专利名称：3，4，5－三取代的苯丙烯类衍生物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及有机化学、药物化学和药理学领域，具体而言，本发明涉及3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物及其关键中间体的制备方法及针对这系列化合物对六种肿瘤细胞株如人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞株(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)所进行的肿瘤细胞生长抑制活性筛选。该类化合物被发现具有一定的抑制肿瘤细胞生长活性，可预期作为抗肿瘤药物用途。
背景技术：
目前，由于工业发展中带来的环境污染等问题，人类的生存环境质量不断下降，肿瘤疾病的发病率和致死率也不断上升。然而治疗肿瘤疾病的特效药并不能令人满意，并且目前抗肿瘤临床所用细胞毒性药物的选择性不高所导致的对正常细胞的恶性杀伤，限制了该类药物的普遍适用性。因此，寻找和发现新的选择性高的细胞毒性抗肿瘤药物是世界范围内的研究热点。我们也致力于抗肿瘤药物的研究。2002年赵昱等从菊科莲叶櫜吾中分离得到4-香叶基-3，5-二甲氧基苯丙烯醇及4-香叶基-3，5-二甲氧基苯丙烯醛并对其作了细胞毒性试验，发现对KB细胞有一定的细胞毒性(Zhao，Y.，Hao，X.J.，Lu，W.，Cai，J.C.，Yu，H.，Sevénet，T.and Guéritte，F.(2002)J.Nat.Prod.65，902-908.)，因此本发明的目的在于对这类化合物进行合成和结构改造，以期寻找对肿瘤细胞株生长产生更强抑制作用的3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物。根据全世界尤其是中国的常发肿瘤疾病谱及肿瘤细胞的敏感性，我们选择了人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)六株肿瘤细胞作为体外细胞毒活性药理评价的指标。
发明目的本发明的目的在于提供一种具有细胞毒活性的化合物，具体而言，本发明提供了一种具有式(1)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物及其可药用盐或溶剂化物
式(1)其中R1，R2，或R3可以相同或不同，可以分别是氢，含1～16个碳的饱和或不饱和烃基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的芳基烷基，取代或未取代的芳基烯基，含1～8个碳的酰基，取代或未取代的烯丙基芳基；R可以是-COOH，-CH2OH，-CHO，-COOR4，-CONH2，-CONHR4，-CON(R4)2，其中R4是含1～8个碳的烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯烷基；其中“取代或未取代”是指基团可以未被取代或者被取代，取代基可以是卤素，氨基，硝基，巯基，氰基，羟基，含1～8个碳的烷基，含1～8个碳的烷氧基，含1～8个碳的酰基，芳基，芳基烷基，胺基，酰胺基，烷硫基，芳硫基；本发明的另一目的是提供了具有细胞毒活性如式(7)所示的式(1)化合物的关键中间体3，4，5-三取代的苯甲醛系列化合物及其可药用盐或溶剂化物 式(7)其中基团R1，R2，或R3的定义与式(1)的相同；本发明的另一目的是提供了式(1)和式(7)化合物的制备方法；本发明的又一目的是提供了式(1)和式(7)化合物的用于制备防治肿瘤疾病药物的用途；本发明的另一个目的是提供了一种含有式(1)和式(7)化合物的用于抗肿瘤疾病的药物组合物。
发明内容
本发明提供了一种具有式(1)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物及其可药用盐或溶剂化物 式(1)
其中R1，R2，或R3可以相同或不同，可以分别是氢，含1～16个碳的饱和或不饱和烃基，取代或未取代的芳基，取代或末取代的芳基烷基，取代或未取代的芳基烯基，含1～8个碳的酰基，取代或未取代的烯丙基芳基；R可以是-COOH，-CH2OH，-CHO，-COOR4，-CONH2，-CONHR4，-CON(R4)2，其中R4是含1～8个碳的烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的芳基烷基；其中“取代或未取代”是指基团可以未被取代或者被取代，取代基可以选自卤素，氨基，硝基，巯基，氰基，羟基，含1～8个碳的烷基，含1～8个碳的烷氧基，含1～8个碳的酰基，芳基，芳基烷基，胺基，酰胺基，烷硫基，芳硫基。
本发明优选R具有下面的式(2)，式(3)，式(4)、式(5)或式(6)所示含义R＝COOCH3式(2)R＝COOCH2CH3式(3)R＝COOH 式(4)R＝CH2OH式(5)R＝CHO 式(6)；本发明更优选的式(1)化合物及其可药用盐或溶剂化物是其中R1和R3可以相同或不同，可以分别是氢，含1～8个碳的烷基；R2可以是含1～16个碳的烷基或烯基，取代或未取代的芳基烷基，取代或未取代的芳基烯基。
本发明进一步优选的式(1)化合物及其可药用盐或溶剂化物是其中R1和R3可以相同或不同，可以分别是氢、甲基或乙基；R2可以是含1～16个碳的烷基或烯基，取代或未取代的苯甲基，取代或未取代的苯基烯丙基。
除非另有说明本发明的术语“烃基”包括烷基、烯基和炔基；“烷基”是指含1～8个碳的直链或支链烷基或者含3-8个碳的环烷基，可以是甲基，乙基，丙基，异丙基，环丙基，丁基，异丁基，叔丁基，环丁基，戊基，异戊基，新戊基，环戊基，己基，环己基，庚基，环庚基，辛基等；术语“烯基”含2～8个碳的直链或者支链烯基或3～8个碳的环烯基，可以是乙烯基，丙烯基，烯丙基，丁烯基，异丁烯基，戊烯基，异戊烯基，环戊烯基，己烯基，环己烯基等；术语“芳基”包括碳环芳基和含有1-3个选自氮、氧或硫杂原子的杂环芳基，其中芳基可以部分或者全部被氢化，可以是苯基，萘基，吡啶基，吡咯基，呋喃基，噻吩基，(氢化)喹啉基，(氢化)异喹啉基，吲哚基，三氮唑基，噁唑基，四氢呋喃基，哌啶基，吗啉基等；“胺基”包括甲胺基、乙胺基、丙胺基、二甲胺基、二乙胺基等；“酰胺基”包括甲酰胺基、乙酰胺基、丙酰胺基、丁酰胺基等；本发明“取代或未取代”是指基团可以未被取代或者被取代，取代基可以是卤素，氨基，硝基，巯基，氰基，羟基，含1～8个碳的烷基，含1-8个碳的烷氧基，含1～8个碳的酰基，芳基，芳基烷基，胺基，酰胺基，烷硫基，芳硫基。
本发明进一步的实施方案是当式(1)中的基团R为式(3)所示结构时，称为式(I)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯酸乙酯类化合物
其中基团R1，R2，或R3的定义与式(1)化合物的定义相同。
本发明优选的式(I)化合物包括 当式(1)中的基团R为式(4)所示结构时，称为式(II)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯酸类化合物
其中基团R1，R2，或R3的定义与式(1)化合物的定义相同。
本发明优选的式(II)化合物包括
当式(1)中的基团R为式(5)所示结构时，称为式(III)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯醇类化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与式(1)化合物的定义相同。
本发明优选的式(III)化合物包括
当式(1)中的基团R为式(6)所示结构时，称为式(IV)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯醛类化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与式(1)化合物的定义相同。
本发明优选的式(IV)化合物包括 具有式(7)结构的化合物，称为式(V)所示的3，4，5-三取代的苯甲醛类化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与式(1)化合物的定义相同。
本发明优选的式(V)化合物包括
本发明的另一目的是提供一种由中间体式(7)化合物制备式(1)化合物的方法。该合成工艺路线特征是以式(V)化合物通过与三苯基乙氧羰基次甲基膦烷经历魏悌锡(wittig)反应制备得到式(I)化合物；由式(I)化合物经过碱水解得到式(II)化合物；式(I)化合物通过氢化锂铝还原得到式(III)化合物；式(IV)化合物可由式(III)化合物经过吡啶氯铬酸盐氧化铝混合物(PCC·Al2O3)的氧化得到，或者由式(V)化合物与乙醛溶液通过羟醛缩合反应得到。化合物I、II、III、IV的具体制备过程如下所示
其中基团R1，R2，或R3的定义与式(1)中的定义相同。
本发明的再一目的是提供关键中间体式(7)化合物的制备方法，根据式(7)化合物的定义分别介绍如下当式(7)化合物3，5位R1和R3为烷基取代时，以甲基为例说明。由原料没食子酸甲酯(VI-a)通过硫酸二甲酯进行甲基化，得到3，4，5三甲基化的产物(VI-b)；由化合物(VI-b)通过氢化锂铝的还原得到化合物(VI-c)；化合物(VI-c)通过吡啶氯铬酸盐氧化得到产物(VI-d)；化合物(VI-d)通过苯硫酚和六甲基磷酰三胺的脱甲基作用得到R1和R3为甲基的化合物(VI)；此化合物(VI)与卤代物(R2X)发生取代反应得到式R1和R3为甲基的化合物(V-M)。化合物(V-M)的具体制备过程如下所示
当式(7)化合物3，5位R1和R3为酰基或氢取代时，分别以乙酰基和氢为例加以说明，得到产物分别为化合物(VI-A)和化合物(VI-H)。以化合物(VI-d)为原料，常温下用三氯化铝脱去三个甲基得三羟基苯甲醛(VI-e)；化合物(VI-e)由醋酐吡啶乙酰化得到三乙酰基产物(VI-f)；化合物(VI-f)在N，N-二甲基甲酰胺的存在下通过与碳酸钾和卤代物(R2X)反应得到化合物(V-A)；化合物(V-A)再进一步在碳酸钾的水解作用下产生化合物(V-H)。化合物(V-A)和化合物(V-H)的具体制备过程如下所示
式(1)化合物及其中间体式(7)化合物具有重要的生物活性，体外对六株肿瘤细胞包括人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌胞胞(CNE)，(口腔上皮癌细胞株(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)的细胞毒活性试验表明此类具有苯丙烯结构的新化合物(如化合物IV-a)及其中间体系列化合物(如V-e)对肿瘤细胞生长具有抑制作用，有可能发展成为新的防治肿瘤药物。
本发明的式(1)化合物及式(7)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有肿瘤细胞生长抑制活性从而可以用于防治肿瘤的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明的式(1)化合物及式(7)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的抗肿瘤药物如铂类药物顺铂(DDP)、喜树碱类药物伊立替康(Irinatecan、CPT-11)、长春花碱类药物失碳长春花碱(Vinorebine，NVB诺维本)、脱氧胞昔类药物吉西他滨(Gemcitabine，Gemzar，健择)、足叶乙甙(Etoposide)、紫杉醇(Paclitaxel)等联合使用，制备得到具有肿瘤生长抑制活性的细胞毒性组合物，可用于治疗肿瘤疾病。该类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
下面通过实施例进一步说明本发明。实施例给出了代表性化合物的合成及相关结构鉴定数数据以及部分活性数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例13，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯(VI-b)的制备取氢氧化钠(10g，0.25mol)溶于水中，冷却后加入化合物没食子酸甲酯(VI-a，10.8g，0.058mol)，搅拌溶解，呈棕红色，边搅拌边滴加27ml硫酸二甲酯(滴加时控制温度低于40℃)，加液完毕后加热回流2小时，溶液呈棕黄色。冷却后加碱中和到弱酸性，在10℃以搅拌保温1小时，过滤后用水洗至近中性，得灰白色固体，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝6∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得化合物(VI-b)9.28g，收率为70％。
实施例23，4，5-三甲氧基苄醇(VI-c)的制备将氢化锂铝(55mg，1.49mmol)加至5ml四氢呋喃中，而后将溶于5ml四氢呋喃的3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯(VI-b，0.226g，1mmol)滴入混合液中，加液完毕后加热回流5小时，再在室温下搅拌过夜。然后加入少量水分解过量的氢化锂铝，然后用1M盐酸滴节PH至酸性，用乙醚萃取后有机相分别用饱和食盐水，蒸馏水洗涤，最后用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液浓缩得粗品，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得(VI-c)0.148g，收率为72％。
实施例33，4，5-三甲氧基苯甲醛(VI-d)的制备在烧瓶中加入吡啶氯铬酸盐(0.775g，0.3mol)，用二氯甲烷溶解，室温搅拌，再注入以二氯甲烷溶解的3，4，5-三甲氧基苄醇(VI-c，0.1g，0.51mmol)，室温搅拌20分钟，生成棕色物。抽滤，不溶物以乙醚洗涤，合并滤液，分别以5％氢氧化钠，5％盐酸，饱和碳酸氢钠溶液，饱和氯化钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸镁干燥。过滤，脱溶得粗品，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得液体化合物(VI-d)85mg，收率为85％。
实施例4丁香醛(VI)的制备在烧瓶中加入氢化钠(48mg，2mmol)及5ml无水甲苯，再注入苯硫酚(0.2ml，2mmol)搅拌半小时，随之加入六甲基磷酰三胺(0.35ml，氢化钙处理)，注入溶有3，4，5-三甲氧基苯甲醛(VI，0.31g，1.5mmol)的甲苯溶液，物料呈黄色浑浊，加热回流两小时后降至室温，加入10ml二氯甲烷，分出有机层，水层用二氯甲烷提取三次，再用1M盐酸调PH至酸性，析出白色固体，用二氯甲烷提取至无色，有机相合并后用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干噪过夜，过滤，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得淡黄色固体粗品，柱层析得化合物(VI)0.252g，收率为92％。
实施例5化合物VI-e(3，4，5-三羟基苯甲醛)的制备在一个置有三氯化铝(8.14g，61.2mmol)的反应瓶中加入25ml二氯甲烷，再慢慢加入5ml二氯甲烷溶解的3，4，5-三甲氧基苯甲醛(3g，15.3mmol)溶液，室温搅拌24小时，然后再加入三氯化铝(8.14g，61.2mmol)，再于室温搅拌48小时。然后用1M盐酸除去过量的三氯化铝除去，浓缩除去二氯甲烷和部分水，用乙酸乙酯(60ml×5)进行萃取，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥过夜。快速柱层析纯化(氯仿∶甲醇＝20∶1，粗品/硅胶＝1∶20)得3，4，5-三羟基苯甲醛500mg，收率为21.2％。
实施例6化合物VI-f(2，3-二乙酰氧基-5-甲醛基-苯基醋酸酯)的制备 将3，4，5-三羟基苯甲醛(420mg，2.72mmol)溶解于8ml吡啶中，溶液冰浴冷却下加入16ml醋酐。该溶液在室温下搅拌下4小时，而后将此溶液加入冰的饱和氯化铵(15ml)的乙酸乙酯(25ml)混合液中，然后分液漏斗分层后取上层乙酸乙酯液。有机层用纯水洗至近中性，再用无水硫酸钠干燥过夜，过滤，浓缩，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝6∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得2，3-二乙酰氧基-5-甲醛基-苯基醋酸酯280mg，收率为36.7％)。
VI-f化合物(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.481H-NMR(400MHZ，CDC13)δ9.85(1H，s)，7.70(2H，s)，2.29(9H，s)；
实施例7化合物V-1(3-乙酰氧基-2-苄氧基-5-甲醛基-苯基醋酸酯)的制备 本例涉及到一类如式(6)所示的具有细胞毒活性的3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物关键中间体3，4，5-三取代的苯甲醛系列化合物的一般合成方法。具体涉及化合物V-1(3-乙酰氧基-2-苄氧基-5-甲醛基-苯基醋酸酯)的合成。将2，3-二乙酰氧基-5-甲醛基-苯基醋酸酯(56mg，0.2mmol)加入盛有3ml N，N-二甲基甲酰胺的烧瓶中。然后加入溴苄(68mg，0.4mmol)，碳酸钾(82mg，0.6mmol)加热并搅拌24小时后，过滤，滤液浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得化合物V-1(63mg，96％)。
V-1化合物(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.441H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.81(1H，s)，7.65(2H，s)，7.39(5H，m)，2.29(6H，s)，5.18(2H，s)。
实施例8化合物V-k(4-苄氧基-3，5-二羟基-苯甲醛)的制备 本例涉及到一类如式(6)所示的具有细胞毒活性的3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物关键中间体3，4，5-三取代的苯甲醛系列化合物的一般合成方法。具体涉及化合物V-k(4-苄氧基-3，5-二羟基苯甲醛)的合或。将碳酸钾(175mg，1.28mmol，0.9m1水)溶液加入到3-乙酰氧基-2-苄氧基-5-甲醛基-苯基醋酸酯(141mg，0.43mmol)的甲醇(5ml)溶液中，在室温下搅拌10分钟，过滤，滤液浓缩得到的棕黑色溶液再用乙酸乙酯(15ml×4)萃取后，无水硫酸钠干燥过夜，快速柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得4-苄氧基-3，5-二羟基-苯甲醛100mg，收率为94.9％。
V-k化合物Rf(乙酸乙酯)0.571H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.78(1H，s)，7.05(2H，s)，7.39(5H，m)，5.99(2H，brs)，5.18(2H，s)。
实施例9化合物V-f(4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛)的制备 本例涉及到一类如式(6)所示的具有细胞毒活性的3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物关键中间体3，4，5-三取代的苯甲醛系列化合物的一般合成方法。具体涉及化合物V-f(4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛)的合成。在一个1000ml的三颈瓶中依次加入氢化钠(64mg，1.2mmol)和甲醇(7ml)，丁香醛(VI，0.2g，1.08mmol)的甲醇(3ml)溶液和4-溴-苄溴(333mg，1.4mmol)，加热回流3个小时。冷至室温，过滤，滤液浓缩，加入少量水，用1MHCl调PH至酸性，用乙醚萃取(30ml×3)，饱和食盐水洗涤后干燥过夜，过滤，滤液浓缩后用乙醚重结晶得白色固体4-苄氧基-3，5-二甲氧基苯甲醛219mg，收率为62.5％。
V-f化合物Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.511H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.87(1H，s)，7.12(2H，s)，3.90(6H，s)，5.08(2H，s)，7.35(2H，d，J＝8.4Hz)，7.47(2H，d，J＝8.4Hz)。
实施例10化合物V-j(4-(4-乙氧基-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛)的制备 本例涉及到一类如式(6)所示的具有细胞毒活性的3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物关键中间体3，4，5-三取代的苯甲醛系列化合物的一般合成方法。具体涉及化合物V-j(4-(4-乙氧基-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛)的合成。用四氢呋喃将丁香醛(VI，20mg， 0.11mmol)、4-乙氧基苄醇(25mg，0.165mmol)、三苯基膦(43mg，0.165mmol)溶解，然后滴入40％的偶氮二甲酸二乙酯甲苯溶液。反应液搅拌72小时，然后经浓缩、柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝6∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得到白色固体化合物V-j26mg，收率为75％。
V-j化合物Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.501H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.85(1H，s)，7.10(2H，s)，3.89(6H，s)，5.06(2H，s)，7.35(2H，d，J＝6.8Hz)，6.85(2H，d，J＝6.8Hz)。
根据与实施例1-10之一的方法制备以下表一所示实施例11-20化合物 表一
下面列出表一中各化合物的理化数据V-a白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.57；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.86(1H，s)，7.11(2H，s)，3.90(6H，s)，5.13(2H，s，H-1′)，7.42(2H，dd，J＝7.6，1.2Hz)，7.33(3H，m)；V-b白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.57；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.86(1H，s)，7.12(2H，s)，3.91(6H，s)，4.07(2H，t，H-1′)，1.57(2H，m)，1.30(2H，m)；1.26(24H，m)，0.88(3H，t)；V-c白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.61；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.88(1H，s)，7.14(H，s)，3.89(6H，s)，5.20(2H，s，H-1′)7.67(1H，dd，J＝8.4，2.4Hz)，7.12(1H，dd，J＝8.4，2.4Hz)，7.03(1H，d，J＝2.4Hz)；V-d淡黄色液体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.65；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.87(1H，s)，7.12(2H，s)，3.93(6H，s)，4.67(2H，brd，J＝7.2Hz)，5.54(1H，brt，J＝7.2Hz)，2.03(4H，m)；5.05(1H，m)，1.67(1H，s)，1.65(1H，s)；1.58(1H，s)；V-e白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.57；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.86(1H，s)，7.11(2H，s)，3.90(6H，s)，5.00(2H，s，H-1′)7.15(1H，brd，J＝7.2Hz)，7.52(1H，dd，J＝7.2，7.6Hz)，7.32(1H，dd，J＝7.2，7.6Hz)，7.75(1H，brd，J＝7.6Hz)；V-g白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.57；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.87(1H，s)，7.12(2H，s)，3.93(6H，s)，5.09(2H，s，H-1′)，7.70(1H，s)，7.43(1H，d，J＝7.6Hz)；7.22(1H，dd，J＝7.6，7.6Hz)；V-h白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.54；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.87(1H，s)，7.12(2H，s)，3.92(6H，s)，5.07(2H，s，H-1′)，7.64(1H，s)，7.41(1H，d，J＝8.4Hz)，7.28(1H，d，J＝8.4Hz)；V-i淡黄色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.63；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.87(1H，s)，7.11(2H，s)，3.89(6H，s)，5.15(2H，s，H-1′)，7.47(1H，d，J＝8.0Hz)，7.29(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz)；7.23(1H，d，J＝2.0Hz)；V-m白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙烷5/2)0.57；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.86(1H，s)，7.12(2H，s)，3.90(6H，s)，5.17(2H，brd，J＝6.4Hz)，6.24(1H，dt，J＝12.0，6.4Hz)，7.34(1H，d，J＝12.0Hz)，7.39(5H，m)；V-n淡黄色液体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.60；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.87(1H，s)，7.12(H，s)，3.93(6H，s)，4.65(2H，brd，J＝7.2Hz)，5.55(1H，brt，J＝6.8Hz)，2.03(8H，m)，5.10(1H，brt)，5.08(1H，brt)，1.66(3H，brs)，1.58(3H，br)，1.60(3H，brs)，1.68(3H，brs)。
实施例21化合物I-f(3-[4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯酸乙酯)的制备 本例涉及到一类具有细胞毒活性的如式(I)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯酸乙酯的一般合成方法。具体涉及到化合物I-f(3-[4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯酸乙酯)的制备。在烧瓶中加入化合物V-f(1.19g，3.39mmol)和25ml苯，搅拌溶解，然后加入三苯基乙氧羰基次甲基膦烷(1.9g，5.42mmol)，加热回流2小时，冷至室温，浓缩得粗品，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝7∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得白色固体化合物I-f992mg，收率为69.5％。
I-f化合物Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.661H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.34(3H，t)，4.27(2H，q)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.59(1H，d，J＝16.0Hz)，6.74(2H，s)，3.85(6H，s)，5.00(2H，s)，7.35(2H，d，J＝8.4Hz)，7.46(2H，d，J＝8.4Hz)。
实施例22化合物I-b(3-[4-苄氧基-3，5-二羟基-苯]丙烯酸乙酯)的制备 本例涉及到一类具有细胞毒活性的如式(I)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯酸乙酯的一般合成方法。具体涉及到化合物I-b(3-[4-苄氧基-3，5-二羟基-苯]丙烯酸乙酯)的制备。由根据实施例7方法制得的化合物V-A与三苯基乙氧羰基次甲基膦烷通过实施例20的方法制得I-b化合物的中间体，再根据实施例8的方法水解得到白色固体化合物I-b，两步收率为60％。
I-b化合物Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.281H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.34(H，t)，4.27(H，q)，6.30(1H，d，J＝16.0Hz)，7.53(1H，d，J＝16.0Hz)，6.70(2H，s)，5.09(2H，s)，7.40(5H，m)。
根据实施例21及实施例22之一的方法制备以下表二所示实施例23-32化合物 表二
下面列出表二中各化合物的理化数据I-a白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.63；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.34(3H，t)，4.27(2H，q)，6.30(1H，d，J＝16.0Hz)，7.53(1H，d，J＝16.0Hz)，6.70(2H，s)，3.85(6H，s)，5.09(2H，s)，7.40(5H，m)；I-c白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.68；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.35(3H，t)，4.28(2H，q)，6.36(1H，d，J＝16.0Hz)，7.61(1H，d，J＝16.0Hz，H-5)，6.76(2H，s)，3.85(6H，s)，5.13(2H，s)，7.01(1H，d，J＝8.4Hz)，7.12(1H，dd，J＝8.4，2.4Hz)，7.69(1H，d，J＝2.4Hz)；I-d白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.78；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.35(3H，t)，4.28(2H，q)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.61(1H，J＝16.0Hz)，6.76(2H，s)，3.88(6H，s)，4.01(2H，t)，1.76(H，m)，1.44(H，m)，1.34(2H，m)，1.27(22H，m)，0.89(3H，t)；I-e白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.65；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.34(3H，t)，4.27(2H，q)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.59(1H，d，J＝16.0Hz)，6.74(2H，s)，3.89(6H，s)，5.00(2H，s)，7.15(1H，brd，J＝7.2Hz)，7.52(1H，dd，J＝7.2，7.6Hz)，7.32(1H，dd，J＝7.2，7.6Hz)，7.75(1H，brd，J＝7.6Hz)；I-g微黄色液体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.71；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.34(3H，t)，4.26(2H，q)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.60(1H，d，J＝16.0Hz)，6.74(2H，s)，3.88(6H，s)，4.59(2H，brd，J＝7.2Hz)，5.55(1H，brt，J＝7.2Hz)，1.99(4H，m)，5.07(1H，brt)，1.67(3H，s)，1.65(3H，s)，1.59(3H，s)；I-h白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.67；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.35(3H，t)，4.27(2H，q)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.60(1H，d，J＝16.0Hz)，6.74(2H，s)，3.86(6H，s)，5.01(2H，s)，737(1H，brd，J＝7.6Hz)，7.20(1H，dd，J＝7.6，8.0Hz)，7.43(1H，brd，J＝7.6Hz)，7.70(1H，s)；I-i白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.63；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.34(3H，t)，4.27(2H，q)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.60(1H，d，J＝16.0Hz)，6.74(2H，s)，3.86(6H，s)，5.00(2H，s，H-1′)，7.64(1H，d，J＝1.6Hz)，7.40(1H，d，J＝8.4Hz)，7.29(1H，dd，J＝8.4，1.6Hz)；I-j白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.59；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.34(3H，t)，4.27(2H，q)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.59(1H，d，J＝16.0Hz)，6.73(2H，s)，3.83(6H，s)，5.08(2H，s)，7.22(1H，d，J＝7.6Hz)，7.48(1H，brd，J＝7.6Hz)，7.29(1H，brs)；I-k白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.61；1H-NMR(400MHZ， CDCl3)δ1.34(3H，t)，4.27(2H，q)，6.34(1H，d，J＝16.0Hz)，7.59(1H，d，J＝16.0Hz)，6.73(2H，s)，3.84(6H，s)，4.98(2H，s)，7.36(2H，brd，J＝8.4Hz)，6.85(2H，brd，J＝8.4)，4.03(2H，q)，1.40(3H，t)；I-l无色液体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.72；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.34(3H，t)，4.26(2H，q)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.60(1H，d，J＝16.0Hz)，6.74(2H，s)，3.87(6H，s)，4.55(2H，d，J＝7.2Hz，H-1′)，5.57(1H，brt，J＝6.8Hz)，2.02(8H，m)，5.10(1H，brt)，5.08(1H，brt)，1.66(3H，brs)，1.59(3H，brs)，1.61(3H，brs)，1.68(3H，brs)。
实施例33化合物II-f(3-[4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯酸)的制备 本例涉及到一类具有细胞毒活性的如式(II)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯酸的一般合成方法。具体涉及到化合物II-f(3-[4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯酸)的制备。将化合物I-f(122mg，0.29mmol)加到25ml的烧瓶中，用5ml乙醇溶解，加入氢氧化钾水溶液(48mg，0.87mmol，3ml水)，加热回流3小时，冷至室温，浓缩至无醇味，然后加入2ml水，用1M盐酸调至PH为酸性，可见有大量白色的固体析出，用乙醚(10ml×3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，浓缩得3-[4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯酸110mg，收率97％。
II-f化合物Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.211H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.36(1H，d，J＝16.0Hz)，7.70(1H，d，J＝16.0Hz)，6.76(2H，s)，3.86(6H，s)，5.01(2H，s)，7.35(2H，d，J＝8.4Hz)，7.47(2H，d，J＝8.4Hz)。
根据与实施例33相同的方法制备以下表三所示实施例34-44化合物 表三
下面列出表三中各化合物的理化数据II-a微黄色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.23；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.36(1H，d，J＝16.0Hz)，7.70(1H，d，J＝16.0Hz)，6.77(2H，s)，3.86(6H，s)，5.06(2H，s)，7.47(2H，brd，J＝7.2Hz)，7.30-7.35(3H，m)；II-b微黄色液体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.27；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.36(1H，d，J＝16.0Hz)，7.71(1H，d，J＝16.0Hz)，6.77(2H，s)，3.89(6H，s)，4.59(2H，brd，J＝7.2Hz)，5.55(1H，brt，J＝7.2Hz)，2.02(4H，m)，5.07(1H，brt)，1.67(3H，s)，1.66(3H，s)，1.59(3H，s)；II-c微黄色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.24；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.36(1H，d，J＝16.0Hz)，7.69(1H，d，J＝16.0Hz)，6.76(2H，s)，3.85(6H，s)，5.08(2H，s，H-1′)，7.68(1H，d，J＝8.4Hz)，7.10(1H，dd，J＝8.4，2.4Hz)，6.98(1H，d，J＝2.4Hz)；II-d白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.28；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.35(1H，d，J＝16.0Hz)，7.70(1H，d，J＝16.0Hz)，6.77(2H，s)，3.88(6H，s)，4.01(2H，t)，1.75(1H，m)，1.44(2H，m)，1.26(24H，m)，0.88(3H，t)；II-e白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.24；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.37(1H，d，J＝16.0Hz)，7.72(1H，d，J＝16.0Hz)，6.78(2H，s)，3.86(6H，s)，5.15(2H，s)，7.54(1H，d，J＝8.4Hz)，7.33(1H，dd，J＝8.4，1.6Hz，H-4′)，7.16(1H，dd，J＝8.4，1.6Hz)，7.72(1H，d，J＝8.4Hz)；II-g白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.21；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.36(1H，d，J＝15.6Hz)，7.70(1H，d，J＝15.6Hz)，6.76(2H，s)，3.87(6H，s)，5.02(2H，s)，7.70(1H，brs)，7.43(1H，brd，J＝7.6Hz)，7.21(1H，dd，J＝7.6，6.8Hz)，7.37(1H，brd，J＝6.8Hz)；II-h白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.21；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.36(1H，d，J＝16.0Hz)，7.70(1H，d，J＝16.0Hz)，6.77(2H，s)，3.88(6H，s)，5.01(2，s)，7.64(1H，s)，7.41(1H，d，J＝8.0Hz)，7.30(1H，d，J＝8.0Hz)；II-i白色固体Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.18；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.36(1H，d，J＝16.0Hz)，7.69(1H，d，J＝16.0Hz)，6.76(2H，s)，3.85(6H，s)，5.09(2H，s)，7.23(1H，d，J＝8.0Hz)，7.48(1H，brd，J＝8.0Hz)，7.29(1H，brs)；II-j白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.21；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.35(1H，d，J＝15.6Hz)，7.70(1H，d，J＝15.6Hz)，6.76(2H，s)，3.86(6H，s)，5.00(2H，s)，7.38(2H，brd，J＝8.4，6.8Hz)，6.85(2H，s，brd，J＝8.4，6.8Hz)；II-k白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.23；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.50(1H，d，J＝16.0Hz)，7.61(1H，d，J＝16.0Hz)，7.06(2H，s)，3.91(6H，s)，5.05(2H，s)，7.08(1H，brs)，7.28-7.42(3H，m)；II-m微黄色液体，Rf(正己烷/乙酸乙酯/甲酸3/1/0.05)0.21；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.36(1H，d，J＝16.0Hz)，7.71(1H，d，J＝16.0Hz)，6.77(2H，s)，3.89(6H，s)，4.56(2H，d，J＝7.2Hz)，5.56(1H，brt，J＝7.2Hz)，2.03(8H，m)，5.10(1H，brt)，5.08(1H，brt)，1.66(3H，brs)，1.59(3H，brs)，1.61(3H，brs)，1.68(3H，brs)。
实施例45化合物III-e(3-[4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯醇)的制备 本例涉及到一类具有细胞毒活性的如式(III)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯醇的一般合成方法。具体涉及到化合物III-e(3-[4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯醇)的制备。在一个三口烧瓶中依次加入氢化锂铝(28mg，0.725mmol)和8m1乙醚，冰盐浴冷至0℃，加入溶于2ml乙醚的化合物I-f(122mg，0.29mmol)，搅拌30min。加水分解多余的氢化锂铝，而后用1M盐酸调至PH为酸性，乙醚(10ml×3)来萃取，有机相用饱和食盐水冼涤，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，滤液浓缩得粗品，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得3-[4-(4-溴-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯醇86mg，收率为78.1％。
化合物III-e白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.171H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.45(2H，brd，J＝6.4Hz)，5.85(1H，dt，J＝12.0，6.4Hz)，6.52(1H，d，J＝12.0Hz)，6.46(2H，s)，3.83(6H，s)，4.95(2H，s)，7.37(2H，d，J＝8.0Hz)，7.47(2H，d，J＝8.0Hz)。
根据与实施例45相同的方法制备以下表四所示实施例46-56化合物 表四
下面列出表四中各化合物的理化数据II-a白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.17；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.32(2H，brd，J＝6.0Hz)，6.31(1H，dt，J＝12.0，6.0Hz)，6.52(1H，d，J＝12.0Hz)，6.61(2H，s)，3.83(6H，s)，5.01(2H，s)，7.48(2H，brd，J＝7.6Hz)，7.28-7.36(3H，m)；III-b白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)034；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.32(2H，brd，J＝4.8Hz)，6.30(1H，dt，J＝4.8，15.6Hz)，6.54(1H，d，J＝15.6Hz)，6.61(2H，s)，3.85(6H，s)，3.95(2H，t)，1.74(2H，m)，1.43(2H，m)，1.26(24H，m)，0.87(3H，t)；III-c白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.19；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.32(2H，brd，J＝5.2Hz)，6.31(1H，dt，J＝15.6，5.2Hz)，6.54(1H，d，J＝15.6Hz)，6.31(2H，s)，3.82(6H，s)，5.07(2H，s)，7.68(1H，d，J＝8.4Hz)，7.10(1H，dd，J＝8.4，2.4Hz)，6.98(1H，d，J＝2.4Hz)；III-d白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.19；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.33(2H，brd，J＝5.6Hz)，6.30(1H，dt，J＝5.6，15.6Hz)，6.55(1H，d，J＝15.6Hz)，6.62(2H，s)，3.83(6H，s)，5.09(2H，s)，7.15(1H，brd，J＝7.2Hz)，7.52(1H，dd，J＝7.2，7.6Hz)，7.32(1H，dd，J＝7.2，7.6Hz)，7.75(1H，brd，J＝7.6Hz)；III-f白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.18；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ433(2H，brd，J＝5.6Hz)，6.30(1H，dt，J＝5.6，16.0Hz)，6.55(1H，d，J＝16.0Hz)，6.61(2H，s)，3.85(6H，s)，5.00(2H，t)，7.22(1H，brd，J＝8.0Hz)，7.31(1H，dd，J＝8.0，8.0Hz)，6.98(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz)，7.28(1H，d，J＝2.0Hz)；III-g白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.19；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.32(2H，brd，J＝5.6Hz)，6.30(1H，dt，J＝5.6，16.0Hz)，6.55(1H，d，J＝16.0Hz)，6.61(2H，s)，3.86(6H，s)，4.47(2H，brd，J＝7.2Hz)，5.57(1H，brt，J＝7.2Hz)，1.75(3H，s)，1.67(1H，s)；III-h白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.16；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.23(2H，brd，J＝6.8Hz)，6.35(1H，dt，J＝6.8，16.0Hz)，7.61(1H，d，J＝16.0Hz)，6.74(2H，s)，3.86(6H，s)，5.00(2H，s)，7.64(1H，d，J＝1.6Hz)，7.40(1H，d，J＝8.4Hz)，7.29(1H，d，J＝8.4，1.6Hz)；III-i白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.17；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.27(2H，brd，J＝7.2Hz)，6.35(1H，dt，J＝7.2，16.0Hz)，7.59(1H，d，J＝16.0Hz)，6.73(2H，s)，3.83(6H，s)，5.08(2H，s)，7.21(1H，d，J＝8.0Hz)，7.48(1H，dd，J＝8.0，1.6Hz)，7.29(1H，d，J＝1.6Hz)；III-j白色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.12；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.32(2H，brd，J＝4.8Hz)，6.28(2H，dt，J＝4.8，16.0Hz)，6.55(1H，d，J＝16.0，4.8Hz)，6.59(2H，s)，383(6H，s)，4.94(2H，s)，7.38(2H，dd，J＝6.8，2.0Hz)，6.84(2H，dd，J＝6.8，2.0Hz)，4.01(2H，q)，1.41(1H，t，J＝2.0Hz)；III-k微黄色液体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.23；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ4.32(2H，brd，J＝5.6Hz)，6.29(1H，dt，J＝5.6，16.0Hz)，6.54(1H，d，J＝16.0Hz)，6.60(2H，s)，3.86(6H，s)，4.51(2H，brd，J＝7.2Hz)，5.57(1H，brt，J＝7.2Hz)，2.04(4H，m)，5.08(1H，brt)，1.68(3H，s)，1.66(3H，s)，1.59(3H，s)；III-m微黄色液体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.24；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ6.60(2H，s)，3.86(6H，s)，6.54(1H，d，J＝15.6Hz)，6.35(1H，dt，J＝15.6，6.0Hz)，4.53(2H，d，J＝7.2Hz)，5.57(1H，brt，J＝7.2Hz)，2.02(8H，m)，5.10(1H，brt)，5.09(1H，brt)，1.65(3H，brs)，1.59(3H，brs)，1.60(3H，brs)，1.68(3H，brs)。
实施例57化合物IV-b(3-[4-(4-乙氧基-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯醛)的制备
本例涉及到一类具有细胞毒活性的如式(IV)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯醛的一般合成方法。具体涉及到化合物IV-b(3-[4-(4-乙氧基-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯醛)的制备。本例的原料之一是化合物V-j(4-(4-乙氧基-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛)，它是由丁香醛(VI)与4-乙氧基苄醇通过实施例10的方法获得。在反应瓶中用1.5ml乙醇将化合物V-j(60mg，0.19mmol)溶解，然后加入40％的乙醛溶液(28μl，0.26mmol)，并在室温下搅拌24小时。反应结束后用氯化钠使溶液达饱和并用乙醚萃取(8ml×3)，有机层用无水硫酸钠干燥过夜，过滤，滤液浓缩得粗品，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝6∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得3-[4-(4-乙氧基-苄氧基)-3，5-二甲氧基苯]丙烯醛45mg，收率为65％。
Rf(正己烷乙酸乙酯5/2)0.411H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.68(1H，d，J＝7.6Hz)，6.63(1H，dd，J＝15.6，7.6Hz)，7.38(1H，d，J＝15.6Hz)，6.77(2H，s)，3.86(6H，s)，5.01(2H，s)，7.36(2H，d，J＝8.4Hz)，6.85(2H，d，J＝8.4)，4.04(2H，q)，1.40(3H，t)。
实施例58化合物IV-d(3-[4-法尼基-3，5-二甲氧基苯]丙烯醛)的制备 本例涉及到一类具有细胞毒活性的如式(IV)所示的3，4，5-三取代的苯丙烯醛的一般合成方法。具体涉及到化合物IV-d(3-[-法尼基-3，5-二甲氧基苯]丙烯醛)的制备。本例的原料之一是化合物III-m(3-[4-法尼基-3，5-二甲氧基苯]丙烯醇)，它是由起始原料法尼基溴和丁香醛根据实施例9制得化合物V-1，然后根据实施例20、47的方法制得。将化合物III-m(100mg，0.24mmol)溶于10mlCH2Cl2，然后在此溶液中加入吡啶氯铬酸盐三氧化铝混合物(PCC-Al2O3，750mg，0.38mmol)，室温搅拌3小时，最后过滤，滤液浓缩得粗品，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝6∶1，粗品/硅胶＝1∶50)得到化合物IV-d69mg，收率为70％。
化合物IV-d
Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.551H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.68(1H，d，J＝7.6Hz)，6.64(1H，dd J＝16.0，7.6Hz)，7.40(1H，d，J＝16.0Hz)，6.79(2H，s)，3.90(6H，s)，4.58(2H，d，J＝7.2Hz)，5.56(1H，brt，J＝6.8Hz)，2.02(8H，m)，5.10(1H，brt)，5.08(1H，brt)，1.67(3H，brs)，1.59(3H，brs)，1.60(3H，brs)，1.69(3H，brs)。
根据实施例57及实施例58之一的方法制备以下表四所实施例59及实施例60化合物 表五 下面列出表五中各化合物的理化数据IV-a微黄色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.57；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.68(1H，d，J＝7.6Hz)，6.64(1H，dd，J＝16.0，7.6Hz)，7.40(1H，d，J＝16.0Hz)，6.78(2H，s)，3.89(6H，s)，4.61(2H，brd，J＝7.2Hz)，5.55(1H，brt，J＝7.2Hz)，2.04(4H，m)，5.05(1H，brt)，1.67(3H，s)，1.65(3H，s)，1.59(3H，s)；IV-c微黄色固体，Rf(正己烷/乙酸乙酯5/2)0.38；1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ9.69(1H，d，J＝7.6Hz)，6.64(1H，dd，J＝15.6，7.6Hz)，7.40(1H，d，J＝15.6Hz)，d，6.80(2H，s)，3.91(9H，s)；为了更好地理解本发明的实质，下面分别用化合物对六种肿瘤细胞株生长的抑制作用的药理实验结果，说明其在制药领域中的新用途。
实施例61化合物IV-a对KB细胞的细胞毒活性KB(口腔上皮癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法。细胞经过24小时的孵育后，分别将新配的化合物IV-a的二甲亚砜溶液以浓度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最终浓度分别为100ug/mL，33.3ug/mL，11.1ug/mL和3.7ug/mL。72小时后，加入10μLMTT(5mg/mL)的磷酸盐缓冲液，再继续在37℃培养4小时后，离心5分钟除去未转化的MTT，每孔中加入200μL二甲亚砜，以溶解还原的MTT晶体甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶标仪在570nm波长下比色，细胞存活率由样品相对于对照品的比值计算。其中化合物IV-a对KB细胞半抑制浓度IC50由剂量效应曲线得到。
化合物IV-a的IC50为2.40×10-6M实验结论(KB细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。对KB细胞半数抑制浓度达到10-6M级别的化合物有希望发展成为抗肿瘤药物)本实验表明此类具有苯丙烯醛结构的化合物，对KB细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
根据实施例61的方法，我们测试了所有化合物对KB细胞的药理活性，具体数据以几个实施例为例(见表六)。
表六
实施例66化合物I-b对PC-3细胞的细胞毒活性PC-3(前列腺癌)细胞用F-12培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如实施例60。
化合物I-b的IC50为3.86×10-5M实验结论本实验表明此类具有苯甲醛结构的化合物，对PC-3细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
根据实施例66的方法，我们测试了所有化合物对PC-3细胞的药理活性，具体数据以几个实施例为例(见表七)表七
实施例71化合物V-k对CNE细胞的细胞毒活性CNE(鼻咽癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL链霉素。以每孔5×103细胞的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如实施例61。
化合物V-k的IC50为3.90×10-5M实验结论本实验表明此类具有苯甲醛结构的化合物，对CNE细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
根据实施例71的方法，我们测试了所有化合物对CNE细胞的药理活性，具体数据以几个实施例为例(见表八)。
表八
实施例76化合物II-b对A549细胞的细胞毒活性A549(人肺癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如实施例61。
化合物II-b的IC50为5.43×10-5M实验结论本实验表明此类具有苯丙烯酸结构的化合物，对A549细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
根据实施例76的方法，我们测试了所有化合物对A549细胞的药理活性，具体数据以几个实施例为例(见表九)。
表九
实施例81化合物III-1对BEL-7404细胞的细胞毒活性BEL-7404(人肝癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如实施例61。
化合物III-1的IC50为3.13×10-5M实验结论本实验表明此类具有苯丙烯醇结构的化合物，对BEL-7404细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
根据实施例81的方法，我们测试了所有化合物对BEL-7404细胞的药理活性，具体数据以几个实施例为例(见表十)。
表十
实施例86化合物IV-c对Hela细胞的细胞毒活性Hela(人子宫颈癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如实施例61。
化合物IV-c的IC50为2.94×10-5M实验结论本实验表明此类具有苯丙烯醛结构的化合物，对Hela细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗肿瘤作用的药物。
根据实施例86的方法，我们测试了所有化合物对Hela细胞的药理活性，具体数据以几个实施例为例(见表十一)。
表十一
为了更好地理解本发明的实质，下面分别用该类化合物的各种药物剂型例如片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂和软膏剂的制备方法，说明其在制药领域中的新应用。
实施例91片剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物IV-a为例)2000mg，按照药剂学一般压片法混匀后加辐料8000mg，压制成100片，每片重100mg。
实施例92胶囊剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物III-h为例)2000mg，按照药剂学胶囊剂的要求将8000mg辐料混匀后，装入空心胶囊，每个胶囊重100mg。
实施例93注射剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物V-k为例)2000mg，按照常规药剂学方法，进行活性炭吸附，经0.65μ微孔滤膜过滤后，填入氮气罐制成水针制剂。每只针剂罐装2ml，共罐装1000瓶。
实施例94气雾剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物III-i为例)2000mg，用适量丙二醇溶解后，加入蒸馏水及其他辐料后，制成200ml的澄清溶液即得。
实施例95栓剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物V-n为例)2000mg，将之研细加入甘油适量，研匀后加入已熔化的甘油明胶，研磨均匀，倾入已涂润滑剂的模型中，制得化合物V-n栓20颗。
实施例96膜剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物V-f为例)2000mg，将聚乙烯醇、药用甘油、水等搅拌膨胀后加热溶解，80目筛网过滤，再将化合物V-f加入到滤液中搅拌溶解，涂膜机制膜200片。
实施例97滴丸剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物II-g为例)2000mg，与明胶等基质700mg加热熔化混匀后，滴入低温液体石蜡中，共制得滴丸100丸。
实施例98外用搽剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物II-d为例)2g，按照常规药剂学方法，与乳化剂等辐料0.5g混合研磨，再加蒸馏水至50ml制成。
实施例99软膏剂用含有权利要求1和权利要求2中化合物的化合物(以化合物III-d为例)2000mg，研细后与凡士林等油性基质198g研匀即得。
权利要求
1.一种具有式(1)所示的具有细胞毒活性的3，4，5-三取代的苯丙烯类衍生物及其可药用盐或溶剂化物 式(1)其中R1，R2，或R3可以相同或不同，可以分别是氢，含1～16个碳的饱和或不饱和烃基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的芳基烷基，取代或未取代的芳基烯基，含1～8个碳的酰基，取代或未取代的烯丙基芳基；R可以是-COOH，-CH2OH，-CHO，-COOR4，-CONH2，-CONHR4，-CON(R4)2，其中R4是含1～8个碳的烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的芳基烷基；其中“取代或未取代”是指基团可以未被取代或者被取代，取代基可以选自卤素，氨基，硝基，巯基，氰基，羟基，含1～8个碳的烷基，含1～8个碳的烷氧基，含1～8个碳的酰基，芳基，芳基烷基，胺基，酰胺基，烷硫基，芳硫基。
2.根据权利要求1的化合物，其中取代基R具有下面的式(2)，式(3)，式(4)，式(5)或式(6)所示含义R＝COOCH3式(2)R＝COOCH2CH3式(3)R＝COOH 式(4)R＝CH2OH式(5)R＝CHO 式(6)。
3.根据权利要求2的化合物，其中取代基R1和R3可以相同或不同，可以分别是氢，含1～8个碳的烷基；R2可以是含1～16个碳的烷基或烯基，取代或未取代的芳基烷基，取代或未取代的芳基烯基。
4.根据权利要求3的化合物，其中R1和R3可以相同或不同，可以分别是氢、甲基或乙基；R2可以是含1～16个碳的烷基或烯基，取代或未取代的苯甲基，取代或未取代的苯基烯丙基。
5.根据权利要求1-4之一的化合物，其中取代基R是式(3)所示结构，所述化合物为下面的式I化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求1-4之一中的相同。
6.根据权利要求5的式I化合物，它们是
7.根据权利要求1-4之一的化合物，其中取代基R是式(4)所示结构，所述化合物为下面的式II化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求1-4之一中的相同。
8.根据权利要求7的式II化合物，它们是
9.根据权利要求1-4之一的化合物，其中取代基R是式(5)所示结构，所述化合物为下面的式III化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求1-4之一中的相同。
10.根据权利要求9的式III化合物，它们是
11.根据权利要求1-4之一的化合物，其中取代基R是式(6)所示结构，所述化合物为下面的式IV化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求1-4之一中的相同。
12.根据权利要求11的式IV化合物，它们是
13.一种具有式(7)所示的3，4，5-三取代的苯甲醛化合物及其可药用盐或溶剂化物 式(7)其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求1中的相同。
14.根据权利要求13的化合物，为下面的式V化合物 其中取代基R1和R3可以相同或不同，可以分别是氢，含1～8个碳的烷基，取代基R2可以是含1～16个碳的烷基或烯基，取代或未取代的芳甲基。
15.根据权利要求14的式V化合物，它们是
16.根据权利要求5中式I化合物的制备方法，包括将式V化合物通过魏锑锡反应制备得到式I化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求5中的相同。
17.根据权利要求7中式II化合物的制备方法，包括将式I化合物通过水解反应制备得到式II化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求7中的相同。
18.根据权利要求9中式III化合物的制备方法，包括将式I化合物通过还原反应制备得到式III化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求9中的相同。
19.根据权利要求11中式IV化合物的制备方法，包括将式III化合物通过氧化反应制备得到式IV化合物 或将式V化合物通过羟醛缩合制备得到式IV化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求11中的相同。
20.根据权利要求14中式V化合物的制备方法，包括将式VI化合物通过与卤代物发生取代反应制备得到式V化合物 或将式VI化合物通过与醇羟基进行缩合制备得到式V化合物 其中基团R1，R2，或R3的定义与权利要求14中的相同。
21.根据权利要求1-15之一的化合物或者它们的可药用盐或它们的溶剂化物用于制备防治肿瘤疾病药物的用途。
22.一种用于防治肿瘤疾病的药物组合物，其含有治疗有效量的作为活性成分的根据权利要求1-15之一的化合物或者它们的可药用盐或它们的溶剂化物和可药用辅料。
23.一种用于防治肿瘤疾病的药物组合物，其含有治疗有效量的作为活性成分的根据权利要求1-15之一的化合物或者它们的可药用盐或它们的溶剂化物以及与其他抗肿瘤药物以一定比例组成的混合物和可药用辐料。
24.根据权利要求22的药物组合物，其可以是注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
全文摘要
本发明涉及有机化学和药物化学领域，具体而言，本发明涉及具有细胞毒活性的3，4，5－三取代的苯丙烯类衍生物及其制备方法和用途，本发明还涉及关键中间体3，4，5－三取代的苯甲醛化合物及其制备方法和用途。经药理活性测试，上述化合物对前列腺癌细胞(PC－3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞株(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL－7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)具有较强的抑制活性，可预期作为抗肿瘤药物用途。
文档编号C07C47/277GK1680270SQ200410030668
公开日2005年10月12日 申请日期2004年4月5日 优先权日2004年4月5日
发明者赵昱, 龚景旭, 邹宏斌, 巫秀美, 白骅 申请人:浙江海正天华新药研发有限公司