一种治疗肠易激综合征的中药提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种治疗肠易激综合征的中药提取物及其制备方法，该中药提取物取苍术1.6?1.8重量份、陈皮1重量份、姜半夏1重量份、厚朴1重量份、藿香1重量份、茯苓1重量份，通过超临界CO2技术萃取挥发油，并用β?环糊精包合技术对挥发油包合，采用正交设计L9(34)试验筛选醇提工艺及水提工艺，优选出最佳工艺条件。本发明的中药提取物治疗肠易激综合征效果显著，制备工艺稳定，适合工业化生产。
【专利说明】
-种治疗肠易激综合征的中药提取物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药技术领域，具体设及一种治疗肠易激综合征的中药提取物及其制 备方法。
【背景技术】
[0002] 肠易激综合征是一种临床上最常见的胃肠功能素乱性疾病，该疾病无胃肠道器质 性病变的综合征，缺乏可W解释症状的形态学改变和生化异常，具有慢性、常持续存在或间 歇发作。本病的发病率高，并有逐年上涨的趋势。其病因和发病机制尚未完全阐明，现普遍 认为是由多种发病机制共同作用的结果。祖国医学并没有IBS运一病名，根据其临床表现， 将其归属于"腹痛"、"泄泻"、"郁证"等范畴。其病因与感受外邪、情志失调、饮食不节及脏腑 虚弱等有关。
[0003] 肠易激综合征的发病率高，其中腹泻型肠易激综合征约占45-50%。由于肠易激综 合征临床表现个体差异较大，目前西医并没有一种药物对肠易激综合症治疗完全有效，主 要是对症治疗和综合治疗。近年来很多报道中采用中医药治疗腹泻型肠易激综合征，临床 实践证明治疗疗效明显，不良反应少，复发率低，显示出中医治疗该病有明显优势。
[0004] 经过文献分析及实际调查结果显示，中医药的治疗主要分为中药汤剂、中成药、针 灸治疗，W及中西医结合治疗。目前较为普遍的是中药汤剂，效果不明显，亟待开发针对腹 泻型的肠易激综合征，并且疗效确切、安全稳定，服用方便的中成药。
【发明内容】
[0005] 本发明对古方进行了继承和发展，采用超临界C〇2技术萃取挥发油，并用β-环糊精 包合技术对挥发油包合，采用正交设计L9(34)试验筛选醇提工艺及水提工艺，优选出最佳工 艺条件，加入适量辅料制成颗粒剂，本发明的治疗肠易激综合征的中药提取物制备工艺稳 定，疗效确切、安全稳定，服用方便。
[0006] 本发明的目的是通过W下方式实现的：
[0007] -种治疗肠易激综合征的中药提取物，其特征在于该中药提取物是通过W下步骤 制备得到的：
[000引取苍术1.6-1.8重量份、陈皮1重量份、姜半夏1重量份、厚朴1重量份、蕾香1重量 份、巧等1重量份；
[0009] 1)提取挥发油:苍术和陈皮采用二氧化碳超临界萃取，萃取压力为25-35MPa，萃取 溫度36-48°C，萃取时间1-化，C〇2流量为20-24HZ，所得挥发油除水后备用，药渣另存；
[0010] 2)醇提:取厚朴、姜半夏，与苍术、陈皮两味提取挥发油后的药渣，加总重6-10倍量 的浓度为70-90%的乙醇，提取1-3次，每次加热保持微沸1-2小时，合并醇提液，静置，滤过， 药渣备用，醇提液减压浓缩至60°C时的相对密度为1.25~1.30的清膏；
[00川 3)水提:取蕾香、巧等与上述醇提后的药渣，加6-10倍量的水，加热保持微沸1-2小 时，提取1-3次，合并水提液，静置，滤过，水溶液减压浓缩至60°C时的相对密度为1.25~ 1.30的清膏；
[001^ 4)挥发油的包合:按照挥发油:β-环糊精l:4-8ml/g的比例称取β-环糊精，将β-CD 加入水研匀，倒入胶体磨中，边研磨边缓慢连续滴加用无水乙醇溶解的挥发油，娠磨20- 40min，将得到的混合溶液于4°C下静置2地W上，抽滤，蒸馈水清洗至不再有液滴滴下时，真 空干燥，得包合物；
[0013] 5)混合:将醇提清膏、水提清膏、挥发油β-环糊精包合物混合，干燥即得。
[0014] 优选步骤1)中萃取压力为25MPa，萃取溫度48 °C，萃取时间化，C〇2流量为20化。
[0015] 优选步骤2)醇提步骤中乙醇浓度为70 %，溶媒倍量8倍，每次加热保持微沸1.5小 时，提取2次。
[0016] 优选步骤3)水提步骤中水的倍量8倍，加热保持微沸2小时，提取2次。
[0017]优选步骤4)中挥发油与β-环糊精的比例化：6ml/g。
[001引优选步骤4)中β-CD与其5倍量的水研匀，挥发油与无水乙醇按照体积比1:1比例溶 解。
[0019] 优选步骤4)中娠磨时间为40min，真空干燥溫度为40°C。
[0020] 所述的中药提取物可W与药学接受的辅料制成各种制剂，其剂型可W是丸剂、片 剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂。
[0021] 上述治疗肠易激综合征的中药提取物的制备方法包括W下步骤：
[0022] 取苍术1.6-1.8重量份、陈皮1重量份、姜半夏1重量份、厚朴1重量份、蕾香1重量 份、巧等1重量份；
[0023] 1)提取挥发油:苍术和陈皮采用二氧化碳超临界萃取，萃取压力为25-35MPa，萃取 溫度36-48°C，萃取时间1-化，C〇2流量为20-24HZ，所得挥发油除水后备用，药渣另存；
[0024] 2)醇提:取厚朴、姜半夏，与苍术、陈皮两味提取挥发油后的药渣，加总重6-10倍量 的浓度为70-90%的乙醇，提取1-3次，每次加热保持微沸1-2小时，合并醇提液，静置，滤过， 药渣备用，醇提液减压浓缩至60°C时的相对密度为1.25~1.30的清膏；
[0025] 3)水提:取蕾香、巧等与上述醇提后的药渣，加6-10倍量的水，加热保持微沸1-2小 时，提取1-3次，合并水提液，静置，滤过，水溶液减压浓缩至60°C时的相对密度为1.25~ 1.30的清膏；
[0026] 4)挥发油的包合:按照挥发油:β-环糊精l:4-8ml/g的比例称取β-环糊精，将β-CD 加入水研匀，倒入胶体磨中，边研磨边缓慢连续滴加用无水乙醇溶解的挥发油，娠磨20- 40min，将得到的混合溶液于4°C下静置2地W上，抽滤，蒸馈水清洗至不再有液滴滴下时，真 空干燥，得包合物；
[0027] 5)混合:将醇提清膏、水提清膏、挥发油β-环糊精包合物混合，干燥即得。
[0028] 上述中药提取物在制备治疗肠易激综合征的药物中的应用。
[0029] 本发明的有益效果:本发明提供的中药提取物具有治疗肠易激综合征的作用，可 用于制备治疗肠易激综合征的药物，本发明提供的方法操作简单，生产成本低，提取效果 好。
[0030] (一)工艺路线的筛选
[0031] 1、挥发油提取工艺筛选
[0032] (1)正交试验设计优选挥发油萃取参数
[0033] 考察萃取压力、萃取溫度、萃取时间及C〇2流量对挥发油萃取的影响，取苍术 187.5g、陈皮112.5g按下列因素水平表萃取，因素水平表见表1。
[0034] 表1挥发油萃取的因素水平表
[0035]
[0036] W挥发油得油量(g)为考察指标，对正交数据进行了数据分析，结果见表2。
[0037] 表2W得油量为指标的正交安排表 [00；3 引
[0039](表中提供了9个试验方案。如第6号试验是A2B3C1化，即萃取压力为30MPa，萃取溫 度为48°C，萃取1小时，C〇2流量为22化，依此类推）
[0040] W挥发油得油量为指标，极差分析结果B〉C〉D〉A，即影响因素排列顺序为：萃取溫 度〉萃取时间>0)2流量〉萃取压力。各因素与水平之间的最佳组合为A1B3C3D1，即萃取压力 25MPa，萃取溫度48 °C，萃取时间化，C〇2流量20化。
[0041] (3)验证试验
[0042] WA项作为误差项，进一步进行方差分析。
[0043] 由试验结果可知，B因素有显著性差异，故对B因素上浮一个水平（54°C)进行两次 追加实验，并依照极差分析优选的最佳参数（即萃取压力25MPa，萃取溫度48°C，萃取时间 化，0)2流量20化）进行验证试验，由结果可知，追加验证实验的参数与正交实验是吻合的， 挥发油得油量为22.25g，表明该工艺稳定可行。但是，由于溫度升高，萃余物容易板结，不易 取出，浪费了时间；并且萃余物还要继续乙醇提取，为节约成本和时间，且验证结果与试验 结果相接近，条件基本稳定可靠，因此最终选择最佳工艺参数A1B3C3化，即萃取压力25MPa， 萃取溫度48 °C，萃取时间化，CO2流量20化。
[0044] 2、醇提条件的优选研究
[0045] (1)正交试验设计筛选醇提条件
[0046] 厚朴、姜半夏等二味药材与苍术、陈皮超临界萃取挥发油后的药渣采用醇提的方 法。现考察乙醇浓度、溶媒倍量、提取时间、提取次数四个因素对提取的影响。称取相当于 32g苍术、陈皮混合药材的药渣，12g厚朴粗粉，12g姜半夏置电热套中按下述因素水平表回 流提取，因素水平表见表3。
[0047] 表3醇提条件的正交因素水平表
[004引
[0049] 我们选用澄皮巧、厚朴酪含量和浸膏量(g)为考察指标，对正交试验进行了数据分 析，结果见表4。
[0050] 表4W澄皮巧、厚朴酪含量和浸膏量为指标的综合评分正交安排表
[0化1 ]
[0化2]
[0054] (表中提供了9个试验方案。如第6号试验是A2B3C1D2,即用10倍量80%乙醇提取2 次，每次1小时依此类推）
[0055] W干膏得量为指标，极差分析结果0〉4〉〇8，即影响因素排列顺序为:提取次数〉乙 醇浓度〉提取时间〉溶媒倍量。各因素与水平之间的最佳组为A1B2C2化，WC项作为误差项，进 一步进行方差分析。D因素对实验结果有显著性影响。最佳醇提组合为乙醇浓度70%，加醇8 倍，提取3次，每次1.5小时。
[0056] W澄皮巧含量为指标，极差分析结果B〉D〉C〉A，即影响因素排列顺序为:溶媒倍量〉 提取次数〉提取时间〉乙醇浓度。各因素与水平之间的最佳组为A3B2C1化，WA项作为误差项， 进一步进行方差分析。B因素对实验结果有显著性影响。最佳醇提组合为乙醇浓度90%，加 醇8倍，提取2次，每次1小时。
[0057] W厚朴酪含量为指标，极差分析结果A〉B〉D〉C，即影响因素排列顺序为：乙醇浓度〉 溶媒倍量〉提取次数〉提取时间。各因素与水平之间的最佳组为A3B1C2化，WC项作为误差项， 进一步进行方差分析。A因素对实验结果有显著性影响。最佳醇提组合为乙醇浓度90%，加 醇6倍，提取2次，每次1.5小时。
[0058] 由于3个指标确定的最佳工艺不同，为了更加客观地评价，用综合评分寻找最佳工 艺，对3个指标赋与不同的权重，考虑到生产成本，故对3个指标分别赋予权重:将干膏得量 权重定为0.2,澄皮巧含量的权重定为0.4,厚朴酪含量的权重定为0.4。采用综合评分法:综 合评分为Υ =权重X(l〇〇-ymax+y〇,其中ymax为每个指标中的最大值，yi为第i行相应的指标 值。W综合评分为指标，极差分析结果D〉A〉C〉B，即影响因素排列顺序为：提取次数〉乙醇浓 度〉提取时间〉加醇倍量。各因素与水平之间的最佳组合为A出2C2化，WB项作为误差项，进一 步进行方差分析，各因素对实验结果的影响均不显著。最终醇提组合为乙醇浓度70%，加醇 8倍，提取2次，每次1.5小时。
[0化9] (2)醇提验证试验
[0060]称取相当于32g苍术、陈皮混合药材的药渣，12g厚朴粗粉，12g姜半夏，W8倍量 70 %乙醇提取2次，每次1.5小时。进行Ξ批验证试验，结果见表5。
[0061 ] 表5.醇提验证试验结果
[0062]
[0063] ①结论:醇提验证试验结果与正交试验结果基本吻合，因此将8倍量70 %乙醇，提 取2次，每次1.5小时，确定为最佳醇提工艺条件。
[0064] 3、水提条件的优选研究
[0065] (1)采用正交试验设计筛选水提条件
[0066] 蕾香、巧等等二味药材与上述醇提药渣采用水提的方法。W溶媒倍量、提取时间、 提取次数Ξ个因素为考察因素。采用正交设计L9(34)，称取相当于56g苍术、陈皮、厚朴、姜半 夏混合药材的药渣，12g蕾香，12g巧等置电热套中按下述因素水平表回流提取，因素水平表 见表6。
[0067]表6.水提条件的正交因素水平表 [006引
[0069] 我们选用干膏得率（％ )和多糖含量（％ )为考察指标，对正交试验进行了数据分 析，结果见表7。
[0070] 表7. W干膏得率、多糖含量为指标的综合评分正交安排表
[0071]
[0072]
[0073] (表中提供了9个试验方案。如第6号试验是A2B3C1，即用8倍量水提取1次，每次2小 时，依此类推）
[0074] W干膏得率为指标，极差分析结果C〉A〉B，即影响因素排列顺序为:提取次数〉溶媒 倍量〉提取时间。各因素与水平之间的最佳组合为A2B3C3，WD项作为误差项，进一步进行方 差分析。c因素对实验结果有显著性影响。最佳水提组合为加8倍量水，提取3次，每次2小时。
[0075] W多糖含量为指标，极差分析结果C〉A〉B，即影响因素排列顺序为:提取次数〉溶媒 倍量〉提取时间。各因素与水平之间的最佳组合为A2BiCi，WD项作为误差项，进一步进行方 差分析，各因素对实验结果均无显著性影响。最佳水提组合为加8倍量水，提取1次，每次1小 时。
[0076] 由于2个指标确定的最佳工艺不同，为了更加客观地评价，用综合评分寻找最佳工 艺，对2个指标赋与不同的权重，考虑到服用量，故对巧旨标分别赋予权重:将干膏得率权重 定为0.4，多糖含量的权重定为0.6。采用综合评分法:综合评分为Υ =权重X (100-ymax+yi)， 其中ymax为每个指标中的最大值，yi为第i行相应的指标值。W综合评分为指标，极差分析结 果A〉B〉C，即影响因素排列顺序为:溶媒倍量〉提取时间〉提取次数。各因素与水平之间的最 佳组合为A2B3C2，WD项作为误差项，进一步进行方差分析。各因素对实验结果的影响均不显 著。最终水提组合为加8倍量水，提取2次，每次2小时。
[0077] (2)水提验证试验
[0078] 称取相当于56g苍术、陈皮、厚朴、姜半夏混合药材的药渣，12g蕾香，12g巧等，加水 8倍量，提取2次，每次2小时。进行Ξ批验证试验，结果见表8。
[00巧]表8.水提验证试验结果
[0080]
[0081] 结论:水提验证试验结果与正交试验结果基本吻合，因此将加8倍量水，提取2次， 每次2小时，确定为最佳水提工艺条件。
[0082] 4、挥发油β-环糊精包合条件的优选研究
[0083] (1)正交试验设计筛选β-环糊精包合条件
[0084] 目前文献报道的挥发油包合多采用饱和水溶液、超声法和胶体磨娠磨法，胶体磨 娠磨法具有包合溫度低、时间短、包合率高等优点。故选择胶体磨娠磨法进行挥发油包合工 艺研究。
[0085] 用乙醇溶解挥发油，试验表明当挥发油与乙醇用量比为1:1时挥发油溶解较好。待 挥发油溶解后将其逐滴加入与水混溶的β-环糊精溶液中进行包合，包合结束后，用具塞锥 形瓶接收包合物的混合溶液，4°C条件下静置12hW上，置布氏漏斗中抽滤，包合物于40°C真 空干燥。W挥发油与e-CD的体积质量比、包合时间、加水倍量为考察因素，采用正交设计L9 (34)，因素水平见表9。
[0086] 表9包合工艺的正交因素水平表
[0087]
[0088] 我们选用包合物得率、挥发油利用率和包合物含油率为评价指标，对正交试验进 行了数据分析，结果见表10。
[0089] 表10.包合正交试验安排及结果分析表
[0090]
[0091]
[0092]
[OOW](表中提供了9个试验方案。如第6号试验是A2B3C1，即挥发油:β-环糊精1:6,加水5 倍量，包合20min，依此类推。）
[0094] W包合物得率为指标，极差分析结果A〉C〉B，即影响因素排列顺序为：挥发油与β- 环糊精比〉时间〉加水倍量。各因素与水平之间的最佳组为AiB2C2，WD项作为误差项，进一步 进行方差分析。各因素对实验结果的影响均不显著。
[0095] W包合物含油率为指标，极差分析结果A〉C〉B，即影响因素排列顺序为：主客分子 比〉包合时间〉加水倍量。各因素与水平之间的最佳组合为A2B3C3，WD项作为误差项，进一步 进行方差分析，各因素对实验结果的影响均不显著。
[0096] W挥发油利用率为指标，极差分析结果A〉C〉B，即影响因素排列顺序为：主客分子 比〉包合时间〉加水倍量。各因素与水平之间的最佳组为A3B3C3，WD项作为误差项，进一步进 行方差分析，各因素对实验结果的影响均不显著。
[0097] 由于3个指标确定的最佳工艺不同，为了更加客观地评价，用综合评分寻找最佳工 艺，计算方法如下:在挥发油包合物的3个指标中，分别选取最高者作为100分，然后对3个指 标赋与不同的权重，考虑到生产成本，故对3个指标分别赋予权重:包合物得率0.2,含油率 0.4,油利用率0.4,采用综合评分法:综合评分为Υ =权重X(100-ymax+yi)，其中ymax为每个 指标中的最大值，yi为第i行相应的指标值。W综合评分为指标，极差分析结果A〉C〉B，即影 响因素排列顺序为：挥发油与0-环糊精比〉时间〉加水量。各因素与水平之间的最佳组为 A3B3C3dWD项作为误差项，进一步进行方差分析，各因素对实验结果的影响均不显著。考虑 到服用量问题，最终包合工艺定为挥发油与0-环糊精(ml:g)比为1:6,加入5倍量水(环糊精 质量的5倍），包合40min。
[0098] (2)挥发油包合验证试验
[0099] 量取挥发油6ml，将挥发油用等量乙醇溶解后，按照挥发油与β-环糊精的比为1:6、 加水5倍量、包合40min的条件进行验证试验，验证结果见表11。
[0100] 表11挥发油包合追加验证试验结果
[0101]
[0102] 结论:挥发油β-环糊精包合追加验证试验结果与前述试验结果基本吻合，因此将 挥发油与e-CD(ml:g)比1:6、加水5倍量，包合时间40min确定为最佳挥发油β-环糊精包合工 艺条件。
[0103] (3)包合物制备方法
[0104] 用乙醇溶解挥发油，挥发油与乙醇用量比为1:1。待挥发油溶解后将其逐滴加入与 0-环糊精溶液(加水量为e-CD的5倍）中进行包合，包合结束后，用具塞锥形瓶接收包合物的 混合溶液，4°C条件下静置12hW上，置布氏漏斗中抽滤，用蒸馈水洗涂，待不再有液滴滴下 时，将包合物于40°C真空干燥。
[01化]④包合物的表征：
[0106] 采用紫外分光光度法及差示扫描量热法对包合物进行表征。
[0107] a.紫外分光光度法(UV)
[0108] 分别取β-环糊精、包合物、挥发油、β-环糊精与挥发油的物理混合物适量，乙酸乙 醋作溶剂溶解，在250~60化m范围内进行扫描，扫描图谱见图1。由图1可见，物理混合物与 挥发油A值基本一致，包合后A值明显降低，表明挥发油已被包合。
[0109] β-环糊精无吸收，挥发油在337皿、316皿、296皿、266nm处有特征吸收峰，吸光度分 别为1.015、0.991、0.689、0.692;物理混合物在337皿、315皿、295皿处有吸收峰，吸光度分 别为0.936、0.920、0.638;物理混合物与挥发油基本一致，吸光度略低，可能是因为有一部 分挥发油与环糊精包合；包合物在337醒、316醒、297醒、266醒处有吸收峰，分别为0.193、 0.191、0.133、0.129,与物理混合物和挥发油相比基本一致，但吸光度明显降低，说明挥发 油已被环糊精包合，包合成功。
[0110] b.差示扫描量热法(DSC)
[0111] 分别取挥发油、挥发油与β-CD物理混合物、包合物和β-CD进行DSC扫描，结果见图 2。由图2可知，挥发油在133.40°C-174.38°C有一吸热峰，热洽值为36.8736J/g，i3-环糊精在 79.09 °C-97.44°C有一吸热峰，热洽值为686.8713J/g，物理混合物由于β-环糊精对挥发油 的吸附作用，使得133.4°C右移至219.69°C-222.12°C，79.38°C-106.03°C，表现出挥发油和 环糊精各自的吸收峰，热洽值分别为5.4163J/g和258.7438J/g，包合物的吸收峰移至55.79 。(:-78.33°C，热洽值为 227.39371/邑，133.40°〇174.38°(：和219.69°(：-222.12°(：左右的吸热 峰消失，包合物与物理混合物图谱有明显区别，表明包合物已形成一种新的物相。
[0112] 由图2可知，挥发油在133.40°C-174.38°C有一吸热峰，热洽值为36.8736J/g，f3-环 糊精在79.09 °C-97.44 °C有一吸热峰，热洽值为686.8713 J/g，物理混合物由于β-环糊精对 挥发油的吸附作用，使得133.4°C右移至219.69°C-222.12°C，79.38°C-106.03°C，表现出挥 发油和环糊精各自的吸收峰，热洽值分别为5.41631八和258.74381八，包合物的吸收峰移 至 55.79°C-78.33°C，热洽值为 227.39371/邑，133.40°〇174.38°(：和219.69°(：-222.12°(：左 右的吸热峰消失，包合物与物理混合物图谱有明显区别，表明包合物已形成一种新的物相。
[0113] 5、颗粒成型工艺的研究
[0114] 1、辅料的种类及用量考察
[0115] 中药提取过程中因为药材及工艺等因素会影响其浸膏的得率，为了保持制剂的规 格均衡性，选用糊精适量作为赋形剂。同时为了适用于糖尿病患者，选用甜菊素作为矫味 剂。
[0116] (1)单因素筛选糊精用量
[0117] 取醇提和水提混合浸膏158.4g，加入挥发油β-环糊精包合物22.7g，分别加入0.5- 1.5倍量的糊精，W70%乙醇制粒，结果见表12。
[0118] 表12.糊精用量筛选结果
[0119]
[0120] 由上表可见浸膏158g中加入糊精1-1.5倍量左右时，制粒可W进行，考虑服用量故 确定颗粒剂每袋规格为lOg，由于浸膏得率可随药材等因素变化，因此糊精用量在浸膏量的 1-1.5倍左右。
[0121] (2)单因素筛选甜菊素用量
[0122] 甜菊素的甜度为薦糖的200~300倍，选用不同比例进行试验，根据口感确定甜菊 素的用量为0.75%，结果见表13。
[0123] 表13.甜菊素用量筛选结果
[0124]
[0125] 本发明的药效学试验如下：
[0126] 1.1药品及试剂
[0127] 中药提取物颗粒:按照实施例1方法制备得到。
[0128] 屯味除湿汤：按重量比例取半夏曲-厚朴-苍术-广蕾香-陈皮-巧等-甘草(20 : 20 : 20:10:10:10:7)药材，加适量水煎煮。
[0129] 浓缩不换金正气散：按处方比例取半夏曲-厚朴-苍术-广蕾香-陈皮-巧等-甘草 (1:1:1:1:1:1:)药材，加适量水煎煮，浓缩。
[0130] 本方水煎剂:按处方比例取苍术-姜半夏-厚朴-广蕾香-陈皮-巧等(5:3:3:3:3:3) 药材，加适量水煎煮，浓缩。
[0131] Botting液：按《实验药理方法学》附录配制：NaCl 8.0，KC1 0.2，CaC12 0.08， MgC12 0.04，Na肥P04 0.05，Na肥03 1.0，Glucose 1.0(g)，蒸馈水配成 1000ml。
[0132] 1.2 动物
[0133] 小鼠，72只，方罕各半，体重18~22g;大鼠，72只，方罕不分，体重160~220g由上海第 二军医大学实验动物中屯、，许可证号为:SCXK(沪)2002-0006。
[0134] 二、试验方法和结果
[0135] 2.1对胃肠道推进的影响
[0136] 取合格小鼠72只，禁食12小时，按随机分为9组，每组8只。正常对照组（阴性对照 组）、模型对照组、阳性药得舒特组(3mg/kg)、中药提取物高剂量组(16g/kg)、中药提取物中 剂量组（8g/kg)、中药提取物低剂量组（4g/kg)、本方水煎组（8g/kg)、屯味除湿汤组（8g/ kg)、不换金正气散组(8g/kg)。正常对照组、模型对照组W蒸馈水0.4ml/20g灌胃，各组给药 容积相等。给药90min后正常对照组皮下注射生理盐水(0. lml/20g体重），其余4组均皮下注 射新斯的明0.1ml (0. lml/20g，每ml含新斯的明0.03mg)，造成小肠过度疫李模型。15min后， 各组W碳末糊剂灌胃（0.2ml/10g，每剂含碳末0.05g，、阿拉伯胶0.02g)，继而20min后处死， 分别测量小肠碳末推进长度及小肠总长度，计算碳末推进百分率。数据统计分析采用组间 比较t检验，结果见表14。
[0137] 炭末推进百分率（％ )=墨汁在肠内推进距离(cm)/小肠全长X 100%
[013引表14 AIP对胃肠道推进的影响(；巧)(n = 8)
[0139]
[0140] a : p〈Q . Q5 ; aa : p〈〇 . 01 ; aaa : p〈〇 . 001 空白对照组比较
[0141] b : p〈Q . Q5 ; bb : p〈〇 . 01 ; bbb : p〈〇 . 001模型对照组比较
[0142] 。: ？<0.05;。。:？<0.01;。。。:口<0.001本方水煎剂组比较
[0143] 结果表明，与模型对照组相比，阳性对照药、中药提取物高、中、低剂量可超极显著 性抑制炭末在胃肠道内的推进率(P<〇.001)，本方水煎剂可极显著性抑制炭末在胃肠道内 的推进率(p<〇.001)，屯味除湿汤及不换金正气散无显著性差异。与本方水煎剂相比，屯味 除湿汤、不换金正气散对炭末在胃肠道内的推进率抑制率有显著性差异(P<〇.05)，中药提 取物高剂量组对炭末在胃肠道内的推进率抑制率有极显著性差异(P<〇. 01 )，中剂量组对炭 末在胃肠道内的推进率抑制率有显著性差异(P<〇. 005)。
[0144] 2.2对番泻叶所至大鼠腹泻的治疗作用
[0145] 所有大鼠于实验前10小时禁食，自由饮水。其中随机取8只为正常组模型组用蒸馈 水灌胃，其余大鼠均给予番泻叶煎剂(〇.3g/mL)灌胃（按20mL/kg)，每日1次。持续5天。大鼠 造模标准为体重减轻，食欲减退，大便稀薄，倦邸少动，皮毛干枯无光泽。
[0146] 造模5天后继续灌服番泻叶，于每日服用番泻叶后60分钟开始给药:模型组W生理 盐水灌胃（20mL/kg);高剂量给药组（11.2g/kg);中剂量给药组（5.6g/kg);低剂量给药组 (2.8g/kg);得舒特组（1.5mg/kg)，本方水煎组(8g/kg)、屯味除湿汤组(8g/kg)、不换金正气 散组(8g/kg)。灌胃剂量20ml/kg。给药后一小时单笼放置，笼底放置有滤纸，记录3小时W内 便稀情况。
[0147] 大鼠番泻叶灌胃后化内的稀便级：
[0148] W稀便污染滤纸形成的污迹的直径大小定级，（圆形污迹，记录其直径长度;楠圆 形污迹:记录其最长径与最短径之和的1/^2为直径长度），制定标准如下：
[0149] I级:直径长度1~1.9
[0150] Π 级:直径长度2~2.9
[0151] 虹级：直径长度3~3.9
[0152] IV级:直径长度〉4
[0153] 实验中设及公式如下：
[0154] 腹泻率=腹泻动物只数/动物总数X 100%
[01W] 表15. AIP对番泻叶所至大鼠腹泻的影响
[0156]
[0157] *:P<〇.〇5Day4 与 Dayl 比较
[0158] 结果表明，给药第四天与给药第一天组内自身比较，阳性对照药、中药提取物高剂 量组、中药提取物中剂量组能显著降低稀便级数，抑制腹泻率。因此，本发明中药提取物具 有运脾除湿功效。主治腹泻型肠易激综合征，寒湿困脾证。
【附图说明】
[0159] 图1为紫外光谱图。
[0160] 图2为DSC扫描图。
【具体实施方式】
[0161] W下通过实施例对本发明进行进一步的阐述：
[0162] 实施例1
[0163] -、中药提取物处方：
[0164] 苍术333g陈皮200g姜半夏200g [01化]厚朴200g蕾香200g巧等200g
[0166] 二、制法：
[0167] (一)提取挥发油:苍术、陈皮二氧化碳超临界萃取，萃取压力为25MPa，萃取溫度48 Γ，萃取时间化，C〇2流量为20化，所得挥发油除水后备用，药渣另存；
[0168] (二)醇提:取厚朴、姜半夏，与苍术、陈皮等二味提取挥发油后的药渣，加8倍量的 70%乙醇，加热保持微沸1.5小时，提取2次，合并两次醇提液，静置，滤过，药渣备用，醇提液 减压浓缩至相对密度为1.25~1.30(60°C)的清膏备用。
[0169] (Ξ)水提:取蕾香、巧等与上述醇提后的药渣，加8倍量的水，加热保持微沸2小时， 提取2次，合并两次水提液，静置，滤过，水溶液减压浓缩至相对密度为1.25~1.30(60°C)的 清膏备用。
[0170] (四）挥发油的包合:按照挥发油:β-环糊精(ml:g) = l:6的比例称取β-环糊精，将 β-CD加入5倍量的水研匀，倒入胶体磨中，开动机器，缓慢连续滴加与无水乙醇（1:1)溶解的 挥发油，娠磨40min，将包合物及环糊精的混合溶液接出，于4°C下静置24h，倒入布氏漏斗 中，抽滤，用50ml蒸馈水清洗2次，每次25ml，待不再有液滴滴下时，于40°C真空干燥，得包合 物备用。
[0171] 化)制颗粒； 水提浸膏和醇提浸膏（约相当于生药1333g)(约） 525g
[0172]
[0173]
[0174] 制法:将水提浸膏、醇提浸膏、挥发油β-环糊精包合物、糊精适量及0.75%甜菊素 混合均匀，用适量70%乙醇将浸膏稀释，制成软材，14目不诱钢筛制粒，干燥（《60°C )，干颗 粒过10目及50目筛，整粒，制成lOOOg，将所得颗粒侣锥包装，分装成lOg/袋，即得。
[0175] 实施例2
[0176] -、中药提取物片剂处方：
[0177] 苍术333g陈皮200g姜半夏200g
[0178] 厚朴200g蕾香200g巧等200g
[0179] 二、制法：
[0180] (一)提取挥发油:苍术、陈皮二氧化碳超临界萃取，萃取压力为30MPa，萃取溫度36 Γ，萃取时间化，C〇2流量为24化，所得挥发油除水后备用，药渣另存；
[0181] (二)醇提:取厚朴、姜半夏，与苍术、陈皮等二味提取挥发油后的药渣，加6倍量的 浓度为80 %乙醇，加热保持微沸2小时，提取3次，合并醇提液，静置，滤过，药渣备用，醇提液 减压浓缩至相对密度为1.25~1.30(60°C)的清膏备用。
[0182] (Ξ)水提:取蕾香、巧等与上述醇提后的药渣，加10倍量的水，加热保持微沸1小 时，提取3次，合并Ξ次水提液，静置，滤过，水溶液减压浓缩至相对密度为1.25~1.30 (60 °C)的清膏备用。
[0183] (四）挥发油的包合:按照挥发油:β-环糊精(ml:g) = l:4的比例称取β-环糊精，将 β-CD加入5倍量的水研匀，倒入胶体磨中，开动机器，缓慢连续滴加与无水乙醇（1:1)溶解的 挥发油，娠磨30min，将包合物及环糊精的混合溶液接出，于4°C下静置24h，倒入布氏漏斗 中，抽滤，用50ml蒸馈水清洗2次，每次25ml，待不再有液滴滴下时，于40°C真空干燥，得包合 物备用。
[0184] (五)制片剂:将水提浸膏、醇提浸膏、挥发油β-环糊精包合物和片剂常规辅料混合 压片。
[01化]实施例3
[0186] 中药提取物胶囊:将按照实施例2的步骤（1)、（2)(3)和(4)制备得到水提浸膏、醇 提浸膏、挥发油β-环糊精包合物和胶囊剂常规辅料制混合制备灌装硬胶囊。
[0187] 实施例4
[0188] 中药提取物软胶囊:将按照实施例1的步骤（1)、（2)(3)和(4)制备得到水提浸膏、 醇提浸膏、挥发油0-环糊精包合物与适量的大豆油混合后压制软胶囊即可。
【主权项】
1. 一种治疗肠易激综合征的中药提取物，其特征在于该中药提取物是通过以下步骤制 备得到的： 取苍术1.6-1.8重量份、陈皮1重量份、姜半夏1重量份、厚朴1重量份、藿香1重量份、茯 苳1重量份； 1) 提取挥发油:苍术和陈皮采用二氧化碳超临界萃取，萃取压力为25-35MPa，萃取温度 36-48°C，萃取时间l_2h，C0 2流量为20-24HZ，所得挥发油除水后备用，药渣另存； 2) 醇提:取厚朴、姜半夏，与苍术、陈皮两味提取挥发油后的药渣，加总重6-10倍量的浓 度为70-90 %的乙醇，提取1-3次，每次加热保持微沸1-2小时，合并醇提液，静置，滤过，药渣 备用，醇提液减压浓缩至60°C时的相对密度为1.25~1.30的清膏； 3) 水提:取藿香、茯苓与上述醇提后的药渣，加6-10倍量的水，加热保持微沸1-2小时， 提取1 -3次，合并水提液，静置，滤过，水溶液减压浓缩至60 °C时的相对密度为1.25~1.30的 清膏； 4) 挥发油的包合:按照挥发油:β_环糊精l:4-8ml/g的比例称取β-环糊精，将β-⑶加入 水研匀，倒入胶体磨中，边研磨边缓慢连续滴加用无水乙醇溶解的挥发油，碾磨20_40min， 将得到的混合溶液于4°C下静置24h以上，抽滤，蒸馏水清洗至不再有液滴滴下时，真空干 燥，得包合物； 5) 混合:将醇提清膏、水提清膏、挥发油β-环糊精包合物混合，干燥即得。2. 根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于步骤1)中萃取压力为25MPa，萃取温 度48 °C，萃取时间2h，C02流量为20Hz。3. 根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于步骤2)醇提步骤中乙醇浓度为70%， 溶媒倍量8倍，每次加热保持微沸1.5小时，提取2次。4. 根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于步骤3)水提步骤中水的倍量8倍，加 热保持微沸2小时，提取2次。5. 根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于步骤4)中挥发油与β-环糊精的比例 为1:6ml/g。6. 根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于步骤4)中β-CD与其5倍量的水研匀， 挥发油与无水乙醇按照体积比1:1比例溶解。7. 根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于步骤4)中碾磨时间为40min，真空干 燥温度为40 °C。8. 根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于该中药提取物与药学可接受的辅料 制成各种剂型，优选为丸剂、片剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂。9. 一种权利要求1所述的治疗肠易激综合征的中药提取物的制备方法，其特征在于该 方法包括以下步骤： 取苍术1.6_1.8重量份、陈皮1重量份、姜半夏1重量份、厚朴1重量份、藿香1重量份、茯 苳1重量份； 1) 提取挥发油:苍术和陈皮采用二氧化碳超临界萃取，萃取压力为25-35MPa，萃取温度 36-48°C，萃取时间l_2h，C0 2流量为20-24HZ，所得挥发油除水后备用，药渣另存； 2) 醇提:取厚朴、姜半夏，与苍术、陈皮两味提取挥发油后的药渣，加总重6-10倍量的浓 度为70-90 %的乙醇，提取1-3次，每次加热保持微沸1-2小时，合并醇提液，静置，滤过，药渣 备用，醇提液减压浓缩至60°C时的相对密度为1.25~1.30的清膏； 3) 水提:取藿香、茯苓与上述醇提后的药渣，加6-10倍量的水，加热保持微沸1-2小时， 提取1 -3次，合并水提液，静置，滤过，水溶液减压浓缩至60 °C时的相对密度为1.25~1.30的 清膏； 4) 挥发油的包合:按照挥发油:β_环糊精l:4-8ml/g的比例称取β-环糊精，将β-⑶加入 水研匀，倒入胶体磨中，边研磨边缓慢连续滴加用无水乙醇溶解的挥发油，碾磨20_40min， 将得到的混合溶液于4°C下静置24h以上，抽滤，蒸馏水清洗至不再有液滴滴下时，真空干 燥，得包合物； 5) 混合:将醇提清膏、水提清膏、挥发油β-环糊精包合物混合，干燥即得。10.权利要求1所述的中药提取物在制备治疗肠易激综合征的药物中的应用。
【文档编号】A61K47/48GK105998480SQ201610323847
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月16日
【发明人】濮存海, 姬珊珊, 倪正
【申请人】濮存海