于纯水中，加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀，得到 8 %的壳聚糖溶液，1，4-丁二醇二缩水甘油醚的用量为步骤(1)中1，4-丁二醇二缩水甘油醚 用量的一半；
[0128] (4)将步骤(3)的壳聚糖溶液加入步骤(2)碱性交联得到的产物中，混合均匀，调节 反应体系pH值至5，30°C下进行酸性交联，交联12h;
[0129] (5)酸性交联后，将交联后的混合凝胶倒入透析袋中，放入磷酸盐缓冲液中充分透 析纯化；
[0130] (6)将纯化后凝胶过60~120目筛网制粒；
[0131] (7)将步骤(6)纯化得到的复合凝胶倒入模具中，在_40°C~_50°C预冻抽空后，先 后于-30°C~-10°C、(TC~15°C进行梯度温度真空冷冻干燥成型，加压成膜；
[0132] (8)采用医用压敏胶将步骤(7)所得膜分别与透气性能良好的高弹透性无纺布或 医用聚氨酯薄膜粘合，粘合后在30°C下充分固化，使粘合牢固，另外在膜的另一侧覆保护 膜；
[0133] (9)将步骤(8)制得的产品包装后终端辐照灭菌，即得可降解生物创伤敷料。
[0134] 将该实施例与实施例2A1组可降解生物创伤敷料进行Wistar大鼠大面积创伤试 验，试验方法为:大鼠20只，随机分为该实施例组(A)以及实施例2A1可降解生物创伤敷料组 (B)，每组10只，大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠30mg/kg，麻醉成功后，常规脱毛、消毒铺巾，挫 伤大鼠背部皮肤至大面积出血，分别将两组敷料置于创伤部位，同时将精确称重的纱布盖 在止血材料上，用150g砝码压lmin之后每30s观察一次出血情况，以移去砝码后lOmin不再 出血为"止血"，记录止血时间。
[0135] 试验结果如下表6所示，从表6可以看出，护理大面积创伤时，实施例2的敷料能够 快速吸收渗液、止血、消炎，伤口愈合快速、良好，护创促愈效果优异。而实施例5的敷料虽然 也有止血效果，但是止血速度明显低于实施例2,并且产生了轻微的炎症反应，消炎效果低， 伤口愈合情况也明显慢于实施例2的敷料。由此可以看出，透明质酸钠、羧甲基纤维素钠、羧 甲基壳聚糖交联方式的改变对于敷料的吸液、止血、消炎、促愈效果均有较大影响。
[0136] 止血膜与生物创伤敷料均可快速止血，采用止血膜护理大面积创伤，产生了轻微 的炎症反应，而本专利生物创伤敷料护创促愈效果优异，并未发生炎症反应，且使用更加简 单方便，不需要采用其他二级敷料固定于创伤部位，更有益于创伤部位的愈合。
[0137] 表6大面积创伤愈合效果观察
[0139] 实施例6
[0140] 参照公开号CN103055353B中的交联方法进行产品的制备，编号为A，2000kD透明质 酸钠:羧甲基纤维素钠的质量比为1:1，1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚加入量占透明质酸钠和羧 甲基纤维素钠总质量的1.5%，步骤如下：
[0141] (1)将透明质酸钠与羧甲基纤维素钠溶于去离子水中，配制成溶液，调节pH值至 10,得碱性溶液；
[0142] (2)向碱性溶液中加入1，4-丁二醇二缩水甘油醚，搅拌均匀，35 °C反应；
[0143] (3)调节反应液pH值至3,倒入模具中流延成型，35°C反应，然后烘箱中恒温干燥成 膜；
[0144] 采用2000kD透明质酸钠，透明质酸钠/羧甲基纤维素钠/羧甲基壳聚糖的质量比为 1:1:1，1，4_丁二醇二缩水甘油醚加入量占透明质酸钠和羧甲基纤维素钠总质量的1.5%。 制备步骤为：
[0145] (1)调节去离子水pH值至10,加入1，4_ 丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀得混合溶 液；
[0146] (2)将透明质酸钠与羧甲基纤维素钠溶于混合溶液中，混合均匀并使生物多糖充 分溶解，35 °C反应进行碱性交联，交联6h;
[0147] (3)碱性交联后，调节反应体系pH值至3,35°C下进行酸性交联，交联8h;
[0148] (4)碱酸交联后，将交联后的凝胶倒入透析袋中，放入纯水中充分透析纯化；
[0149] (5)将纯化后凝胶分别过60目、80目、100目、120目筛网制粒得到均匀凝胶颗粒，分 别记为 B1、B2、B3、B4;
[0150] (6)将羧甲基壳聚糖溶于纯水中，制备8%的壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液分别与透 析纯化未制粒的交联凝胶颗粒充分混合，并除气泡，记为C组;将壳聚糖溶液分别与透析纯 化制粒后的交联凝胶颗粒B1、B2、B3、B4充分混合，并除气泡，记为B1、B2、B3、B4组；
[0151] (7)将步骤(6)处理得到的复合凝胶倒入模具中，在-40°C~_50°C预冻抽空后，先 后于-30°C~-10°C、(TC~15°C进行梯度温度真空冷冻干燥成型，加压成膜；
[0152] 将以上几组可降解生物创伤敷料进行Wistar大鼠肝创伤止血修复的可行性研究， 以比较这6组敷料的差异。
[0153] 1、试验方法
[0154] 大鼠42只，自由饮水进食，饲养1周后进行实验。按随机数字表法分为A组、C组和B1 ~Μ组，每组7只，2只观察止血时间和吸液量，5只观察完全降解时间。大鼠腹腔注射1%戊 巴比妥钠30mg/kg麻醉大鼠。仰卧固定于手术台上，逐层开腹，游离并暴露肝脏左叶，用组织 钳在肝脏左叶中间位置切取下一块肝组织（5mmX3mmX2mm)，造成敞开型伤口，立即记录时 间，自由出血5s后分别贴敷几组敷料，然后用10g砝码压20s，取下观察30s。如果创面仍在出 血再按上述步骤操作，如此循环直到止血记为止血成功，记录每只大鼠的止血时间，另每组 5只挫伤肝脏后将相同大小敷料置于创面，缝合伤口，分别于4(1、10(1、20(1、30(1、60(1观察敷料 降解情况。
[0155] 2、试验结果
[0156] 试验结果如下表7所示，A组敷料为透明致密的薄片状，致密均匀。B1-B4组敷料为 均匀细密的白色疏松海绵状，C组敷料也为白色疏松海绵状。B1-B4组敷料目测可见质地均 十分均匀、无裂痕，而C组敷料质地不均匀，裂痕较多。起始止血时间B、C组显著快于A组，B1 ~B4组随制粒筛网目数增大而止血速度加快，C组质地不均，从而吸液速度和止血时间与B 组相比有显著差距。与A组相比，B、C组敷料吸液止血快速、吸液量大、降解时间快，A组敷料 止血速度慢、吸液量少、但在创伤部位可维持较长时间，避免创伤组织发生粘连。
[0157] 表7不同敷料止血及降解效果观察 「01581
[0159]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的 保护范围。
【主权项】
1. 一种可降解生物创伤敷料的制备方法，其特征是包括以下步骤： (1) 调节水的pH值至10~12,加入交联剂，混合均匀得混合溶液； (2) 将透明质酸钠与纤维素衍生物溶于上述混合溶液中，混合均匀并使生物多糖充分 溶解，进行碱性交联； (3 )碱性交联后，调节反应体系pH值至3~5，进行酸性交联； (4) 酸性交联后，将交联所得的凝胶进行透析、纯化、制粒，得到细致均匀的交联凝胶颗 粒； (5) 将水溶性壳聚糖或水溶性壳聚糖衍生物溶于水中，制得壳聚糖水溶液，将该水溶液 与步骤(4)的交联凝胶颗粒混合均匀，并除去气泡，得到复合凝胶； (6) 将复合凝胶倒入模具中，干燥，即得可降解生物创伤敷料。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述纤维素衍生物为带有羟基或羧基活 性基团的纤维素衍生物，优选为羧甲基纤维素钠或羟乙基纤维素钠;所述水溶性壳聚糖衍 生物指的是对壳聚糖进行改性使其能够溶于水，但没有改变壳聚糖杀菌消炎功能的壳聚糖 衍生物，优选为羧甲基壳聚糖;透明质酸钠的分子量为500 kD~1500 kD。3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:透明质酸钠与纤维素衍生物的质量比为 1:0.25~0.25:1，优选为1: 2-4;透明质酸钠与水溶性壳聚糖或水溶性壳聚糖衍生物的质量 比为 1:0.2~0.5:1，优选为2:1 -1:2。4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:步骤（1)中，交联剂的加入量占透明质酸 钠和纤维素衍生物总质量的0.2~4%。5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述碱性交联的温度为30t>4(TC，时间 为2~6 h;所述酸性交联的温度为30°040°C，时间为8~14h。6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:步骤(4)中，将交联所得的凝胶倒入透析 袋中，放入磷酸盐缓冲液或纯水中进行透析、纯化。7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:步骤(4)中，制粒所用筛网为60-120目。8. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤(5)中，壳聚糖水溶液的浓度为2~ 10wt%〇9. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:步骤(6)中，干燥为真空冷冻干燥或恒温 干燥，优选为真空冷冻干燥;所述真空冷冻干燥采用梯度升温的方式进行，具体为:先在-40 °〇-50°C预冻抽真空，然后依次于-30°C~-10°C、0°C~15 °C进行真空冷冻干燥。10. -种可降解生物创伤敷料，其特征是:根据权利要求1-9中任一项所述的可降解生 物创伤敷料的制备方法制得。
【文档编号】C08L5/04GK105833331SQ201610343739
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】冯晓毅, 宋永民, 耿凤, 郭学平
【申请人】华熙福瑞达生物医药有限公司