油脱胶方法

专利名称：油脱胶方法
油脱胶方法相关申请本申请要求提交于2009年10月16日的美国专利申请No. 61/252，638的优先权。 上述参考文献在此全文引入作为参考。对经由EFS-WEB提交的序列表的参照本申请经由MPEP § 1730 II. B. 2. (a) (A)授权并列出的USPTO EFS-WEB服务器电子提交，该电子申请包括电子提交的序列(SEQ ID)表；该序列表在此全文引入作为参考。 该序列表以下面的电子提交的.txt文件识别
权利要求
1.一种水合食用油中的非水化磷脂的方法，包括i-a)混合水性酸与食用油，得到pH小于约4的酸性混合物；和i-b)混合碱与所述酸性混合物，得到pH约6-9的反应混合物，其中步骤i-a)和/或i-b)中的混合产生包含至少约60体积％的液滴尺寸为约15 μ m 约45 μ m的水相的乳液。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述乳液包含至少约60、70、80、90、93、95、96、97、98或99体积％的液滴尺寸为约20 μ m 约45 μ m的水相。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述液滴尺寸为约15、18、20、22、25、27、四、32、35或40 μ m0
4.如权利要求1所述的方法，其中所述乳液包含至少约90体积％的液滴尺寸为约15-40 μ m的水相。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述食用油是粗制油或水脱胶油。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述食用油包括NeochlorisοIeoabundans油、二形棚藻(Scenedesmus dimorphus)油、目艮虫藻(Euglena gracilis)油、三角揭指藻(Phaeodactylum tricornutum)油、颗石藻(Pleurochrysis carterae)油、zj、定 Ii更金藻(Prymnesium parvum)油、扁藻(Tetraselmis chui)油、四 y 藻(Tetraselmissuecica) ^> § ^ ^ ^ ^ (Isochrysis galbana) ^> it it iS (Nannochloropsissalina)油、(Botryococcus braunii)油、才土氏· (Dunaliellatertiolecta)油、微球藻(Nannochloris)油、螺旋藻(Spirulina)油、绿藻(Chlorophycease)油、硅藻(Bacilliarophy)油、巴西莓油、杏仁油、巴巴苏仁油、黑加仑籽油、琉璃苣籽油、芥花油、腰果油、蓖麻油、椰子油、香菜油、玉米油、棉籽油、海甘蓝油、亚麻仁油、葡萄籽油、榛子油、其他坚果油、大麻籽油、麻风树油、荷荷芭油、亚麻籽油、夏威夷核果油、芒果仁油、绣线菊油、芥末油、牛蹄油、橄榄油、棕榈油、棕榈仁油、棕榈油精、花生油、山核桃油、松仁油、开心果油、罂粟籽油、菜籽油、米糠油、红花油、油茶油、芝麻油、乳木果油、大豆油、葵花籽油、妥尔油、tsiAaki油、核桃油、经由遗传修饰的微生物(GMO)或传统的“育种”而具有改变的脂肪酸组成的“天然”油种类如高油酸、低亚麻酸或低饱和油(高油酸芥花油、低亚麻酸大豆油或高硬脂酸葵花籽油)或其共混物。
7.如权利要求1所述的方法，其中使用高剪切混合器进行步骤i-a)和/或i-b)中的混合，所述高剪切混合器的尖端速度至少为约1400cm/s、1600cm/s、I800cm/S、2000cm/S、2100cm/s、2300cm/s、2500cm/s、3000cm/s 或 3500cm/so
8.如权利要求1所述的方法，其中使用尖端速度为约2300cm/s的高剪切混合器进行步骤i-a)和/或i-b)中的混合。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述酸选自磷酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸和其‘昆合物。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述酉堯是柠檬酸。
11.如权利要求1所述的方法，其中步骤L_a)中的酸性混合物的pH为约1 约4。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述酉I的混合持续约1分钟至约5小时。
13.如权利要求1所述的方法，其中步骤L_b)中的反应混合物的pH为约6 约9。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、硅酸钠、碳酸钠、碳酸钙和其组合。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述碱的混合持续约1分钟至约5小时。
16.如权利要求1所述的方法，还包括水或酶脱胶而得到脱胶油的步骤。
17.如权利要求1所述的方法，还包括酶脱胶的步骤。
18.如权利要求16所述的方法，其中所述酶选自磷脂酶A、磷脂酶C、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C或其组合。
19.如权利要求16所述的方法，其中所述酶选自磷脂酶C、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C或其组合。
20.如权利要求16所述的方法，其中所述酶选自磷脂酶C、包含SEQIDNO :8的酶或其组合。
21.如权利要求16所述的方法，其中所述酶包含SEQID NO :8。
22.如权利要求16所述的方法，其中所述酶是具有SEQID NO :8的多肽。
23.如权利要求16所述的方法，其中所述脱胶油含有小于约30ppm的磷、小于约20ppm的磷、小于约15ppm的磷、小于约IOppm的磷、小于约7ppm的磷、小于约5ppm的磷或小于约3ppm的磷。
24.一种水合食用油中的非水化磷脂的方法，包括i-a)混合水性酸与食用油，得到pH小于约4的酸性混合物；和i-b)混合碱与所述酸性混合物，得到pH约6-9的反应混合物，其中步骤i-a)和/或i-b)中的混合产生包含平均液滴尺寸为约15-35 μ m的水相的乳液。
25.如权利要求M所述的方法，其中所述平均液滴尺寸为约15、18、20、22、25、27、四或35 μ m0
26.如权利要求25所述的方法，其中所述平均液滴尺寸为约15、18、20、22或25口!11。
27.如权利要求沈所述的方法，其中所述平均液滴尺寸为约20μ m。
28.一种获得磷脂的方法，包括i-a)混合水性酸与食用油，得到pH小于约4的酸性混合物；i-b)混合碱与所述酸性混合物，得到pH约6-9的反应混合物，其中步骤i-a)和/或i-b)中的混合产生包含至少约60体积％的液滴尺寸为约15 μ m 约45 μ m的水相的乳液；i-c)混合磷脂酶；和i-d)分离磷脂。
29.如权利要求观所述的方法，其中所述磷脂酶是磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C。
30.如权利要求观所述的方法，其中所述酶是具有SEQID NO :8的多肽。
31.如权利要求观所述的方法，其中所述磷脂包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PQ、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPQ、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血磷脂酸(LPA)、胆碱(C)、乙醇胺(E)、丝氨酸⑶，肌醇(I)或其组合。
32.如权利要求四所述的方法，其中所述磷脂是磷脂酰肌醇。
33.一种获得磷脂的方法，包括i-a)混合水性酸与食用油，得到pH小于约4的酸性混合物；i-b)混合碱与所述酸性混合物，得到pH约6-9的反应混合物，其中步骤i-a)和/或i-b)中的混合产生包含平均液滴尺寸为约15-35 μ m的水相的乳液；i-c)混合磷脂酶；和i-d)分离磷脂。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述磷脂酶是磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C。
35.如权利要求33所述的方法，其中所述酶是具有SEQID NO :8的多肽。
36.如权利要求33所述的方法，其中所述磷脂包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PQ、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPQ、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血磷脂酸(LPA)、胆碱(C)、乙醇胺(E)、丝氨酸(S)、肌醇(I)或其组合。
37.如权利要求34所述的方法，其中所述磷脂是磷脂酰肌醇。
38.一种获得肌醇的方法，包括i-a)混合水性酸与食用油，得到pH小于约4的酸性混合物；i-b)混合碱与所述酸性混合物，得到pH约6-9的反应混合物，其中步骤i-a)和/或i-b)中的混合产生包含至少约60体积％的液滴尺寸为约15 μ m 约45 μ m的水相的乳液；i-c)混合磷脂酶；和i-d)分离肌醇。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述磷脂酶是磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C。
40.如权利要求38所述的方法，其中所述酶是具有SEQID NO :8的多肽。
41.如权利要求18、28、33或38中任一项所述的方法，其中所述磷脂酶由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(a)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，且(i)相对于 SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,·98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、·28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性，以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为blastall-p blastp-d" nr pataa" -F F，且所有其他选项均设置为缺省；( )编码多肽，所述多肽具有SEQ ID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、·25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(iii)在严格条件下与包含SEQ ID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、·25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC中洗涤约15分钟；(iv)包含序列SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ν)相对于 SEQ ID NO 7,SEQ ID NO :9 或 SEQ ID NO 10 具有至少约 75%、76%、77%、·78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91·93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(b)(a)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(c)(a)或(b)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(d)(c)的核酸，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(e)(a) (d)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(f)(e)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列，或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(g)(d)、(e)或⑴的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列，所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(h)(d)、(e)或(f)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(i)(a) (h)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(j) (a) (h)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(k)与(a) (j)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列。
42.如权利要求18、28、33或38中任一项所述的方法，其中所述磷脂酶(a)包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)相对于SEQ ID NO :6 具有至少 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、·19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性；(ii)相对于SEQ ID NO :8 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(b)(a)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列；(c)(a)或(b)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分；(d)(c)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(e)(d)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(f)(a) (e)中任一个的多肽，其中PI-PLC催化反应，所述反应包括1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油；(g)(a) (f)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(h)(a) (f)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(i)(a) (h)中任一个的多肽，其中(i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii)(i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化； (iii)⑴或(ii)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或(iv) (iii)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(j) (a) (i)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在所述组合物中；或(k) (j)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ ID N0:2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
43. 一种水解、破裂或分裂含有磷脂的组合物的方法，包括(A)(a)提供磷脂酶多肽；(b)提供含有磷脂的组合物；和(c)在所述磷脂酶水解、破裂或分裂所述含有磷脂的组合物的条件下使步骤(a)的多肽与步骤(b)的组合物接触；(B)(A)的方法，其中所述组合物包括含有磷脂的脂质双层或膜；或(C)(A)或(B)中任一个的方法，其中所述组合物包含植物细胞、细菌细胞、酵母细胞、 昆虫细胞或动物细胞，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C (PI-PLC)酶活性的多肽，且(ia)相对于SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性，以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2.2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" _F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、.11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100% 的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸、或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列， 或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15 中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列；(Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分；(Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中所述PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在所述组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
44. 一种液化或除去含有磷脂的组合物的方法，包括(a)提供磷脂酶多肽；(b)提供含有磷脂的组合物；和(c)在所述磷脂酶除去或液化所述含有磷脂的组合物的条件下使步骤(a)的多肽与步骤(b)的组合物接触，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，和(ia)相对于SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性， 以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" -F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、.11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100% 的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列，或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列， 或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15 中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列；(Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分；(Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中所述PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在所述组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ ID N0:2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
45. 一种将非水化磷脂转化成水化形式的方法，包括 (Aa) (Aaa)提供含有磷脂酶多肽的组合物； (Aab)提供含有非水化磷脂的组合物；和(Aac)在所述多肽将所述非水化磷脂转化成水化形式的条件下使步骤(Aaa)的多肽与步骤(Aab)的组合物接触，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C (PI-PLC)酶活性的多肽，且(ia)相对于SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性， 以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为blastall-p blastp-d" nr pataa" -F F，所有其他选项均设置为缺省；(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列，或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列， 或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15 中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分；(Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中所述PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iV-1) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在所述组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
46. 一种纯化植物留醇或三萜烯的方法，包括 Al) (AIa)提供含有磷脂酶多肽的组合物； (AIb)提供含有植物留醇或三萜烯的组合物；和(AIc)在所述多肽能够催化所述组合物中的磷脂水解的条件下使步骤(AIa)的多肽与步骤(Art)的组合物接触；(Bi) (Al)的方法，其中所述植物留醇或三萜烯包括植物甾醇； (Cl) (Bi)的方法，其中所述植物留醇衍生于植物油；(DI) (EI)的方法，其中所述植物油包括椰子油、芥花油、可可油、玉米油、棉籽油、亚麻籽油、橄榄油、棕榈油、花生油、衍生于米糠的油、红花油、芝麻油、大豆油或葵花籽油；(EI) (Al) (DI)中任一个的方法，还包括使用非极性溶剂定量提取游离植物留醇和植物留醇基脂肪酸酯；或(FI) (EI)的方法，其中所述植物留醇或三萜烯包括谷留醇、菜油留醇、豆留醇、豆甾烷醇、β-谷甾烷醇、谷甾烷醇、链甾醇、海绵甾醇、多孔甾醇、穿贝海绵甾醇或菜籽甾醇， 其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C (PI-PLC)酶活性的多肽，且 (ia)相对于 SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性，以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" _F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO 5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸，其还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸、或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列，或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15 中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、`16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中所述PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在所述组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ ID N0:2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
47. 一种精制油或脂肪的方法，包括 (Al) (Ala)提供含有磷脂酶多肽的组合物； (Alb)提供包含含有磷脂的油或脂肪的组合物；和(Alc)在所述多肽能够催化所述组合物中的磷脂水解的条件下使步骤(Ala)的多肽与步骤(Alb)的组合物接触；(Bi) (Al)的方法，其中所述多肽处于被加到所述组合物中的水溶液中； (Cl) (Bi)的方法，其中水量为约0.5 5% ； (Dl) (Al) (Cl)中任一个的方法，其中处理时间小于约2小时； (El) (Al) (Cl)中任一个的方法，其中处理时间小于约60分钟； (Fl) (Al) (Cl)中任一个的方法，其中处理时间小于约30分钟、小于约15分钟或小于约5分钟；(Gl) (Al) (Fl)中任一个的方法，其中所述水解条件包括约25°C 70°C的温度；(Hl) (Al) (Gl)中任一个的方法，其中所述水解条件包括使用碱；(Il) (Al) (Hl)中任一个的方法，其中所述水解条件包括约pH 3 pH 10的pH ；(Jl) (Al) (Il)中任一个的方法，其中所述水解条件包括加入乳化剂和/或在步骤 (Al) (Alc)的接触之后的混合；(Kl) (Al) (Jl)中任一个的方法，包括加入破乳剂和/或加热或冷却，以促进水相分1 ；(Li) (Al) (Kl)中任一个的方法，包括在接触步骤之前脱胶以通过离心收集卵磷脂， 然后加入PLC、PLC和/或PLA以除去非水化磷脂；(Ml) (Al) (Li)中任一个的方法，包括对于食用油的粗制油水脱胶至小于IOppm的磷，然后对于生物柴油物理精制到小于约50ppm的磷；或(Ni) (Al) (Ml)中任一个的方法，包括加入酸以促进非水化磷脂的水合，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，且(ia)相对于SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性，以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" -F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 个或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100% 的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列、或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列， 或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15 中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中所述PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在所述组合物中；或(Ik) (Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
48. 一种使油或脂肪脱胶的方法，包括 (al)提供含有磷脂酶多肽的组合物； (bl)提供含有包含磷脂的脂肪或油的组合物；和(Cl)在所述多肽能够催化所述组合物中的磷脂水解的条件下使步骤(al)的多肽与步骤(bl)的组合物接触，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，和(ia)相对于SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查确定序列同一性， 以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" _F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列， 或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中PI-PLC催化反应，所述反应包括1-磷脂酰-ID-Hiy0-肌醇4，5- 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油；(Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在该组合物中；或(Ik) (Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
49. 一种处理油或脂肪的方法，包括 (al)提供含有磷脂酶多肽的组合物； (bl)提供含有油或脂肪的组合物；和(cl)在所述多肽能够催化所述油或脂肪中的磷脂水解的条件下使步骤(al)的多肽与步骤(bl)的组合物接触，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，和(ia)相对于SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性， 以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" _F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID N0:7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10，或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列， 或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15 中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物或包含在该组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ ID N0:2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
50. 一种物理精制含有磷脂的组合物的方法，包括 (A-I) (A-Ia)提供含有磷脂酶多肽的组合物； (A-Ib)提供含有磷脂的组合物；和(A-Ic)在物理精制之前、期间或之后使步骤(A-Ia)的多肽与步骤(A-Ib)的组合物接触；(B-I) (A-I)的方法，其中所述多肽在物理精制之前加入，所述含有磷脂的组合物包含植物，并且所述多肽在所述植物中被转基因表达，所述多肽在种子或其他植物部分的破碎过程中加入，或者，所述多肽在破碎之后或在精制之前加入； (C-I) (A-I)的方法，其中所述多肽在物理精制期间加入；(D-I) (A-I)的方法，其中所述多肽在物理精制之后加入在分离之前在剧烈混合器或保持混合器中；在加热步骤之后；在离心机中；在皂料中；在洗涤水中；或在漂白或除臭步骤期间；或(E-I) (A-I) (D-I)中任一个的方法，还包括加入磷脂酶A(PLA)、磷脂酶B(PLB)、磷脂酶C (PLC)、磷脂酶D (PLD)、或磷酸酶，或其任意组合，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，和(ia)相对于SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性， 以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2.2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" -F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示的氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示的氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列，或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列， 或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在该组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
51. 一种对含有磷脂的组合物进行碱精制的方法，包括 (Al) (Ala)提供含有具有磷脂酶活性的多肽的组合物； (Alb)提供含有磷脂的组合物；和(Alc)在碱精制之前、期间或之后使步骤(Ala)的多肽与步骤(Alb)的组合物接触； (Bi) (Al)的方法，其中所述多肽在加入酸或碱之前加入；(Cl) (Al) (Bi)中任一个的方法，其中所述多肽在碱精制期间加入，并且取决于磷水平和游离脂肪酸水平加入不同水平的酸和碱；或(Dl) (Al) (Bi)中任一个的方法，其中所述多肽在碱精制之后加入在分离之前在剧烈混合器或保持混合器中；在加热步骤之后；在离心机中；在皂料中；在洗涤水中；或在漂白或除臭步骤期间；(El) (Al) (Dl)中任一个的方法，其中碱精制条件通过加入浓碱溶液产生，或其中碱精制条件包括使用比11 %的工业标准更浓的浓碱溶液，或其中碱精制条件包括使用浓缩了约12% 50%的浓碱溶液；(Fl) (Al) (El)中任一个的方法，其中所述含有磷脂的组合物包括植物； (Gl) (Al) (Fl)中任一个的方法，其中所述多肽在所述植物中被转基因地表达； (Hl) (Al) (Gl)中任一个的方法，其中所述多肽种子或其他植物部分的破碎期间加入，或者，所述多肽在破碎之后或在精制之前加入；或(Il) (Al) (Hl)中任一个的方法，包括如

图10所示的方法；或如图10所示的方法， 其中加入足量酸以促进钙和镁金属含量的降低，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，和 (ia)相对于 SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、.16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性，以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" _F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、1617、.18、.19、.20、.21、..22、..2324、.25、.26、.27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列，或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列，或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在该组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
52. 一种从脂质A使2’或3’脂肪酸链脱去酰基的方法，包括 使脂质A与磷脂酶多肽接触，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，和 (ia)相对于 SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性，以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" _F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100% 的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列，或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列，或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在该组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
53. 一种通过减少的油截留来减少胶质并提高中性油(甘油三酯)量的方法，包括 (Al) (Ala)提供含有磷脂酶多肽的组合物； (Alb)提供含有具有磷脂的脂肪或油的组合物；和(Alc)在所述多肽能够催化所述组合物中的磷脂水解的条件下使步骤(Ala)的多肽与步骤(Alb)的组合物接触足以减少胶质并提高中性油的时间；(Bi) (Al)的蛋白制剂，其中所述蛋白制剂包括含有非水液体组合物的制剂、流延固体、 粉末、冻干粉末、颗粒形式、微粒形式、压片、小球、丸剂、凝胶形式、水凝胶、糊剂、气雾剂、喷雾剂、洗液、浆剂、水/油乳剂、乳膏、胶囊、囊泡或胶束的悬液；或，(Cl) (Al)或(Bi)的方法，包括对所述组合物使用高剪切混合，然后与本发明的具有磷脂酶活性的至少一种多肽无剪切混合或低剪切混合，从而允许磷脂底物与磷脂酶充分接触，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成(I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶活性的多肽，和(ia)相对于 SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、.83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14 和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性， 以及任选地，序列比对算法是BLAST 2.2.2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" _F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、.12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30 种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变(突变)的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、.13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 9 或 SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列，或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列， 或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在该组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。
54.一种通过权利要求47、48、49或53中任一项所述的方法生产的油或脂肪。
55.一种制造生物柴油的方法，包括(A) (a)提供磷脂酶多肽，其中所述磷脂酶多肽由分离的、合成的或重组的核酸(多核苷酸)编码，所述核酸(多核苷酸)包含以下的核酸序列或由以下的核酸序列组成 (I)编码具有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C (PI-PLC)酶活性的多肽，且 (ia)相对于 SEQ ID NO :5 具有至少约 75%、76%、77%、78%、79%、80%、81 %、82%、 83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%, 98^^99%或更多、或100%的序列同一性，并且编码多肽，所述多肽具有表12、表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸取代或突变、或其任意组合，以及任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性，以及任选地，序列比对算法是BLAST 2. 2. 2版算法，其中过滤设置被设定为 blastall-p blastp-d" nr pataa" _F F，所有其他选项均设置为缺省;(ib)编码多肽，所述多肽具有SEQID NO :6所示的氨基酸序列，并且具有表12、表13、 表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合；或(ic)在严格条件下与包含SEQID NO :5并编码多肽的核酸杂交，所述多肽具有表12、 表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或 30 种或更多、或全部氨基酸改变(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中所述严格条件包括洗涤步骤，所述洗涤步骤包括在约65°C的温度下在0. 2X SSC 中洗涤约15分钟；(id)包含序列SEQID NO :7、SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10或由其组成的核酸；或(ie)相对于SEQID NO :7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :10具有至少约75%、76%、77%、 78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多、或 100%的序列同一性；(II)(I)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然信号序列或前蛋白氨基酸序列的多肽；(III)(I)或(II)的核酸序列，其编码具有PI-PLC酶活性但缺少天然启动子序列的多肽；(IV)(III)的核酸序列，还包括异源启动子序列或其他转录调控序列；(V)(I) (IV)中任一个的核酸序列，还包括编码异源氨基酸序列的核酸，或还包括异源核苷酸序列；(VI)(V)的核酸，其中所述编码异源氨基酸序列的核酸包含编码异源(前导)信号序列、或标签或表位的序列，或由其组成，或所述异源核苷酸序列包括异源启动子序列；(VII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源核苷酸序列编码异源(前导)信号序列， 所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(Ε 或内膜、或者靶向植物内质网(Ε 或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成，或所述异源序列编码限制位点；(VIII)(IV)、(V)或(VI)的核酸，其中所述异源启动子序列包含组成型或诱导型启动子、或细胞类型特异性启动子、或植物特异性启动子、或细菌特异性启动子，或由其组成；(IX)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是热稳定的；(X)(I) (VIII)中任一个的核酸，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(XI)与(I) (X)中任一个的核苷酸序列完全互补的核酸序列，或所述磷脂酶多肽包含氨基酸序列(Ia) (Iai)相对于 SEQ ID NO :6 具有至少 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性，并且具有表12、表13、表14和/或表15中所示氨基酸改变或取代(突变)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30种或更多、或全部氨基酸改变或取代(突变)、或等同氨基酸改变或取代(突变)、或其任意组合，其中任选地，用序列比对算法或通过目视检查来分析确定序列同一性； (Iaii)相对于 SEQ ID NO :8 具有至少约 75 %、76 %、77 %、78 %、79 %、80 %、81 %、 82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%, 97%、98%、99%或更多、或100%的序列同一性；(Ib) (Ia)的多肽，但缺少天然信号序列和/或前蛋白序列； (Ic) (Ia)或(Ib)的多肽，还包括异源氨基酸序列或异源部分； (Id) (Ic)的多肽，其中所述异源氨基酸序列或异源部分包含异源(前导)信号序列、标签、可检测标记或表位，或由其组成；(Ie) (Id)的多肽，其中所述异源(前导)信号序列包含靶向内质网(ER)或内膜、或者靶向植物内质网(ER)或内膜系统的N-端和/或C-端延伸，或由其组成；(If) (Ia) (Ie)中任一个的多肽，其中PI-PLC催化反应，所述反应包括 1-磷脂酰-lD-myo-肌醇4，5_ 二磷酸(也称作PIP2，磷脂酰肌醇二磷酸)+ H2O η lD-myo-肌醇1，4，5-三磷酸(也称作IP3，肌醇三磷酸)+ 二酰基甘油； (Ig) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是热稳定的； (Ih) (Ia) (If)的多肽，其中所述PI-PLC活性是耐热的；(Ii) (Ia) (Ih)中任一个的多肽，其中(i_i)所述多肽被糖基化，或所述多肽包括至少一个糖基化位点，(ii-i) (i-i)的多肽，其中所述糖基化是N-连接的糖基化或0-连接的糖基化；(iii-i) (i-i)或(ii-i)的多肽，其中所述多肽在酵母细胞中表达后被糖基化；或 (iv-i) (iii-i)的多肽，其中所述酵母细胞是毕赤酵母或裂殖酵母；(Ij) (Ia) (Ii)中任一个的多肽，还包含含有至少一个第二种酶或至少一个第二种磷脂酶的组合物，或包含在该组合物中；或(Ik)(Ij)的多肽，其中所述至少一个第二种磷脂酶包括具有SEQ IDNO :2和/或SEQ ID NO 4中所示的序列的多肽，或表8和9中所述的至少一个它们的变体PLC酶。(b)提供含有脂质或烷基酯的组合物；(c)使(a)的磷脂酶多肽与(b)的组合物接触；(B)(A)的方法，其中所述含有脂质或烷基酯的组合物是油和/或脂肪，或包含油和/或脂肪；或(C)(A)或(B)的方法，其中所述含有脂质或烷基酯的组合物是或包含藻类、植物油、直链植物油、原始植物油、废植物油、动物脂肪、油脂、牛油、猪油或黄油脂。
56. 一种通过如权利要求55所述的方法制备的生物柴油。
全文摘要
在可选实施方案中，本发明提供磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)酶、编码它的核酸、与其特异性结合的抗体以及制备和使用它们的方法。还提供包括使用这些磷脂酶的工业方法和产品。在某些实施方案中，本文提供的是使脂质基质内的非水化磷脂(NHP)水合的方法。该方法能够使NHP迁移到油-水界面，从而允许NHP反应和/或从脂质除去。在某些实施方案中，提供的是从植物油中除去NHP、水化磷脂和卵磷脂以制造可用于食物生产和/或非食物应用的脱胶油或脂肪产品的方法。在某些实施方案中，本文提供的是使NHP水合、然后酶处理并除去各种磷脂和卵磷脂的方法。本文提供的方法可以针对粗制或水脱胶油实施。
文档编号C12P7/64GK102575243SQ201080046680
公开日2012年7月11日 申请日期2010年10月8日 优先权日2009年10月16日
发明者C·L·G·戴顿, 乔纳森·里昂, 弗拉维奥·达席尔瓦·加里亚多, 纳尔逊·巴顿, 艾琳·奥多诺休, 蒂姆·希契曼, 马克·A·沃尔 申请人:邦奇油类公司