联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法。
【背景技术】
[0002]植物油精炼一般包括脱胶、中和、脱色和脱臭等工序。两个主要的工艺可分为化学精炼和物理精炼。脱胶是毛油精炼的第一工序，用于从毛油除去磷脂和粘液物质。酶法有其独特的优点，如专一的反应，反应条件温和，和较少的环境污染，使其在具有更高的附加值或独特的营养和功能性方面的新产品开发方面更具有竞争力。与传统的水化脱胶工艺相比，酶法脱胶减少大量的酸和碱的使用，减少精炼过程中产生的废水，提高产品质量和降低操作成本。
[0003]传统的酶法脱胶是水解磷脂的脂肪酸链而生成溶血性磷脂，可以通过水化的方法除去。因此，磷脂酶脱胶是油脂脱胶的一种新方法，同传统的脱胶方法相比，酶法脱胶可大大节约化学物质的消耗量，几乎不产生废水，在环保、经济、质量等方面具有潜在的优势。磷脂酶A1适用于磷脂乳化液的改性和植物油的脱胶，磷脂酶A i特定水解磷脂生成Sn-1溶血磷脂。而磷脂酶C却能特异性水解磷酸基与甘油基之间的磷氧键，生成甘油二酯，甘油二酯溶于油中成为食用油的一部分。因此，采用磷脂酶C和磷脂酶A1脱胶，不仅能实现物理精炼，还可提高脱胶油的得率。
【发明内容】
[0004]本发明根据ΡΙΧ、ΡΙΛ的各自特点，开发出磷脂酶C-磷脂酶A1双酶脱胶技术，利用磷脂酶C脱胶提高油脂得率这一特点，先采用少量PLC进行常规酶法脱胶操作，而后利用磷脂酶AJA胶彻底速度快的特点，加入适量PLA i实施脱胶操作，考察PLC和PLA 加入时间，加入量之比以及之间的关系。为PLC和PLA1在毛油脱胶中的应用提供了条件。用固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶&来进行脱胶的方法通过以下步骤实现:一、磷脂酶C和磷脂酶&的固定化；二、固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1K合脱胶；三、磷含量测定；四、固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶&重复利用次数的研宄。
【具体实施方式】
[0005]【具体实施方式】一:一种固定化磷脂酶仏和固定化磷脂酶C联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法，其特征在于用固定化磷脂酶仏和固定化磷脂酶C大豆毛油脱胶的方法通过以下步骤实现:一、磷脂酶仏和磷脂酶C的固定化:首先称取一定量的海藻酸钠于40°C水浴保温溶解，同时称取一定量的壳聚糖于5%的醋酸溶液中，40°C水浴保温溶解；再向溶解的壳聚糖醋酸溶液中加入一定量的CaCl2溶液，混匀，称取一定量的磷脂酶A i，加入到10 mL海藻酸钠溶液中，搅拌均匀，静置一段时间，用灭菌后的注射器吸取混合液，以约5滴/s的速度注入壳聚糖醋酸溶液、CaCl2混合溶液中，以180 r/min转速搅拌，将其置于4°C环境固定化10 h，以同样的方法对磷脂酶C进行固定；二、固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1联合脱胶:取水化大豆毛油300 g，预热至75°C，加入45%柠檬酸0.6 mL混合搅拌维持30 min ；冷却至温度为30~40°C左右，加入4mol/L NaOH溶液和一定量的蒸馏水混合均匀，固定化磷脂酶C在固定化酶添加量0.14g/kg，初始PH值为7.0，反应温度为50°C，搅拌速度为250r/min，反应时间为1.5h。然后加入磷脂酶A1在固定化酶添加量0.12g/kg，初始PH值为6.0，反应温度为50°C，搅拌速度为250r/min，反应时间为1.0h。在此最佳条件下测得脱胶油中的磷含量为4.3mg/kg，DAG增加率为1.3%，节省时间约两小时同时确定了固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1连续用于对大豆毛油的脱胶，使用6个批次后，测定固定化酶相对活力，结果酶活力仍保持在80%左右。
[0006]【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一的不同点在于步骤二中固定化酶脱胶条件进行进一步确定，结果为磷脂酶A1反应后的反应体系的起始pH值为6.5?8.0，反应时间0.5-2.5h，反应温度为30?80°C，固定化酶添加量0.08-0.16g/kg，用优化结果进行固定化磷脂酶4对大豆毛油脱胶，在最优条件下测的磷含量为4.3mg/kg，同时确定了固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1连续用于对大豆毛油的脱胶，使用6个批次后，测定固定化酶相对活力，结果酶活力仍保持在80%左右，将固定化酶脱胶后的油脂得率与常规酶法脱胶或者是两种酶单独脱胶后油脂得率进行比较，得到固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1联合应用对大豆毛油脱胶后的油脂得率增长1.3倍。
【主权项】
1.一种固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A 合应用对大豆毛油进行脱胶的方法，其特征在于用固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1大豆毛油脱胶的方法通过以下步骤实现:一、磷脂酶C和磷脂酶仏的固定化:首先称取一定量的海藻酸钠于40°C水浴保温溶解，同时称取一定量的壳聚糖于5%的醋酸溶液中，40 °C水浴保温溶解；再向溶解的壳聚糖醋酸溶液中加入一定量的CaCl2溶液，混匀，称取一定量的磷脂酶A1，加入到10 mL海藻酸钠溶液中，搅拌均匀，静置一段时间，用灭菌后的注射器吸取混合液，以约5滴/s的速度注入壳聚糖醋酸溶液、CaCl2混合溶液中，以180 r/min转速搅拌，将其置于4°C环境固定化10 h，以同样的方法对磷脂酶C进行固定；二、固定化酶脱胶:取水化大豆毛油300 g，预热至75°C，加入45%柠檬酸0.6 mL混合搅拌维持30 min ;冷却至温度为30~40°C左右，加入4 mo I/L NaOH溶液和一定量的蒸馏水混合均匀，固定化磷脂酶C在固定化酶添加量0.14 g/kg，初始PH值为7.0，反应温度为50 °C，搅拌速度为250 r/min，反应时间为1.5 h，然后加入磷脂酶八1在固定化酶添加量0.12 g/kg，初始PH值为6.0，反应温度为50°C，搅拌速度为250 r/min，反应时间为1.0 h，在此最佳条件下测得脱胶油中的磷含量为4.3 mg/kg，DAG增加率为1.3%，节省时间约两小时，同时确定了固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶仏连续用于对大豆毛油的脱胶，使用6个批次后，测定固定化酶相对活力，结果酶活力仍保持在80%左右。
2.根据权利要求1所述的用固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶Ai联合应用对大豆毛油脱胶的方法，其特征在于步骤二中固定化酶脱胶条件进行进一步确定，结果为磷脂酶仏反应后的反应体系的起始pH值为6.5?8.0，反应时间0.5~2.5 h，反应温度为30?80 °C，固定化酶添加量0.08~0.16 g/kg，用优化结果进行固定化磷脂酶仏对大豆毛油脱胶，在最优条件下测的磷含量为4.3 mg/kg,同时确定了固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1连续用于对大豆毛油的脱胶，使用6个批次后，测定固定化酶相对活力，结果酶活力仍保持在80%左右，将固定化酶脱胶后的油脂得率与常规酶法脱胶或者是两种酶单独脱胶后油脂得率进行比较，得到固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1联合应用对大豆毛油脱胶后的油脂得率增长1.3倍。
【专利摘要】本发明是一种固定化磷脂酶C和固定化磷脂酶A1联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法。利用磷脂酶C脱胶提高油脂得率这一特点，先采用少量PLC进行常规酶法脱胶操作，而后利用磷脂酶A1脱胶彻底速度快的特点，加入适量PLA1实施脱胶操作，考察PLC和PLA1的加入时间，加入量之比以及之间的关系。最终确定的最佳条件为：固定化磷脂酶C在固定化酶添加量0.14g/kg，初始PH值为7.0，反应温度为50℃，搅拌速度为250r/min，反应时间为1.5h。然后加入磷脂酶A1在固定化酶添加量0.12g/kg，初始PH值为6.0，反应温度为50℃，搅拌速度为250r/min，反应时间为1.0h，在此最佳条件下测得脱胶油中的磷含量为4.3mg/kg，DAG增加率为1.3%，节省时间约两小时，为以后工业化生产脱胶工艺提供了依据。
【IPC分类】C11B3-00
【公开号】CN104593145
【申请号】CN201510028129
【发明人】于殿宇, 江连洲, 解桂东, 王立琦, 刘飞, 杜华楠, 许多现, 李俊
【申请人】东北农业大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月21日