高纯度海绵骨针的制备方法
【专利摘要】高纯度海绵骨针的制备方法，涉及海绵骨针。将海绵洗净，干燥，粉碎，过筛，去除大颗粒物质，得海绵粉末；在海绵粉末中加入酸、次氯酸盐中的至少一种，搅拌，同时加热到30～110℃并保温0.5～6h，停止加热后沉淀，收集沉淀的骨针，清洗后得骨针粗产品；配制浓度为1％～10％的粘稠剂，将骨针粗产品与粘稠剂混合，同时加入浓度为1％～30％的过氧化氢溶液，过氧化氢与骨针粗产品中的海绵角蛋白反应，在角蛋白表面产生气泡；将含有过氧化氢、骨针粗产品的粘稠剂放入真空容器中，通过调节真空度的高低调节角蛋白表面气泡的大小及逃逸时间，静置后，杂质与骨针分层，平衡压力后打开真空容器，将上层杂质去除，清洗下层沉淀，即得产物。
【专利说明】
高纯度海绵骨针的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及海绵骨针，尤其是涉及一种高纯度海绵骨针的制备方法。
【背景技术】
[0002]海绵动物属于多孔动物门，俗称海绵，是最简单的多细胞动物，它们没有明确的器官结构，但中胶层发达，其中的细胞具有全能性。海绵中与其它后生动物相比，海绵细胞呈现出高度的独立性。海绵主要营固着生活，体内有一套特有的水沟系统，是其摄食、呼吸、排泄、生殖等生命活动的主要通道。由于成体海绵营固着或附着生活，不具备运动能力。
[0003]海绵动物在地球上分布广泛，生物量巨大，估计约有15，000种现生种，已记录了约8，500种海绵，除了 150种淡水海绵外，其余的都是海洋种类(Hooper，2002)。它们大量存活在包括深海和极地海域在内的所有的海域中。大部分沿海种类的海绵披覆生长在岩石，贝壳的外壳，海水中的木头或珊瑚礁等坚硬物质的表面，这样能够降低它们被海浪剥离、拆散的危险。而直立生长的海绵在水流缓慢的深海中较常见，直立生长也可以避免它们在深海中被大量的沉积物所覆盖。大部分海绵种类生活在较浅的水域，也有一些种类包括大部分的六放海绵是栖息在深海中。而未污染的沿海以及热带珊瑚礁海域则是海绵主要的生活区域。
[0004]骨针(spiculers)是由海绵动物体内一种具有富集并有条理地沉淀娃或I丐能力的造骨细胞(sclerocytes)分泌产生，它们是一种特殊中胶层细胞，分布于中胶层中。
[0005]海绵的骨针形态多样，是海绵分类鉴定的重要依据。骨针主要成分为二氧化硅的寻常海绵纲的种类占海绵生物种类80%以上，其主要分布区域为浅海。
[0006]由于海绵骨针形态随种类而异，粒径一致，数量众多且成分稳定，其利用价值逐渐为人们所重视。目前仅有以科研为目的的海绵骨针提取方法为科研工作者所熟知(参考文献:王德祥，沈铭辉，海绵骨针的制备方法，厦门大学学报(自然科学版)，2006)，但是该方法存在处理量少、成本尚、海绵骨针提取纯度不尚等缺点，特别是海绵角蛋白等特殊蛋白去除不彻底，因此该方法仅适用于以形态分类为目的的海绵骨针提取。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于针对传统的海绵骨针批量制备上存在的上述不足，提供一种高纯度海绵骨针的制备方法。
[0008]本发明包括以下步骤:
[0009]I)将海绵洗净，干燥；
[0010]2)将干燥后的海绵粉碎，过筛，去除大颗粒物质，得海绵粉末；
[0011 ] 3)在海绵粉末中加入酸、次氯酸盐中的至少一种，搅拌，同时加热到30?110 °C并保温0.5?6h，停止加热后沉淀，收集沉淀的骨针，清洗后得骨针粗产品;粗产品中最主要的固体杂质是海绵角蛋白；
[0012]4)配制质量百分浓度为1%?10%的粘稠剂，将步骤3)得到的骨针粗产品与粘稠剂混合，同时加入质量百分浓度为I %?30 %的过氧化氢溶液，过氧化氢与骨针粗产品中的海绵角蛋白反应，在角蛋白表面产生气泡；
[0013]5)将含有过氧化氢、骨针粗产品的粘稠剂放入真空容器中，通过调节真空度的高低调节角蛋白表面气泡的大小及逃逸的时间，静置后，杂质与骨针逐步分层，平衡压力后打开真空容器，将上层的杂质去除，清洗下层沉淀，即得高纯度海绵骨针。
[0014]在步骤I)中，所述海绵可采用养殖的海绵，或者自然海区采集的方式获得的具有矿物骨针的天然海绵，或者提取活性物质剩余的海绵残渣;所述洗净可将海绵撕成0.5?
5.0cm3大小，用清水冲洗，去除泥沙、杂质及共生生物;所述干燥可采用离心或挤压方式去除多余水分，再晾干或烘干。
[0015]在步骤2)中，所述过筛可过15?60目的筛网。
[0016]在步骤3)中，所述酸可选自盐酸、硝酸、硫酸、磷酸等中的一种;所述沉淀可采用自然沉淀0.5?6h或离心，所述离心的离心力<1000g;所述清洗可采用清水漂洗I?4次。
[0017]在步骤4)中，所述粘稠剂可选自甘油、纤维素类、聚丙烯酸类等中的一种。
[0018]本发明采用将样品与酸或次氯酸盐共热处理，过氧化氢气泡悬浮角蛋白等方法，显著提高海绵骨针的获取率及纯度。
【具体实施方式】
[0019]实施例1:
[0020]以海绵活性产物提取剩余的海绵残渣为材料，通风橱中晾干，去除有机溶剂。通过40目，80目的两级套筛过滤，获得粉末状的海绵残渣。按照海绵残渣与盐酸质量体积比为1:2的比例加入盐酸开始消化，密封消化容器，同时沸水浴加热。2h后，用清水漂洗消化后的骨针两遍。取出骨针粗产品。粗产品中，杂质的含量约占产品干重的12%。配制2%的纤维素凝胶溶液，将10g骨针粗产品与50mL过氧化氢混合，迅速加入IL新配制的凝胶溶液，搅拌分散后，放入真空容器中抽真空。保持真空状态静置1min后，迅速解除真空状态，将浮在表面的杂质迅速取出。凝胶溶液底部沉淀的海绵骨针的纯度可以达到95%?98%。
[0021]实施例2:
[0022]以新鲜获取的海绵为材料，撕开，清洗，去除其中的杂质及其他生物。洗净后的海绵晾干、粉碎。通过20目以及60目的两级套筛，获得粉末状的海绵残渣。按照海绵粉末与次氯酸钠的质量体积比为1:4的比例加入次氯酸钠溶液，在通风系统中加热至60?70°C，消化过程不断搅拌。4h后停止加热，自然冷却，沉淀。将上清倒出，清洗沉淀2?3次。此时获得的海绵骨针的纯度约为8 2 %.配制6 %的海藻酸凝胶溶液2 L，将海绵骨针的粗产品5 O O g与10mL的过氧化氢搅拌，迅速放入凝胶溶液中，搅拌分散后置于真空容器中抽真空。保持真空状态20min后，迅速解除真空状态，将漂浮在表面的杂质取出。经显微镜检测，骨针的纯度可以达到97%。
【主权项】
1.高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于包括以下步骤: 1)将海绵洗净，干燥； 2)将干燥后的海绵粉碎，过筛，去除大颗粒物质，得海绵粉末； 3)在海绵粉末中加入酸、次氯酸盐中的至少一种，搅拌，同时加热到30?110°C并保温0.5?6h，停止加热后沉淀，收集沉淀的骨针，清洗后得骨针粗产品;粗产品中最主要的固体杂质是海绵角蛋白； 4)配制质量百分浓度为1%?10%的粘稠剂，将步骤3)得到的骨针粗产品与粘稠剂混合，同时加入质量百分浓度为1%?30%的过氧化氢溶液，过氧化氢与骨针粗产品中的海绵角蛋白反应，在角蛋白表面产生气泡； 5)将含有过氧化氢、骨针粗产品的粘稠剂放入真空容器中，通过调节真空度的高低调节角蛋白表面气泡的大小及逃逸的时间，静置后，杂质与骨针逐步分层，平衡压力后打开真空容器，将上层的杂质去除，清洗下层沉淀，即得高纯度海绵骨针。2.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤I)中，所述海绵采用养殖的海绵，或者自然海区采集的方式获得的具有矿物骨针的天然海绵，或者提取活性物质剩余的海绵残渣。3.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤I)中，所述洗净是将海绵撕成0.5?5.0cm3大小，用清水冲洗，去除泥沙、杂质及共生生物。4.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤I)中，所述干燥是采用离心或挤压方式去除多余水分，再晾干或烘干。5.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述过筛是过15?60目的筛网。6.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述酸选自盐酸、硝酸、硫酸、磷酸中的一种。7.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述沉淀采用自然沉淀0.5?6h或离心，所述离心的离心力<1000g。8.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述清洗采用清水漂洗I?4次。9.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述粘稠剂选自甘油、纤维素类、聚丙烯酸类中的一种。
【文档编号】C01B33/12GK105858669SQ201610267764
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月27日
【发明人】王德祥, 陈铭
【申请人】厦门大学