专利名称：一种酶促油脱胶的方法
技术领域：
本发明涉及一种酶促减少食用油中含磷成分的含量的改进方法。
背景技术：
从常用油和脂肪产品中通过对含油原料进行压榨或通过从所述原料中提取油质并除去提取溶剂而加工所得的油包含诸如极性脂质类(主要由磷脂组成)、脂肪酸、色素、气味成分等等的杂质。因此需要通过精加工除去这些杂质。这类方法可能需要脱胶的步骤。
本领域已知应用磷脂酶使食用油酶促脱胶(US 5，264，367；JP-A-2153997；和EP 622446)，以降低上述水脱胶食用油的含磷量。
但这些文献并未具体指明在酶促脱胶方法中使用少量水。
相反，EP 622446建议在酶促脱胶方法中使用大量水。参见该文献的第3页，第33-44行以及权利要求4，其建议在上述方法中使用占油重30％以上的水。
发明简述本发明将解决的问题是，提供又简化又经济的使食用油酶促脱胶的廉价方法。
所述溶液使用少量水实施上述方法。
因此，本发明涉及减少食用油中含磷成分含量的方法，所述食用油的含磷量为50-10，000ppm，该方法包括使pH 1．5-8的上述油与磷脂酶A1(PLA1)、磷脂酶A2(PLA2)、或磷脂酶B(PLB)的已乳化在油中的水溶液相接触，直至油中含磷量减至12ppm以下，然后从处理过的油中分离水相，其中上述方法的特征在于，上述乳化条件是利用占油重0．01-1．5％的水，优选占油重0．01-1．0％的水，更优选占油重0．01-0．75％的水，更优选占油重0．01-0．5％的水，最优选占油重0．01-0．4％的水而形成。
而且，占油重0．01％以上水的这种较低剂量范围可能优选为占油重的0．1％的水。
本文所述方法的好处是减少了水以及废水处理的成本。此外，由于只有少量的油将浪费到水相中而使油的回收量增加。
此外，本文所述方法的好处可能是，采用这种方法的油厂有可能省略对该方法中所用污水的污泥再循环过程。
本领域已知的酶促脱胶方法产生大量污水，其净化处理的成本很高。运显然是一种经济负担。
此外，油厂过去不得不对工艺水进行再循环以减少上述污水纯化的成本。
可通过本文所述方法中所用的少量水而省略上述再循环步骤。
根据本领域(如US 5，264，367)进行酶促脱胶时，常常将油包水乳液加热处理至如65-75℃以促进油相与水相通过如离心而进行分离。当在油脱胶方法中使用热稳定性磷脂酶LecitaseTM(Novo Nordisk A／S，Denmark)时，含有此酶的水相可有利地重复使用多次(加或不加新鲜酶溶液均可)。
然而，对油厂而言，如果能完全避免水相的再循环则更为有利。一般情况下，再循环意味着水的总体消耗将增加，而成本也将增加。如果在酶促脱胶方法中只使用了少量水，可省去有时颇成问题的污泥相再循环过程。
本发明的实施方案叙述如下，只为举例说明用。
发明详述食用油原则上，任何食用油可按本发明的方法进行脱胶。油的实例如原油以及水脱胶的油。
原油(也称未脱胶油)可能是从如油菜籽、大豆、或向日葵中压榨或提取的油或它们的混合物。原油中的磷脂含量可能在0．5-3％w／w之间变动，对应于含磷量为200-10，000ppm、更优选250-1200ppm。除了磷脂以外，原油中还包含低浓度的碳水化合物、蔗糖化合物以及钙、镁和铁的金属／磷脂酸复合物。
优选地，上述食用油是已事先除去粘胶且含磷量为50-250ppm的油。
这类油通常通过水脱胶法获得并称之为“水脱胶油”。
水脱胶油通常通过使1-3％w／w的热水与温(60-90℃)原油混合而获得。一般处理时间为30-60分钟。水脱胶的步骤除去水合时在油中不溶的磷脂和粘质树胶。水合磷脂及树胶可通过沉降、过滤或离心从油中分离-离心为更主要的方法。
可供选择地，在此称为“水脱胶”的方法也可称为“湿态精制以除去粘胶”(参见US 5，264，367)。
此外，食用油优选为植物油。
本方法中所用的磷脂酶优选地，本发明的方法中所用的磷脂酶是得自微生物的磷脂酶，优选微生物为丝状真菌、酵母或细菌。
为了本发明的目的，在此与具体微生物来源一起使用的术语“得自”指所述酶以及编码这种酶的DNA序列从所述具体来源产生。
因而所述酶是通过已知的标准方法从这种具体微生物来源中获得，其中所述标准方法能使技术人员获得含有所述酶并能应用于本发明的方法中的样品。上述标准方法可能是从上述具体微生物来源中进行直接纯化或克隆编码所述酶的DNA序列，然后在同一来源中重组表达(同源重组表达)或在不同来源中重组表达(异源重组表达)。
更优选地，本发明的方法中所用的磷脂酶得自镰孢属的丝状真菌，如大刀镰孢、异孢镰孢、茄病镰孢的菌株，或尤其是尖孢镰孢的菌株；或曲霉属的丝状真菌，如泡盛曲霉、臭曲霉、日本曲霉、黑曲霉的菌株，或尤其是米曲霉的菌株。
适当的镰孢属磷脂酶的实例公开在i) Tsung-Che等人(Phytopathological notes 581437-38(1968))(一种茄病镰孢菌磷脂酶)；和ii) EP专利申请号97610056．0公开了一种适当的大刀镰孢菌磷脂酶(参见该文献的实施例18)和一种尖孢镰孢菌磷脂酶(参见实施例1-17)。
适当的曲霉属磷脂酶实例公开在i) EP 575133公开了多种不同的曲霉菌磷脂酶(参见权利要求14)，尤其是米曲霉的磷脂酶(权利要求17或18)和黑曲霉的磷脂酶(权利要求19)；和ii) DE 19527274 A1公开了一种适当的曲霉制品(参见实施例)。
此外，市售磷脂酶制品Degomma VOD(Roehm，Germany)也适用于本发明的方法中，据信这种制品包含曲霉菌磷脂酶。
此外，优选本发明的方法中所用的磷脂酶具有特定的特性。
因此，本发明的实施方案涉及i)一种根据本发明的方法，其中所述磷脂酶是实质上不依赖于Ca2+浓度的磷脂酶，这种磷脂酶是在磷脂酶活性试验中在5mM EDTA和5mM Ca2+下测得的相对磷脂酶活性，这一试验是在包含2％磷脂酰胆碱、2％ TritonX-100、20mM柠檬酸盐，pH 5的缓中液中；37℃温育10分钟，然后于95℃终止反应5分钟而测量磷脂酰胆碱中释放的游离脂肪酸；其中5mMEDTA／5mM Ca2+时的相对磷脂酶活性的比例大于0．25，更优选大于0．5；和／或ii)一种根据本发明的方法，其中所述磷脂酶是具有能释放至少7μmol游离脂肪酸／分钟／mg酶；更优选至少15μmol游离脂肪酸／分钟／mg酶的磷脂酶活性的磷脂酶，该磷脂酶以其磷脂酶活性的形式在试验中测量，这一试验是在包含2％磷脂酰胆碱、2％ Triton X-100、20mM柠檬酸盐，pH 5的缓冲液中；37℃温育10分钟后于95℃终止反应5分钟而测量磷脂酰胆碱中释放的游离脂肪酸。
对上述试验的详细描述公开在本文的具体实施例中(参见下文)。更详细参考见EP专利申请号97610056．0(参见该文献中的实施例9)。
此外，已证实特异性适于酶促油脱胶的一般方法并尤其适于本文所述改进方法的磷脂酶的特征是具有特定的一级氨基酸序列。
因此，在本发明的另一实施方案中，本发明涉及根据本发明的一种方法，其中所述磷脂酶是具有选自下列组的多肽序列的磷脂酶(a)具有示于SEQ ID NO 1中第31-346位的氨基酸序列的多肽；(b)具有示于SEQ ID NO 1中第31-303位的氨基酸序列的多肽；(c)与(a)，或(b)中所定义的上述多肽具有至少70％同源性的多肽；以及(a)，(b)或(c)的片段。
对具有上述多肽序列的磷脂酶的克隆和纯化的详细描述，参见EP专利申请号97610056．0。
在该文献中，还可知得自尖孢镰孢菌并具有上述(b)所述多肽序列的磷脂酶表现出上述两个功能性特征。因此，这种磷脂酶是本发明的方法中所用的最优选的磷脂酶。本文的一个实施例证实了这种磷脂酶的应用(参见下文)。
最后，适当的非微生物磷脂酶的一个实例是得自猪胰的市售磷脂酶(LecitaseTM，Novo Nordisk A／S，Denmark)。
本发明的方法的标准工艺参数本发明的方法中除了特别使用少量水以外，可根据本领域而应用任何其它工艺参数。参见参考本领域已知的方法的背景部分。
酶促处理是通过分散磷脂酶水溶液而进行，优选将所述水溶液分散为平均直径小于10μ(微)m的小滴。
根据本发明的方法，水的用量为相对于油重量的0．01-1．5％。
可任选加入乳化剂。可利用机械振荡维持该乳液。
酶促处理可在pH 1．5-8的范围内的任一pH下进行，优选pH 3-6。可通过加入柠檬酸、柠檬酸盐缓冲液、NaOH或HCl对pH进行调整。
温度一般在30-75℃较适宜(特别是40-60℃)。反应时间通常为0．5-12小时(如2-6小时)，合适的酶剂量通常为每升油100-5000IU，特别是200-2000IU／l。
酶促处理可分批在如罐中搅拌进行，或可以在如一组搅拌的反应罐中连续进行。
酶促处理后分离水相和油相。这种分离是通过常规方式如离心进行。本发明的方法可该值降至12ppm以下，更优选10ppm以下，进一步优选5ppm以下。
材料和方法实施例实施例1对食用油酶促脱胶的试验的总述用于进行酶促脱胶的设备该设备由1L夹套式钢反应器(配有钢盖)、推进器(约600rpm)、折流板、温度传感器，顶部入水管，顶部回流冷凝器(约4℃)，和底部出水管组成。反应器夹套与恒温水浴相通。出水管经聚硅氧烷管道通向配备了“方口高剪切隔离屏(high shear screen)”的Silverson联机搅拌头，该搅拌头由SilversonL4RT高剪切实验室搅拌器(约8500rpm，流速约1．1升／分钟)驱动。搅拌头配备有冷却旋管(5-10℃)和出水管并经聚硅氧烷管道与该反应器的入水管管道相通。温度传感器插在聚硅氧烷管道中，刚好在搅拌头之后。反应器／搅拌头体系与外环境通过回流冷凝器进行唯一的连接。
进行酶促脱胶的一般方法开动所有冷却和恒温设备。然后将0．6L(约560g)油加入反应器中，该反应器保持在具体实验所需的温度附近。开动实验室搅拌器，借此油开始从反应器循环至搅拌头再回到反应器。使该系统平衡约10分钟，在此期间精确校准温度。添加溶于适量水中的柠檬酸一水合物0．6g(2．86mmol)或柠檬酸和柠檬酸三钠的适量混合物而开始预处理阶段(参见下表1和7；[柠檬酸]的水／油乳液=4．6mM)，此时设置t=0。在t=30分钟时，加入适量的4MNaOH溶液(参见表1和7)。
表1．实验A-D中的含水量；wdg(水脱胶的)菜籽油
*0．6g柠檬酸一水合物提供的水。
**0．5g柠檬酸一水合物和0．14g柠檬酸三钠二水合物的混合物提供的水。
在t=35分钟时，取样进行P-分析和pH测定。紧接着，加入所需量的酶溶液(预处理阶段结束)。在t=1，2，3．5，5，6小时时取出用于P(磷)分析和pH测定的样品，然后终止反应。
排空反应器／搅拌器系统，用500ml 10％ Deconex／DI(去离子)水溶液漂洗2次，再用500ml DI水至少中洗3次。表2指示反应期间的各添加步骤和取样步骤。
表2．酶处理时间表 磷分析P分析取样取10ml油包水乳液，加入玻璃离心管中。将该乳液在沸水浴中加热30分钟。于5000rpm下离心10分钟。将约8ml的上层(油相)转移至一个12ml的聚苯乙烯试管中，静置(以沉降)12-24小时。沉降后从上层透明相中取约1-2g进行P分析。
P分析按“油、脂肪及其衍生物分析的标准方法，第7版(1987)”中2．421方案进行称100mg Mgo(leicht，Merck #5862)置于在瓷皿中，用燃气喷灯加热。加入1-2g油，用燃气喷灯点燃，产生黑色、坚硬的物质。在Vecstar加热炉中于850℃加热2小时，形成白灰。将该灰溶于5ml 6M硝酸中，加入20ml混合试剂(reagent mix)。静置20分钟。测量460nm处的吸光度(使用空白(5ml HNO3+20ml混合试剂)调零)。利用标定曲线进行计算。
取2ml油包水乳液，与2ml MilliQ水混合。待相分离后，用移液管吸去上部油层。用pH电极Orion测量水相中的pH。用下式将测量值转换成“真实”pH值pH真实=pH测得值-0．38。
标定曲线是通过将0．6g柠檬酸一水合物溶于27g DI水中而得到的；用pH电极Orion测量该溶液的pH(pH真实)。取100μl与2ml MilliQ水混合，用pH电极Orion测量该溶液的pH(pH测得值)。通过添加NaOH溶液而逐渐改变柠檬酸溶液的pH，对于每次调整来说，如上进行稀释以及pH测定。
实施例2对水脱胶的菜籽油的脱胶处理(I)实验均按以上实施例1所述的“进行酶促脱胶的一般方法”进行。
油水脱胶的菜籽油来自丹麦的Arhus Oliefabrik(AOM)。批号C00730／B01700和C00730／B01702，含磷量231-236ppm。含水量≤0．1％w／w。
酶具有SEQ NO 1所示氨基酸序列的尖孢镰孢菌的PL(磷脂酶)。批号F-9702027，估计浓度0．75mg／ml。
此酶如EP专利申请号97610056．0所述进行重组表达及纯化。
实验A(含水量5．3％)将0．6L(560g)wdg(水脱胶)的菜籽油加入设备中并加热至40℃。在t=0分钟时，加入由0．6g柠檬酸一水合物溶于27g水中而成的溶液。在t=30分钟时，加入1．07ml(4．3毫摩尔)4M NaOH溶液，使pH为5左右。在t=35分钟时，加入1ml(0．75mg)尖孢镰孢菌磷脂酶的纯化溶液。离心后测得的油相含磷量以及水相pH值示于表3中。
表3．wdg菜籽油用尖孢镰孢菌磷脂酶脱胶的结果，含水量5．3％。
实验B(含水量1．3％)
如以上实验A，不同的是，在t=0分钟时，加入由0．6g柠檬酸一水合物溶于5．0g水中而成的溶液，在t=30分钟时，加入0．71ml(2．86毫摩尔)4M NaOH溶液，使pH为5左右。离心后测得的油相含磷量以及水相pH值示于表4中。
表4．wdg菜籽油用尖孢镰孢菌磷脂酶脱胶的结果，含水量1．3％。
实验C(含水量0．3％)如以上实验A，不同的是，t=0分钟时，加入0．6g柠檬酸一水合物粉末，t=30分钟时，不加入NaOH溶液，使pH为5左右。离心后测得的油相含磷量以及水相pH值示于表5中。
表5．wdg菜籽油用尖孢镰孢菌磷脂酶脱胶的结果，含水量0．3％。
实验D(含水量0．3％)如以上实验C所述，不同的是，t=0分钟时，加入由0．5g柠檬酸一水合物和0．14g柠檬酸三钠二水合物粉末组成的混合物，使pH为5左右。离心后测得的油相含磷量以及水相pH值示于表6中。
表6．wdg菜籽油用尖孢镰孢菌磷脂酶脱胶的结果，含水量0．3％。
实施例3对粗菜籽油(压榨的和提取的混合物)的脱胶处理(II)实验均按以上实施例1所述的“酶促脱胶的一般方法”进行。
油粗菜籽油来自MILO Olomouk，Czechrep。批号C00745／B02042，含磷量263ppm。含水量0．17％w／w。
表7．实验E和F中的水含量；粗菜籽油
实验E(含水量5．4％)将0．6L(560g)粗菜籽油加入设备中并加热至40℃。在t=0分钟时，加入由0．6g柠檬酸一水合物溶于27g水中而成的溶液。在t=30分钟时，加入1．07ml(4．3毫摩尔)4M NaOH溶液，使pH为5左右。在t=35分钟时，加入1ml(0．75mg)尖孢镰孢菌磷脂酶的纯化溶液。离心后测得的油相含磷量以及水相pH值示于表8中。
表8．粗菜籽油用尖孢镰孢菌磷脂酶脱胶的结果，含水量5．4％。
实验F(含水量1．4％)如以上实验E，不同的是，t=0分钟时，加入由0．6g柠檬酸一水合物溶于5．0g水中而成的溶液，t=30分钟时，加入0．71ml(2．86毫摩尔)4MNaOH溶液，使pH为5左右。离心后测得的油相含磷量以及水相pH值示于表9中。
表9．粗菜籽油用尖孢镰孢菌磷脂酶脱胶的结果，含水量1．4％。
实施例4适用于本发明的油脱胶方法中的磷脂酶的鉴定试验磷脂酶活性试验磷脂酶活性(PHLU)是通过测量磷脂酰胆碱所释放的游离脂肪酸而测定的。加入4％ L-α-磷脂酰胆碱(得自Avanti，USA的植物磷脂酰胆碱)，4％Triton X-100，5mM CaCl2的50mM HEPES溶液(pH 7)，使50μl酶溶液在50mM HEPES溶液(pH 7)中稀释至适当浓度。样品于30℃温育10分钟，离心(在7000rpm下5分钟)前先在95℃终止反应5分钟。用Wako ChemicalsGmbH的NEFA C试剂盒测定游离脂肪酸；将25μl反应混合物加入250μl试剂A中并在37℃温育10分钟。然后加入500μl试剂B，再次使样品在37℃温育10分钟。用HP 8452A二极管阵列分光光度计测量550nm处的吸光度。样品均至少一式两份进行。底物和酶的盲试(预处理的酶样品(95℃ 10分钟)+底物)也包括在内。将油酸作脂肪酸标准物。1 PHLU等于能在这些条件下每分钟释放1μmol游离脂肪酸的酶量。
可供选择地，该试验可在37℃的20mM柠檬酸盐缓中液，pH 5(Ca2+依赖性)或20mM Britton-Robinson缓冲液中进行(pH分布／温度分布／稳定性)。
磷脂酶A1活性(PLA1)是用1-(硫-癸酰基)-2-癸酰基-1-硫代-锡-甘油基-3-胆碱磷酸(D3761分子探针)为底物而测量的。在200μl的比色杯中，向190μl底物(100μl D3761(2mg／ml，溶于乙醇中)+50μl 1％ Triton X-100+1．85ml 50mM HEPES，0．3mM DTNB，2mM CaCl2，pH7)中加入10μl酶，在HP8452A二极管阵列分光光度计上在室温下测量作为时间的函数的4l0nm处的吸光度。计算线性范围内的曲线斜率作为活性。PLA1等于能在这些条件下每分钟释放1μmol游离脂肪酸的酶量。
磷脂酶A2活性(PLA2)是用1-十六酰基-2-(1-芘癸酰基)-锡-甘油基-3-胆碱磷酸(H361分子探针)而测量的。向2ml比色杯中的2ml底物(50μl 1％Triton X-100+25μl 0．1％H361的甲醇溶液+10ml 50mM HEPES，pH 7)中在搅拌下加入10μl酶，用Perkin Elmer LS50装置测量作为时间的函数(以1秒的间隔)的376nm处的芘荧光发射量(在340nm处激发)。在Triton X-100／磷脂胶束中，调整磷脂的浓度使之具有受激子的结构(在480nm处发射)。经裂解，使含芘基团的2-位的脂肪酸释放至水相中，导致单体发射量增加。PLA2为等浓度下线性范围内的曲线斜率。
序列表&#60110&#62NOVO NORDISK A／S&#60120&#62一种酶促油脱胶方法&#60130&#625570-WO&#60140&#62&#60141&#62&#60160&#621&#60170&#62PatentIn 2．0版&#60210&#621&#60211&#62346&#60212&#62PRT&#60213&#62尖孢镰孢菌&#60400&#621Met Leu Leu Leu Pro Leu Leu Ser Ala Ile Thr Leu Ala Val Ala Ser1 5 10 15Pro Val Ala Leu Asp Asp Tyr Val Asn Ser Leu Glu Glu Arg Ala Val20 25 30Gly Val Thr Thr Thr Asp Phe Ser Asn Phe Lys Phe Tyr Ile Gln His35 40 45Gly Ala Ala Ala Tyr Cys Asn Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ser Lys Ile50 55 60Thr Cys Ser Asn Asn Gly Cys Pro Thr Val Gln Gly Asn Gly Ala Thr65 70 75 80Ile Val Thr Ser Phe Val Gly Ser Lys Thr Gly Ile Gly Gly Tyr Val85 90 95Ala Thr Asp Ser Ala Arg Lys Glu Ile Val Val Ser Phe Arg Gly Ser100 105 110Ile Asn Ile Arg Asn Trp Leu Thr Asn Leu Asp Phe Gly Gln Glu Asp115 120 125Cys Ser Leu Val Ser Gly Cys Gly Val His Ser Gly Phe Gln Arg Ala130 135 140Trp Asn Glu Ile Ser Ser Gln Ala Thr Ala Ala Val Ala Ser Ala Arg145 150 155 160Lys Ala Asn Pro Ser Phe Ash Val Ile Ser Thr Gly His Ser Leu Gly165 170 175Gly Ala Val Ala Val Leu Ala Ala Ala Asn Leu Arg Val Gly Gly Thr180 185 190Pro Val Asp Ile Tyr Thr Tyr Gly Ser Pro Arg Val Gly Asn Ala Gln195 200 205Leu Ser Ala Phe Val Ser Asn Gln Ala Gly Gly Glu Tyr Arg Val Thr210 215 220His Ala Asp Asp Pro Val Pro Arg Leu Pro Pro Leu Ile Phe Gly Tyr225 230 235 240Arg His Thr Thr Pro Glu Phe Trp Leu Ser Gly Gly Gly Gly Asp Lys245 250 255Val Asp Tyr Thr Ile Ser Asp Val Lys Val Cys Glu Gly Ala Ala Asn260 265 270Leu Gly Cys Asn Gly Gly Thr Leu Gly Leu Asp Ile Ala Ala His Leu275 280 285His Tyr Phe Gln Ala Thr Asp Ala Cys Asn Ala Gly Gly Phe Ser Trp290 295 300Arg Arg Tyr Arg Ser Ala Glu Ser Val Asp Lys Arg Ala Thr Met Thr305 310 315 320Asp Ala Glu Leu Glu Lys Lys Leu Asn Ser Tyr Val Gln Met Asp Lys325 330 335Glu Tyr Val Lys Asn Asn Gln Ala Arg Ser340 34权利要求
1．一种减少食用油中含磷成分的含量的方法，该食用油中含磷量为每百万份50-10，000份(ppm)，该方法包括使pH 1．5-8的上述油与磷脂酶A1(PLA1)、磷脂酶A2(PLA2)或磷脂酶B(PLB)的已乳化在油中的水溶液相接触，直至油中含磷量减至12ppm以下，然后从处理过的油中分离水相，其中上述方法的特征在于，上述乳化条件是利用占油重0．01-1．5％的水，优选占油重0．01-1．0％的水，最优选占油重0．01-0．5％的水而形成的。
2．权利要求1的方法，其中上述油是已事先除去粘胶且含磷量为50-250ppm的油。
3．权利要求1或2的方法，其中所述磷脂酶是得自微生物的磷脂酶，优选得自丝状真菌、酵母或细菌。
4．权利要求3的方法，其中所述丝状真菌属于镰孢属，如大刀镰孢、异孢镰孢、茄病镰孢的菌株，或尤其是尖孢镰孢的菌株。
5．权利要求3的方法，其中所述丝状真菌属于曲霉属，如泡盛曲霉、臭曲霉、日本曲霉、黑曲霉的菌株，或尤其是米曲霉的菌株。
6．前述权利要求中任一项的方法，其中所述磷脂酶是实质上不依赖于Ca2+浓度的磷脂酶，这种磷脂酶是作为相对磷脂酶活性在磷脂酶活性试验中在5mM EDTA和5mM Ca2+下测得的，该试验是在包含2％磷脂酰胆碱、2％Triton X-100、20mM柠檬酸盐，pH 5的缓冲液中；37℃温育10分钟，然后于95℃终止反应5分钟，测量磷脂酰胆碱中释放的游离脂肪酸；其中5mMEDTA／5mM Ca2+下的相对磷脂酶活性的比例大于0．25，更优选大于0．5。
7．前述权利要求中任一项的方法，其中所述磷脂酶是具有能够释放至少7μmol游离脂肪酸／分钟／mg酶；更优选至少15μmol游离脂肪酸／分钟／mg酶的磷脂酶活性的磷脂酶，该磷脂酶以其磷脂酶活性的形式在试验中测量，该试验是在包含2％磷脂酰胆碱、2％Triton X-100、20mM柠檬酸盐，pH 5的缓中液中；37℃温育10分钟，然后于95℃终止反应5分钟，测量磷脂酰胆碱中释放的游离脂肪酸。
8．前述权利要求中任一项的方法，其中所述磷脂酶是具有选自下列组的多肽序列的磷脂酶(a)具有示于SEQ ID NO 1中第31-346位的氨基酸序列的多肽；(b)具有示于SEQ ID NO 1中第31-303位的氨基酸序列的多肽；(c)与(a)或(b)中所定义的上述多肽具有至少70％同源性的多肽；以及(a)，(b)或(c)的片段。
全文摘要
一种酶促减少食用油中含磷成分的含量的改进方法。该方法包括使用磷脂酶和少量水。
文档编号C11B3/00GK1293706SQ99804005
公开日2001年5月2日 申请日期1999年4月7日 优先权日1998年4月8日
发明者金·克劳森 申请人:诺维信公司