专利名称：睾丸生精细胞凋亡相关基因的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物工程遗传基因，特别是生殖健康领域的睾丸生精细胞凋亡相关基因。
背景技术：
目前，生殖健康领域是国际上的研究热点，随着人类基因组计划的顺利实施和人类基因组草图的完成，男性生殖健康以及男性不育的遗传学研究，已成为遗传学研究领域中的重大课题。据医学统计，育龄夫妇中约有10-15％的不育，其中一个重要的原因是男方生精障碍，表现为无精或严重少精(＜200万/ml)，约占不育男子10％。生精细胞的凋亡是精子发生的一个逆过程，主要发生在睾丸中。人类睾丸是一种具有高度增殖能力的组织，但成年睾丸中产生的成熟精子的数量要比预计生成的精子数少20-75％。大量研究表明睾丸中生精细胞这种自发性退化是通过凋亡而发生的，同时还发现在不育男性中精子凋亡异常增多，因此，凋亡调控的紊乱也是特发性男性不育症的一个重要决定因素。目前国际上已知的睾丸生精细胞凋亡相关基因有Bcl-2/Bax基因族、Fas/Apo-1基因、HSP基因族、iNOS基因、TRAIL及其受体基因、TR2基因等，但是到目前为止国际上尚无特异性的睾丸生精细胞凋亡相关基因。
发明内容
本发明的目的在于研究、克隆出特异性的睾丸生精细胞凋亡相关基因。
本发明的技术解决方案是从模式生物小鼠基因出发，或从模式生物小鼠出发建立小鼠的隐睾凋亡模型后，再通过抑制消减杂交(SSH)技术克隆小鼠生精细胞凋亡相关的EST，进一步运用分子生物学技术和生物信息技术共克隆出特异性的4个人类睾丸生精细胞凋亡相关基因(TSARG1、TSARG2、TSARG3、TSARG4)和2个小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因(Tsarg1、Tsarg)，均已登陆genebank并获得登陆序列号(尚未公开)。
具体实施例方式依本发明的前述技术解决方案所获得4个人类睾丸生精细胞凋亡相关基因为TSARG1、TSARG2、TSARG3、TSARG4，2个小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因为Tsarg1、Tsarg。它们各自的碱基序列及相应蛋白序列分别表达如下TSARG1(AY032925)1 aacattttca ccaagggaaa caagttatga ccatgattac gccaaggctt gaatggatgc61 aggtcgaatt ttagattgaa gggatccaga tctccagtct ttactcaata tagggatcga121 gcgtccgccc gggcaggtaa ggctcctagg gcagagggca aacggcccct ccaggaggga181 gccgggagat tacgcagctc catgtaggtc cacgtttagg ttgggaggat ctaccatgaa241 gaaggtcaag aagaaaaggt cagaggccag acgccaccga gactccacct cccagcatgc301 tagctccaat tccacctctc agcagcctag tcctgaatcc acaccacagc agcctagccc361 tgaatccaca ccacagcatt ccagccttga aaccacctcc cggcagccag cattccaagc421 ccttccagca cccgaaatcc gccgctcctc ttgctgcctt ttatctccag atgctaacgt481 gaaggcagcc cctcaatcca ggaaagcagg gcctctgatt cgcgccggcc cgcattcctg541 ctcctgtgcc acttgcccct gcagctccgc ttgctggcgt cgtctggggc tatgccatag601 ccgcatcttc gatgtccttc tgcctcggga ctggcagatg gcgccaggga gaggactccc661 caacctgctc accttctaca gaaaatcttc aagaaaaccc tccagtcatc gtaacgcgtg721 tcctccaagc cctcggaact gtggctgtgg 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权利要求
1.睾丸生精细胞凋亡相关基因，其特征在于它是特异性的人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG1，其碱基序列为1 aacattttca ccaagggaaa caagttatga ccatgattac gccaaggctt gaatggatgc61 aggtcgaatt ttagattgaa gggatccaga tctccagtct ttactcaata tagggatcga121 gcgtccgccc gggcaggtaa ggctcctagg gcagagggca aacggcccct ccaggaggga181 gccgggagat tacgcagctc catgtaggtc cacgtttagg ttgggaggat ctaccatgaa241 gaaggtcaag aagaaaaggt cagaggccag acgccaccga gactccacct cccagcatgc301 tagctccaat tccacctctc agcagcctag tcctgaatcc acaccacagc agcctagccc361 tgaatccaca ccacagcatt ccagccttga aaccacctcc cggcagccag cattccaagc421 ccttccagca cccgaaatcc gccgctcctc ttgctgcctt ttatctccag atgctaacgt481 gaaggcagcc cctcaatcca ggaaagcagg gcctctgatt cgcgccggcc cgcattcctg541 ctcctgtgcc acttgcccct gcagctccgc ttgctggcgt cgtctggggc tatgccatag601 ccgcatcttc gatgtccttc tgcctcggga ctggcagatg gcgccaggga gaggactccc661 caacctgctc accttctaca gaaaatcttc aagaaaaccc tccagtcatc gtaacgcgtg721 tcctccaagc cctcggaact gtggctgtgg ctctgggggc tctaggagct gcctactaca781 tcactgaatc cttgtgaaca agcccctagg cccacagtct ggcagacctc caccagcccc841 aggagttgat aggtgatggc gctgggagaa gatgttcaga atatctcaaa agccaagtcc901 agaagatcca gtttccatca aagggacctc tcttgtcacc aaaatttaaa aaaagaaaaa961 aaaaacgaaa aaa其蛋白序列为MKKVKKKRSEARRHRDSTSQHASSNSTSQQPSPESTPQQPSPESTPQHSSLETTSRQPAFQALPAPEIRRSSCCLLSPDANVKAAPQSRKAGPLIRAGPHSCSCATCPCSSACWRRLGLCHSRIFDVLLPRDWQMAPGRGLPNLLTFYRKSSRKPSSHRNACPPSPRNCGCGSGGSRSCLLHH
2.睾丸生精细胞凋亡相关基因，其特征在于它是特异性的人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG2，其碱基序列为1 gcgctgaggt ctcgccccat aagactccgc cccgccccac gaggccgcgc cgccagcaat61 aaggcccagc cccgccttct gctgttgccg cagcaaccca gaaagcgtca tggctgccgc121 cggccaggaa aaagggtatt tgacacagac tgcggcagcc ctagacaagt caccgtcact181 ttcgccacag ctagcagctc ccatccgagg gaggcctaag aagtgtctgg tctatccgca241 tgcgccgaag agctcccgct tgtctcgttc cgttctgcgt tggcttcagg gtctggatct301 cagcttcttc cccaggaaca tcaacagaga tttttcaaat ggcttcctaa ttgcagaaat361 attctgtata tattacccct gggaacttga attatcatcc tttgaaaacg ggacctcttt421 aaaagtcaag ttggataact gggcacagtt ggagaagttc ctggcaagaa aaaaatttaa481 attacctaaa gaactaatcc atggaacaat tcattgtaaa gctggagtgc ctgaaatatt541 gatagaagag gtttacactt tattaacaca tcgagaaatt aaaagtatcc aggatgactt601 tgtgaatttc acggactata gctaccagat gcgtttaccc ctggtttcca ggtctacagt661 ttcgaagtct attaaagata acattaggtt atcagaatta ctaagcaatc ccaacatgct721 gaccaatgaa cttaaagcgg agttcctcat ccttttacat atgttgcaaa gaaaattagg781 cagaaaattg aatccagaat ggtttgatgt gaaaccaaca gtgggagaag ttactctcaa841 tcaccttcct gcccaagcct ctgggcgcag atataattta aaagttaaaa gaggaagagt901 tgtccctgtt ttaccaaata taggtagtgg tggcagttca catagagaaa tacatgtgaa961 gcaagctgga caacattctt attactctgc tatgaaacct atcagaaaca tggacaagaa1021 accttgaaaa gcacctgtca aatggctttg aagaagtgat gccaccatct ctagccataa1081 taaagaaaca gaatcaccta gtattggatg tatttcaata ataaatagag tggtgtcttt1141 tccataattg tgttaaagaa catttctttt ccattcaatt tgtttattaa actcctatgc1201 caggcattgt tgaaaataca aaattaaata aat蛋白序列为MAAAGQEKGYLTQTAAALDKSPSLSPQLAAPIRGRPKKCLVYPHAPKSSRLSRSVLRWLQGLDLSFFPRNINRDFSNGFLIAEIFCIYYPWELELSSFENGTSLKVKLDNWAQLEKFLARKKFKLPKELIHGTIHCKAGVPEILIEEVYTLLTHREIKSIQDDFVNFTDYSYQMRLPLVSRSTVSKSIKDNIRLSELLSNPNMLTNELKAEFLILLHMLQRKLGRKLNPEWFDVKPTVGEVTLNHLPAQASGRRYNLKVKRGRVVPVLPNIGSGGSSHREIHVKQAGQHSYYSAMKPIRNMDKKP
3.睾丸生精细胞凋亡相关基因，其特征在于它是特异性的人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3，其碱基序列为1 tgtagctgga ggacaggaaa tagatcttta ttatgtcagt ttaagccctg cgccatccca61 cccttgtatc atatctgtgc agcaggctcc cctgcacacc ctgaggctgt ggcgggtagg121 ggtggggtga ggcccggcta gcctcctctc acccctgctc cagcccacca cagtcatgtc181 agcaatgcct ggcgcagcat ctgcttcttc tggggtgtga ggcgggtggg gaactggatg241 tcgaagaaga tgaagagatc ccctttctta gtggggtcct ccggcaatgg catcccctcc301 cctggcacct tcttgaagta tttggggtgg atgatgtcat tgatggggat gttgagcaga361 cggtcatcta gggtcctcac ctccacagtg cagcaggtga gagccttgcc aagagggatg421 gggttcacga agaagaggtt gtcattctcc ctgcggaagc gagggtgtag cttctccttt481 acgatgaaaa tgatgtctgc tgggatgatg ttggggccct ggtccccttc cttctcaaag541 gtgatgcgtg tgccctgcct ccaaccgggc ttcacatcaa tggtcaggat cttgtccttg601 atggtggagg agtacccatc ctcgttcagc acccttctgg agatcttaat ttttttggtg661 cagccaaaga ataagtcctc cagggacagg tagagatccc gttcgacttg ggggtcctgc721 ttcttgaccc ctcggccctg gagcccccca aagttcaaat ctacctcact tccttctgca781 tcaaaaaact ctgcaggagg aaaggaggca ctccctctgg tggccgcgct caggagtgcc841 agaagagact gctggtagtc ctcggcagga agtgcaaaga cagccccatc ctggctctgc901 ccctgatgtg ctgtgtgatc cgtgggcttc agtgtcttgg tctgtgggat ggggtaataa961 tgcctgacct gccttccacc attaagatga agagctaaaa cttgctgaga gcttactatg1021 cgtcaggtgc tatttttgga accttacatt attatttcat tggtccaggg agcccaaaca1081 aaacgcttaa ggtcccgtag ctagtaagca gtagagttgg gatctgaacc acaggacaat1141 atgactacgg aacctgtgtc cttaaccact gtgccacgcc gcatcgctag atgtggaagc1201 ccctcataag ctgtaaactc gaggggcgct atggttaaga gttttcatat tctgcctctc1261 atggttaatg ccatggaata aacttcacag gctagaatgg tgaaatgacc ttaggcaggg1321 atggtgaggt gactacacta tgtccctcta agatgcgatg ggcaatcaag aggcctgaat1381 cttctggtcc tcctgttgca ttgctgaatt c蛋白序列MSKKMKRSPFLVGSSGNGIPSPGTFLKYLGWMMSLMGMLSRRSSRVLTSTVQQVRALPRGMGFTKKRLSFSLRKRGCSFSFTMKMMSAGMMLGPWSPSFSKVMRVPCLQPGFTSMVRILSLMVEEYPSSFSTLLEILIFLVQPKNKSSRDR
4.睾丸生精细胞凋亡相关基因，其特征在于它是特异性的人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG4，其碱基序列为1 acttttcagg ggacattcag aggcatcagc cccttcctcc tcaccagctc ccagagttcc61 catctccatc cccaatccta aagaaggaaa tcgatgccac ggtcctcaag gagccctggg121 gacccaggcg ccctactcga agatgtggcc cacaatccca gaccccggag gattgcccag181 cgaggccgga acaccagcag gatggcagag gacacctccc caaacatgaa tgacaacatc241 ctgttgcctg tccgcaacaa tgaccaagcc ctaggcctga ctcagtgcat gctgggatgt301 gtgtcctggt tcacctgttt tgcctgctcc ctgagaactc aggcccagca ggttctgttt361 aacacgtgca gatgcaagct gctgtgccag aagctcatgg agaagacagg cattctgctc421 ctctgtgctt tcggattctg gatgttttct attcacttac catcgaaaat gaaagtctgg481 caggatgaca gcataaatgg tccactgcag agcttgaggt tgtaccagga gaaggtgcga541 catcacagtg gggaaatcca ggacctccga ggtagcatga accagctcat tgccaagctc601 caggagatgg aagccatgtc cgatgagcaa aaaatggccc agaaaataat gaagatgata661 cacggagatt acatcgaaaa gccagacttt gccctgaagt ctataggggc cagcattgac721 tttgagcaca cgtcagtcac ctataaccat gagaaggccc actcctactg gaactggatc781 cagctgtgga actacgcaca gcccccagac gtgatccttg agcccaacgt gacacctggc841 aattgctggg cctttgaggg tgaccgcggc caggtgacca tccaattggc tcagaaggtt901 tacctgtcca acctcacgct gcagcacatc cccaagacca tctcattgtc aggcagcctg961 gacaccgccc ccaaggactt cgtcatctat ggcatggagg gctcccccaa ggaggaggtg1021 ttcctggggg catttcagtt tcagccagaa aacatcatcc agatgttccc actccagaac1081 cagccggccc gggctttcag tgcggtcaag gtgaagatct caagcaactg ggggaaccca1141 ggcttcactt gcctgtaccg cgtgcgagtg catggctctg tggccccgcc cagagagcag1201 cctcaccaga acccctaccc taagagagat taaaatttat tctttacccc ca蛋白序列MPRSSRSPGDPGALLEDVAHNPRPRRIAQRGRNTSRMAEDTSPNMNDNILLPVRNNDQALGLTQCMLGCVSWFTCFACSLRTQAQQVLFNTCRCKLLCQKLMEKTGILLLCAFGFWMFSIHLPSKMKVWQDDSINGPLQSLRLYQEKVRHHSGEIQDLRGSMNQLIAKLQEMEAMSDEQKMAQKIMKMIHGDYIEKPDFALKSIGASIDFEHTSVTYNHEKAHSYWNWIQLWNYAQPPDVILEPNVTPGNCWAFEGDRGQVTIQLAQKVYLSNLTLQHIPKTISLSGSLDTAPKDFVIYGMEGSPKEEVFLGAFQFQPENIIQMFPLQNQPARAFSAVKVKISSNWGNPGFTCLYRVRVHGSVAPPREQPHQNPYPKRD
5.睾丸生精细胞凋亡相关基因，其特征在于它是特异性的小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因Tsarg1，其碱基序列为1 gaaaagatca agagacatac ccacagggga gactgcctac ctagggaggg agccaggaaa61 ttcacagctc catgtagctc cacggtgtta ctctagaagg atcaccatga agaaggtcaa121 aaagaaaaag tctgattcca ggcgccgcag gaattccatt tcaccgcaga ctagctccga181 ttcctcacag cagcccagct cagaaacccc gccgtcatgt ccagagcccg cctcgccacc241 atctaagcca cagccttgcc aggagtccac cacaccacac caagttaacc ctgagcctaa301 accgcaacag catacaccac agcctctccc gcctccagag aaacctgcct catctccgtt361 cctggtaccc atggaaccta aaccaattct tccaagcagg aaagcagtgc ctctgaccta421 tgtggcccca cgctcctgct cctgtgcagc ctgcccgggc agctccgctt gctggcatcg481 tctggggctt tgccatagcc gaatctttga tgtcctccta cctcgggact ggtcatccat541 gccagggaga ggagtcccaa accttctcac cttctacaga aaaccgtcaa ggaagtactg601 cgctccccgt aactctcgtg cttcaagctc tcggaactgt tgctgtggct ctgggggcct661 tgggagttgc ctacttcatg gctgaatcct tgtgaattgg accccaggcc caccgtccgg721 caggggttca tggcatggca ccccaactat gccactctgc gtaaggatta ttctaagaag781 aaagtcgttg agaaactgaa gctcgtctct gccctctctg atctacctga gaacagcata841 atctctgcta ttacaatgag gtgacgccat cccgggaagg gtgaacagtc ttgcccctga901 agacagcaca cgggaaaacc atcccacaca aagtctgcct tgtctccata tcggtgtcct961 tccacagtca gccaccattc acattcaaac ctcttatagc ttccctacaa aattcttgct1021 gtttatgggg atgtctgtac atcttttgtg tcatttgctc tgtgcacagg cactgcctca1081 ttaataactt gttttctctt gcc蛋白序列MKKVKKKKSDSRRRRNSISPQTSSDSSQQPSSETPPSCPEPASPPSKPQPCQESTTPHQVNPEPKPQQHTPQPLPPPEKPASSPFLVPMEPKPILPSRKAVPLTYVAPRSCSCAACPGSSACWHRLGLCHSRIFDVLLPRDWSSMPGRGVPNLLTFYRKPSRKYCAPRNSRASSSRNCCCGSGGLGSCLLHG
6.睾丸生精细胞凋亡相关基因，其特征在于它是特异性的小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因Tsarg，其碱基序列为1 ataggatagg aatctttatt atgtcagcct aaggtctcac gcctccccat cttcataggc61 tgggggttga gtggatagga gcaggcaagg cccagctagc cctctccatc cctgttcctg121 ctcaggtccc ccagaattag gtcagcaatg cctggcgcag catctgcttc ttctggggtg181 tgaggcgggt ggggaactgg atgtcaaaga agatgaagag gtctcccttc ttgctggggt241 tctcaggcag tggcatcccc tcacctggca caatcttgaa gtacttaggg tggacaatgt301 cgttgatagg gatgttgagc agccggtcat caagagtctt cacctccaca gtgcagcagg361 taagggcctt gcccaaagga atggggtaca cgaagaagag gttgtcatgc tccctgcgga421 agcgagggtg cagcttctcc ttcacaatga agataatgtc agcagggatg atgttggggc481 cctggtcccc ttccttctca aaggtgat~c gtgtgccctg cctccatcca ggtctcacat541 cgatggtcag gatcttgtcc ttgatggtag aagaatatct gtcttcattt agtacccttc601 gggagatctt aatttttttg gtgcagccaa agaataagtc ctcaagggac agatagaggt661 ctcgttcaat gggagggtct tgtttctgga cgcctctgcc ccaaagcccc ccaaaattca721 aatctatatc atttccttct gcatcaaaaa attcgctgaa ggggttgtct cccccaaaaa781 actcgtggaa cactttgtca gggttgccat ggaagacgta gccagttgtc catggagtct841 gggatccaaa ctctagggga atcccaccct tcaggccttc ctcaccaaac ttgtcataga901 tgcctcgctt cacagggtcg ctcagcacgt cgtaggcttc tgctatttgc ttgaatatct961 ctggtgcacc cggctcagat gacttcaatg ggtggttctt cagggcaagt ttccggtatc1021 ttgaccacag gtctgtatgg tggggacata ggttatgtca agttgacata aaactagcca1081 gcacacttgg tcttctggta attaggctag ccttatctat ttgccatggt aatccttcca1141 ttgatgagtc ccattggcc蛋白序列MSKKMKRSPFLLGFSGSGIPSPGTILKYLGWTMSLIGMLSSRSSRVFTSTVQQVRALPKGMGYTKKRLSCSLRKRGCSFSFTMKIMSAGMMLGPWSPSFSKVMRVPCLHPGLTSMVRILSLMVEEYLSSFSTLREILIFLVQPKNKSSRDR
全文摘要
睾丸生精细胞凋亡相关基因，从模式生物小鼠基因出发，或从模式生物小鼠出发建立小鼠的隐睾凋亡模型后，再通过抑制消减杂交(SSH)技术克隆小鼠生精细胞凋亡相关的EST，进一步运用分子生物学技术和生物信息技术共克隆出特异性的4个人类睾丸生精细胞凋亡相关基因(TSARG1、TSARG2、TSARG3、TSARG4)和2个小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因(Tsarg1、Tsarg)其优点在于以本发明为基础可以进一步研究基因的表达产物——睾丸凋亡相关蛋白质的功能，研究蛋白质的晶体学结构，确定其结构与功能的关系，从而为男性不育的诊断和治疗、新型避孕药物的研制提供候选靶标。
文档编号C07K14/435GK1459458SQ0211413
公开日2003年12月3日 申请日期2002年5月20日 优先权日2002年5月20日
发明者卢光琇, 李麓芸, 付俊江, 刘上峰, 刘刚, 邢晓为 申请人:卢光琇