一种具有保健功效的食品、保健品或药物组合物及其制备方法和用图
【专利摘要】本发明提供了一种保健品或/和药物组合物，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂：金钗石斛6?10份、玛咖6?10份、佛手2?5份，本发明保健品或/和药物组合物，配方精当，可有效清除体内自由基，具有良好的抗氧化、抗衰老、抗疲劳、补肾壮阳、提高免疫功能等作用，具有良好的保健、医用价值。
【专利说明】
一种具有保健功效的食品、保健品或药物组合物及其制备方 法和用途
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种保健品或/和药物组合物及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 石斛，为兰科植物金钦石斛Dendrobium nobile Lindl ·、鼓植石斛Dendrobium chrysotoxum Lindl.或流苏石斛Dendrobium fimbriatum Hook.的栽培品及其同属植物近 似种的新鲜或干燥茎。【性味与归经】甘，微寒。归胃、肾经。【功能与主治】益胃生津，滋阴清 热。用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目 暗不明，筋骨痿软。
[0003] 玛咖来源于十字花科(Cruciferae)独行菜属(Lepidium)l年生或2年生栽培植物 或野生植物玛咖(Lepidium meyenii Walp.)的干燥根和根莖。玛咖在国外有着几千年的民 间药用和食用历史，2003年玛咖成功引入我国云南丽江种植基地和新彊种植基地。其具有 提高生育能力、抗疲劳、改善性功能、抗氧化、抑制前列腺增生、缓解更年期综合症、增强免 疫力等多种功效，因此受到世界各国的广泛关注。
[0004] 佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)为芸香科柑桔属植物的干 燥成熟果实，又名"佛手香橡"、"蜜罗柑"、"福寿橘"，该属全世界约有20余种，原产亚洲东南 部及南部，果实中主要含挥发油，主要用于理气，化痰之药用。佛手性温，味辛，苦、酸。入肝、 脾、肺、经。《本草纲目》载："煮酒饮，治痰气咳嗽;煎汤，治心下气痛。"《本草再新》曰："治气 舒肝，和胃化痰，破积，治噎膈反胃，消症瘕瘰疬。"《滇南本草》："补肝缓胃，止呕吐，消胃寒 痰，治胃气疼痛。"佛手含有柠檬油素、柠檬苦素、二甲氧基香豆精、三羟基二甲氧基黄酮、胡 萝卜苷、β-谷留醇、对羟基苯丙烯酸、棕榈酸、琥珀酸、柠檬油素二聚体、小量香叶木苷及橙 皮苷等生理活性成分。
[0005] 未见将三种药物组合使用的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供了一种新的药味较少，功效明确的保健品或/和药物组合 物。
[0007] 本发明具有保健功效的的食品、保健品或药物组合物，它是由如下重量配比的原 料药制备而成的制剂:石斛6-10份、玛咖6-10份、佛手2-5份。
[0008] 优选地，所述具有保健功效的的食品、保健品或药物组合物由如下重量配比的原 料药制备而成的制剂:石斛10份、玛咖10份、佛手5份。
[0009] 其中，所述的石斛为兰科石斛属植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.的茎。
[0010] 所述具有保健功效的食品、保健品或药物组合物由原料药的药粉、原料药的水或 有机溶剂提取物为活性成分，加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
[0011] 其中，所述有机溶剂为浓度为30%~70%的含水乙醇或30度-70度的粮食酒。
[0012]所述制剂为颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂、片剂或酒剂。
[0013] 本发明还提供了前述食品、保健品或药物组合物的制备方法，
[0014] (1)按照前述配比称取原料药；
[0015] ⑵将原料药混合后，用酒提取，提取液经沉淀、过滤，即得。
[0016] 其中，所述酒的浓度为30度-70度的粮食酒。
[0017] 粮食酒:是指以高粱、玉米、大米、懦米、大麦、小麦、小米、青稞等各种粮食为原料， 经过糖化、发酵后，采用蒸馏方法酿制的白酒。
[0018] 其中，提取的方法为浸泡或渗滤提取。
[0019] 本发明还提供了前述食品、保健品或药物组合物在制备抗衰老、抗疲劳、补肾壮 阳、提高免疫或抗氧化的食品、保健品或药物组合物中的用途。
[0020] 本发明还提供了前述食品、保健品或药物组合物在制备自由基清除剂的食品、保 健品或药物组合物中的用途。
[0021] 本发明保健品或/和药物组合物，配方精当，可有效清除体内自由基，具有良好的 抗氧化、抗衰老、抗疲劳、补肾壮阳、提高免疫功能等作用，具有良好的保健、医用价值。
[0022] 下面通过【具体实施方式】对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限 制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述 基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
【具体实施方式】
[0023]粮食酒：由泸州老窑集团有限责任公司提供 [0024]实施例1本发明食品、保健品或者药物组合物的制备
[0025]取金钗石斛(干品）10g、玛咖(干品）10g、佛手(干品）5g，用1000g 50度粮食酒浸泡 20天，沉淀、过滤，弃去药渣，得到滤液，即为保健酒成品。
[0026]实施例2本发明食品、保健品或者药物组合物的制备
[0027]取金钗石斛(干品）6g、玛咖(干品）6g、佛手(干品）2g，用100g 50度粮食酒渗漉，漉 速为lmL/min，合并漉液，加900g 50度粮食酒，混匀，沉淀、过滤，滤液即为保健酒成品。
[0028]实施例3本发明食品、保健品或者药物组合物的制备
[0029]取金钗石斛(干品）10g、玛咖(干品）10g、佛手(干品）5g，用1000g 30度粮食酒浸泡 20天，沉淀、过滤，弃去药渣，得到滤液，即为保健酒成品。
[0030] 以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
[0031] 试验例1本发明组合物的抗衰老研究
[0032] 1 材料
[0033] 1.1受试品与试剂本发明组合物酒剂(实施例1制备的本发明组合物），棕色液体， 人体推荐日摄入量为60mL/60kg，BW;考马斯亮兰（批号20140324)、丙二醛（MDA，批号 20140427)、超氧化物歧化酶(S0D，批号20140426)、单胺氧化酶(ΜΑ0,批号20140428)检测试 剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
[0034] 1.2实验动物清洁级昆明种小鼠，体18_22g，雌雄各半，由西南医科大学实验动物 中心提供，生产许可证号SCXK(川）2013-17,使用许可证号SCXK(川）2013-065。
[0035] 1.3仪器756PC紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；XW-80A旋涡混匀 器(江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；恒温水浴锅(重庆实验设备厂）
[0036] 2 方法
[0037] 2.1分组及造模将80只小鼠适应性喂养1周后，按体质量序随机分为8组：空白对 照组(NS)、模型组(NS)、酒基对照组（15%乙醇）及本发明组合物酒剂10mL(成品）/kg(剂量 为250mg生药/kg)、20mL(成品）/kg剂量组(剂量为500mg生药/kg)、拆方制剂三个组(金钗石 斛500mg/kg，玛咖500mg/kg，佛手500mg/kg)，临用前用生理盐水稀释）。除空白对照组外，其 他各组均每天颈背部皮下注射5 % D-半乳糖生理盐水溶液0.025mL/g，空白对照组每天颈背 部皮下注射等量的生理盐水，连续注射42d。造模同时开始灌胃给药，每日给药1次，连续给 药 42d。
[0038] 2.2避暗实验记录5min内小鼠进入暗室的电击次数(错误次数），作为学习获得成 绩。24h后再次测验，记录第1次触电潜伏期（即将小鼠放人明室开始计时，到第1次双足触电 时间）和5min内小鼠进入暗室的电击次数，作为记忆保持成绩。
[0039] 2.3脾脏指数的测定行为学测试结束后，将小鼠称质量，摘眼球取血后，脱臼处 死，取脾脏称质量，计算小鼠脾脏指数，即脾脏指数=脾脏质量(mg)/小鼠体质量(10g)。
[0040] 2.4生化指标的检测各组小鼠于行为学测试完毕后，摘取小鼠眼球取血约lmL，取 血完毕后，脱臼处死小鼠，取小鼠肝组织。血液离心取血清、组织制成10%匀浆置于4°C冰箱 储存备用。SOD、MDA、MA0含量测定按试剂盒说明书进行。
[0041] 2.5统计学处理计量资料用以(无士8)表示，采用3?5513.0统计软件进行单因素 方差分析及组间两两比较。
[0042] 3 结果
[0043] 3.1本发明组合物酒剂对避暗实验的影响见表1。与模型组相比，本发明组合物酒 剂组能降低衰老模型小鼠避暗的错误次数(P〈〇.05)，改善其学习及记忆能力，具有明显促 智作用。本发明组合物与单味药材在同等剂量下的对比试验表明，金钗石斛、玛咖、佛手亦 能不同程度降低衰老模型小鼠避暗的错误次数，但作用均不及本发明组合物大剂量组(P〈 0.01或Ρ〈0·05)。
[0044] 表1本发明组合物酒剂对避暗实验的影响（J土S, η=10)
[0045]
[0046] 注：与空白对照组比较，*P<0 · 05，#P<0 · 01;与模型组比较，v P<0,05, w P<W)1; 与组合物大剂量组比较;。P<0.05，°°p<0.01。
[0047] 3.2本发明组合物酒剂对衰老小鼠脾脏指数的影响见表2。与模型组相比，本发明 组合物酒剂组能升高衰老模型小鼠的脾脏指数，说明本发明组合物酒剂在一定程度上可增 加免疫器官的质量，具有免疫增强作用。本发明组合物与单味药材在同等剂量下的对比试 验表明，金钗石斛、玛咖、佛手亦能不同程度升高衰老模型小鼠的脾脏指数，但作用均不及 本发明组合物大剂量组(P〈〇.〇l或P〈〇.〇5)。
[0048] 表2本发明组合物酒剂对衰老小鼠脾脏指数的影响（.? 士S，n=10)
[0049]
[0050] 注：与空白对照组比较，*P<0 · 05，林P<0 · 01;与模型组比较，νΡ<0.05, Ρ<0·01; 与组合物大剂量组比较;。P<0.05，°°P<0.01。
[0051 ] 3.3对衰老小鼠血清中SOD、MDA、MA0含量的影响见表3。与模型组相比，本发明组 合物酒剂组均能升高衰老模型小鼠血清中S0D水平，降低MDA、MA0含量(P〈0.05或0.01)。本 发明组合物与单味药材在同等剂量下的对比试验表明，金钗石斛、玛咖、佛手亦能不同程度 升高衰老模型小鼠血清中S0D水平，降低MDA、MA0含量，但作用均不及本发明组合物大剂量 组(Ρ〈0·01或Ρ〈0·05)
[0052 ] 表3本发明组合物酒剂对血清中SOD、MDA及肝脏中MAO含量的影响(f ±:S, 11=10)
[0053]
[0054] 注：与空白对照组比较，*Ρ<0·05,林Ρ<0·01;与模型组比较，''w P<0.01; 与组合物大剂量组比较;。P<0.05，°°P<0.01。
[0055] 4 讨论
[0056] 肾虚衰老可能与机体抗氧化活性降低、自由基清除能力减退及机体免疫系统功能 失调有关。补肾药物延缓衰老的作用机制之一，在于提高机体抗氧化活性，增强机体清除自 由基的能力。结果表明，本发明组合物酒剂能降低衰老小鼠避暗的错误次数，升高血清中 S0D含量，降低血清中MDA及肝脏中ΜΑ0含量，有一定的抗衰老作用，其机理可能与其提高抗 氧化酶活性、清除自由基有关。本发明组合物与单味药材在同等剂量下的对比试验表明，金 钗石斛、玛咖、佛手亦能不同程度降低衰老小鼠避暗的错误次数，升高血清中S0D含量，降低 血清中MDA及肝脏中ΜΑ0含量，但作用均不及本发明组合物大剂量组(P〈0.01或P〈0.05)。
[0057] 实验结果说明，本发明药物组合物可以降低衰老小鼠避暗的错误次数，升高血清 中S0D含量，降低血清中MDA及肝脏中ΜΑ0含量，具有抗衰老的作用，且与单味药材在同等剂 量下相比，效果显著提高，说明本发明三种组分在本发明特别配比下发挥了协同增效的作 用。
[0058] 试验例2本发明组合物的抗疲劳研究
[0059] 1 材料
[0060] 1.1受试品本发明组合物酒剂(实施例1制备的本发明组合物），棕色液体，人体推 荐日摄入量为60mL/60kg，BW;
[0061 ] 1.2实验动物清洁级雄性昆明种小鼠，体质量20± 2g，由由西南医科大学实验动 物中心提供，生产许可证号SCXK (川）2013-17，使用许可证号
[0062] SCXK(川）2013-065。
[0063] 1.3试剂糖原检测试剂盒、全血乳酸检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究 所。血清尿素氮(BUN)含量用全自动血液生化测定仪测定。
[0064] 2 方法
[0065] 2.1动物分组与给药:将210只小鼠适应性喂养1周后，按体质量序随机分为7组:空 白对照组(NS)、酒基对照组（15%乙醇)及本发明组合物酒剂10mL(成品）/kg(剂量为250mg 生药/kg)、20mL(成品）/kg剂量组（剂量为500mg生药/kg)、拆方制剂三个组（金钗石斛 500mg/kg,玛咖500mg/kg，佛手500mg/kg)。每组30只，灌胃给药，每日给药1次，连续给药 21d〇
[0066] 2.2指标测定：
[0067] 2.2.1称量体重实验开始及结束时称量小鼠体重，并做记录。
[0068] 2.2.2力竭游泳实验末次灌胃30min后根据体重，负荷体重5 %的铅丝，放入50cm X 40cm X 40cm水箱游泳，水温30 4± 2°C。参照MCARDLE推荐力竭实验的判断标准，记录游泳 开始时间至力竭的时问作为小鼠游泳时间。
[0069] 2.2.3运动后小鼠血清尿素氮、肝糖原、肌糖原、全血乳酸测定灌胃给药15d后，在 末次给药后30min，以无负重或负重游泳后，采取相应的标本，测定各自相应的指标。
[0070] 2.3统计学处理计量资料用以（7土3)表示，采用3?5513.0统计软件进行单因素 方差分析及组间两两比较。
[0071 ] 3 结果
[0072] 3.1对小鼠体重的影响本发明组合物酒剂，各剂量组小鼠活泼，皮毛光滑，未见不 良的反应。与对照组相比，本发明组合物酒剂各剂量组小鼠实验开始体重及结束时体重无 显著性差异(P>〇.05)，表明本发明组合物酒剂对小鼠体重增长未见明显的影响。
[0073] 3.2对小鼠力竭游泳时间的影响各组按设计剂量灌胃给药14d后，进行力竭游泳 实验，结果见表1。本发明组合物酒剂组小鼠力竭游泳时间显著延长，非常显著地高于空白 对照组小鼠（P〈〇.〇l)。
[0074] 表1本发明组合物酒剂对小鼠力竭游泳时间的影响(Y 土S，11=30)
[0075]
[0076] 注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01 ;与组合物大剂量组比较，° P< 0·05，°Ρ<0·01〇
[0077] 3.3对小鼠运动前后全血乳酸的影响各实验组按剂量灌胃给药14d后，末次给药 后30min后再负重游泳30min，分别眼眶采血检测全血乳酸，结果见表2。运动前，各组小鼠血 乳酸水平无显著差异(P>〇.05);运动后，本发明组合物酒剂各剂量组的血乳酸水平显著低 于对照组(P〈〇.01)，与阳性对照组无显著性差异，提示本发明组合物酒剂对运动后小鼠血 乳酸的升高有抑制作用。
[0078] 表2本发明组合物酒剂对小鼠力竭游泳时间的影响（I'_±S，11=30)
[0079]
[0080] 注：与空白对照组比较，*P<0 · 05，林P<0 · 01 ;与组合物大剂量组比较，° P< 0·05，°Ρ<0·01〇
[0081] 3.4对小鼠运动后血清尿素氮、肝糖原、肌糖原的影响本发明组合物酒剂对运动 后小鼠血清尿素氮、肝糖原和肌糖原影响的结果见表3。与对照组相比，本发明组合物酒剂 各组小鼠运动后血清尿素氮显著降低(Ρ〈〇.01);运动后本发明组合物酒剂组小鼠肝糖原含 量明显高于阴性对照组(Ρ〈〇.05或Ρ〈0.01)，肌糖原与对照组也有非常显著的统计学意义(Ρ 〈0.05或Ρ>0.01)。结果显示本发明组合物酒剂能明显地降低小鼠运动后血清尿素氮，并且 增加肝糖原和肌糖原的含量。
[0082] 表2本发明组合物酒剂对小鼠血清尿素氮、肝糖原和肌糖原的影响（Y±S、ll=30)
[0083]
[0084] 注：与空白对照组比较，*P<0 · 05，林P<0 · 01 ;与组合物大剂量组比较，° P< 0·05，°Ρ<0·01〇
[0085] 4 小结
[0086] 根据保健食品功能学评价程序和检验方法，若一项或一项以上的耐力运动实验如 负重游泳和爬杆，以及2项或2项以上的生化指标如血乳酸、血清尿素氮、肝/肌糖原等为阳 性，即可判定受试物具有抗疲劳活性。因此，在本实验条件下，本发明组合物酒剂有明显的 抗疲劳作用。本发明组合物与单味药材在同等剂量下的对比试验表明，金钗石斛、玛咖、佛 手亦有不同程度的抗疲劳作用，但作用均不及本发明组合物大剂量组(P〈〇.01或P〈〇.05)。
[0087] 实验结果说明，本发明药物组合物可以延长小鼠力竭游泳时间、降低小鼠血清尿 素氮、肝糖原和肌糖原，具有抗疲劳的作用，且与单味药材在同等剂量下相比，效果显著提 高，说明本发明三种组分在本发明特别配比下发挥了协同增效的作用。
[0088] 试验例3本发明组合物的补肾壮阳作用
[0089]《黄帝内经》云："男子五八肾气衰，发堕齿槁…..，意思是说男人到40岁时，开始出 现肾气衰退，表现为头发脱落掉，牙齿枯槁等症状。男人肾虚，多以肾阳虚为主。肾阳虚会导 致一系列问题，如精力不济、易疲劳、健忘、反应迟钝、性功能减低等，影响其工作和生活质 量。"本发明组合物酒剂"是经现代工艺研制而成的保健食品。本研究通过观察正常大鼠交 配能力和正常大鼠阴茎勃起，验证其补肾壮阳功效;通过计数正常大鼠附睾精子存活率和 精子密度，检测其生精作用。
[0090] 1材料与仪器
[0091] 1.1受试物与试剂本发明组合物酒剂(实施例1制备的本发明组合物），棕色液体， 人体推荐日摄入量为60mL/60kg，BW;戊巴比妥钠（sodium，pentobarbital )，北京化学试剂 公司生产，批号140919;黄体酮注射液(progesterone injection)，天津金耀氨基酸有限公 司生产，国药准字H12020534，批号1408181，规格：lml: 10mg;苯甲酸雌二醇注射液，天津金 耀氨基酸有限公司生产，批号1407061，规格：1ml: lmg;注射用青霉素钠，华北制药股份有限 公司生产，国药准字H13020657,批号F1402107。
[0092] 1.2动物SD大鼠，由西南医科大学实验动物中心提供，生产许可证号SCXK(川） 2013-17,使用许可证号SCXK(川）2013-065。实验前在实验观察室温度16~26°C，相对湿度 40%~70%，照明12h/l2h明暗交替，实验前适应观察3d，取健康动物进入实验。
[0093] 2 方法
[0094] 2.1对正常雄性大鼠交配能力的影响SD大鼠70只，雄性，体重（180 ± 10)g，按体质 量序随机分为7组：空白对照组(NS)、酒基对照组（15%乙醇）及本发明组合物酒剂10mL(成 品）/kg(剂量为250mg生药/kg)、20mL(成品）/kg剂量组(剂量为500mg生药/kg)、拆方制剂三 个组(金钗石斛500mg/kg,玛咖500mg/kg，佛手500mg/kg)，均为组合物大剂量组所含组分的 等剂量)。灌胃给药，每日给药1次，连续给药21d。
[0095] 2.1.1雌性大鼠的准备取70只雌性大鼠，体质量（180±10)g，腹腔注射3%戊巴比 妥钠溶液，0.14ml/100g麻醉，行双侧卵巢摘除术，术后连续3d肌肉注射青霉素2万U/kg，术 后2W分组实验。实验前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4h皮下注射黄体酮500只。 [0096] 2.1.2交配实验观察方法将雄性大鼠单独放人笼中使其适应环境5min，然后放人 1只雌鼠，开始记录下列数据:①自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的时间(捕捉潜伏期）；② 20min内雄鼠捕捉雌鼠或爬背的动作次数(捕捉次数）；③雄鼠自爬背成功后出现舔阴茎的 时间(射精潜伏期）；④20min内雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出现舔阴茎的次数(射精次数）。 [0097] 2.2对大鼠阴茎勃起功能的影响给药第21d，末次给药后lh，将4mA电流强度刺激 大鼠阴茎头部。记录刺激开始至阴茎勃起时间（勃起潜伏期)和阴茎勃起持续时间。
[0098] 2.3对正常雄性大鼠精子的影响给药第21d，取大鼠左侧附睾，在附睾尾纵向划一 个小口，置于3ml RPMI-1640培养基(含10%左右的动物血清）内孵育15min，制备精子悬液。 取少量精子悬液用培养基稀释5倍，加到血球计数板上，在27~300c条件下用高倍镜随机观 察200个精子的活动状态(活动的精子:活动良好、呈直线或曲线游动;不活动的精子:活动 迟缓，原地打转或不活动），并统计精子存活率(活动的精子数X100%/200)。精子悬液用培 养基稀释50倍，血球计数板计数。
[0099] 2.4统计学处理计量资料用以（无士3)表示，采用3?5513.0统计软件进行单因素 方差分析及组间两两比较。
[0100] 3实验结果
[0101] 3.1对正常雄性大鼠交配能力的影响本发明组合物酒剂明显缩短大鼠捕捉潜伏 期和射精潜伏期，提高捕捉次数和射精次数，与空白对照组比较(P〈〇.05)，提示本发明组合 物酒剂可有效提高正常大鼠交配能力。结果详见表1。
[0102] 表1本发明组合物酒剂对正常大鼠交配能力影响（〒土S, 11=10)
[0103]
[0104] 注：与空白对照组比较，*P<0.05，林P<0.01;与组合物大剂量组比较，。° P< 0.01ο
[0105] 3.2对大鼠阴茎勃起功能的影响本发明组合物酒剂明显缩短大鼠勃起潜伏期，延 长勃起持续时间，与空白对照组比较(P〈〇.05)，显示本发明组合物酒剂可增强大鼠阴茎勃 起功能。结果详见表2。
[0106] 表2本发明组合物酒剂对大鼠阴茎勃起功能的影响(无土S，11=10)
[0107]
[0108] 注:与空白对照组比较，*P<0.05;与组合物大剂量组比较，° ° P<0.01。
[0109] 3.3对正常雄性大鼠精子的影响本发明组合物酒剂可显著增加附睾精子数(P〈 〇. 05)，提高精子存活率(P〈0.01)，说明本发明组合物酒剂具有生精作用。
[0110] 结果详见表3。
[0111] 表3本发明组合物酒剂对正常雄性大鼠精子的影响（〒土S,n=10)
[0112]
[0113] 注:与空白对照组比较，*P<0.05;与组合物大剂量组比较，。P<0.05，°°P<0.01。
[0114] 4 小结
[0115] 本研究表明：本发明组合物酒剂明显缩短大鼠捕捉潜伏期和射精潜伏期，提高捕 捉次数和射精次数，显著减少大鼠勃起潜伏期，延长勃起持续时间；可显著增加附睾精子 数，提高精子存活率，具有补肾壮阳生精的作用。本发明组合物与单味药材在同等剂量下的 对比试验表明，各味药单用的效果均不及本发明组合物大剂量组(P〈〇.01或P〈〇.05)。
[0116] 实验结果说明，本发明药物组合物具有补肾壮阳、生精的作用，且与单味药材在同 等剂量下相比，效果显著提高，说明本发明三种组分在本发明特别配比下发挥了协同增效 的作用。
[0117] 试验例4本发明组合物的免疫调节作用
[0118] 本研究通过计算脾指数与胸腺指数、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验，三硝基氯 苯(PC)诱导迟发性变态反应试验和血清溶血素测定，分别观察本发明组合物酒剂对小鼠免 疫器官重量、腹腔巨噬细胞功能、细胞免疫功能和体液免疫功能的影响。
[0119] 1 材料
[0120] 1.1受试物及试剂本发明组合物酒剂(实施例1制备的本发明组合物），棕色液体， 人体推荐日摄入量为60mL/60kg，BW。瑞氏染液，弘慈医疗器械有限公司生产，批号 20140324。鸡红细胞(SRBC)，泸州卫生防疫站提供。
[0121] 1.2动物昆明种小白鼠，18~22g;豚鼠，雌雄兼用，体重300~350g。均由西南医科 大学实验动物中心提供，生产许可证号SCXK(川）2013-17，使用许可证号SCXK(川）2013-065。给药前后，动物分笼以全价颗粒饲养，自由饮水。室温:22~24°C，湿度:65~80 °C。
[0122] 2 方法
[0123] 2.1对免疫器官重量的影响将70只小鼠随机分为7组，每组10只，分别为空白对照 组、酒基对照组及本发明组合物酒剂低、高剂量组、拆方制剂三个组(金钗石斛500mg/kg，玛 咖500mg/kg，佛手500mg/kg)，均为组合物大剂量组所含组分的等剂量）。各组动物经灌胃给 药。本发明组合物酒剂低、高剂量组分别按10mL(成品）/Kg、20mL(成品）/Kg的剂量给予受试 物，空白组和洒基对照组分别给予与高剂量组等容积的生理盐水和15%的乙醇。小鼠连续 灌胃30d，每日1次，末次给药后lh，小鼠摘眼球放血处死，取脾脏和胸腺，去尽筋膜，用滤纸 吸干脏器表面血污，称重，计算脾（胸腺）指数。脾（胸腺）指数=脾（胸腺）重量(mg)/体重 (g)〇
[0124] 2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验取小鼠70只，分组同上。试验前一天给 小鼠腹腔注射2 %糖原水溶液1. OmL，使巨噬细胞从腹膜血管渗到腹腔。第10天给药后2h，每 组小鼠均腹腔注射2%鸡红细胞液lml。轻柔腹部。30min后脱颈椎处死小鼠。死亡后立即剖 开腹腔，用滴管吸出腹腔液滴加在载玻片上，每片约〇. 2ml。将载玻片放入37°C温箱中孵育 30min，生理盐水冲去附着的细胞，用瑞氏染液染色，水冲洗晾干。显微镜下观察小鼠腹腔巨 噬细胞的吞噬情况，并计算吞噬百分率和吞噬指数。吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细 胞数/巨噬细胞总数X 100% ;吞噬指数=巨噬细胞吞噬鸡红细胞的总数/巨噬细胞总数。
[0125] 2.4三硝基氯苯(PC)诱导小鼠迟发性变态反应
[0126] 2.4.1给药与致敏:取小鼠70只，分组同上。小鼠连续灌胃30d，每日1次。第二十二 天用剃毛刀片将各鼠腹部去毛，范围约3X3cm2。用微量进样器取1%PC无水乙醇溶液100μ L，均匀涂抹在剃毛区致敏，并用吹风机吹干。
[0127] 2.4.2攻击与测试:致敏第七天，将1 %PC橄榄油溶液30yL均匀涂抹于每鼠右耳(两 面)进行攻击。抗原攻击24h后，将小鼠脱白处死，沿耳廓基线剪下左右耳壳，用打孔器于同 一部位分别取下直径8_的耳片，并称重以左右耳片重量之差/左耳重作为肿胀度。
[0128] 2.5血清溶血素形成的实验取小鼠70只，体重19~21g，雌性，分组和给药方法同 2.1，给药3d后腹腔注射5 %鸡红细胞0.5mL/只致敏。免疫7d，摘眼球取血并分离血清。按文 献[3]方法取稀释100倍血清lmL加5%鸡红细胞、10%补体0.5mL混匀，置37°C恒温水浴箱温 浴30Min，取出放在冰水冷却，离心，取上清液，测A540，以半数溶血值HC 5Q(HC5Q =样品A值/ 半数溶血A值X样品稀释倍数)表示溶血素水平。
[0129] 2.6统计学分析计量资料用以（^±8)表示，采用3?5513.0统计软件进行单因素 方差分析及组间两两比较。
[0130] 3 结果
[0131] 3.1本发明组合物酒剂对小鼠免疫器官重量的影响与空白对照组比较，酒基对照 组本发明组合物酒剂10mL(成品）/Kg组动物脾脏、胸腺脏器系数未见显著性差异。本发明组 合物酒剂20mL(成品）/Kg组均能显著提高小鼠的胸腺指数和脾指数，与空白对照组比较P< 0.05,结果见表1。
[0132] 表1本发明组合物酒剂对小鼠免疫器官的影响(i±:S)(n = 10)
[0133]
[0134] 注:与空白对照组比较，*P<0.05;与组合物大剂量组比较，。P<0.05，°°P<0.01。
[0135] 2.2对小鼠巨噬细胞功能的影响本发明组合物酒剂1 OmL(成品）/Kg、20mL(成品）/ Kg组均能显著提高小鼠的吞噬百分率及吞噬指数，与空白对照组比较P<0.05或P<0.01， 结果见表2。
[0136] 表2本发明组合物酒剂对小鼠巨噬细胞功能的影响（7 土S> (η = 10)
[0137]
[0138] 注:与空白对照组比较，*Ρ<0.05;与组合物大剂量组比较，。Ρ<0.05，°°Ρ<0.01。
[0139] 3.3本发明组合物酒剂对小鼠迟发性变态反应的影响结果见表3。与空白对照组 比较，本发明组合物酒剂高剂量组可显著降低小鼠耳廓肿胀度，Ρ<〇.01。
[0140] 表3本发明组合物酒剂对小鼠迟发性变态反应的影响(.〒士S)(n = l〇)
[0141]
[0142] 注:与空白对照组比较，*P<0.05;与组合物大剂量组比较，。P<0.05，°°P<0.01。
[0143] 3.4对小鼠血清溶血素形成的影响结果显示，本发明组合物酒剂10mL(成品）/Kg/ 20mL(成品）/Kg、40mL(成品）/Kg组均能明显促进小鼠溶血素抗体形成，与空白对照组比较， ?<0.05或？<0.01，结果见表4。
[0144] 表4本发明组合物酒剂对小鼠血清溶血素形成的影响(I土S)(n = 10)
[0145]
[0146] 注:与空白对照组比较，*P<0.05;与组合物大剂量组比较，。P<0.05，° ° P<0.01。
[0147] 4 小结
[0148] 在本实验条件下，本发明组合物酒剂能显著升高脾指数与胸腺指数，提高巨噬细 胞吞噬功能，降低小鼠耳廓肿胀度，升高血清溶血素含量。因此，本发明组合物酒剂对小鼠 的免疫功能具有显有的调节作用。本发明组合物与单味药材在同等剂量下的对比试验表 明，各味药单用的效果均不及本发明组合物大剂量组(P〈〇.01或P〈〇.05)。
[0149] 实验结果说明，本发明药物组合物具有调节免疫功能，且与单味药材在同等剂量 下相比，效果显著提高，说明本发明三种组分在本发明特别配比下发挥了协同增效的作用。
[0150] 综上，本发明药物组合物可有效清除体内自由基，具有良好的抗氧化、抗衰老、抗 疲劳、补肾壮阳、提高免疫功能等作用，具有良好的保健、医用价值，应用前景良好。
【主权项】
1. 一种具有保健功效的食品、保健品或药物组合物，其特征在于:它是由如下重量配比 的原料药制备而成的制剂： 石斛6-10份、玛咖6-10份、佛手2-5份。2. 根据权利要求1所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于：它是由如下重量配 比的原料药制备而成的制剂： 石斛10份、玛咖10份、佛手5份。3. 根据权利要求1或2所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于:所述石斛为兰科 石斛属植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.的莖。4. 根据权利要求1~3任意一项所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于:它是由 原料药的药粉、原料药的水或有机溶剂提取物为活性成分，加上药学上常用的辅料或辅助 性成分制备而成的制剂。5. 根据权利要求4所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于:所述有机溶剂为浓 度为30 %~70 %的含水乙醇或30度-70度的粮食酒。6. 根据权利要求1-5任意一项所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于:所述制 剂为颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂、片剂或酒剂。7. 权利要求1-6任意一项所述食品、保健品或药物组合物的制备方法，其特征在于： (1) 按照权利要求1或2所述配比称取原料药； (2) 将原料药混合后，用酒提取，提取液经沉淀、过滤，即得。8. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于:所述酒的浓度为30度-70度的粮食酒； 和/或，提取的方法为浸泡或渗滤提取。9. 权利要求1-6任意一项所述食品、保健品或药物组合物在制备抗衰老、抗疲劳、补肾 壮阳、提高免疫或抗氧化的食品、保健品或药物组合物中的用途。10. 权利要求1-6任意一项所述食品、保健品或药物组合物在制备自由基清除剂的食 品、保健品或药物组合物中的用途。
【文档编号】A61P39/00GK105902834SQ201610405516
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年6月8日
【发明人】孙琴, 税丕先, 傅秀娟, 黄群莲, 李华云, 李芹
【申请人】西南医科大学