一种用于抑郁症的药物组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种药物组合物，由贯叶连翘提取物和银杏叶提取物组成；以所述药物组合物的重量为基准，所述贯叶连翘提取物占20％～80％，余量为所述银杏叶提取物。本发明还提供一种含有上述药物组合物的药物制剂。此外，本发明还提供所述药物组合物和所述药物制剂在制备治疗抑郁症的药物中的应用。药效试验表明，本发明的药物组合物对抑郁有显著疗效，从而可以为临床提供一种治疗抑郁症的新选择。
【专利说明】
一种用于抑郁症的药物组合物
技术领域
[0001] 本发明属于医学和药学领域，具体涉及一种新的用于抑郁症治疗的药物组合物。
【背景技术】
[0002] 抑郁症，又称抑郁障碍，以显著而持久（至少2周以上，甚至长达数年）的心境低落 为主要临床特征，是心境障碍的主要类型。临床可见心境低落与其处境不相称，情绪的消沉 可以从闷闷不乐到悲痛欲绝，自卑抑郁，甚至悲观厌世，可有自杀企图或行为;甚至发生木 僵;部分病例有明显的焦虑和运动性激越;严重者可出现幻觉、妄想等精神病性症状。
[0003] 抑郁症是一种高患病率、高疾病负担、高复发率、高致残率、高自杀率的慢性精神 疾病。据世界卫生组织统计，全球抑郁症发病率约为11 %，全球约有3.4亿抑郁症患者。严重 的患者中有15 %会选择自杀来结束生命，2/3的患者曾有过自杀的念头，每年因抑郁症自杀 死亡的人数估计高达100万。当前抑郁症已经成为世界第四大疾病，预计到2020年可能将成 为仅次于心脏病的人类第二大疾患。我国大范围抑郁症患病情况的调查还没有开展，只是 在不同的地区开展了抑郁症的患病率调查。已有的数据显示我国抑郁症患病率各地区的差 异比较大，在1.6%-4.1%之间。鉴于我国抑郁症患者的低就诊率，实际发生率应该更高。
[0004] 越来越多的研究表明，躯体疾病如肿瘤、糖尿病、关节炎、慢性疼痛、心血管疾病等 慢性疾病跟抑郁症互为危险因素，有共同发病的风险。如关节炎、背疼、头疼的患者患抑郁 症风险是普通人群的1.9到3.2倍，抑郁症患者发生肿瘤、心血管疾病、中风的风险也较高。 因此，抑郁症的防治成为医药领域的研究热点。
[0005] 随着基因组学、脑影像学、神经科学研究的深入，2010年《自然》杂志主编Philip Campbel提出抑郁症是脑部发育性疾病，至此，抑郁症属于功能性疾病的观念被彻底更正， 因此，药物治疗仍然是当前抑郁症治疗的主要手段。自20世纪80年代以来，抑郁症治疗的研 究取得了长足的进步，特别是第3代抗抑郁药5-羟色胺再摄取抑制剂的诞生，开启了抑郁症 治疗的新篇章，随后10年相继研发出第4代5-羟色胺与去甲肾腺素双通道再摄取抑制剂 (SNRI类，如万拉法新）、5_羟色胺与去甲肾腺素双通道调节剂(NaSSa类，如米氮平），为医师 给患者制订个性化治疗方案提供了更安全、更有效、更多的药物选择。尽管第3、4代抗抑郁 药有更高的治疗缓解率、更好的耐受性而成为一线抗抑郁药物，而且对中、重度抑郁症也具 有良好的疗效，但目前一线抗抑郁药物的治愈率仅为30%，起效时间2-4年(王祖新.抑郁症 的药物治疗[J].中华内科杂志，1998，37(11): 783)。近年，药物研究最新热点的氯胺酮具有 快速起效的特点。研究表明氯胺酮治疗抑郁症4~72h治疗有效率及治愈率平均为77 %和 43%，但维持疗效时间较短（Murrough J W，et al.R apid and longer-term antidepressant effects of repeated ketamine infusions in treatment-resistant major depression[J].Biol Psychiatry?2013?74(4):250-256)〇
[0006] 除了经典的化学药物研发思路，药物研究人员和机构还致力于从包括中草药在内 的天然药物等多种途径寻找更加有效和安全的抗抑郁症药物。
[0007] 现有技术中已经出现了这样的药物组合物。如公开号CN102961452A(【公开日】2013 年3月13日）、发明名称为"一种用于缓解抑郁的药物组合物及其制备方法"的中国发明专利 申请，公开了一种由5-HTP(5-羟色氨酸）20份、盐酸维生素B615份、贯叶连翘提取物30份和 卡瓦提取物30份组成的药物组合物。又如公开号CN102847050A(【公开日】2013年1月2日）、发 明名称为"一种用于治疗抑郁症的中药有效部位组合物"的中国发明专利申请，公开了一种 包括以贯叶连翘总黄酮为有效部位的贯叶连翘提取物、以姜黄素为有效部位的姜黄提取 物、以人参皂苷为有效部位的人参提取物的中药有效部位组合物。再如公开号 CN104147090A(【公开日】2014年11月19日）、发明名称"一种治疗抑郁症的药物组合物"公开一 种由甜叶菊100~300份、合欢皮100~200份、云木香100~150份和银杏叶60~100份为原料 的药物组合物。
[0008] 虽然有新药的面市，但是显然抑郁症的治疗手段还远不能满足患者对疗效和治疗 结局的期待。
【发明内容】
[0009] 针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种药物组合物。药效试验表明，该组 合物对抑郁有显著的疗效，从而可以为临床医生和患者提供一种治疗抑郁症的新选择。
[0010] 为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：
[0011] -种药物组合物，由贯叶连翘提取物和银杏叶提取物组成。
[0012] 优选的，以所述药物组合物的重量为基准，所述贯叶连翘提取物占20%~80%，余 量为所述银杏叶提取物。
[0013] 更优选的，以所述药物组合物的重量为基准，所述贯叶连翘提取物占20%~60%， 余量为银杏叶提取物。
[0014] 进一步更优选的，以所述药物组合物的重量为基准，所述贯叶连翘提取物占40% ~60 %，余量为银杏叶提取物。
[0015] 最优选的，以所述药物组合物的重量为基准，所述贯叶连翘提取物占60%，所述银 杏叶提取物占40 %。
[0016] 优选的，上述药物组合物中，所述贯叶连翘提取物总金丝桃素不少于0.30%，贯叶 金丝桃素不少于3.0%。
[0017] 优选的，上述药物组合物中，所述银杏叶提取物总黄酮醇苷不少于24.0%，含萜类 内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的总量计不少于6.0%。
[0018] 本发明的另一个目的在于提供一种含有上述药物组合物的药物制剂。
[0019] 所述药物制剂可以含有也可以不含有药学上可以接受的辅料。
[0020] 所述药物制剂为口服制剂，包括但不限于片剂、胶囊剂、软胶囊剂、泡腾片、口腔速 溶膜剂、口腔崩解片、口服液。
[0021] 本发明还有一个目的在于提供上述药物制剂的制备方法，包括将上述药物组合物 和药学上可以接受的辅料混合，按照常规方法制备成临床上可以接受的制剂。
[0022] 此外，本发明还有一个目的在于提供上述药物组合物和所述药物制剂在制备治疗 抑郁症的药物中的应用。
[0023] 本发明所述的药学上可以接受的辅料，包括（1)稀释剂(又称填充剂），如淀粉、蔗 糖、糊精、碳酸钙、硫酸钙、轻质氧化镁、微晶纤维、甘露醇、乳糖、预胶化淀粉；（2)崩解剂，如 干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、泡腾崩解 剂等；（3)润湿剂，如蒸馏水、乙醇等；（4)粘合剂，如糖粉与糖浆、淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、 纤维素衍生物、胶浆、糊精等；（5)润滑剂，如硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、微粉硅胶、氢化植 物油、聚乙二醇；以及必要的着色剂、芳香剂和甜味剂等等。
[0024]对体重60公斤的成年人，本发明提供的药物组合物的临床用量范围为口服600~ 1200mg/日，优选为900mg/日。
【附图说明】
[0025]以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
[0026]图1示出试验例1中大鼠体重变化曲线，其中" 表示空白组，"奮"表示模型 组表示阳性组，" "表示药物I组，"-I、"表示药物II组，表示药物III组， " 表示药物IV组，".、、、、、、、:"表示药物V组，""表示药物VI组。
[0027]图2示出的是试验例1中CUMS抑郁模型对大鼠糖水偏好的影响，其中1为空白组，2 为模型组。
[0028]图3示出的是试验例1中各试验组大鼠血浆中N0的含量测定结果；其中，图3A是各 试验组大鼠血浆中N0-1的含量测定结果，图3B是各试验组大鼠血浆中N0-2的含量测定结 果。图中，1是空白组，2是模型组，3是阳性组，4是药物I组，5是药物II组，6是药物III组，7是 药物IV组，8是药物V组，9是药物VI组。
[0029]图4示出的是试验例1中各试验组大鼠血浆中C0RT的含量测定结果；其中，图4A是 各试验组大鼠血浆中C0RT-1的含量测定结果，图4B是各试验组大鼠血浆中C0RT-2的含量测 定结果。图中，1是空白组，2是模型组，3是阳性组，4是药物I组，5是药物II组，6是药物III 组，7是药物IV组，8是药物V组，9是药物VI组。
[0030] 图5示出的是试验例1中各试验组大鼠矿场实验的结果，其中图5A为水平运动测定 结果，图5B为垂直运动测定结果。图中，1是空白组，2是模型组，3是阳性组，4是药物I组，5是 药物II组，6是药物III组，7是药物IV组，8是药物V组，9是药物VI组。
[0031] 图6示出的是试验例1中各试验组大鼠海马组织中5-HT含量的测定结果。图中，1是 空白组，2是模型组，3是阳性组，4是药物I组，5是药物II组，6是药物III组，7是药物IV组，8 是药物V组，9是药物VI组。
[0032]图7示出的是试验例1中各试验组大鼠海马组织中NE含量的测定结果。图中，1是空 白组，2是模型组，3是阳性组，4是药物I组，5是药物II组，6是药物III组，7是药物IV组，8是 药物V组，9是药物VI组。
[0033]图8示出的是试验例1中各试验组大鼠海马组织中BDNF含量的测定结果。图中，1是 空白组，2是模型组，3是阳性组，4是药物I组，5是药物II组，6是药物III组，7是药物IV组，8 是药物V组，9是药物VI组。
【具体实施方式】
[0034] 以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅 用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
[0035] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药 材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品，其中，
[0036]贯叶连翘提取物片，商品名称路伏^泰?，每片含贯叶连翘干燥提取物300mg;德国 威玛舒培博士药厂生产，进口药品注册证号:Z20090005;
[0037]贯叶连翘提取物:含贯叶金丝桃素3.0%，总金丝桃素0.30 % ;购自重庆高仁生物 科技有限公司；
[0038]银杏叶提取物含总黄酮醇苷24.0%，砲类内酯（以以白果内酯、银杏内酯A、银杏内 酯B和银杏内酯C的总量计)6.0% ;购自重庆高仁生物科技有限公司。
[0039]实施例1 一种药物组合物 [0040]所述药物组合物的组成为：
[00411 贯叶连翘提取物40g，银杏叶提取物10g。
[0042]将上述提取物混合均匀，即得。
[0043]实施例2-种药物组合物
[0044]所述药物组合物的组成为：
[0045] 贯叶连翘提取物30g，银杏叶提取物20g。
[0046] 将上述提取物混合均匀，即得。
[0047]实施例3-种药物组合物 [0048]所述药物组合物的组成为：
[0049] 贯叶连翘提取物20g，银杏叶提取物30g。
[0050] 将上述提取物混合均匀，即得。
[0051 ] 实施例4 一种药物组合物
[0052]所述药物组合物的组成为：
[0053] 贯叶连翘提取物10g，银杏叶提取物40g。
[0054] 将上述提取物混合均匀，即得。
[0055]试验例1本发明所述药物组合物的抗抑郁作用研究 [0056] 实验动物及实验药品
[0057] 1.实验动物:SD大鼠，雄性，130_170g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许 可证号：SCXK(湘）2013 - 0004。
[0058] 2 ?实验药品：
[0059] 贯叶连翘提取物片，商品名称路従*泰?，每片含贯叶连翘干燥提取物300mg;德国 威玛舒培博士药厂生产，进口药品注册证号:Z20090005;
[0060] 贯叶连翘提取物:含贯叶金丝桃素3.0%，总金丝桃素0.30 % ;购自重庆高仁生物 科技有限公司；
[0061] 银杏叶提取物含总黄酮醇苷24.0%，砲类内酯（以以白果内酯、银杏内酯A、银杏内 酯B和银杏内酯C的总量计)6.0% ;购自重庆高仁生物科技有限公司。
[0062] 动物饲养:
[0063] 室内温度（18°C~24°C)，进食量(10g/100g体重? d)，饮水(每周换水2~3次）。
[0064] 实验动物分组及给药方案
[0065] 1.动物分组:实验大鼠随机分为9组，每组12只大鼠，6只/笼，每组2笼：
[0066] ①空白对照组:生理盐水，灌胃，lml/100g体重?天
[0067] ②模型组：同"空白对照组"
[0068] ③阳性药组:贯叶连翘提取物片（路优泰? )
[0069] ④药物I组:贯叶连翘提取物:银杏叶提取物=1:0，
[0070] ⑤药物II组:贯叶连翘提取物:银杏叶提取物=4:1 (实施例1的组合物），
[0071 ]⑥药物III组:贯叶连翘提取物:银杏叶提取物=3:2(实施例2的组合物），
[0072] ⑦药物IV组:贯叶连翘提取物:银杏叶提取物=2:3(实施例3的组合物），
[0073] ⑧药物V组:贯叶连翘提取物:银杏叶提取物=1:4(实施例4的组合物），
[0074] ⑨药物VI组:贯叶连翘提取物:银杏叶提取物=0:1。
[0075] 2 ?给药剂量：
[0076] 路优泰@_每片含贯叶连翘提取物300mg，成人3片/d;若成人体重按60kg计，根据成 人/大鼠换算比例，大鼠每日给药量为：
[0077] 900mg/60X6.3kg ? d = 94.5mg/kg ? d [0078]各药物组的每日给药剂量也为94.5mg/kg ? d。
[0079] 3 ?药液配制：
[0080]①生理盐水的配制:称取9g氯化钠，用双蒸水定容至1000ml容量瓶中。
[0081 ]②阳性药药液的配制:取路伏^泰?片4片，去包衣，碾碎至粉末，称取0.945g粉末， 用少量生理盐水溶解，定容至l〇〇ml容量瓶中，配制成9.45mg/ml的溶液。按照所述方法，随 用随配。
[0082]③药物组药液的配制:分别取贯叶连翘提取物、实施例1~实施例4的组合物、以及 银杏叶提取物各〇.945g，用少量生理盐水溶解，定容至100ml容量瓶中，配制成9.45mg/ml的 溶液。按照所述方法，随用随配。
[0083] 4 ?给药方案：
[0084]造模第15天开始给药，药物组灌胃给予相应药液，模型组和空白组灌胃给予等体 积生理盐水，每天1次，连续4周
[0085]实验动物造模:慢性温和不可预见性应激(CUMS)
[0086]通过利用一系列轻、中等强度的不可预知刺激(潮湿垫料、置于空笼、倾斜鼠笼、明 暗颠倒、强光刺激、高频振荡、冷水游泳、禁食、禁水等）的方式对大鼠连续实施6周，每天随 机1 一 2种刺激，造成CUMS的大鼠抑郁模型。
[0087] 实验过程及结果:
[0088] 1 ?体重增长率
[0089] 1)实验方法:造模第1天，第7天，第14天，第21天，第28天，第35天，第42天测量所有 各实验组大鼠体重。
[0090] 2)结果:见表1及图1。
[0091] 表1各试验组大鼠体重（
[0093] 与空白组比较，口〈0.05;#:与模型组比较，p〈0.05。
[0094] 3)结论：
[0095] 实施应激后，各造模组大鼠体重增长缓慢，实验第14天、21天、28天、35天、42天，与 空白组比较，模型组、阳性药组、各药物组大鼠体重均显著减轻(P〈〇.05);经药物治疗后，造 模大鼠体重有所增加，实验第28天、第35天、第42天，与模型组比较，阳性药组、药物I组、药 物II组、药物III组大鼠体重均显著增加(P〈〇. 05);与阳性药组比较，药物I~VI组大鼠体重 无显著性差异。
[0096] 2.糖水消耗实验
[0097] 1)实验方法:造模第14天给予大鼠刺激后，将空白组大鼠和模型组大鼠进行独笼 饲养，在环境安静的条件下使大鼠适应性含糖饮水1天，禁食禁水24小时后，每笼放置1瓶纯 水，1瓶1.5%蔗糖水各50ml，2瓶位置随机摆放，12小时后测定纯水和糖水的消耗量，由下列 计算出糖水偏好率。
[0098] 糖水偏好率=糖水消耗量/(纯水消耗量+糖水消耗量）X 100%
[0099] 2)实验结果:见表2及图2。
[01 00]表2抑郁模型对大鼠糖水偏好的影响
[0102] 与空白组比较，p〈0.05。
[0103] 3)数据分析：造模2周后，与空白组比较，模型组大鼠的糖水偏好率显著下降（P〈 〇. 05);表明模型组大鼠经造模后含糖饮水减少，快感缺失。说明造模成功。
[0104] 3.血浆中皮质酮(C0RT)和N0含量测定
[0105] 1)实验方法:造模第14天、第42天给予大鼠刺激后，对各组大鼠进行眼眶取血(血 浆），取血后大鼠正常饲养和给药;将所取血液静置1小时，离心(3000r/min，20min)，取上清 液置于EP管中，低温保存待测。测定时将血浆样本在室温下解冻，采用ELISA法检测血浆中 CORT和NO的含量。
[0106] 2)实验结果:分别见表3和表4,以及图3和图4。其中，各试验组大鼠血浆中N0-1的 含量测定结果见图3A，各试验组大鼠血浆中N0-2的含量测定结果见图3B，各试验组大鼠血 浆中C0RT-1的含量测定结果见图4A，各试验组大鼠血浆中C0RT-2的含量测定结果见图4B。
[0107] 表3各试验组大鼠血浆中N0含量的影响（$ ± §)
[0109] 与空白组比较，口〈0.05;#:与模型组比较4〈0.05 ;&:与阳性药组比较，？〈0.05。
[0110] 表4各试验组大鼠血浆中C0RT含量的影响（i 士 s)
[0112] 与空白组比较，p〈0.05。
[0113] 3)数据分析：
[0114] ①造模2周后，与空白组比较，各造模大鼠血浆中N0含量明显升高(P〈0.05);造模6 周结束后，各造模大鼠血浆中N0含量持续升高，与空白组比较有显著性差异(p〈0.05)。与模 型组比较，药物II~VI组大鼠血浆中N0含量显著降低(p〈0.05)。与阳性药组比较，药物III、 V和VI组大鼠血浆中N0含量显著降低(p〈0.05)。
[0115] ②造模2周后，各组大鼠血浆中C0RT含量无明显差异;造模6周结束后，与模型组比 较，阳性药组、药物I~IV组大鼠血浆中C0RT含量显著减少(P〈0.05);与阳性药组比较，各给 药组间大鼠血浆中C0RT含量无明显差异。
[0116] 4.旷场实验(水平运动次数，垂直运动次数）
[0117] 1)实验方法：
[0118]在造模第42天给予大鼠刺激后，进行旷场实验，将大鼠放置于25格无盖方箱的中 心，即刻观察大鼠在3分钟内的活动情况，测定大鼠水平运动和垂直运动得分:大鼠穿越方 格数为水平活动得分，穿越1格(三爪以上跨入)为1次;直立次数(两前肢离地lcm以上)为垂 直活动得分，每只大鼠仅进行1次，每次3min。每只大鼠测试结束后，要及时将大鼠排泄物清 除干净，以免影响下次实验。
[0119] 2)实验结果:见表5及图5。
[0120] 表5各试验组大鼠旷场实验测定结果x ± S)
[0122] 与空白组比较，口〈0.05;#:与模型组比较，p〈0.05。
[0123] 3)数据分析：
[0124] CUMS造模结束后，模型组大鼠水平运动和垂直运动次数均明显减少(P〈0.05);经 药物治疗后，与模型组比较，阳性药组、药物I~VI组大鼠水平运动和垂直运动次数均显著 增加(P〈0.05);与阳性药组比较，各给药组大鼠水平运动和垂直运动次数无明显差异。
[0125] 5.大鼠海马组织中各神经递质含量的测定
[0126] 1)实验方法：
[0127] 造模第42天给予大鼠刺激后，将各组大鼠颈椎脱白处死，取脑，在冰台上，分离称 取海马组织，放入组织匀浆器中，加入9倍PBS(pH7.4)匀浆，制成10%海马组织匀浆液，将匀 浆液置入离心管中，于4°C条件下以3000r/min速度离心20min，静置后仔细收集上清液，置 于1.5mlEP管中，-70°C保存，采用ELISA法检测下丘脑中5-HT(5-羟色胺）、NE(去甲肾上腺 素）、BDNF(脑源性营养因子)的含量。
[0128] 2)实验结果:见表6、及图6~8。
[0129] 表6各试验组大鼠海马组织中神经递质含量测定结果（i ± S)
[0131] 与空白组比较，口〈0.05;#:与模型组比较4〈0.05 ;&:与阳性药组比较，？〈0.05。
[0132] 3)数据分析：
[0133] ①5-HT是脑内单胺类神经递质，有研究表明抑郁症的发生是脑内5-HT释放减少， 突触间隙5-HT含量下降导致的结果。造模42天后，模型组大鼠海马组织5-HT含量明显减少， 与空白组比较有显著性差异(P〈〇.05);与模型组比较，阳性药组、药物I~VI组大鼠海马5-HT含量显著增加(P〈0.05);与阳性药组比较，各药物组大鼠海马5-HT含量无明显差异，但是 药物III组的5-HT水平高于药性药组。各药物组别间相互比较，药物III组（贯叶连翘提取 物/银杏叶提取物=3:2)与其他各组均有显著性差异。
[0134] ②NE是由多巴胺经酪氨酸羟化酶作用生成的神经递质，有学说认为抑郁症是中枢 神经系统中去甲肾上腺素合成和释放减少引起的。造模42天后，模型组大鼠海马组织NE含 量明显减少，与空白组比较有显著性差异(P〈〇. 05);与模型组比较，阳性药组、药物I~IV组 大鼠海马5-HT含量显著增加(P〈0.05);与阳性药组比较，各药物组大鼠海马NE含量无明显 差异，但是药物III组的NE水平高于药性药组。各药物组别间相互比较，药物III组（贯叶连 翘提取物/银杏叶提取物=3:2)与其他各组均有显著性差异。
[0135] ③BDNF能刺激新生神经元突起的生长，促进新生神经元的发育和成熟;应激损伤 的初期，可通过调节神经细胞内的钙浓度，减少神经细胞坏死或凋亡，对神经元起保护作 用。BDNF不仅可以通过促进轴突和树突的生长、重构及突触形成，调节神经的结构可塑性， 还可以通过突触前和突触后机制改变突触传递，影响神经的功能可塑性。造模42天后，模型 组大鼠海马组织BDNF含量明显减少，与空白组比较有显著性差异(P〈0.05);与模型组比较， 药物III~VI组大鼠海马BDNF含量显著增加(P〈0.05)，阳性药虽然能够提高BDNF的水平，但 是与模型组比较没有显著性差异(P > 0.05);与阳性药组比较，药物VI组大鼠海马BDNF含量 显著增加(P〈〇.05)。各药物组间相互比较，药物V和VI组与其他各组有显著性差异。
[0136] 结果分析:
[0137] 1.对大鼠连续给予轻、中等强度的不可预知刺激7天时就能观察到大鼠体重显著 降低，14天时大鼠的糖水消耗量明显降低、42天时大鼠的水平运动次数和垂直运动次数都 显著减少，说明造模成功。
[0138] 2.药物II组(实施例1的组合物)和III组(实施例2的组合物)能够显著提高抑郁大 鼠的体重、改善其行为学，作用与阳性药物路犹^泰?相当。
[0139] 3.血浆中N0水平过高，可对组织和细胞造成损伤。模型大鼠的N0-2水平显著高于 空白组，本发明的组合物都能够显著降低N0-2水平，阳性药组的N0-2水平虽然有所下降，但 是与模型组比较没有显著差异。提示本发明的组合物可以对组织和细胞起到保护作用，且 作用强于阳性对照。
[0140] 4.研究认为抑郁是因为大脑中相关神经递质，如5-HT、NE、BDNF等合成和释放的减 少。本试验的模型大鼠即表现出脑内上述神经递质水平显著降低（与空白组比较）。本发明 实施例1-4的组合物(药物II~V组)能够显著提高抑郁大鼠脑组织中5-HT、NE、BDNF的水平， 尤其是实施例2的组合物(药物III组），其在提高5-HT和NE水平方面的作用好于阳性药组。 [0141]综合试验测定结果看，本发明的组合物能够显著纠正抑郁引起的大鼠各项指征的 异常，其中贯叶连翘提取物:银杏叶提取物=3:2、2:3和1:4的组合物作用较优。尤其是贯叶 连翘提取物:银杏叶提取物=3 :2，与阳性药路优泰6比较，该优选的组合物既有5-HT和NE 单胺类神经递质的再摄取的功效，又能保护神经细胞，提高神经功能可塑性。
[0142] 试验例2本发明所述药物组合物抗利血平致小鼠抑郁的药效学研究
[0143] 实验动物及实验药品
[0144] 1.实验动物：SPF级ICR小鼠，雄性，150只，体重18-2lg，湖南斯莱克景达实验动物 有限公司提供，许可证号：SCXK (湘)2011 -0003。
[0145] 2 ?实验药品
[0146] 贯叶连翘提取物:含贯叶金丝桃素3.0%，总金丝桃素0.30 % ;购自重庆高仁生物 科技有限公司；
[0147] 银杏叶提取物含总黄酮醇苷24.0%，萜类内酯（以以白果内酯、银杏内酯A、银杏内 酯B和银杏内酯C的总量计)6.0% ;购自重庆高仁生物科技有限公司。
[0148] 盐酸氯米帕明：购自购自江西中医药大学附属医院，批号:22150401。
[0149] 利血平:购自成都普菲德生物技术有限公司，批号：150314。
[0150] 动物饲养:
[0151] 室内温度（18°C~24°C)，进食量(10g/100g体重? d)，饮水(每周换水2~3次）。
[0152] 实验动物分组及给药方案
[0153] 1.动物分组及给药剂量:实验小鼠随机分为6组，每组10只小鼠，5只/笼，每组2笼：
[0154] ①空白对照组:生理盐水(NaCl 9g/L)，灌胃，lml/100g体重?天
[0155] ②模型组：同"空白对照组"
[0156] ③阳性对照组:盐酸氯米帕明，40mg ? kg-1 ? d-1
[0157] @高剂量组:贯叶连翘提取物+银杏叶提取物(质量比3:2)，272.1611^*1^4?(^
[0158] ?中剂量组:贯叶连翘提取物+银杏叶提取物(质量比3:2)，136.0811^1^_ 1*(1_1
[0159] ⑥低剂量组:贯叶连翘提取物+银杏叶提取物(质量比3:2)，68.04mg ? kg"1 ? cf1
[0160] 2 ?药液配制：
[0161] ①利血平溶液的制备:给药量为4mg ? kg<，取0.04g利血平粉末，用少量生理盐水 溶解，定容至l〇〇ml容量瓶中，配置浓度为0.4mg ? mr1。
[0162] ②生理盐水的配制:称取9g氯化钠，用双蒸水定容至1000ml容量瓶中。
[0163] ③阳性药药液的配制：取盐酸氯米帕明，去包衣，碾碎至粉末，称取0.2667g粉末， 用少量生理盐水溶解，定容至l〇〇ml容量瓶中，配置浓度为2.667mg ? mr1。
[0164] ④高剂量组药液的配制：取贯叶连翘提取物1.0887g、银杏提取物0.7257g，混合， 用少量生理盐水溶解，定容至l〇〇 ml容量瓶中。
[0165] ⑤中剂量组药液的配制：取贯叶连翘提取物0.5443g、银杏提取物0.3692g，混合， 用少量生理盐水溶解，定容至l〇〇 ml容量瓶中。
[0166] ⑥低剂量组药液的配制：取贯叶连翘提取物0.2721g、银杏提取物0.1815g，混合， 用少量生理盐水溶解，定容至l〇〇 ml容量瓶中。
[0167] 4.给药方案
[0168] 各组灌胃给予药物或生理盐水，每日1次，连续给药7d(给药体积均按0.015mL ? g 4 ? cf1);末次给药后，除空白对照组外，其它各组腹腔注射4mg ? kg-1利血平，腹腔注射给药 体积按0.01ml ? g-1 ? d-1。
[0169] 实验过程及结果:
[0170] 1.体温下降的观测：
[0171] 末次给药4h后将温度计探头插入小鼠肛门内，深度以温度计探头完全进入肛门为 准，维持至少2min。记录各组数据，比较给药组及对照组中体温的差异。具体结果见表7。
[0172] 表7各组体温测定结果（X. 士 S)
[0174] 注：与空白组比较，*表示P〈0.05，#表示P〈0.01;与模型组比较，▲表示P〈0.05，^ 表示P〈0.01
[0175] 数据分析：模型组小鼠腹腔注射利血平后体温与空白组比较降低非常显著（P〈 0.01)，表明利血平致抑郁模型造模成功；阳性对照组和中剂量组与模型组比较都具有显著 差异(P〈0.05)，但两者升高因利血平导致的体温下降的作用相当，无显著性差异。
[0176] 2.小鼠血清中NE，DA和脑组织中5-HT含量的测定
[0177] 在末次给药后8h，摘眼球取血，将所取血液静置1小时，离心（3000r/min，20min)， 取上清液置于EP管中，低温保存待测。取血后，断头处死动物，在冰盘上剥离大脑，去掉小脑 和嗅球，保留剩余的全脑组织，用锡箱纸包裹，_70°C保存。加入9倍PBS(PH7.4)匀浆，制成 10%脑组织匀浆液，将匀浆液置入离心管中，于4°C条件下以3000r/min速度离心20min，静 置后仔细收集上清液，置于2mlEP管中，-70°C保存待测。
[0178] 采用ELI SA法检测小鼠血清中NE、DA，和脑组织5-HT的含量。结果见表8。
[0179] 表8小鼠血清和脑组织中神经递质的含量测定结果（i ± s)
[0181] 注：与空白组比较，*表示P〈0.05，#表示P〈0.01;与模型组比较，▲表示P〈0.05，^ 表示P〈0.01
[0182] 数据分析：
[0183] 1)模型组小鼠血清中DA含量明显减少，与空白组比较具有极显著性差异（P〈 0.01)，表明利血平致抑郁模型造模成功；与模型组比较，阳性药组和各剂量组小鼠血清中 DA含量均显著增加(P〈0.01)，说明本发明的药物组合物高中低剂量均能够显著升高抑郁小 鼠血清中DA含量;与阳性药组比较，各剂量组小鼠血清中DA含量无显著差异。
[0184] 2)模型组小鼠血清中NE含量明显减少，与空白组比较具有极显著性差异（P〈 0.01)，表明利血平致抑郁模型造模成功；与模型组比较，阳性药组和各剂量组小鼠血清中 NE含量均显著增加(P〈0.01)，说明本发明的药物组合物高、中、低剂量均具能显著提高血清 中NE的含量;与阳性药组比较，各给药组均有显著性差异(P<0.05)。
[0185] 3)模型组小鼠脑组织中5-HT含量明显减少，与空白组比较具有极显著性差异(P〈 0.01)，表明利血平致抑郁模型造模成功；与模型组比较，阳性药组和中低剂量组小鼠脑组 织中5-HT含量均显著增加，说明本发明的药物组合物中低剂量均能够显著升高抑郁小鼠脑 组织中5-HT含量;与阳性药组比较，低剂量组小鼠脑组织中5-HT含量与之相当。
[0186] 实验结论
[0187] 利血平所致抑郁小鼠在各项生理指标都表现为异常，如体温显著降低、血清和脑 组织中的相关神经递质水平显著降低。贯叶连翘提取物和银杏提取物以质量比3:2组成的 药物组合物，能够逆转上述异常的生理指标，显示出对于抑郁有良好的药效，且作用大多与 阳性药相当；特别的，本发明的药物组合物三个剂量组升高抑郁小鼠血清中NE水平的作用 强于阳性对照药。因此，综合上述药效实验结果，本发明的药物组合物治疗抑郁的作用好于 盐酸氯米帕明。
[0188] 总之，本发明提供了一种新的可以用于治疗抑郁的药物组合物，由贯叶连翘提取 物和银杏叶提取物组成。药效学试验表明，本发明的药物组合物对抑郁模型动物有显著的 疗效，尤其是贯叶连翘提取物:银杏叶提取物=3:2(重量比）的药物组合物，在调节相关生 化指标和神经递质方面，作用优于现有技术的路优泰 51和盐酸氯米帕明。
[0189] 以上对本发明【具体实施方式】的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本 发明做出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范 围。
【主权项】
1. 一种药物组合物，由贯叶连翘提取物和银杏叶提取物组成。2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，以所述药物组合物的重量为基准， 所述贯叶连翘提取物占20%~80%，余量为所述银杏叶提取物。3. 根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，以所述药物组合物的重量为基 准，所述贯叶连翘提取物占20%~60%，余量为银杏叶提取物； 优选的，以所述药物组合物的重量为基准，所述贯叶连翘提取物占40%~60%，余量为 银杏叶提取物。4. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，以所述药物组合物的重量为基准， 所述贯叶连翘提取物占60%，所述银杏叶提取物占40%。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述贯叶连翘提取物 总金丝桃素不少于〇. 30%，贯叶金丝桃素不少于3.0%。6. 根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述银杏叶提取物总 黄酮醇苷不少于24.0%，含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的总 量计不少于6.0%。7. -种含有权利要求1至6中任一项所述药物组合物的药物制剂； 优选的，所述药物制剂含有或不含有药学上可以接受的辅料。8. 根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂为口服制剂，选自片剂、 胶囊剂、软胶囊剂、泡腾片、口腔速溶膜剂、口腔崩解片和口服液中的一种或多种。9. 权利要求7或8所述的药物制剂的制备方法，包括将上述药物组合物和药学上可以接 受的辅料混合，按照常规方法制备成临床上可以接受的制剂。10. 权利要求1至6中任一项所述的药物组合物和权利要求7或8所述的药物制剂在制备 治疗抑郁症的药物中的应用。
【文档编号】A61P25/24GK105853479SQ201610268990
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】张海燕, 杨明, 宋民宪, 方洋, 赖琼, 李游
【申请人】江西中医药大学