ZD55?MnSOD联合顺铂在抑制卵巢癌细胞增殖中的用图

ZD55?MnSOD联合顺铂在抑制卵巢癌细胞增殖中的用图
【专利摘要】本发明涉及本发明属于生物制药领域，具体涉及ZD55?MnSOD联合顺铂在抑制卵巢癌细胞增殖中的用途。具体而言，本发明涉及含有携带MNSOD的溶瘤腺病毒与顺铂以及其他药物的组合对卵巢癌或卵巢癌细胞的增殖具有协同的治疗或者抑制作用，进而为治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞的增殖提供了新的组合物或药盒。
【专利说明】
ZD55-MnS0D联合顺铂在抑制卵巢癌细胞増殖中的用途
技术领域
[0001 ]本发明属于生物制药领域，具体涉及ZD55-MnS0D联合顺铂在抑制卵巢癌细胞增殖的中的用途。
【背景技术】
[0002]卵巢癌(ovariancancer，0C)发病率在妇科恶性肿瘤中占第2位，但病死率最高。卵巢癌有多种病理类型，其中上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer，E0C)是最常见也是预后最差的类型。EOC—般发现时患者已处于肿瘤晚期，手术和化学药物治疗是卵巢癌治疗中的两个重要手段，但术后及化疗后约70%复发，复发后的患者对进一步治疗的耐受度及治疗效果明显下降。由于晚期卵巢癌的根治性手术不能达到理想和满意程度，故化学药物治疗对手术后的治疗就显得更为重要。但由于晚期卵巢癌极易产生对化学药物的耐药和全身毒副反应，应用现有的化学药物治疗仍然有很高的复发率和未控率，因此研发新型的高效低毒的抗肿瘤药物是目前卵巢癌治疗的研究热点。
[0003]上世纪初，人们偶然发现肿瘤患者感染野生型病毒后，肿瘤的体积会缩小，说明病毒对肿瘤具有一定的杀灭作用。此后，研究者选取各种不同病毒进行试验，筛选出了一大类对肿瘤具有杀伤作用的病毒，并对这些病毒的基因组加以改造，构建出了靶向性更高，杀伤效果更强的病毒载体，这一大类病毒载体以其相对特异的肿瘤靶向作用又被称为溶瘤病毒载体。在此基础上，Kirn于2001年提出“病毒治疗”(virotherapy)这一概念。病毒治疗是在确保病毒的高感染率、高扩增率条件下，有目的地删除野生型病毒本身所携带的某些致病基因，以提高其生物安全性;或是修改/删除某些表达病源识别蛋白的基因，以逃避机体的免疫反应，满足治疗的需要。溶瘤病毒能特异性在肿瘤细胞内复制，使感染的肿瘤细胞发生溶解而死亡，而复制产生的子代病毒又可以感染邻近的肿瘤细胞，引起更多的肿瘤细胞死亡，因此用于肿瘤的临床研究前景很好。基因治疗是一种新兴的治疗手段，可用于多种疾病的治疗。一些学者提出将肿瘤的病毒治疗与基因治疗结合起来，在溶瘤腺病毒(OncolyticAdenovirus’OA)中加入治疗基因来增强治疗效果。传统基因治疗的载体本身并没有治疗作用，而基因病毒治疗是利用溶瘤腺病毒把治疗基因运送至肿瘤细胞内，治疗基因拷贝数随着病毒的复制而不断增加，大大提高其表达水平。肿瘤的基因病毒治疗克服了传统肿瘤基因治疗的转染效率低、靶向性差、抗癌基因表达量低等缺点，又克服了病毒治疗对肿瘤杀伤力不足的缺陷。大量研究表明肿瘤的基因病毒治疗效果显著优于单纯的基因治疗或病毒治疗。目前，利用溶瘤病毒治疗卵巢癌已经得到了广泛的研究，并已证明其能作为治疗卵巢癌的有效手段。
[0004]人体正常的新陈代谢都会产生自由基，但在特殊情况下会产生大量自由基，这些大量的自由基通过氧化作用使人体的细胞和组织受到损伤，包括自由基使酶失活、自由基损害细胞膜、自由基损伤导致基因突变和癌变，所以自由基是许多疾病发生发展的病理学基础。超氧化物歧化酶是细胞内重要的酶性自由基清除剂，可催化O—2歧化为H2O2和02。人体内超氧化物歧化酶中最重要的就是锰超氧化物歧化酶(MnSOD) JnSOD基因的表达和调控对机体自由基-自由基清除剂的平衡体系至关重要，是抗氧化系统最重要的酶之一。
[0005]BHYYeung等人(British Journal of Cancer(2008)99，283-293.)报道了MnSOD在卵巢癌细胞中的表达显著升高，且其过表达是对癌细胞凋亡增加的抗性的其中一个机制。通过MnSOD的siRNA的敲除能提高超氧化物的产生并导致卵巢癌对抗癌药物阿霉素和紫杉醇敏感性。
[0006]Yumin Hu等人(2005)报道了通过siRNA抑制MnSOD的表达导致卵巢癌细胞中超氧化物升高70%，进而导致在体外细胞增殖的刺激和在体内肿瘤的入侵式生长。
[0007 ] Wong, Kwan-yeung (2005)报道了 MnSOD在卵巢癌中的作用，并证实了 MnSOD的上调是与卵巢癌发生相关的一个机制(通过增加对氧化胁迫的细胞凋亡抗性)。
[0008]顺铂(Cisplatin，CDDP)，1965年由美国科学家B.Rosenborg等人首次发现的，第一个具有抗癌活性的金属配合物。他在1965年意外发现“惰性的铂电极”能引起细菌的菌丝生长这一事实，从而展开了顺式二氯二铂的抗癌特性。目前，顺铂是常用的抗癌药物之一。
[0009]WU YM等人报道了顺铂和携带MDA-7/IL-24的溶瘤腺病毒的组合能增强肿瘤细胞的死亡(Wu YM, Zhang KJ , Yue XT , et al.Enhancement of tumor cell death bycombining cisplatin with an oncolytic adenovirus carrying MDA-7/IL-24.ActaPharmacol Sin.2009 ； 30:467-477.) ；Takakura M等人报道了腹膜内施用端粒酶特异性溶瘤腺病毒使得卵巢癌细胞对顺铂变得更敏感(Cancer Gene Ther.2010； 17:11-19.) ；Pan Q等人报道了顺铂与携带TRAIL的溶瘤腺病毒的组合能协同诱导肿瘤细胞的死亡(Mol CellB1chem.2007；304:315-323.)。

【发明内容】

[0010]为了更好的治愈卵巢癌或为治疗卵巢癌提供另一种可行的选择，提高患者的预后或者生活质量，本发明的发明人经过大量、坚持不懈的筛选，发现携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂的组合对卵巢癌或卵巢癌细胞的增殖具有协同的治疗或者抑制作用，进而为治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞的增殖提供了新的疗法或手段。
[0011]本发明采用携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂联合抑制卵巢癌细胞增殖作用影响进行体外和体外实验，结果显示在携带MNSOD的溶瘤腺病毒和顺铂两者联合应用具有协同抑制卵巢瘤细胞增殖的作用。
[0012]本发明所述的携带MnSOD的溶瘤腺病毒可为携带MnSOD基因的复制型溶瘤腺病毒ZD55-MnS0D(Zhang Y,Gu J,Zhao L,He L,Qian ff,ffang J1Wang Y,Qian Q,Qian C，Wu J,Liu XY.Complete eliminat1n of colorectal tumor xenograft by combinedmanganese superoxide dismutase with tumor necrosis factor-related apoptosis—inducing ligand gene virotherapy.Cancer Res.2006 Apr 15;66(8):4291-8.)，其具有肿瘤复制特异性，对正常细胞无毒性。携带MNSOD的溶瘤腺病毒基因组结构见图1A。
[0013]因此，本发明一方面提供了携带MnSOD的溶瘤腺病毒在制备用于在受试者中治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞增殖的药物组合物或药盒中的用途，其中所述药物组合物或药盒含有携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂，任选地，所述药物组合物或药盒还含有用于治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞增殖的其他药物活性成分，例如吉西他滨、普乐沙福(AMD3100)或紫杉醇等。任选地，所述的药物组合物或药盒中的携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂分别在分开的容器中存放或者携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂在同一容器中存放。
[0014]本发明提供了在受试者中治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞增殖的方法，其包括向所述受试者同时或依次施用携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂。任选地，在本发明的方法中，可以同时或者依次施用其他的治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞增殖的药物活性成分，例如吉西他滨、普乐沙福(AMD3100)或紫杉醇等;或者同时或者依次施用奎尼丁。
[0015]对于本发明所述的受试者，其优选为哺乳动物，更优选为人。
[0016]对于本发明的携带MNSOD的溶瘤腺病毒和顺铂，本领域技术人员可以对其作出任何修饰，前提是所述修饰不负面影响其活性。例如，可以对化合物进行修饰或装载在其他载体上，以提高其在体内的半衰期;或者可以与已知的穿透肽连接，以促进本发明化合物的透皮吸收或者越过血脑屏障等。总之，本领域技术人员可对本发明的化合物进行各种修饰以提高递送效率或用于其他目的并保持其活性。对于病毒的修饰，例如，本领域技术人员可以进行基因修饰，以使其表达其他的抵抗癌症的活性成分。这类修饰也是在本发明的范围之内的。
[0017]本发明的作为活性成分的携带MNSOD的溶瘤腺病毒和顺铂可以连同药学上可接受的载体一起使用。除活性成分外，本发明的方法、用途和产品还可以包含合适的药学上可接受的载体，包括促进活性成分加工成制剂(例如适于注射或输注的制剂)的赋形剂和助剂。
[0018]适于注射或输注的制剂可包括水性和非水性无菌注射液和水性和非水性无菌混悬剂，所述无菌注射液可任选地包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和能使制剂与目的接收者的血液等压的溶质，所述无菌混悬剂可包括悬浮剂和增稠剂。所述制剂可存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿，并且可以保存在冻结干燥的(冻干)条件，在立即使用前仅需要加入无菌液体载体，例如注射用水。
[0019]本发明的活性成分任选地可与固体赋形剂相组合，且任选地磨碎所得到的混合物，并且需要时，在加入合适的助剂后，加工颗粒的混合物，以获得所需剂型。合适的赋形剂特别是填充剂例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇;纤维素或淀粉制剂、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。需要时，可以加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐例如海藻酸钠。
[0020]在本发明中施用携带MNSOD的溶瘤腺病毒和顺铂的量可为能协同治疗受试者中卵巢癌或抑制卵巢癌细胞增殖的任何量，其可以是相当于约0.l_15mg顺铂，优选0.01-20mg顺铂和1-100M0I携带丽SOD的溶瘤腺病毒的剂量。更优选地，剂量单位包括约l-4mg的顺铂和5-80M0I携带MNSOD的溶瘤腺病毒。最优选地，剂量单位包括约2-3mg的顺铂和10-60M0I携带MNSOD的溶瘤腺病毒。有效量的测定在本领域技术人员的能力内，特别是根据本文提供的公开内容的启示下。
[0021]根据本发明，本发明的药学产品(药物、药剂)或药物组合物可以以任意有效剂量施用给药受试者。优选地，本发明的药学产品(药物、药剂或药盒)或药物组合物可以以多次剂量给药，例如从约2至约15次剂量，更优选从约4-10次剂量，最优选约6次剂量。在特别优选的实施方案，在给药过程中，以每三周给药约一次的频率将本发明的药学产品(药物、药剂)或药物组合物给药至受试者，例如注射、输注或口服。在特别优选的实施方案，给药为通过静脉注射施用顺铂，通过腹腔注射携带MnSOD的溶瘤腺病毒。
[0022]应当理解本发明的药学产品(药物、药剂或药盒)或药物组合物可以按用于通过任意适宜的途径给药的任意适宜的方式配制。
[0023]本发明的药学产品(药物、药剂)或药物组合物的剂量单位是基于常规进行给药受试者。例如，剂量单位可以给药多于每日一次、每周一次、每月一次等。剂量单位可以是以两次/周为基础给药，即每周两次，例如每三天一次。
[0024]如本文所使用的，“包含”与“包括”、“含有”或“特征在于”同义，并且是包括在内的或开放性的，并且不排除另外的未陈述的元件或方法步骤。术语“包含”在本文中的任何表述，特别是在描述本发明的方法、用途或产品时，应理解为包括基本上由所述组分或元件或步骤组成和由所述组分或元件或步骤组成的那些产品、方法和用途。本文示例性描述的本发明适当地可以在不存在本文未具体公开的任何一种或多种元件、一种或多种限制的情况下进行实践。
[0025]本发明的药学产品(例如药物组合物或药盒)中可包含涉及该药学产品的说明书，且该说明书可以含有如下内容:适应症(例如卵巢癌)、施用剂量(例如上述所示例性说明的)以及可能产生的副作用等等。
[0026]本文已采用的术语和表述用作描述性而不是限制性术语，并且在此种术语和表述的使用中不预期排除所示和所述特征或其部分的任何等价物，但应认识到各种修饰在请求保护的本发明的范围内是可能的。因此，应当理解尽管本发明已通过优选实施方案和任选特征具体公开，但本领域技术人员可以采用本文公开的概念的修饰和变化，并且此类修饰和变化被视为在如由附加权利要求定义的本发明的范围内。
[0027]为更清楚地说明本发明，现结合如下实施例进行详细说明，但这些实施例仅仅是对本发明的示例性描述，并不能解释为对本申请的限制。
【附图说明】
[0028]图1A:重组溶瘤腺病毒ZD55-MnS0D的结构。
[0029]图1B: ZD55-MnS0D在卵巢癌细胞SK0V-3中有效表达MnSOD蛋白及病毒蛋白ElA，其中ZD55-MnS0D及ZD55作用浓度为1MOI，作用时间为48小时。
[0030]图1C: ZD55-MnS0D感染正常肝细胞QSG-7701后，病毒蛋白ElA表达情况，其中ZD55-MnSOD及ZD55作用浓度为10M0I，作用时间为48小时。
[0031 ] 图1D: ZD55-MnS0D在对卵巢癌细胞SK0V-3的细胞毒性，其中ZD55_MnS0D及ZD55作用浓度为5M0I。
[0032]图1E: ZD55-MnS0D在对正常肝细胞QSG-7701的细胞毒性，其中ZD55_MnS0D及ZD55作用浓度为5M0I。
[0033]图2A:ZD55-MnS0D与顺铂联合作用对对卵巢癌细胞SK0V-3的细胞毒性，其中作用时间为48小时。
[0034]图2B:ZD55-MnS0D与顺铂联合作用对卵巢癌细胞SK0V-3活性氧水平的影响，其中ZD55-MnS0D及ZD55作用浓度为10M0I，顺铂的作用浓度为4yg/ml，作用时间均为48小时。
[0035]图3A:细胞核染色检测ZD55-MnS0D与顺铂联合作用对卵巢癌细胞SK0V-3的促凋亡作用，其中作用浓度:ZD55-MnS0D( 10M0I)，顺铂(4yg/ml)，作用时间为72小时。
[0036]图3B:流式细胞仪检测ZD55-MnS0D与顺铂联合作用对对卵巢癌细胞SK0V-3和正常肝细胞QSG-7701的促凋亡作用，其中作用浓度:2055-11^00(10101)，顺铂(448/1111)，作用时间为48小时。
[0037]图4A:卵巢癌SK0V-3荷瘤裸鼠模型验证ZD55-MnS0D与顺铂联合作用对卵巢癌的杀伤作用。
[0038]图4B:卵巢癌SK0V-3荷瘤裸鼠实验小鼠存活率统计。
【具体实施方式】
[0039]本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
[0040]1、材料和方法[0041 ] 1.1:细胞系和病毒
[0042]人卵巢癌细胞系SK0V3获自于中国科学院典型培养物收集中心细胞库(CBTCCAS，上海，中国)，并培养在添加10%热灭活胎牛血清(FBS，GIBCO，Carlsbad，CA)的DMEM培养基。在37 °C下于5% CO2中温育。
[0043]重组溶瘤腺病毒的构建和产生如Zhang Y，Gu J1Zhao L，He L1Qian ff,ffang J,Wang Y,Qian Q,Qian C,Wu J,Liu XY.Complete eliminat1n of colorectal tumorxenograft by combined manganese superoxide dismutase with tumor necrosisfactor-related apoptosis-1nducing ligand gene virotherapy.Cancer Res.2006 Apr15; 66 (8): 4291-8所述。重组腺病毒的扩增通过感染HEK293细胞进行。
[0044]1.2:体外的细胞毒性检测和定量分析
[0045]通过MTT方法来检测细胞存活。简而言之，将SK0V3接种至96孔板，每100μ1培养基IXlO4个细胞。加入不同浓度的各种处理物进行处理。在48小时或72小时之后，加入MTT(5g/υ?ΟμΙ，然后继续培养4小时后，再加MTT溶解液[20%SDS溶解于1:1D MF/H20中]100μ1，370C培养4小时，在DNA微量板读数器(GEN1s model ； Tecan ；Maennedorf，瑞士)上测A595。
[0046]1.3:R0S产生的分析
[0047]通过DCFH-DA至荧光产物DCF的转化并通过流式细胞仪来检测ROS产生。在细胞温育的最后30分钟，往细胞中添加lOmol/L DCFH-DA。细胞从培养板上脱离后，立即进行细胞流分析。DCF阳性细胞个数是过氧化氢产生的指标。
[0048]1.4:Hoechst 33342染色分析
[0049]Hoechst 33342染色用于检测细胞凋亡的形态特征。SK0V3细胞分别用顺铂或ZD55-MnS0D、或其组合进行处理。在处理后72小时，添加lmg/ml的Hoechst 33342(5yL)(Sigma-Aldrich，St Louis，M0)并在温育30分钟后用倒置荧光显微镜观察。未处理的细胞作为对照。
[0050]1.5:流式细胞仪检测
[0051 ] SK0V3细胞用顺铂和/或ZD55-MnS0D进行处理。48小时后，根据厂商说明使用Annexin V-FITC和PI双染色或者PI单独染色检测凋亡细胞。使用FACS(FACStar细胞荧光计，BD B1sciences)检查细胞凋亡和细胞周期。
[0052]1.6:ffestern blot分析
[0053]收集SK0V3细胞，并用PBS洗涤两次，然后在RI PA缓冲液中裂解。在12 %的SDS-PAGE上分离蛋白质，然后将分离的蛋白质转移至硝酸纤维素膜。加入封闭液(含5%脱脂牛奶的TBST)封闭，一抗作用60min后，用TBST洗5次，每次lOmin，再置偶联荧光素的二抗的封闭液中，室温杂交45min后，Odyssey红外激光扫描成像仪进行半定量分析。
[0054]1.7:动物实验
[0055]4-5周龄的雌性BALB/c裸鼠购自中国科学院上海实验动物中心(上海，中国)。所有的实验操作均符合实验动物在福利和伦理的要求。将SK0V-3细胞(2X106，在PBS中)在裸鼠的右侧皮下注射。一旦皮下肿瘤大小到达100-150_3，将裸鼠随机分为4组(每组8只)。然后将顺铂、ZD55-MnS0D及其组合、或PBS分别注射。ZD55-MnS0D(lX109PFlV鼠)采用肿瘤内注射的方式，而顺铂以5mg/Kg体重的量腹膜内注射，ΙΟΟμΙ PBS作为对照，连续注射三次，隔天注射。从注射开始，每5天测量肿瘤大小。
[0056]1.8:统计分析
[0057]实验统计数据用平均值土标准偏差(SD)表示，并用GraphPad 6.0软件进行分析和学生t检测。当P〈0.05时，被认为是统计显著性的。
[0058]实施例1:ZD55-MnS0D在卵巢癌细胞中的抗肿瘤活性
[0059]用于本实施例的重组溶瘤腺病毒的结构如图1A所示。在卵巢癌细胞系(SK0V-3)中，以所示MOI水平的ZD55-MnS0D和ZD55的感染导致腺病毒蛋白ElA的显著产生。为了评估ZD55的转基因递送能力，SK0V-3细胞用ZD55-MnS0D或ZD55处理48小时，并进行蛋白质印记以检测MnSOD基因的检测。如图1B所示，MnSOD在SK0V-3细胞中有效表达。在人正常的肝细胞系(QSG-7701)中，在用ZD55-MnS0D或ZD55处理后，没有ElA的表达(图1C)。这些结果表明，ZD55-MnS0D具有癌细胞选择性复制的特性，且MnSOD转基因被有效表达。
[0060]为了调查ZD55-MnS0D对细胞存活的影响以及确认毒性结果，人卵巢癌细胞SK0V-3和人正常细胞QSG-7701用10M0I的ZD55-MnS0D或ZD55感染。细胞增值用MTT检测法测定。结果表明，ZD55-MnS0D，在感染后4天，ZD55_MnS0D诱导了感染癌细胞系70.2 %的细胞死亡，且在杀死癌细胞方面ZD55-MnS0D比ZD55更显著有效(图1D)。相反，92.7%的正常的人细胞仍然存活(图1E)。
[0061 ]实施例2:ZD55-MnS0D增强顺铂介导的卵巢癌细胞抑制
[0062]为了评估ZD55-MnS0D是否增强顺铂诱导的卵巢癌细胞死亡，根据如上所述进行了MTT检测。卵巢癌细胞分别用顺铂、ZD55-MnS0D或其组合进行处理。结果表明，顺铂和ZD55-MnSOD的组合能够增强卵巢癌杀伤效果(图2A)。
[0063]为了验证增强的MnSOD表达能够富集H2O2，用对H2O2敏感的探针DCFH-DA检测H2O2的产生。图2B显示，用2055-]?11300(?〈0.01)和顺铂(？〈0.01)处理的肿瘤细胞相对未转导的细胞而言有显著增加的DCF-阳性肿瘤细胞比例，且用ZD55(P>0.05)感染的DCF阳性细胞的比例大于对照。本领域技术人员熟知，02—可被MnSOD的表达歧化为H2O2和O2。因此，这些结果间接表明增强的MnSOD表达或顺铂处理能导致H2O2的集聚，如升高的DCF-阳性细胞比例所证实的那样。
[0064]实施例3:ZD55-MnS0D增强顺铂介导的卵巢癌细胞凋亡
[0065]使用Hoechst 33342染色分析来调查用顺铂和ZD55_MnS0D的组合、单独的顺铂或单独的ZD55-MnS0D处理的SK0V-3细胞的形态变化。图3A表明，与单独的顺铂处理相比，用顺铂和ZD55-MnS0D的组合共处理导致显著的细胞凋亡，这点可以从染色质凝聚、细胞核碎片化和凋亡体的特征看出。为了定量ZD55-MnS0D对顺铂诱导的细胞凋亡的影响，使用FITC/PI双染色分析细胞凋亡(图3B)。结果证实用顺铂和ZD55-MnS0D的组合共处理导致的SK0V-3细胞凋亡比率是37.9%,其是顺铂单独处理的近3倍(12.8%)0
[ΟΟ??] 蛋白质印记分析证实，顺铀可以活化Capase依赖性路径，包括活化Caspase_8、Caspase-3和PARP剪切，而这一独特的效果能够被顺铂和ZD55-MnS0D的组合共处理进一步增强。
[0067]实施例4:ZD55_MnS0D增强顺铂介导的体内卵巢癌细胞生长抑制
[0068]为了检测顺铂和ZD55-MnS0D组合的体内治疗效果，使用SK0V-3细胞系建立的卵巢癌移植模型进行动物实验。在55或80天的时间段观察并比较抗肿瘤效果。如图4A所示，与仅仅接受PBS瘤内注射的动物相比，肿瘤内注射顺铂、ZD55-MnS0D和他们的组合的肿瘤平均大小快速降低。正如所期望的那样，组合的治疗比单独的顺铂(P = 0.002)和单独的ZD55-MnS0D(P = 0.002)更有效。而且，顺铂和ZD55-MnS0D的组合相对于roS、单独的顺铂或单独的ZD55-MnS0D而言具有显著改善的存活率(图4B)。
[0069]实施例5:ZD55-MnS0D、顺铂和奎尼丁三者在体内显著抑制卵巢癌细胞生长
[0070]4-5周龄的雌性BALB/c裸鼠购自中国科学院上海实验动物中心(上海，中国)。所有的实验操作均符合实验动物在福利和伦理的要求。将SK0V-3细胞(2X106，在PBS中)在裸鼠的右侧皮下注射。一旦皮下肿瘤大小到达100-150_3，将裸鼠随机分为4组(每组8只)。然后施用顺铂和ZD55-MnS0D的组合、和顺铂、ZD55-MnS0D和奎尼丁(quinidine，Quin)三者的组合。ZD55-MnS0D(lX109PFlV鼠)采用肿瘤内注射的方式，而顺铂和奎尼丁均以5mg/Kg体重的量腹膜内注射，ΙΟΟμΙ PBS作为对照，连续注射三次，隔天注射。从注射开始，每5天测量肿瘤大小并在75天的时间内统计裸鼠的存活。
[0071]结果证实，在第50天的时候顺铂和ZD55-MnS0D的组合以及顺铂、ZD55-MnS0D和奎尼丁的组合均能基本消除裸鼠的荷瘤块，但是在实验结束时的第75天，顺铂和ZD55-MnS0D的组合使得裸鼠的存活率是75%(8只裸鼠死亡)，而顺铂、ZD55-MnS0D和奎尼丁三者的组合的裸鼠存活率为93.75% (两只裸鼠死亡)。
[0072]虽然用上述实施方式描述了本发明，应当理解的是，在不背离本发明的精神的前提下，本发明可进行进一步的修饰和变动，且这些修饰和变动均属于本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.携带MnSOD的溶瘤腺病毒在制备用于在受试者中治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞增殖的药物组合物或药盒中的用途，其中所述药物组合物或药盒含有携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂以及药学上可接受的载体。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物组合物或药盒还含有用于治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞增殖的其他药物活性成分。3.根据权利要求2所述的用途，其中所述的其他药物活性成分是如吉西他滨、普乐沙福或紫杉醇。4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述的药物组合物或药盒中的携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂分别在分开的容器中存放或者携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铂在同一容器中存放。5.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述的药物组合物或药盒中还含有奎尼丁。6.根据权利要求5所述奎尼丁的用途，其中携带顺铂和奎尼丁在同一容器中存放，而携带MnSOD的溶瘤腺病毒在另一容器中存放。7.携带MnSOD的溶瘤腺病毒、顺铂和奎尼丁在制备用于在受试者中治疗卵巢癌或抑制卵巢癌细胞增殖的药物组合物或药盒中的用途。8.携带MnSOD的溶瘤腺病毒在制备用于在受试者中上调卵巢癌细胞中的剪切型Caspase-3、Caspase-9和/或PARP的表达水平的药物组合物或药盒中的用途，其中所述药物组合物或药盒含有携带MnSOD的溶瘤腺病毒、顺铂。9.根据权利要求8所述的用途，其中所述药物组合物或药盒还含有吉西他滨、普乐沙福、奎尼丁或紫杉醇。10.根据权利要求9所述的用途，所述的药物组合物或药盒中的携带MnSOD的溶瘤腺病毒和顺铀分别在分开的容器中存放或者在同一容器中存放。
【文档编号】A61K45/06GK106039323SQ201610388977
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月2日
【发明人】童向民, 黄东胜, 牟晓洲, 王世兵
【申请人】浙江省人民医院