一种提高发酵法生产磷脂酶c产量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于酶脱胶领域，具体说是一种提高发酵法生产磯脂酶C产量的方法。
【背景技术】
[000引磯脂酶（Phospholipase, PL)是生物体内存在的能水解甘油磯脂的酶，水解产物 为各种磯脂酸和氨基醇，如胆胺、胆碱、丝氨酸、己醇胺等。根据磯脂酶水解甘油磯脂的位 点（Sehmiel DH, Miller VL. Bacterial Phospholipases and Pathogenesis[J]. Microbes and Infection, 1999,1:1103-1112)不同，可将磯脂酶分为磯脂酶 A (phospholipase A, PLA)、磯脂酶 B(Phospholipase B，PLB)、磯脂酶 C(化os地olipase C，化C)和磯脂酶 D (Phospholipase D，PLD)。磯脂酶C作用于3位磯酸醋键，产物为甘油二醋、磯酸胆碱或磯 酸己醇胺等。
[0003] 磯脂酶可广泛应用于油脂精练、磯脂改性、饲料改良剂、食品工业和医药等方面。 脱胶是植物油精炼过程中的一个重要环节，对提高油的品质至关重要，脱胶主要是脱除磯 月旨，脱胶若不彻底，会影响油品的深加工和油品的稳定性，减低油品货架期。酶法脱胶可W 克服传统脱胶方法脱胶脱除率低，同时中性油损失高等的问题。而在酶法脱胶工艺中，现有 文献多报道磯脂酶PLA用于植物油脱胶。磯脂酶PLA (包括PLA1和PLA2)，脱胶后可产生极 性溶血磯脂和极性脂肪酸，PLA脱胶工艺仅仅损失油中总的磯脂分子，来减少精炼损耗。而 磯脂酶PLC酶通过选择性水解磯酸醋官能团与磯脂反应，生成甘油二醋（DAG)和磯脂酸基 团，甘油二醋不需要被除去，所W PLC脱胶工艺通过保留原始的磯脂分子而仅去除磯酸醋 官能团来减少精炼损耗，不存在PLA脱胶工艺中产生的能提高脱胶油酸价的极性脂肪酸的 问题，PLC用于脱胶优势明显好于PLA。
[0004] 现有磯脂酶C产品通过发酵法生产，因此，提高其所产磯脂酶C的产量是本领域的 技术人员所急需解决的一个问题。
【发明内容】
[0005] 本发明的第一方面在于，提供一种用于产磯脂酶C的菌株的发酵培养基。
[0006] 本发明提供的发酵培养基中包含猛离子、k精氨酸和橄揽油中的一种或多种。
[0007] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中包含猛离子、k精氨酸和橄 揽油中的两种或H种。
[0008] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中含有猛离子0. 59mM-17. 7mM， k精氨酸0. 〇5-2wt%，优选k精氨酸0. l-2wt%，和/或橄揽油0. 42-1. 5wt%，优选橄揽油 0. 42-1. 32wt%〇
[0009] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中含有猛离子2. 95mM-ll. 8mM, k 精氨酸 0. 3-1. 5wt%，和 / 或橄揽油 0. 66-1. 02wt〇/〇。
[0010] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中的猛离子来源于猛离子的无 机盐。
[0011] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中的猛离子来源于硫酸猛、氯 化猛、醋酸猛、碳酸猛、硝酸猛、磯酸猛中的一种或多种。
[0012] 在本发明的一个优选实施方案中，所述菌株为：枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)、地衣芽抱杆菌（Bacillus licheniformis)、短小芽抱杆菌（Bacillus pumilus)、莫哈韦芽抱杆菌（Bacillus mojavensis)、萎缩芽抱杆菌（Bacillus atrophaeus)或简单芽抱杆菌（Bacillus simplex);在本发明的一个优选实施方案中，所述 菌株为；枯草芽抱杆菌CGMCC No. 7506、枯草芽抱杆菌GIM1. 135、枯草芽抱杆菌GIM1. 286、 枯草芽抱杆菌GIM1. 129、地衣芽抱杆菌GIM1. 182、地衣芽抱杆菌GIM1. 362、地衣芽抱杆菌 CGMCC1. 0265、地衣芽抱杆菌CGMCC No. 7878、地衣芽抱杆菌CGMCC1. 0521、地衣芽抱杆菌 CGMCC1. 0813 ;短小芽抱杆菌CGMCC No. 7879、莫哈韦芽抱杆菌CGMCC No. 4961、萎缩芽抱杆 菌 CGMCC No. 7881 或简单芽抱杆菌 CGMCC No. 7880。
[0013] 本发明的第二方面在于，提供一种提高菌株发酵产磯脂酶c产量的方法。
[0014] 本发明提供的提高菌株发酵产磯脂酶C产量的方法为，在所述菌株的发酵培养基 中加入猛离子精氨酸和橄揽油中的一种或多种。
[0015] 在本发明的一个优选实施方案中，在所述菌株的发酵培养基中加入猛离子、心精 氨酸和橄揽油中的两种或H种。
[0016] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中含有猛离子0. 59mM-17. 7mM， k精氨酸0. 〇5-2wt%，优选k精氨酸0. l-2wt%，和/或橄揽油0. 42-1. 5wt%，优选橄揽油 0. 42-1. 32wt%〇
[0017] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中含有猛离子2. 95mM-ll. 8mM, k 精氨酸 0. 3-1. 5wt%，和 / 或橄揽油 0. 66-1. 02wt〇/〇。
[0018] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中的猛离子来源于猛离子的无 机盐。
[0019] 在本发明的一个优选实施方案中，所述发酵培养基中的猛离子来源于硫酸猛、氯 化猛、醋酸猛、碳酸猛、硝酸猛、磯酸猛中的一种或多种。
[0020] 在本发明的一个优选实施方案中，所述菌株为：枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)、地衣芽抱杆菌（Bacillus licheniformis)、短小芽抱杆菌（Bacillus pumilus)、莫哈韦芽抱杆菌（Bacillus mojavensis)、萎缩芽抱杆菌（Bacillus atrophaeus)或简单芽抱杆菌（Bacillus simplex);在本发明的一个优选实施方案中，所述 菌株为；枯草芽抱杆菌CGMCC No. 7506、枯草芽抱杆菌GIM1. 135、枯草芽抱杆菌GIM1. 286、 枯草芽抱杆菌GIM1. 129、地衣芽抱杆菌GIM1. 182、地衣芽抱杆菌GIM1. 362、地衣芽抱杆菌 CGMCC1. 0265、地衣芽抱杆菌CGMCC No. 7878、地衣芽抱杆菌CGMCC1. 0521、地衣芽抱杆菌 CGMCC1. 0813 ;短小芽抱杆菌CGMCC No. 7879、莫哈韦芽抱杆菌CGMCC No. 4961、萎缩芽抱杆 菌 CGMCC No. 7881 或简单芽抱杆菌 CGMCC No. 7880。
[0021] 本发明的第H个方面，提供一种提高菌株发酵产磯脂酶C产量的方法，其为使用 第一方面的培养基发酵产磯脂酶C的菌株。
[0022] 在本发明的一个优选实施方案中，所述菌株为：枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)、地衣芽抱杆菌（Bacillus licheniformis)、短小芽抱杆菌（Bacillus pumilus)、莫哈韦芽抱杆菌（Bacillus mojavensis)、萎缩芽抱杆菌（Bacillus atrophaeus)或简单芽抱杆菌（Bacillus simplex);在本发明的一个优选实施方案中，所述 菌株为；枯草芽抱杆菌CGMCC No. 7506、枯草芽抱杆菌GIM1. 135、枯草芽抱杆菌GIM1. 286、 枯草芽抱杆菌GIM1. 129、地衣芽抱杆菌GIM1. 182、地衣芽抱杆菌GIM1. 362、地衣芽抱杆菌 CGMCC1. 0265、地衣芽抱杆菌CGMCC No. 7878、地衣芽抱杆菌CGMCC1. 0521、地衣芽抱杆菌 CGMCC1.0813 ;短小芽抱杆菌CGMCC No. 7879、莫哈韦芽抱杆菌CGMCC No. 4961、萎缩芽抱杆 菌 CGMCC No. 7881 或简单芽抱杆菌 CGMCC No. 7880。
[002引本发明的菌株WB畑01280已于2013年4月22日保藏在"中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中也（CGMCC)"(北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生 物研究所，邮编100101)，保藏号是CGMCC No. 7506,分类命名为；枯草芽抱杆菌Bacillus subtilis。
[0024] 本发明的菌株WBRD00240已于2013年7月4日保藏在"中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中也（CGMCC)"(北京市朝阳区北辰西路1号