专利名称：替加氟的环甘油硒代磷脂缀合物及其合成的制作方法
技术领域：
一种含替加氟的硒代环甘油硒代磷脂缀合物及其合成，涉及一种核苷类物质，具体是替加氟的硒代磷脂衍生物。
背景提要磷脂具有广泛的生理活性，大量的磷脂已被合成并证明具有良好的抗癌活性，同时它又是药物的有效载体，对肿瘤组织具有一定的靶向作用；核苷及其类似物在临床上广泛用作抗肿瘤和抗病毒药物；硒是人体必须微量元素，它具有非常明显的防癌、抗癌作用，临床结果表明，有机态硒能极为有效地提高硒的生物利用度及其作为生命必须微量元素的生理功能，且其毒性比无机硒大大降低。其化合物在治疗癌症方面发挥了重大的作用，近几年，将Se引入到药物分子中或合成新的含Se药物是一个研究的热点。但是将硒引人到磷脂核苷缀合物中，还未见文献报道。因此，合成这类化合物并研究它们的生物活性，对磷脂类新药的创制将会具有一定的指导意义。我们首先研究核苷环甘油硒代磷脂缀合物的合成及其活性。
发明内容
本发明的目的在于合成核苷的硒代环甘油磷脂缀合物，以期解决核苷类药物疗效低，毒性大等不足。
实现本发明的技术方案是本发明的化合物是一种如通式所示的替加氟的环甘油硒代磷脂缀合物
n＝2，3，6其合成方法为 下面进一详述本发明合成的替加氟的硒代环甘油磷脂缀合物的元素分析用Yanaco CHN CORDER MT-3型自动元素分析仪测定。元素分析结果及理化数据见表1。
表1.2a～3c的31P NMR，元素分析及理化数据Entry n分子式 Rf状态Yield(％)元素分析分析值(计算值)碳 氢 氮2a 2C29H50FN2O7PSe 0.53 Syrup68 52.3(52.1) 7.51(7.48) 4.21(4.19)2b 3C30H52FN2O7PSe 0.58 Syrup72 53.5(53.8) 7.79(7.77) 4.18(4.19)2c 6C33H58FN2O7PSe 0.62 Syrup56 54.9(54.6) 8.05(8.01) 3.33(3.32)说明测定比移值Rf所用的流动相是石油醚/乙酸乙酯(5∶1)；收率是柱层析后的产率。
用BRUKERAC-P400HE型仪测定测定1H NMR(以TMS为内标)和31P NMR(85％H3PO4为外标)，结果见表2。
表2.2a～3c核磁共振氢及31P NMR如下2a1H NMR(CDCl3，δppm)0.879(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.210～1.290(m，26H，(CH2)13)，1.511～1.560(m，2H，OCH2C15H31)，1.888～1.892(m，1H，1/2CH2CHN)，2.007～2.097(m，1H，1/2CH2CHN)，2.184～2.229(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.329～2.440(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.473(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.559(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.649(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，3.993(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.180～4.264(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.310～4.525(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.668～4.747(m，1H，CHOP)，5.968～5.980(m，1H，CH(O)N)，7.419(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.328，87.635ppm.
2b1H NMR(CDCl3，δppm)0.889(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.213～1.345(m，28H，(CH2)13，OCH2CH2CH2N)，1.521～1.567(m，2H，OCH2C15H31)，1.891～1.895(m，1H，1/2CH2CHN)，2.007～2.097(m，1H，1/2CH2CHN)，2.188～2.232(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.332～2.445(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.475(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.562(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.655(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，3.998(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.185～4.269(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.313～4.528(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.671～4.751(m，1H，CHOP)，5.969～5.982(m，1H，CH(O)N)，7.421(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.528，87.815ppm.
2c1H NMR(CDCl3，δppm)0.883(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.215～1.367(m，34H，(CH2)13，OCH2(CH2)4CH2N)，1.535～1.578(m，2H，OCH2C15H31)，1.895～1.898(m，1H，1/2CH2CHN)，2.012～2.223(m，1H，1/2CH2CHN)，2.191～2.237(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.362～2.485(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.485(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.575(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.667(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，4.002(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.196～4.273(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.333～4.558(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.677～4.758(m，1H，CHOP)，5.968～5.981(m，1H，CH(O)N)，7.423(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.435，87.725ppm.
我们研究了化合物(2a～c)对人体对膀胱癌细胞T-24抑制作用的体外试验，本试验选用体外连续培养的膀胱癌细胞株。细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基，37℃、5％CO2条件下；细胞倍增时间为24～30h.以替加氟作为参照。其结果见表3。
表3化合物2a～c对膀胱癌细胞T-24抑制作用(半数置死量IC50，μg/ml)Entry Tegafur 2a 2b 2cT-24 127 28 37 41从表3可知，化合物2a～c对膀胱癌细胞T-24生长抑制效果优于原药替加氟，说明引入硒元素，增强了抗癌活性。
替加氟的环甘油硒代磷脂缀合物是一类未见文献报道新化合物。我们设计经“一锅法”使六乙基亚磷酰三胺依次与羟烷基替加氟、甘油醚及硒反应制得。实验表明上述方案是完全可行的。所以通过本方法可以成功地实现核苷的硒代磷脂缀合物的合成。
化合物(2a～c)的31P NMR表现为强度相等的双峰，这是因为反应产物是由两组非对映构体组成。
环甘油硒代磷脂缀合物是一类新型的化合物，其光谱性质未见报道。它们的31P NMR值为87ppm左右，而相应的硫代磷脂缀合物的31P NMR值为82ppm左右。它们31P NMR这些差异可以从四配位鳞的分子结构得到解释。
对于四配位磷分子中的P＝X(X＝O，S，Se)键，除一个σ键和一个pπ-dπ键外，还有一个反馈键，即由X原子提供外层孤对电子，与磷原子的3d空轨道形成的π键。由于磷原子的3d轨道参与成键，从而使磷原子的核屏蔽效应增大，所以，它与三配位磷化合物相比，其31P NMR出现在较高场。而对于P＝O、P＝S、P＝Se键，O，S，Se的原子半径是依次增大，因此，反馈键的强度是P＝O＞P＝S＞粮食P＝Se，即P＝Se型化合物磷原子上的屏蔽不如P＝S型化合物，P＝S型化合物不如P＝O型化合物。所以，在其他基团相同时，P＝Se型化合物的31P NMR比相应的P＝S型化合物出现在低场。
具体实施例方式
1.替加氟的硒代环甘油磷脂缀合物的合成将0.742ml(3.0mmol)六乙基亚磷酰三胺溶于75ml无水苯中，加入碘粉38mg(0.15mmol)，加热回流直到生成的白色沉淀消失，加入0.732g(3.0mmol)羟烷基替加氟，在65℃下搅拌8h，加入0.948g(3.0mmol)1-十六烷氧基-2，3-丙二醇，搅拌5h，加入硒237mg(3.0mmol)，搅拌0.5h，减压去掉溶剂，将残余物进行柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯＝5∶1)，按表1中比移值收集。
2.抗肿瘤活性测定首先以DMSO为溶剂将样品和对照物分别稀释为10，0.1mg.ml-1，再分别取10ul加入到完全培养基1ml中，使之在实验中的终浓度为100ug.ml-1、1mg.ml-1。同时以不加样品的DMSO为实验阳性对照。
以完全培养基为溶剂，分别配制成100，10和1ug.ml-1，作为实验使用。同时以完全培养基作为阴性对照。
细胞铺板与观察计数取正常生长处于对数期的T-24和BGC-823细胞，用0.02％EDTA消化液将细胞从种子瓶中消化下来，制备成细胞浓度为1.5×104个/ml的细胞悬液，将细胞悬液接种于24孔板，1ml/孔，正常培养24h后，吸取培养基，换入各组含有测试样品的培养基继续培养。
给药后，并分别于给药后24、48、72、96、120h观察细胞生长状态，同时消化各组仍处于生长状态的活细胞，进行细胞计数。得出样品对癌细胞的抑制作用结果。在不同时段，在倒置显微镜下，可清晰的观察到对照组细胞生长正常。细胞排列紧密，呈对数生长状态。细胞分裂指数相为恶性肿瘤细胞分裂指数状态。以DMSO为溶剂组由于DMSO对细胞有一定的毒副作用，因此在实验中设置空白组。在给药组，细胞分裂指数相下降。随药物农度的增加，其下降趋势增大，细胞死亡增加，存活细胞出现缩圆、胞质浓缩、精糙、颗粒性内涵物增加。
权利要求
1.一种含替加氟的硒代环甘油磷脂类化合物，其特征在于该化合物的通式为
2.一种如权利要求1所述的替加氟的硒代环甘油磷脂类化合物合成方法，其特征在于通过“一锅法”，使六乙基亚磷酰三胺依次与羟烷基替加氟、甘油醚及硒反应，生成替加氟的环甘油硒代磷脂缀合物(2)。反应式为
全文摘要
含替加氟的硒代环甘油磷脂类化合物及其合成涉有机硒及一种核苷类物质。该化合物的结构式如通式所示如上式化合物的合成，是使六乙基亚磷酰三胺依次与羟烷基替加氟、甘油醚及硒反应。经抗肿瘤活性测定，本发明化合物对人体膀胱癌抑制效果比原药替加氟好。因此，硒的引入是提高替加氟的磷脂缀合物活性的有效途径之一。
文档编号C07H19/06GK1634958SQ20041004692
公开日2005年7月6日 申请日期2004年11月12日 优先权日2004年11月12日
发明者许新华, 周冰, 陈雄 申请人:湖南大学