一种医用止血海绵及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种医用止血海绵及其制备方法，该止血海绵由分别冻干的壳聚糖海绵、羧甲基壳聚糖海绵黏合而成，所述壳聚糖海绵和羧甲基壳聚糖海绵在制备过程中均加入了叔丁醇。经该工艺制备的止血海绵晶型好，在体内降解周期短，可持续有效附着于伤口、耐溶解性强、止血效果好、生产效率高、无毒副作用、无刺激。
【专利说明】
一种医用止血海绵及其制备方法
技术领域
[0001]本发明属于医药化工领域，具体涉及一种医用止血海绵及其制备方法。
【背景技术】
[0002]意外伤害中的出血控制一直是人类面临的主要问题，在战场、自然灾害、野外事故以及其他意外事件中，无法控制的出血仍然是导致伤员死亡的主要原因。
[0003]时至今日，纱布压迫止血依然是主要的止血手段，但是这种止血手段效果有限。市售的凝血酶止血材料、胶原蛋白止血材料、变性淀粉等止血产品，存在出血量大时溶解、强度减小的情况。此外，上述材料的粘性也较小、不能有效地附着在伤口表面形成持续性的封闭面，容易造成二次出血等情况，且部分产品由于采取了甲醛或者戊二醛进行交联，虽然增加了耐溶解性，但会有有害物质残留。
[0004]壳聚糖止血海绵因其具有疏松多孔的结构，大大增加了其在止血过程中与伤口和血液的接触面积，其主要成分为天然高分子材料一一壳聚糖，壳聚糖的止血、抑菌、抗菌性、生物相容性、微生物降解性、促进伤口愈合以及易于形成凝胶的性质赋予其具有良好的止血性能，因此对壳聚糖止血海绵进行研究开发成为了生物医学材料领域的研究重点。
[0005]对壳聚糖止血海绵的研究虽已有相关文献报道，但仍存在许多问题，如降解周期长、晶型不好、仅用于渗血以及小型伤口出血，部分产品虽然也进行了板压缩处理，但是仍存在着干燥周期长、外观难以控制、生产效率低下等缺点。
[0006]对比文件1(CN103028135 A)公开了一种用于敷料的止血海绵的制备方法，采用壳聚糖水溶液为原料经过冷冻、冻干以及后处理等工序制备而成，其后处理包括三个步骤，第一步为壳聚糖海绵致密化处理阶段，采取热板压缩法，第二步为预处理阶段，采取烘烤法，第三部为软化处理阶段，采用软化机器软化。采用该工艺制备的壳聚糖海绵晶型不好，且后处理过程步骤繁琐，不利于连续生产。
[0007]对比文件2(CN 101927027)公开了一种壳聚糖/羧甲基壳聚糖快速止血海绵，其由壳聚糖、羧甲基壳聚糖和甘油制成，为一种混合海绵，但该海绵存在降解周期长、外观难以控制等问题。
[0008]因此如何提高壳聚糖止血海绵在体内的降解速率，又使其具有良好的晶型结构，成为目前急需解决的问题。
【发明内容】
[0009]本发明的目的在于提供一种医用止血海绵，所提供的医用止血海绵晶型好，在体内降解周期短，可持续有效附着于伤口、耐溶解性强、止血效果好、生产效率高、无毒副作用、无刺激。
[00010]本发明提供的技术方案为:
一种医用止血海绵，其由分别冻干的壳聚糖海绵、羧甲基壳聚糖海绵黏合而成，所述壳聚糖海绵和羧甲基壳聚糖海绵在制备过程中均加入了叔丁醇。
[0011]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:所述羧甲基壳聚糖海绵所占比例为
O?99.9%ο
[0012]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:所述止血海绵的羧甲基壳聚糖层表面贴有防护垫。
[0013]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:所述防护垫为PE、EVA、PU膜，壳聚糖膜或羧甲基壳聚糖膜。
[0014]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:粘贴防护垫的胶为医用丙烯酸压敏胶、壳聚糖溶液或羧甲基壳聚糖溶液。
[0015]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其采用以下方法制备而成:
1)壳聚糖成盐:将壳聚糖溶于酸性溶液，经过滤、洗涤、烘干，制得壳聚糖盐；
2)配制溶液:将步骤I制备的壳聚糖盐溶于水中，加入叔丁醇作为辅助溶剂，搅拌过滤制得壳聚糖溶液；
将羧甲基壳聚糖溶于水中，加入叔丁醇作为辅助溶剂，搅拌过滤制得羧甲基壳聚糖溶液；
3)冷冻干燥:将步骤2制备的壳聚糖溶液和羧甲基壳聚糖溶液分别冷冻干燥，制得壳聚糖海绵和羧甲基壳聚糖海绵；
4)黏合:将步骤3制备的壳聚糖海绵、羧甲基壳聚糖海绵用胶黏剂黏合为一体；
5)热滚压:将黏合后的复合止血海绵在三级辊压机下进行热滚压；
6)干燥包装:将热滚压后的止血海绵放入层流干燥箱进行二次干燥，然后进行切割，包装和灭菌。
[0016]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:步骤I)所述壳聚糖的脱乙酰度为65%?95%，所述酸性溶液为盐酸、醋酸或乳酸，所述酸性溶液体积百分含量为25%?50%，所述酸性溶液与壳聚糖的重量比为1: 1.5?1:2.5。
[0017]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:步骤2)所述壳聚糖与溶剂的重量体积比(g/100mL)为1.5?3，溶解温度为50?70°C，溶解时间为0.5h?3h，叔丁醇与水的体积比为1:5?1:20。
[0018]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:步骤3)所述的冷冻干燥，其降温速率为0.5?l°C/min，在(TC保持Ih?2h，最终冷冻温度为-25?-45°C，真空度为10?60pa。
[0019]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:步骤4)所述胶黏剂为壳聚糖溶液，羧甲基壳聚糖溶液或医用α-异氰酸酯胶。
[0020]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:步骤5)所述热滚压的滚压温度为70?90°C，滚压后的厚度为0.5mm?2.0mm，密度为0.1?0.3g/cm3。
[0021]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:步骤6)所述二次干燥的干燥温度为70?90°C，时间为45?75min。
[0022]进一步地，本发明所述的医用止血海绵，其中:步骤6)止血海绵切割后粘贴防护垫，然后进行包装和灭菌。
[0023]本发明的另一目的在于提供所述医用止血海绵的制备方法。
[0024]具体技术方案为:
I)壳聚糖成盐:将壳聚糖溶于酸性溶液，经过滤、洗涤、烘干，制得壳聚糖盐； 2)配制溶液:将步骤I制备的壳聚糖盐溶于水中，加入叔丁醇作为辅助溶剂，搅拌过滤制得壳聚糖溶液；
将羧甲基壳聚糖溶于水中，加入叔丁醇作为辅助溶剂，搅拌过滤制得羧甲基壳聚糖溶液；
3)冷冻干燥:将步骤2制备的壳聚糖溶液和羧甲基壳聚糖溶液分别冷冻干燥，制得壳聚糖海绵和羧甲基壳聚糖海绵；
4)黏合:将步骤3制备的壳聚糖海绵、羧甲基壳聚糖海绵用胶黏剂黏合为一体；
5)热滚压:将黏合后的复合止血海绵在三级辊压机下进行热滚压；
6)干燥包装:将热滚压后的止血海绵放入层流干燥箱进行二次干燥，然后进行切割，包装和灭菌。
[0025]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:步骤I)所述壳聚糖的脱乙酰度为65%?95%，所述酸性溶液为盐酸、醋酸或乳酸，所述酸性溶液体积百分含量为25%?50%，所述酸性溶液与壳聚糖的重量比为1: 1.5?1:2.5。
[0026]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:步骤2)所述壳聚糖与溶剂的重量体积比(g/100mL)为1.5?3，溶解温度为50?70°C，溶解时间为0.5h?3h，叔丁醇与水的体积比为1:5?1:20。
[0027]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:步骤3)所述的冷冻干燥，其降温速率为0.5?l°C/min，在(TC保持Ih?2h，最终冷冻温度为_25?-45V，真空度为10?60pao
[0028]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:步骤4)所述胶黏剂为壳聚糖溶液，羧甲基壳聚糖溶液或医用α-异氰酸酯胶。
[0029]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:步骤5)所述热滚压的滚压温度为70?90°C，滚压后的厚度为0.5mm?2.0mm，密度为0.1?0.3g/cm3。
[0030]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:步骤6)所述二次干燥的干燥温度为70?90°C，时间为45?75min。
[0031]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:步骤6)止血海绵切割后粘贴防护垫，然后进行包装和灭菌。
[0032]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:所述防护垫为PE、EVA、PU膜，壳聚糖膜或羧甲基壳聚糖膜。
[0033]进一步地，本发明所述的医用止血海绵的制备方法，其中:粘贴防护垫的胶为医用丙烯酸压敏胶、壳聚糖溶液或羧甲基壳聚糖溶液。
[0034]以下是对本发明技术方案原理以及过程的阐述:
壳聚糖具有良好的止血性能，而羧甲基壳聚糖作为目前应用较多的改性壳聚糖，具有在水中溶解、在人体内易降解的特性，本发明综合两者的优势，将壳聚糖的止血、对皮肤表面的粘附性能以及羧甲基壳聚糖易在体内降解的特性相结合，采用壳聚糖海绵作为创口接触面、羧甲基海绵作为支撑面，使止血海绵既具有了壳聚糖海绵的止血效果、也具有了羧甲基海绵的可降解性以及防粘连性，制得具有良好止血功能，又可在体内快速降解的医用止血海绵。
[0035]壳聚糖作为天然高分子材料，其冻干特性区别于一般冻干粉针剂或者原料药，既要保持冻干后的干燥失重达标、又要保持其外观平整、孔径均匀，而市售的冻干壳聚糖海绵存在晶型较大、孔径不均一、取向性明显等问题，这直接影响了冻干海绵的比表面积以及吸附性，进而对产品的止血性能产生影响。针对该问题，本发明的发明人经过仔细研究，采取了在溶液中加入叔丁醇的方法来优化海绵的晶型以及后期升华过程中孔道的形成与保留。叔丁醇具有易形成针状结晶的特点，能显著改善冻干制剂的形貌，叔丁醇的加入使得溶液在冷冻过程中形成冰晶的方式改变、不形成较大的结晶、冰花，从而能使冻干海绵的外观更加细腻、冰晶小而均匀。由于其针状结晶的特性，在后期的干燥过程中，随着叔丁醇的升华，其针状孔道得以保持，有利于随后的干燥过程，从而加速冻干海绵的干燥过程。同时，针状孔道的存在有利于血液进入海绵内部并充分与壳聚糖表面的聚阳离子接触，从而促进血液凝固，使止血效果提高。
[0036]壳聚糖作为天然高分子材料，难以配制成较高浓度溶液，在一定分子量前提下，当壳聚糖浓度超过3% (g/100mL)后，已经很难进行搅拌、输送、灌装，因此冻干壳聚糖海绵普遍在2%浓度进行冻干。但是这个浓度条件下冻干得到的海绵密度较低(0.02?0.05g/cm3)，应用于止血创面特别是出血量大时存在着被血液浸透以及溶解的风险，从而影响其在较大出血情况下的应用。部分海绵类产品虽然采用了板压平处理，但是其不能连续压平，生产效率低下。本发明在冻干海绵出料以后，采用三级不锈钢辊子进行滚压增加海绵的密度(0.1?0.3g/cm3)、强度，提高其耐溶解性以及持久性，同时，可以方便的进行连续化流水线生产，减少生产过程中人的干预，提高生产效率，减少洁净生产过程中人的污染，扩大其在止血方面的应用范围。
[0037]本发明可实现如下有益效果:
I)本发明的医用止血海绵能够迅速强效止血(I?3分钟)无毒无刺激性，使用安全性高，操作方法简便易行。
[0038]2)本发明的医用止血海绵粘合能力强，能够持续有效附着在伤口表面，并且后处理简便快捷，应用范围广。
[0039]3)本发明的医用止血海绵具有生物可降解性，在体内可以代谢吸收，减少二次手术带来的风险，方便推广。
[0040]4)本发明的医用止血海绵生产周期短，结晶均一、孔径一致，增大与血液的接触面积，更有效的启动凝血机制，且不依赖于血小板作用可应用在肝素化的条件下，提高其止血范围。
[0041]5)本发明的医用止血海绵可流水线化生产，减少一般产品在洁净生产过程中人产生的污染，提高产品的质量，安全性高。
[0042]6)本发明的医用止血海绵可连续生产，提高生产效率、降低生产成本，适应工业化大生产。
【附图说明】
[0043]图1本发明实施例1所得止血海绵整体外观(Al)、局部外观(BI)和电镜照片(Cl);
[0044]图2对比例I所得止血海绵整体外观(A2)、局部外观(B2)和电镜照片(C2)。
【具体实施方式】
[0045]以下采用具体实施例对本发明技术方案进行阐述，但所列举实施例不作为对本发明保护方案的限制。
[0046]实施例1:
采用以下方法制备医用止血海绵:
1.称取10g壳聚糖，加入500mL乙醇，缓慢滴加40g浓度为50%醋酸溶液，搅拌器搅拌两小时至完全成盐后，过滤洗涤多余的酸，烘干得到壳聚糖盐。
[0047]2.称取10g壳聚糖盐，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。
[0048]3.滤液分装到冻干模具中，厚度为2_，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时，升温至室温继续干燥2小时停机，制得壳聚糖海绵a。
[0049]4.称取10g羧甲基壳聚糖，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。滤液分装到冻干模具中，厚度为5mm，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时、升温至室温继续干燥2小时停机，得羧甲基壳聚糖海绵b。
[0050]5.称取30g羧甲基壳聚糖，加入IL注射用水搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液c进入下一步备用。将上一步制得羧甲基壳聚糖海绵b表面涂一层羧甲基壳聚糖溶液C，壳聚糖海绵a放置在上层，轻压粘合得到组合海绵d，进入下一步。
[0051 ] 6.上述组合海绵d放入三级辊压机中，在85°C条件下进行滚压，最终厚度控制在1.0mm?2.0mm。将压缩后的海绵转移至层流干燥箱在80°C条件下进行二次干燥，时间为60分钟。干燥后的海绵进入模切机进行切割，得到小块海绵，在羧甲基壳聚糖层表面粘贴PE膜作为防护垫，然后放入铝箔袋进行封口、包装、辐照灭菌，即得可降解医用止血海绵。
[0052]实施例2:
操作过程与实施例1相同，仅用盐酸代替实施例1中的醋酸。
[0053]实施例3:
操作过程与实施例1相同，仅用乳酸代替实施例1中的醋酸。
[0054]实施例4
采用以下方法制备医用止血海绵:
1.称取10g壳聚糖，加入500mL乙醇，缓慢滴加40g浓度为50%醋酸溶液，搅拌器搅拌两小时至完全成盐后，过滤洗涤多余的酸，烘干得到壳聚糖盐。
[0055]2.称取10g壳聚糖盐，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。
[0056]3.滤液分装到冻干模具中，厚度为2_，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时，升温至室温继续干燥2小时停机，制得壳聚糖海绵a。
[0057]4.称取10g羧甲基壳聚糖，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。滤液分装到冻干模具中，厚度为5mm，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时、升温至室温继续干燥2小时停机，得羧甲基壳聚糖海绵b。
[0058]5.称取30g壳聚糖盐，加入IL注射用水搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液c进入下一步备用。将上一步制得羧甲基壳聚糖海绵b表面涂一层壳聚糖溶液C，壳聚糖海绵a放置在上层，轻压粘合得到组合海绵d，进入下一步。
[0059]6.上述组合海绵d放入三级辊压机中，在85°C条件下进行滚压，最终厚度控制在1.0mm?2.0mm。将压缩后的海绵转移至层流干燥箱在80°C条件下进行二次干燥，时间为60分钟。干燥后的海绵进入模切机进行切割，得到小块海绵，在羧甲基壳聚糖层表面粘贴EVA膜作为防护垫，然后放入铝箔袋进行封口、包装、辐照灭菌，即得可降解医用止血海绵。
[0060]实施例5
采用以下方法制备医用止血海绵:
1.称取10g壳聚糖，加入500mL乙醇，缓慢滴加40g浓度为50%醋酸溶液，搅拌器搅拌两小时至完全成盐后，过滤洗涤多余的酸，烘干得到壳聚糖盐。
[0061 ] 2.称取10g壳聚糖盐，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。
[0062]3.滤液分装到冻干模具中，厚度为2_，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时，升温至室温继续干燥2小时停机，制得壳聚糖海绵a。
[0063]4.称取10g羧甲基壳聚糖，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。滤液分装到冻干模具中，厚度为5mm，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时、升温至室温继续干燥2小时停机，得羧甲基壳聚糖海绵b。
[0064]5.将上一步制得羧甲基壳聚糖海绵b表面涂一层α-异氰酸酯胶c，壳聚糖海绵a放置在上层，轻压粘合得到组合海绵d，进入下一步。
[0065]6.上述组合海绵d放入三级辊压机中、在85°C条件下进行滚压，最终厚度控制在1.0mm?2.0mm。将压缩后的海绵转移至层流干燥箱在80°C条件下进行二次干燥，时间为60分钟。干燥后的海绵进入模切机进行切割，得到小块海绵，在羧甲基壳聚糖层表面粘贴PU膜作为防护垫，然后放入铝箔袋进行封口、包装、辐照灭菌，即得可降解医用止血海绵。
[0066]实施例6
采用以下方法制备医用止血海绵:
1.称取10g壳聚糖，加入500mL乙醇，缓慢滴加40g浓度为50%醋酸溶液，搅拌器搅拌两小时至完全成盐后，过滤洗涤多余的酸，烘干得到壳聚糖盐。
[0067]2.称取10g壳聚糖盐，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。
[0068]3.滤液分装到冻干模具中，厚度为6_，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时，升温至室温继续干燥2小时停机，制得壳聚糖海绵a。
[0069]4.称取10g羧甲基壳聚糖，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。滤液分装到冻干模具中，厚度为2mm，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时、升温至室温继续干燥2小时停机，得羧甲基壳聚糖海绵b。
[0070]5.称取30g羧甲基壳聚糖，加入IL注射用水搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液c进入下一步备用。将上一步制得羧甲基壳聚糖海绵b表面涂一层羧甲基壳聚糖溶液C，壳聚糖海绵a放置在上层，轻压粘合得到组合海绵d，进入下一步。
[0071]6.上述组合海绵d放入三级辊压机中，在85°C条件下进行滚压，最终厚度控制在1.0mm?2.0mm。将压缩后的海绵转移至层流干燥箱在80°C条件下进行二次干燥，时间为60分钟。干燥后的海绵进入模切机进行切割，得到小块海绵，然后放入铝箔袋进行封口、包装、辐照灭菌，即得可降解医用止血海绵。
[0072]实施例7
1.称取10g壳聚糖，加入500mL乙醇，缓慢滴加40g浓度为50%醋酸溶液，搅拌器搅拌两小时至完全成盐后，过滤洗涤多余的酸，烘干得到壳聚糖盐。
[0073]2.称取10g壳聚糖盐，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。
[0074]3.滤液分装到冻干模具中，厚度为2_，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时、升温至室温继续干燥2小时停机，制得壳聚糖海绵a。
[0075]4.称取10g羧甲基壳聚糖，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。滤液分装到冻干模具中、厚度为6mm，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时，升温至室温继续干燥2小时停机，得羧甲基壳聚糖海绵b。
[0076]5.称取30g羧甲基壳聚糖，加入IL注射用水搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液c进入下一步备用。将上一步制得羧甲基壳聚糖海绵b表面涂一层羧甲基壳聚糖溶液C，壳聚糖海绵a放置在上层，轻压粘合得到组合海绵d，进入下一步。
[0077]6.上述组合海绵d放入三级辊压机中、在85°C条件下进行滚压，最终厚度控制在1.0mm?2.0mm。将压缩后的海绵转移至层流干燥箱在80°C条件下进行二次干燥，时间为60分钟。干燥后的海绵进入模切机进行切割，得到小块海绵，然后放入铝箔袋进行封口、包装、辐照灭菌，即得可降解医用止血海绵。
[0078]对比例1:
采用以下方法制备未加叔丁醇的壳聚糖止血海绵:
1.称取10g壳聚糖，加入500mL乙醇，缓慢滴加40g浓度为50%醋酸溶液，搅拌器搅拌两小时至完全成盐后，过滤洗涤多余的酸，烘干得到壳聚糖盐。
[0079]2.称取10g壳聚糖盐，加入5L注射用水搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液进入下一步备用。
[0080]3.滤液分装到冻干模具中、厚度为6_，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到(TC以上I小时，升温至室温继续干燥2小时停机，制得壳聚糖海绵。
[0081 ] 对比例2:
制备壳聚糖止血海绵
[0082]1.称取10g壳聚糖，加入500mL乙醇，缓慢滴加40g浓度为50%醋酸溶液，搅拌器搅拌两小时至完全成盐后，过滤洗涤多余的酸，烘干得到壳聚糖盐。
[0083]2.称取10g壳聚糖盐，加入4.5L注射用水，随后加入0.5L叔丁醇搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液分为两份，进入下一步备用。
[0084]3.其中一份滤液分装到冻干模具中，厚度为6mm，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到O0C以上I小时、升温至室温继续干燥2小时停机，制得壳聚糖海绵a。
[0085]4.另外一份滤液分装到冻干模具中，厚度为2mm，将分装好的模具放到真空冷冻干燥机中，缓慢降温至_35°C，保持I小时，然后缓慢升温至(TC，保持在(TC直到产品温度到O0C以上I小时，升温至室温继续干燥2小时停机，制得壳聚糖海绵b。
[0086]5.称取30g壳聚糖盐，加入IL注射用水搅拌溶解，将溶解后的溶液进行过滤，滤液c进入下一步备用。将上一步制得壳聚糖海绵b表面涂一层壳聚糖溶液C，壳聚糖海绵a放置在上层，轻压粘合得到壳聚糖海绵d，进入下一步。
[0087]6.上述组合海绵d放入三级辊压机中、在85°C条件下进行滚压，最终厚度控制在1.0mm?2.0mm。将压缩后的海绵转移至层流干燥箱在80°C条件下进行二次干燥，时间为60分钟。干燥后的海绵进入模切机进行切割，得到小块海绵，然后放入铝箔袋进行封口、包装、辐照灭菌，即得壳聚糖海绵。
[0088]试验例I
将实施例1所得医用止血海绵和对比例I所得壳聚糖止血海绵进行观察和电镜扫描，结果如附图中图1和图2所示。
[0089]实施例1制备止血海绵过程中加入了叔丁醇，而对比例I制备止血海绵过程中未加叔丁醇，通过对加入叔丁醇后制备的止血海绵和未加叔丁醇制备的止血海绵进行对比，可看出，加入叔丁醇后制备的止血海绵更加细腻，晶型好，电镜照片显示其空间结构更加精细、均匀，比表面积更大，从而使止血效果更好。
[0090]试验例2
家兔股动脉止血效果研究
1.试验品:实施例7制备的医用止血海绵；
对照品:hemcon BandagePRO和普通止血纱布。
[0091]2.动物以及材料:实验用新西兰兔18只，雌雄各9只，体重为2.0?3.0kg;随机分为3组，每组6只。
[0092]3.方法:试验分为三组，第I组针对实施例7制备的医用止血海绵，第2组针对hemcon BandagePRO，第3组针对普通止血纱布。
[0093]以实验用新西兰兔作为模式动物，3%戊巴比妥钠静脉注射麻醉(1.5mL/kg)，仰卧解剖台上，分离左侧股动脉，用1mL注射器刺破动脉血管，见喷射状出血后，立即在伤口处敷于一块止血海绵，用食指和中指并拢一起按压止血，秒表计时，90秒后轻轻松手观察止血状况，若无活动性出血则定义为止血，记录时间；若仍出血，则继续按压180秒观察，超过300秒未止血则视为止血失败;统计观察，记录其止血效果。
[0094]4.结果:第I组医用止血海绵90秒内完成有效止血，止血率为100%;第2组hemconBandagePRO也在90秒内完成有效止血，止血率为100%;第3组普通止血纱布在300秒内无法止血，止血率为0%。
[0095]5.结论:实施例7制备的医用止血海绵与阳性对照品hemcon BandgaePRO止血效果无明显差异，两者均优于普通止血纱布。
[0096]试验例3
止血海绵动物体内降解实验
1.受试产品:实施例6、实施例7和对比例I制备的医用止血海绵。
[0097]2.动物以及材料:雄性实验用大鼠36只，随机分为三组，每组12只，分别是A组(对比例I样品，壳聚糖海绵)，B组(实施例6样品，壳聚糖与羧甲基壳聚糖的重量比为3:1)，C组(实施例7样品，壳聚糖与羧甲基壳聚糖的重量比为1:3)。实验前两天，用硫化钠溶液对大鼠腹部进行脱毛处理，腹部清理干净后，将大鼠静养3天。
[0098]3.方法:实验时使用3%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉。取仰卧位固定于实验用鼠板上，四肢及头部固定好。用75%乙醇溶液对大鼠腹部消毒处理，取上腹部正中切口，切开皮肤，逐层开腹，暴露肝脏左叶。
[00"] 采用局部钳夹的方法在肝左叶表面作IcmX lcmX0.2cm切口，致创面明显出血，待自由出血10s。立即将海绵敷于出血切口表面，轻压I min后将材料取出。观察创面，若有活动性出血，则取第二块敷料贴附创面，按压I min后再观察创面出血情况。重复施压直至创面无活动性出血。取IcmX Icm大小的海绵贴附在肝脏创口处，将右肝叶覆盖于材料之上。缝合腹腔，用75%乙醇溶液对腹部进行消毒，再包扎后分笼饲养。术后每天观察大鼠的活动情况。
[0100]在I周，4周，8周，16周时各组分别取3只大鼠，用过量麻醉药致死，解剖处死后的大鼠腹腔，观察并记录植入部位的植入物的吸收情况。
[0101]4.结果:在三组实验中，C组样品降解最快，B组相对较慢，A组在整个实验周期内降解不明显。
[0102]第一周时，C组大部分植入物已经降解，只在肝脏部位发现少量白色凝胶状物质；第四周时，只有I只大鼠肝胜部位可见很少量白色凝胶物质；第八周时，所有三只大鼠肝脏植入部位的C组植入物已完全消失。而A组实验中，材料植入第一周时，出现很明显的纤维包裹，第四周时，这种纤维包裹达到最大;直到第16周，纤维包裹才减小，植入物较第8周时有所减少。B组实验中，第八周时，部分植入物降解;但至第16周时，仍有2只大鼠肝胜部位可见少量白色凝胶物质。
[0103]结论:实施例7制备的医用止血海绵在体内的降解时间明显缩短。说明羧甲基壳聚糖比壳聚糖更易于在机体内降解，采用壳聚糖和羧甲基壳聚糖制成复合止血海绵可明显缩短其在机体内的降解时间。
【主权项】
1.一种医用止血海绵，其特征在于，由分别冻干的壳聚糖海绵、羧甲基壳聚糖海绵黏合而成，所述壳聚糖海绵和羧甲基壳聚糖海绵在制备过程中均加入了叔丁醇。2.如权利要求1所述的医用止血海绵，其特征在于:所述羧甲基壳聚糖海绵所占比例为O ?99.9%ο3.如权利要求1所述的医用止血海绵，其特征在于:所述止血海绵的羧甲基壳聚糖层表面贴有防护垫。4.如权利要求3所述的医用止血海绵，其特征在于:所述防护垫为PE、EVA、PU膜，壳聚糖膜或羧甲基壳聚糖膜。5.如权利要求3所述的医用止血海绵，其特征在于:粘贴防护垫的胶为医用丙烯酸压敏胶、壳聚糖溶液或羧甲基壳聚糖溶液。6.如权利要求1所述的医用止血海绵，其特征在于:其采用以下方法制备而成: 1)壳聚糖成盐:将壳聚糖溶于酸性溶液，经过滤、洗涤、烘干，制得壳聚糖盐； 2)配制溶液:将步骤I制备的壳聚糖盐溶于水中，加入叔丁醇作为辅助溶剂，搅拌过滤制得壳聚糖溶液； 将羧甲基壳聚糖溶于水中，加入叔丁醇作为辅助溶剂，搅拌过滤制得羧甲基壳聚糖溶液； 3)冷冻干燥:将步骤2制备的壳聚糖溶液和羧甲基壳聚糖溶液分别冷冻干燥，制得壳聚糖海绵和羧甲基壳聚糖海绵； 4)黏合:将步骤3制备的壳聚糖海绵、羧甲基壳聚糖海绵用胶黏剂黏合为一体； 5)热滚压:将黏合后的复合止血海绵在三级辊压机下进行热滚压； 6)干燥包装:将热滚压后的止血海绵放入层流干燥箱进行二次干燥，然后进行切割，包装和灭菌。7.如权利要求6所述的医用止血海绵，其特征在于:步骤I)所述壳聚糖的脱乙酰度为65%?95%，所述酸性溶液为盐酸、醋酸或乳酸，所述酸性溶液体积百分含量为25%?50%，所述酸性溶液与壳聚糖的重量比为1: 1.5?1:2.5。8.如权利要求6所述的医用止血海绵，其特征在于:步骤2)所述壳聚糖与溶剂的重量体积比(g/100mL)为1.5?3，溶解温度为50?70°C，溶解时间为0.5h?3h，叔丁醇与水的体积比为1:5?1:20。9.如权利要求6所述的医用止血海绵，其特征在于:步骤3)所述的冷冻干燥，其降温速率为0.5?l°C/min，在(TC保持Ih?2h，最终冷冻温度为-25?-45°C，真空度为10?60pa。10.如权利要求6所述的医用止血海绵，其特征在于:步骤4)所述胶黏剂为壳聚糖溶液，羧甲基壳聚糖溶液或医用α-异氰酸酯胶。11.如权利要求6所述的医用止血海绵，其特征在于:步骤5)所述热滚压的滚压温度为70?90°C，滚压后的厚度为0.5mm?2.0mm，密度为0.1?0.3g/cm3。12.如权利要求6所述的医用止血海绵，其特征在于:步骤6)所述二次干燥的干燥温度为70?90°C，时间为45?75min。13.如权利要求6所述的医用止血海绵，其特征在于:步骤6)止血海绵切割后粘贴防护垫，然后进行包装和灭菌。14.如权利要求1中所述的医用止血海绵的制备方法，其特征在于:步骤如下: 1)壳聚糖成盐:将壳聚糖溶于酸性溶液，经过滤、洗涤、烘干，制得壳聚糖盐； 2)配制溶液:将步骤I制备的壳聚糖盐溶于水中，加入叔丁醇作为辅助溶剂，搅拌过滤制得壳聚糖溶液； 将羧甲基壳聚糖溶于水中，加入叔丁醇作为辅助溶剂，搅拌过滤制得羧甲基壳聚糖溶液； 3)冷冻干燥:将步骤2制备的壳聚糖溶液和羧甲基壳聚糖溶液分别冷冻干燥，制得壳聚糖海绵和羧甲基壳聚糖海绵； 4)黏合:将步骤3制备的壳聚糖海绵、羧甲基壳聚糖海绵用胶黏剂黏合为一体； 5)热滚压:将黏合后的复合止血海绵在三级辊压机下进行热滚压； 6)干燥包装:将热滚压后的止血海绵放入层流干燥箱进行二次干燥，然后进行切割，包装和灭菌。
【文档编号】A61L24/08GK106075552SQ201610494433
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】梁立波, 张彪, 李素哲
【申请人】石家庄亿生堂医用品有限公司