本发明属于食用菌菌种生产领域，涉及一种秸杆发酵基质、羊肚菌菌种培养基质及其制法，具体涉及利用发酵的农作物秸秆为主要原料制作秸秆发酵基质，然后进一步制备羊肚菌菌种的方法。
背景技术：
羊肚菌(Morchella spp.)又称羊肚菜，隶属于子囊菌纲盘菌目羊肚菌科羊肚菌属，是一种名贵珍稀食用真菌。羊肚菌营养价值高，富含人体必需氨基酸和菌多糖，价格昂贵。采集野生羊肚菌已无法满足羊肚菌消费市场的需求。
羊肚菌的人工驯化栽培曾经是世界性难题。近年来，羊肚菌人工栽培技术取得突破，多采用在农田中栽培的模式。羊肚菌菌种的生产及播种是栽培的第一步。现有的羊肚菌菌种制作与生产方法发明专利有：
公开号CN1793315A的专利“尖顶羊肚菌菌株的筛选及菌种制备”和公开号CN1793316A的专利“黑脉羊肚菌菌株的筛选及菌种制备”中，提供了一种羊肚菌菌种固体培养基配方：木屑79-90％，麸皮5-20％，磷肥1％，石膏1％，羊肚菌生长地腐殖土3％，含水量60％，pH自然。拌匀后，装入750ml的大口瓶中，压紧封口后在120℃灭菌60min。
公开号CN103141302A的专利“梯棱羊肚菌栽培种的制作方法”中，提供了一种羊肚菌栽培种配方：麦粒70-90％，土壤8-28％，石灰1-1.5％，过磷酸钙0.5-1％，含水量60-65％。充分搅拌均匀后，装入玻璃瓶中，121-126℃下灭菌2小时，或者100℃灭菌15-20小时。
公开号CN104686196A的专利“一种通过阴干子实体保存和分离羊肚菌菌种的方法”中，提供了一种用于羊肚菌菌种的麦粒培养基配方：选取无病虫害、饱满、较新鲜、去壳带皮的小麦麦粒，清水浸泡24小时，入锅加清水煮至麦粒无白心，无破皮，捞出沥水，盛入平皿，于121℃灭菌30min。
公开号CN101946634A的专利“一种羊肚菌母种制作方法”中，提供了一种羊肚菌母种培养基配方：按质量比将1～3份的新鲜无虫蛀圆叶杨碎枝条或圆叶杨树叶放入10份的水中煮沸25～30min，过滤取汁制得圆叶杨浸出液；圆叶杨浸出液和PDA培养液按质量比1:1混合后，按混合液的质量百分比再加入Na3PO4.12H2O 0.2％，KH2PO4 0.2％，MgSO4 0.05％，维生素B1 0.005％，搅拌均匀后在121±1℃下灭菌30min。
公开号CN105154342A的专利“一种羊肚菌液态菌种的培养方法”中，(1)提供了一种一级原种培养基：棉籽壳20-30g，杂木屑15-20g，谷壳20-30g，麦麸15-25g，玉米粉8-12g分别用水浸泡，过滤后分别加水煮沸、过滤沥干，然后混合，制得混合料，向所述混合料中加入蔗糖5-10g，碳酸钙1-5g和磷肥1-5g，混合均匀。(2)提供了一种二级原种培养基：松针100-200g、金针菇100-200g和水1200-1800ml进行混合、煮沸、冷却、过滤处理，制得羊肚菌二级原种营养液，然后将小麦20-30g、玉米25-40g、谷壳15-25g、米糠15-25g、蔗糖1-5g、石膏1-5g、磷肥1-5g混合均匀制得羊肚菌二级原种培养基混合料，并加入到与所述羊肚菌二级原种培养基混合料相同质量的所述羊肚菌二级原种培养液中，混合均匀。(3)提供了一种羊肚菌液态培养基配方：松树枝200-300g、土豆200-400g和水1200-1800ml进行混合，然后依次经过煮沸、冷却、过滤处理得到滤液，将糖类物质(蔗糖、葡萄糖和麦芽糖等)15-30g加入到所述滤液中并溶解制得羊肚菌液态菌种营养滤液，取所述羊肚菌液态菌种营养滤液150ml置于培养瓶中，向所述培养瓶中加入洗净烘干的谷壳10-30g和碳酸钙1-5g。
公开号CN102757291A的专利“一种羊肚菌栽培种培养基及其制备方法”中，提供了一种羊肚菌栽培种配方：以质量分数计，主料中包括2-10份的木屑、2-5份的棉籽壳和1-2份的麸皮；辅料中包括0.1-0.5份的蔗糖、0.1-0.6份的石膏、0.1-0.6份的石灰、0.1-0.5份的羊肚菌根际土、0-0.05份的硫酸镁和0.01-0.02份的维生素B1，添加了核桃枝浸提液，所述核桃枝浸提液是1-3份的核桃树枝条用其质量1.5-5倍的水煎煮后的过滤液。
公开号CN101743854A的专利“一种以石斛纤维为基质的羊肚菌菌丝体的制备方法”中，提供了一种羊肚菌固体培养基配方：铁皮石斛经粉碎提取浸膏后的纤维素渣滓70％-90％，玉米5％-20％，加入0.5％-1％亚硒酸钠、0.5％-1％二氧化锗、0.01％-0.2％磷酸二氢钾，含水量50％-60％，pH自然。
上述的羊肚菌菌种制作技术主要存在如下缺点：
(1)部分发明的配方及制作方法复杂，例如公开号CN105154342A的专利“一种羊肚菌液态菌种的培养方法”中的一级和二级原种培养基。
(2)部分发明的原材料难以取得，例如公开号CN1793315A的专利“尖顶羊肚菌菌株的筛选及菌种制备”和公开号CN1793316A的专利“黑脉羊肚菌菌株的筛选及菌种制备”中的配方需要添加羊肚菌生长地腐殖土，公开号CN102757291A的专利“一种羊肚菌栽培种培养基及其制备方法”中的配方需要添加羊肚菌根际土和核桃枝浸提液，公开号CN101743854A的专利“一种以石斛纤维为基质的羊肚菌菌丝体的制备方法”中的配方需要添加石斛纤维。
(3)普遍使用大量的粮食原料，如小麦、玉米等，不仅成本高，还造成粮食资源的耗费。
为解决上述缺陷，本发明欲提供一种新的羊肚菌菌种制作技术，试图改变现有菌种培养基质的配方及生产步骤，使用常见易得的原材料，避免使用粮食原料，以降低成本、节省粮食资源，同时使用秸秆作为主要原料，以充分利用农业废弃物，变废为宝。
技术实现要素：
本发明所解决的技术问题提供了一种新的羊肚菌菌种培养基质，包括其配方及制作方法。
本发明羊肚菌菌种培养基质，是以秸秆发酵后制成秸秆发酵基质，然后以秸秆发酵基质为主要原料制成培养基质；培养基质中秸秆发酵基质按干重计，占重量百分比90-98％，优选占重量百分比90％。
上述技术方案中：
培养基质还包括提供碳源、氮源、磷源、硫源、钙源、钾源等添加剂。所述提供碳氮源的添加剂为麦麸或玉米粉中的任意一种或其混合。
本发明添加剂还采用石灰、石膏、磷酸二氢钾等添加剂用于磷源、硫源、钙源、钾源。其中，石膏用于提供钙和硫元素，石灰用于提供钙元素并调整酸碱度，磷酸二氢钾用于提供钾元素和磷元素。
本发明培养基质，包括如下重量配比的组分：
秸秆发酵基质按干重计85-95份，麦麸或玉米粉任意一种或其混合8-10份，石灰0.05-0.1份、石膏0.05-0.1份、磷酸二氢钾0.005-0.01份。
优选的，秸秆发酵基质按干重计90份，麦麸或玉米粉任意一种或其混合10份，石灰0.1份、石膏0.1份、磷酸二氢钾0.01份。
上述培养基质的水分控制至含水量60-70％，优选含水量为65％。若含水量不足，加水补足即可。
本发明秸秆发酵基质的制备方法，包括如下步骤：
A、秸秆粉碎；
B、秸秆一次发酵：按照下述重量配比混合各组分：秸秆10-15份，菜籽饼0.4-0.5份，尿素0.04-0.05份、禽畜干粪便2-4份、石灰0.2-0.3份、石膏0.15-0.2份、硫酸镁0.04-0.05份、硫酸钾0.04-0.05份(优选按照下述重量配比混合各组分：秸秆10份，菜籽饼0.5份，尿素0.05份、禽畜干粪便4份、石灰0.3份、石膏0.2份、硫酸镁0.05份、硫酸钾0.05份)；混合后控制混合物含水量为55-65％(优选含水量60％)；避雨采用隧道式发酵或建堆发酵，堆积成立方体或圆锥形，发酵体积不小于4立方米；
C、秸秆二次发酵：将步骤B得到一次发酵秸秆置于遮光避雨的场地，堆积成立方体或圆锥形，体积不小于10立方米，在温度0℃以上发酵90-120天，即得秸秆发酵基质。
上述技术方案中，步骤A所述粉碎为粉碎至长度3厘米以下、宽度3毫米以下的条片状。上述形状尺寸是大部分现有农用秸秆破碎机粉碎秸秆后的产物尺寸。这是为了使发酵过程中的微生物与秸秆中的纤维素、木质素充分接触，又考虑到粉碎工艺的能耗成本。
上述技术方案中，步骤B所述采用隧道式发酵或建堆发酵的发酵时间根据温度不同时间不同：
(1)温度0-15℃时发酵40-50天；
(2)温度16-30℃发酵25-35天。
上述技术方案中，步骤B所述禽畜干粪便为鸡、牛、羊的粪便的干燥物。
本发明解决的第二个技术问题是提供本发明羊肚菌菌种培养基质的制备方法，步骤如下：
取秸秆发酵基质与麦麸或玉米粉任意一种或其混合，石灰、石膏、磷酸二氢钾混合，装入培养容器灭菌，冷却，即得羊肚菌菌种培养基质；
其中：
秸秆发酵基质与玉米粉的重量配比为：
秸秆发酵基质按干重计85-95份，麦麸或玉米粉任意一种或其混合8-10份，石灰0.05-0.1份、石膏0.05-0.1份、磷酸二氢钾0.005-0.01份。
优选的，秸秆发酵基质按干重计90份，麦麸或玉米粉任意一种或其混合10份，石灰0.1份、石膏0.1份、磷酸二氢钾0.01份。
所述培养容器为玻璃瓶、聚丙烯塑料菌种瓶或聚丙烯塑料袋任意一种。
所述灭菌为121℃高压蒸汽灭菌1.5-2.5小时，优选121℃高压蒸汽灭菌2小时。
本发明解决的第三个技术问题是提供了一种新的羊肚菌菌种的制作方法：
(1)二级菌种(又称原种)制作：取上述羊肚菌菌种培养基质，无菌操作接入羊肚菌母种琼脂块，培养至菌丝布满羊肚菌菌种培养基质，得二级菌种。
上述步骤(1)中：
所述羊肚菌菌种培养基质与羊肚菌母种琼脂块按照下述比例添加：每500g羊肚菌菌种培养基质，接入1-2平方厘米大小的羊肚菌母种琼脂块。
优选的，从节约利用菌种考虑，每500g羊肚菌菌种培养基质，接入1平方厘米大小的羊肚菌母种琼脂块。
所述培养至菌丝布满羊肚菌菌种培养基质中的培养温度15-25℃，优选培养温度为20℃。在上述培养温度下，培养时间大概为15-20天。
(2)三级菌种(又称栽培种)制作：将上述羊肚菌菌种培养基质灭菌，冷却，无菌操作接入步骤(1)所得二级菌种，培养至菌丝布满培养基质得三级菌种，即为羊肚菌菌种。
上述步骤(2)中：
所述羊肚菌菌种培养基质与二级菌种按照下述重量配比添加：羊肚菌菌种培养基质30-40份，二级菌种1份。
优选的，羊肚菌菌种培养基质30份，二级菌种1份。
所述培养至菌丝布满羊肚菌菌种培养基质中的培养温度15-25℃，优选培养温度为20℃。在上述培养温度下，培养时间大概为15-20天。
本发明所述“羊肚菌”：指真菌中属于羊肚菌属(Morchella genus)的所有食用菌，包括但不限于梯棱羊肚菌(Morchella importuna)、六妹羊肚菌(Morchella sextelata)、尖顶羊肚菌(Morchella conica)、黄羊肚菌(Morchella esculenta)、高羊肚菌(Morchella elata)、粗腿羊肚菌(Morchella crassipes)等。
与已有的羊肚菌菌种配方及制备方法相比，本发明简化了配方及制作步骤，使用常见的原料，避免或减少使用粮食原料，节省了粮食资源，降低了成本。消耗了大量秸秆，不仅变废为宝，还避免焚烧秸秆造成空气污染，且施用的菌种未被羊肚菌消耗的部分还能作为有机肥，不仅改良土壤，还可为下一季作为提供养料。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，说明但不限制本发明。
实施例1：
制备羊肚菌菌种：
地点：四川省简阳市养马镇
时间：2015年5月9日开始
A、将油菜秸秆粉碎成3厘米X 3毫米大小的碎片；
B、秸秆一次发酵：按照下述重量配比混合各组分：碎油菜秸秆10份，菜籽饼0.5份，尿素0.05份、禽畜干粪便4份、石灰0.3份、石膏0.2份、硫酸镁0.05份、硫酸钾0.05份；混合后混合物含水量为60％；5立方米隧道发酵；
C、秸秆二次发酵：将步骤B得到一次发酵秸秆置于遮光避雨的场地，堆积成立方体，体积24立方米，发酵90天，即得秸秆发酵基质。9份此步骤产生的秸秆发酵基质加1份玉米粉、石灰0.01份、石膏0.1份、磷酸二氢钾0.001份，121℃高压蒸汽灭菌2小时，冷却，即得羊肚菌菌种培养基质。
二级菌种制作：取羊肚菌菌种培养基质500g装入750毫升玻璃瓶，121℃高压蒸汽灭菌2小时，冷却，无菌操作接入1平方厘米羊肚菌母种琼脂块，培养至菌丝布满羊肚菌菌种培养基质，得二级菌种。
三级菌种制作：取羊肚菌菌种培养基质500g装入750毫升玻璃瓶，121℃高压蒸汽灭菌2小时，冷却，无菌操作接入上述产生的二级菌种，培养至菌丝布满培养基质得三级菌种，即为羊肚菌菌种。
栽培羊肚菌：
1、地点：四川省成都市金堂县，土质为灰潮土。
2、播种前准备：用常规方法对农田进行施肥、平整、松土。
3、播种时间在2015年10月下旬。取本实施例制备的羊肚菌三级菌种(栽培种)播种，每平方米播种菌种0.5-0.6kg。所述播种采用矮箱垄作、双沟条播的方法，垄高15cm，垄宽80cm。垄之间的沟宽60cm。
4、播种第3天后开始补水，始终保持土壤表层1-3cm含水量50-70％。
5、在地表形成大量羊肚菌菌丝后25天，放置四川金地菌类有限公司提供的营养袋。放置前用钉板在营养袋的一面打3-4排小孔，每排8-10个小孔，每个小孔直径1-3mm。每亩放置2000个营养袋，每垄横向2袋，纵向间隔35cm。小孔朝下摆放。随后搭建遮阳棚，棚高2-3米，所覆盖遮阳网透光率5％。
6、栽培第二年温度升至10-12℃时，喷雾补水催菇，使大棚内空气湿度60-90％，土壤表层1-3cm的含水量50-70％，出菇后大棚内气温维持在8-20℃之间，直至采收结束。
7、采收：当羊肚菌子实体成熟，菌盖长度达到3-6cm，颜色由深灰色转为棕色时，既可采摘。用刀片轻轻横切断菌柄，将子实体轻放入采收容器中。
实施例2：
制备羊肚菌菌种：
地点：四川省成都市蒲江县
时间：2015年6月1日开始
A、将玉米秸秆粉碎成3厘米X 3毫米大小的碎片
B、秸秆一次发酵：按照下述重量配比混合各组分：碎玉米秸秆10份，菜籽饼0.5份，尿素0.05份、禽畜干粪便4份、石灰0.3份、石膏0.2份、硫酸镁0.05份、硫酸钾0.05份；混合后混合物含水量为60％；建5立方米圆锥形堆发酵；
C、秸秆二次发酵：将步骤B得到一次发酵秸秆置于遮光避雨的场地，堆积成圆锥形，体积30立方米，发酵100天，即得秸秆发酵基质。9份此步骤产生的秸秆发酵基质加1份玉米粉、石灰0.01份、石膏0.1份、磷酸二氢钾0.001份，121℃高压蒸汽灭菌2小时，冷却，即得羊肚菌菌种培养基质。
二级菌种制作：取羊肚菌菌种培养基质550g装入750毫升玻璃瓶，121℃高压蒸汽灭菌2小时，冷却，无菌操作接入1平方厘米羊肚菌母种琼脂块，培养至菌丝布满羊肚菌菌种培养基质，得二级菌种。
三级菌种制作：取羊肚菌菌种培养基质550g装入750毫升玻璃瓶，121℃高压蒸汽灭菌2小时，冷却，无菌操作接入上述产生的二级菌种，培养至菌丝布满培养基质得三级菌种，即为羊肚菌菌种。
栽培羊肚菌：
1、地点：四川省成都市青白江县，柑橘林下，土质为水稻土。
2、播种前准备：用常规方法对地表进行松土，施肥。
3、播种时间在2015年11月初。取本实施例制备的羊肚菌栽培种菌种，播种，每平方米播种菌种0.5-0.6kg。所述播种采用高箱垄作、双沟条播的方法，垄高30cm，垄宽100cm。垄之间的沟宽30cm。
4、播种第3天后开始补水，始终保持土壤表层1-3cm含水量50-70％。
5、在地表形成大量羊肚菌菌丝后25天，放置四川金地菌类有限公司提供的营养袋。放置前用钉板在营养袋的一面打3-4排小孔，每排8-10个小孔，每个小孔直径1-3mm。每亩放置2000个营养袋，每垄横向2袋，纵向间隔35cm。小孔朝下摆放。随后搭建遮阳棚，棚高2-3米，所覆盖遮阳网透光率5％。
6、栽培第二年温度升至10-12℃时，喷雾补水催菇，使大棚内空气湿度60-90％，土壤表层1-3cm的含水量50-70％，出菇后大棚内气温维持在8-20℃之间，直至采收结束。
7、采收：当羊肚菌子实体成熟，菌盖长度达到3-6cm，颜色由深灰色转为棕色时，既可采摘。用刀片轻轻横切断菌柄，将子实体轻放入采收容器中。
对照例：
在实施例1和实施例2的同样栽培地点，采用公开号CN103141302A、CN104686196A和CN105154342A的专利提供的羊肚菌菌种及其制备方法进行栽培。
方案实施效果
表1不同专利中提供的菌种的每亩成本投入
备注：含原料成本和制作营养袋的人力成本(单位：元/亩)
表2采用不同专利中提供的菌种的羊肚菌亩产(单位：kg每亩，重量为干重)
以上结果表明，采用本发明提供的羊肚菌菌种培养基质及菌种，能节省在菌种上的每亩成本投入，并且能显著提高羊肚菌的产量，有取代已有羊肚菌菌种配方及制备方法的价值，值得推广使用。