一种防控烟草黑胫病的生物有机肥料、制备方法和应用与流程

本发明涉及生物有机肥料，尤其涉及一种防控烟草黑胫病的生物有机肥料、制备方法和应用。

背景技术：

1、烟草黑胫病是世界烟草生产中危害最严重的病害之一。烟草黑胫病的平均发病率为5.0％～12％，严重田块发病率高达75％，甚至造成绝收。

2、目前，生产上主要采用化学药剂来防治烟草黑胫病，化学药剂例如是苯基酰胺类、乙磷铝、敌克松等杀菌剂。然而，大面积长期重复性地大量使用同一种杀菌剂或作用机制相同的几种内吸性杀菌剂，很容易使烟草黑胫病病菌产生抗药性，从而引起防效下降，药剂用量增加；同时，随着化学农药的长期使用，农药残留及环境污染问题愈发严重，且长期使用化学农药会导致土壤中适宜烟株生长的微生物群落种群密度降低，影响土壤微生物群落的平衡，导致烟株的生长发育受到不同程度的影响。另一方面，烟草是叶用经济作物，对烟叶的外观和内在质量有特殊的要求，化学药剂残留、病原菌抗药性以及对卷烟安全的影响，限制了化学药剂的大规模利用，同时也不利于烟叶的出口。

3、近年来，随着烟草生产及烟草制品逐渐向生态、安全、优质方向发展，以及人们对自身健康和生存环境的日益重视，人们逐渐意识到对烟草病害进行安全、无污染、无公害绿色防控的重要性。而生物防治安全、无污染、无公害，是对烟草上有害生物进行综合治理的发展方向。因此，开发新的防治烟草黑胫病的生防制剂成为本领域技术人员亟待解决的技术问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是提出一种防控烟草黑胫病的生物有机肥料、制备方法和应用，解决了现有技术中采用化学农药防控烟草黑胫病，存在抗药性、化学药剂残留、污染环境以及影响土壤微生物群落平衡的技术问题。本发明优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。

2、为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

3、本发明防控烟草黑胫病的生物有机肥料，包括功能菌菌粉和有机肥，其中，功能菌菌粉为贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005发酵培养制得的粉剂，功能菌菌粉的有效活菌数不低于2亿/g，功能菌菌粉和有机肥混合后制成的生物有机肥料的有效活菌数不低于0.2亿/g。

4、本发明的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)，其编号为ywf-17-0005，保藏登记号为cctcc no：m 2022753，保藏日期2022年05月30日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学(湖北省武汉市武昌区八一路299号)。

5、根据一个优选实施方式，有机肥为油枯型有机肥。

6、本发明中任一项技术方案所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料的制备方法，包括如下步骤：

7、制备贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005菌粉；

8、制备油枯型有机肥；

9、将制备的贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005菌粉与油枯型有机肥复配，制得防控烟草黑胫病的生物有机肥料。

10、根据一个优选实施方式，制备贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005菌粉包括如下步骤：

11、菌种活化：将贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005菌株转接至lb固体培养基克氏瓶斜面，于37℃培养24h进行活化，所述lb固体培养基克氏瓶斜面，克氏瓶容量为200ml，lb固体培养基装入量为60ml；

12、菌悬液的制备：在无菌条件下，将克氏瓶斜面上的贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005菌苔用50ml无菌水洗下，即得贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005菌悬液；

13、种子液的制备：将克氏瓶中的菌悬液50ml接入含有发酵培养基的种子罐中，37℃培养72h，所述种子罐容积为10l，装液量为6l，搅拌速度300r/min，通气量为3l/min；

14、固体发酵：将种子液以10％的接种量转接入固体培养基，加水调节固体培养基含水量至55％，混合均匀，装入35cm×50cm的不锈钢浅盘中，不锈钢浅盘底部打孔，孔径为0.5cm×0.5cm，孔数为18×24个，料层厚度为3～5cm，37℃发酵培养72h，即得固体发酵物，固体发酵物于50℃烘干，粉碎至80～100目，即为贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005菌粉，菌粉中的菌含量为2.5×1010cfu/g。

15、根据一个优选实施方式，种子液的制备过程中，发酵培养基配方为：葡萄糖20～30g/l，酵母膏1～3g/l，蛋白胨1～3g/l，玉米淀粉10～20g/l，糖蜜粉0.5～1.5g/l，硫酸铵10～20g/l，硫酸镁10～20g/l，余量为水；发酵培养基的ph6.0～7.0，发酵培养基于121℃灭菌30min。

16、根据一个优选实施方式，固体发酵过程中，以质量比计，固体培养基配方为：麦麸50％，玉米芯粉30％，米糠10％，蔗糖5％，玉米浆干粉3％，硫酸铵1.5％，磷酸氢二钾0.5％；固体培养基于121℃灭菌30min。

17、根据一个优选实施方式，制备油枯型有机肥包括如下步骤：将油枯置于发酵槽中，均匀喷洒腐熟剂，调节水分至50％，向油枯中添加草炭和石灰，并将物料混匀，发酵15～20天，陈化10～15天，得油枯型有机肥。

18、根据一个优选实施方式，向油枯中添加草炭，使混合物的碳氮比为25∶1。

19、根据一个优选实施方式，向油枯中添加石灰，调节混合物的ph至6.5～7.5。

20、本发明还提供了本发明中任一项技术方案所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料在烟草种植中的应用。

21、本发明提供的防控烟草黑胫病的生物有机肥料、制备方法和应用至少具有如下有益技术效果：

22、本发明防控烟草黑胫病的生物有机肥料，包括功能菌菌粉和有机肥，其中，功能菌菌粉为贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005发酵培养制得的粉剂，功能菌菌粉的有效活菌数不低于2亿/g，功能菌菌粉和有机肥混合后制成的生物有机肥料的有效活菌数不低于0.2亿/g，将该生物有机肥料用于烟草种植中，其可有效防控烟草黑胫病；另一方面，该生物有机肥料为功能菌菌粉和有机肥混合制得，还可避免现有技术中使用化学药剂造成烟草黑胫病病菌产生抗药性，引起防效下降，药剂用量增加的问题；同时，该生物有机肥料还可增加土壤中的微生物，保护土壤的微生态平衡，为烟草的生长提供基础的营养物质，避免长期使用化学药剂造成农药残留、环境污染、影响土壤微生物群落平衡以及影响烟株生长发育的问题；而且还可提高烟叶安全性，有利于烟叶的出口。

23、即本发明防控烟草黑胫病的生物有机肥料、制备方法和应用，解决了现有技术中采用化学农药防控烟草黑胫病，存在抗药性、化学药剂残留、污染环境以及影响土壤微生物群落平衡的技术问题。

技术特征：

1.一种防控烟草黑胫病的生物有机肥料，其特征在于，包括功能菌菌粉和有机肥，其中，功能菌菌粉为贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005发酵培养制得的粉剂，功能菌菌粉的有效活菌数不低于2亿/g，功能菌菌粉和有机肥混合后制成的生物有机肥料的有效活菌数不低于0.2亿/g。

2.根据权利要求1所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料，其特征在于，有机肥为油枯型有机肥。

3.一种权利要求1或2所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料的制备方法，其特征在于，制备贝莱斯芽孢杆菌ywf-17-0005菌粉包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料的制备方法，其特征在于，种子液的制备过程中，发酵培养基配方为：葡萄糖20～30g/l，酵母膏1～3g/l，蛋白胨1～3g/l，玉米淀粉10～20g/l，糖蜜粉0.5～1.5g/l，硫酸铵10～20g/l，硫酸镁10～20g/l，余量为水；发酵培养基的ph 6.0～7.0，发酵培养基于121℃灭菌30min。

6.根据权利要求4所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料的制备方法，其特征在于，固体发酵过程中，以质量比计，固体培养基配方为：麦麸50％，玉米芯粉30％，米糠10％，蔗糖5％，玉米浆干粉3％，硫酸铵1.5％，磷酸氢二钾0.5％；固体培养基于121℃灭菌30min。

7.根据权利要求3所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料的制备方法，其特征在于，制备油枯型有机肥包括如下步骤：将油枯置于发酵槽中，均匀喷洒腐熟剂，调节水分至50％，向油枯中添加草炭和石灰，并将物料混匀，发酵15～20天，陈化10～15天，得油枯型有机肥。

8.根据权利要求7所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料的制备方法，其特征在于，向油枯中添加草炭，使混合物的碳氮比为25∶1。

9.根据权利要求7所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料的制备方法，其特征在于，向油枯中添加石灰，调节混合物的ph至6.5～7.5。

10.权利要求1或2所述的防控烟草黑胫病的生物有机肥料在烟草种植中的应用。

技术总结
本发明公开了一种防控烟草黑胫病的生物有机肥料、制备方法和应用，涉及生物有机肥料领域，解决了现有技术中采用化学农药防控烟草黑胫病，存在抗药性、化学药剂残留、污染环境以及影响土壤微生物群落平衡的问题。该生物有机肥料包括功能菌菌粉和有机肥，功能菌菌粉为贝莱斯芽孢杆菌YWF‑17‑0005发酵培养制得的粉剂，功能菌菌粉的有效活菌数不低于2亿/g，功能菌菌粉和有机肥混合后制成的生物有机肥料的有效活菌数不低于0.2亿/g。该生物有机肥料可避免化学药剂造成烟草黑胫病病菌产生抗药性，引起防效下降，药剂用量增加的问题；还可避免农药残留、环境污染、影响土壤微生物群落平衡以及影响烟株生长发育的问题；而且还可提高烟叶安全性，有利于烟叶的出口。

技术研发人员：李诚,毛明林,杨润霞,潘菲,赵崇钧,叶敏
受保护的技术使用者：云南省微生物发酵工程研究中心有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13