专利名称：一种从绿茶中制备高纯度β-胡萝卜素的方法
技术领域：
本发明属于绿茶深加工技术，涉及一种从绿茶中提取纯化e —胡萝卜素的方法。
背景技术：
茶叶作为一种风味特色和营养保健功能兼具的饮品，在我国已存在上千年历史，是我国 重要的经济作物和出口创汇的农产品。当前世界茶业面临茶叶产量增长速度大于消费量、茶 叶(特别是大宗绿茶)出口价格下跌等矛盾，传统茶业产业结构涵待调整，通过茶叶深加工 和综合利用，实现茶叶产品多元化，提高产业关联度可促进我国茶产业的可持续发展。茶叶 深加工领域中功能性成份的提取和利用是茶叶资源综合利用的重要途径，目前主要集中于茶 多酚、茶氨酸、茶黄素和茶多糖等物质，而胡萝卜素类物质的提取纯化及利用却未涉及。
e -胡萝卜素(e-carotene)是一种广泛存在于植物中的脂溶性类胡萝卜素，属四萜 类化合物，与人体健康密切相关，具有很高药用价值如抗癌、抗氧化、抗辐射、增强免疫力
等功能，且是人体必需的维生素VA的重要来源。陈宗懋报道茶叶中的e-胡萝卜素含量可达
600mg/kg,王新超等总结了已报道的几种主要植物的P—胡萝卜素含量差异，茶叶列第三， 仅次于枸杞和苜蓿，约是胡萝卜的四倍。但枸杞和苜蓿资源稀缺，作为提取原料成本太高。 王新超等系统分析测定了茶树不同部位叶片、不同季节茶叶的e-胡萝卜素含量，研究发现春
季、夏季和秋季茶树的一芽二叶部位(通常为绿茶加工原料的采摘部位)的e-胡萝卜素含量
分别为44. 3、 127. 1和403. 5 mg/kg，而春季茶树的3、4、5叶片的P -胡萝卜素含量分别可达600.5 338.7和337.6。名优绿茶、中高档绿茶通常以茶树的一芽二叶作为原料，春季采摘，以生产出 高品质风味的春茶。而大量的春茶的茶稍余叶和夏秋茶叶未得到充分利用，少部分加工为低 档绿茶贱卖，夏秋茶农民不愿意采摘，致使大量生物资源浪费。我国茶叶种植面积世界第一， 是绿茶生产、消费大国和贸易大国，大宗绿茶近年出口价格不断走低，增加茶叶资源的综合 利用途径，对于农业的可持续发展和创建节约型社会意义深远。
发明内容
本发明目的是要提供一种从绿茶特别是从春茶的茶稍余叶和夏秋茶叶等低档绿茶中提取
纯化e -胡萝卜素(P-carotene)的方法。
本发明所采取的技术方案如包括下述步骤 (1)茶叶前处理
选用未变质的绿茶(低档绿茶更佳)，在室温下经机械粉碎至100-300目的固体粉末，绿 茶粉用甲醇、乙醇和H20混合液或其中至少一种溶液在18-35'C条件下萃取0.5-12.0小时，并 搅拌(搅拌转速100-400r/min)，静置，过滤，滤渣减压干燥,绿茶粉与上述提取液的质量 体积比(g/ml)为l:2-1:30。
(2) 绿茶e -胡萝卜素粗提液制备
从步骤(1)中的滤渣用提取液在15-50'C条件下提取0.5-24.0小时,并搅拌(搅拌转速 100-400r/min)，静置，过滤，滤液冷冻干燥浓缩至原体积的1/5-2/3，得到绿茶P -胡萝卜 素粗提液。所述提取液为乙酸乙酯、丙酮、正己垸、异己垸、二氯甲垸和三氯甲垸中的一种 或多种按比例混合。茶叶粉末与提取液的质量体积比(g/ml)为l :2-1:35。
(3) 绿茶e -胡萝卜素的纯化制备
从步骤(2)所得绿茶e -胡萝卜素粗提液上柱色谱进行梯度洗脱，分部收集，真空冷冻
千燥，得高纯度绿茶e-胡萝卜素。柱层析所用介质为硅胶或氧化铝。所用洗脱液为乙酸乙 酯、丙酮、正己垸、异己烷、环己垸、二氯甲垸和三氯甲烷中的两种,其浓度梯度比例变化为
1: 9-5: 5 (体积比)。洗脱流速为0. 3-55. Oml/min。 本发明具有显著的有益效果
工艺流程和所需设备简单，并且原料采用低档绿茶,生产成本低廉，对茶叶中的P -胡萝 卜素提取率高及纯度高。通过与某国外著名试剂公司的标准品比对表明，本发明所获得的P
-胡萝卜素制品色谱峰更单一 (见图i和2)。从绿茶中制备e -胡萝卜素所获制品纯度高 与以绿茶作为原料，其e-胡萝卜素含量高、相关干扰物质含量较少及提取工艺等有关。本 发明的重要意义在于能使茶叶资源特别是低档绿茶得到更为充分的利用，拓展了绿茶中天然 产物的开发与利用前景。
图1对比公司的P -胡萝卜素标准品HPLC图谱(waters HPLC); 图2本发明所制备的0 _胡萝卜素HPLC图谱(waters HPLC)。
具体实施方式
实施例1:
(1) 取浙江杭州茶叶产区夏季采制的低档绿茶片，在室温下经机械粉碎至200目。绿茶 粉用60^乙醇水溶液(g/ml， 1:10)在25。C条件下提取5.0小时并搅拌(搅拌转速150r/min)。 静置，过滤，滤渣减压干燥；
(2) 步骤(1)中的滤渣用正己垸(g/ml， 1:12)在28。C条件下提取6小时，并搅拌(搅 拌转速200r/min)，静置，过滤，滤液冷冻干燥浓縮至原体积的1/3，得到绿茶e—胡萝卜 素粗提液；
(3) 步骤(2)所得绿茶P -胡萝卜素粗提液上硅胶柱色谱，洗脱液为乙酸乙酯和正己 烷，洗脱梯度顺序为1.0: 9.0; 2.0: 8.0; 3.0: 7.0; 3. 5:6. 5 (乙酸乙酯正己垸,V:V)， 流速为15ml/min,流出液分部收集，检测，合并，真空冷冻干燥得到高纯度的绿茶P -胡萝
卜素。hplc分析表明，所制得的e-胡萝卜素为单一色谱峰。
实施例2:
(1) 取浙江开化茶叶产区秋季采制的低档绿茶片，在室温下经机械粉碎至300目。绿茶 粉用含有乙醇、甲醇和水的混合液(1: 1: 0.8)在18。C条件下提取2.5小时并搅拌(搅拌转 速150r/min)。静置，过滤，滤渣减压干燥。绿茶粉与上述提取液的质量体积比(g/ml)为 1:7.5;
(2) 步骤(1)中的滤渣用正己烷和丙酮(1:1)在22。C条件下提取3小时,并搅拌(搅拌 转速200r/min)，静置，过滤，滤液冷冻干燥浓縮至原体积的1/3，得到绿茶e—胡萝卜 素粗提液；
(3) 步骤(2)所得绿茶e -胡萝卜素粗提液上氧化铝柱色谱，洗脱液为三氯甲烷和异 己烷，洗脱梯度顺序为1.5: 8.5; 2.3: 7.7; 3: 7; 3.6:6.4(三氯甲垸:异己垸，V:V),流 速为12ml/min,流出液分部收集，检测，合并，真空冷冻干燥得到高纯度的绿茶0 -胡萝卜
素。hplc分析表明，所制得的e-胡萝卜素为单一色谱峰。
权利要求
1、一种从绿茶中提取β-胡萝卜素的方法，其特征在于以下工艺步骤1)选用未变质的绿茶，把它粉碎为固体粉末，此绿茶粉用甲醇、乙醇、H2O的混合剂或其中至少一种溶剂在18-35℃条件下萃取0.5-12.0小时，并搅拌，静置，过滤，滤渣减压干燥，绿茶粉与上述提取液的质量体积比g/ml为1∶2-1∶30；2)滤渣用提取液在15-50℃条件下提取0.5-24.0小时，并搅拌，静置，过滤，滤液冷冻干燥浓缩至原体积的1/5-2/3，得到绿茶β-胡萝卜素粗提液，所述提取液为乙酸乙酯、丙酮、正己烷、异己烷、二氯甲烷和三氯甲烷中的一种或多种混合，茶叶粉末与提取液的质量体积比g/ml为1∶2-1∶35；3)绿茶β-胡萝卜素粗提液上柱色谱进行梯度洗脱，分部收集，真空冷冻干燥，得高纯度绿茶β-胡萝卜素，柱层析所用介质为硅胶或氧化铝，所用洗脱液为乙酸乙酯、丙酮、正己烷、异己烷、环己烷、二氯甲烷和三氯甲烷中的两种，其浓度梯度体积比的比例变化为1∶9-5∶5，洗脱流速为0.3-55.0ml/min。
全文摘要
一种从绿茶中制备高纯度β-胡萝卜素的方法。主要内容如下将粉碎的绿茶粉先以甲醇、乙醇和H<sub>2</sub>O混合液或其中至少一种溶剂萃取，萃取后的茶渣减压干燥后，再以乙酸乙酯、丙酮、正己烷、异己烷、二氯甲烷和三氯甲烷中的一种或多种作提取液，提取绿茶β-胡萝卜素的粗提液，粗提液浓缩后用上硅胶或氧化铝柱色谱进行梯度洗脱层析，所用洗脱液为乙酸乙酯、丙酮、正己烷、异己烷、环己烷、二氯甲烷和三氯甲烷中的两种。分部收集流出液，真空冷冻干燥，得高纯度绿茶β-胡萝卜素。本发明适用普通绿茶特别是低档绿茶作原料，具有工艺流程和所需设备简单、对茶叶中的β-胡萝卜素提取率高及纯度高等特点。
文档编号C07C403/00GK101182303SQ20071016448
公开日2008年5月21日 申请日期2007年12月5日 优先权日2007年12月5日
发明者阳 叶, 浩 成, 陈小强 申请人:中国农业科学院茶叶研究所