专利名称：：化学连接物与可切割的底物以及它们的偶联物的制作方法
技术领域：
：本发明提供了附联至药物及配体且可于体内切割的连接物及可切割的底物。该连接物及可切割的底物可用于形成本发明的细胞毒素的药物前体及偶联物，连同其他诊断部分及治疗部分。
背景技术：
：许多治疗剂(特别是那些在癌症化学治疗中尤其有效的治疗剂)在体内经常表现出急性毒性，特别是骨髓毒性及黏膜毒性连同慢性心脏毒性及神经毒性。这种高毒性可限制其应用。发展出更多且更安全的特异性治疗剂(特别是抗肿瘤剂)用于对抗肿瘤细胞有较高功效的以及这些产物的副作用(毒性、破坏非肿瘤细胞等)的数目的减少以及严重度的减轻是令人希望的。一些现存治疗剂的另一项困难是它们在血浆中的稳定性小于最佳。添加官能团来稳定这些化合物导致活性的显著降低。因此，识别一些方式来稳定化合物同时维持可接受的治疗活性水平，这是令人希望的。数十年来，对于更加具有选择性的细胞毒剂的研究一直是极为活跃的，限制剂量的毒性(即细胞毒素对正常组织产生的非希望的活性)是癌症治疗失败的主要原因之一。例如，CC-1065及多卡霉素类(duocarmycins)已知是极为强力的细胞毒素。Upjohn公司首次在1981年从泽耳链霉菌(Str印tomyceszelensis)中分离了CC-1065(Hankaetal.，J.Antibiot.31:1211(1978);Martinetal.，J.Antibiot.33:902(1980);Martinetal.，J.Antibiot.34:1119(1981))且发现CC-1065在体外和在实验动物中都具有有效的抗肿瘤与杀菌活性(Lietal.，CancerRes.42:999(1982))。CC_1065在小沟内与双链B-DNA相结合(Swensonetal.，CancerRes.42:2821(1982))，其中序列优先为5'-d(A/GNTTA)-3'以及5'-d(AAAAA)-3'，并利用其在分子中呈现的CPI左旋(left-hand)单位对3'腺嘌呤的N3位置进行烷基化(Hurleyetal.，Science226:843(1984))。尽管CC-1065具有有效的广泛的抗癌活性，但因为CC-1065引起了实验动物的迟发性死亡，所以它不能被用于人类。CC-1065以及多卡霉素的许多同系物以及衍生物在本领域是已知的。已对许多化合物的结构、合成以及特性的研究进行综述。参见，例如，Bogeretal.，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.35:1438(1996);以及Bogeretal.，Chem.Rev.97:787(1997)。KyowaHakkoKogyaCo.，Ltd.的一个团队已经制备了许多CC-1065衍生物。参见，例如，美国专利号5，101，038;5，641，780;5，187，186;5，070，092;5，703，080;5，070，092;5，641，780;5，101，038;以及5，084，468;以及已公开的PCT申请WO96/10405以及已公开23的欧洲申请0537575Al。UpjohnCompany(PharmaciaUpjohn)已经在积极制备CC-1065的衍生物。参见，例如，美国专利号5，739，350;4，978，757、5，332，837、以及4，912，227。研究也已集中于处于药物前体形式的新治疗剂的开发，药物前体形式是能够在体内通过其结构的某种化学的或酶的修饰而被转变成药物(活性治疗化合物)的化合物。用于降低毒性的目的，这种转变优选地局限于作用部位或靶标组织部位，而非循环系统或非靶标组织。然而，即使药物前体也有问题，例如由于在药物前体到达病人体内所希望的部位之前分解药物前体或活化药物前体的酶的存在，导致许多药物前体特征为血液中及血清中的稳定性低。必治妥梅尔施贵宝公司(Bristol-MyersSquibb)已经说明了特定溶酶体酶可切割的抗肿瘤药物偶联物。参见，例如美国专利号6，214，345。这个专利提供了一个氨基苄基氧羰基。西雅图基因公司(SeattleGenetics)已公布了多项申请，美国专利申请2003/0096743及美国专利申请2003/0130189，它们说明了在药物递送剂中的对氨基节醚类。在这些申请中说明的连接物限于氨基苄醚组合物。其他团体也说明了连接物。例如参见deGrootetal.，J.Med.Chem.42，5277(1999);deGrootetal.J.Org.Chem.43，3093(2000);deGrootetal.，J.Med.Chem.66,8815，(2001);W002/083180;Carletal.，J.Med.Chem.Lett.24，479，(1981);Dubowchiketal.，Bioorg&Med.Chem.Lett.8,3347(1998)。这些连接物包括氨基节醚间隔物、延长的电子级联及环化间隔物系统、环化消除间隔物例如w-胺基胺基羰基以及对胺基苯氧羰基连接物。细胞毒素药物的稳定性，包括体内稳定性仍是一个有待着手解决的重大议题。此外，多种化合物的毒性使其较为无用，所以需要可降低药物毒性的组合物，如形成可切割的药物前体。因此，尽管有本领域的进展，仍然需要开发用于哺乳动物以及特别为人类的治疗的改良的治疗剂，更确切地为细胞毒素，该细胞毒素相对于具有相似结构的已知化合物表现出作用的高特异性、降低的毒性、及改善的血液中的稳定性。本发明应对了这些需要。发明概要本发明涉及药物-配体偶联物，其中该药物与配体通过一个肽基连接物或其他连接物相连接，并涉及药物-酶可切割的底物偶连物。这些偶联物是强力的细胞毒素，可以活性形式被选择性递送至有关的作用部位，然后被切割来释放活性药物。—个实施方案是具有以下化学式的一种化合物(Op-F—(L')'射L1是一个自消连接物；m是一个整数0、l、2、3、4、5、或6;F是一个连接物，包括以下结构式24其中AA1是独立地选自下组的一个或多个成员，该组的构成为天然氨基酸类和非天然a氨基酸类；c是从1到20的一个整数；L2是一个自消连接物并且包括其中R"、R，以及R"各自独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基，并且w是从0到4的一个整数；o是1;」是一个连接物成员；P是0或1;f是选自下组的一个成员，该组的构成为受保护的反应性官能团、未受保护的反应性官能团、可检测的标记、以及靶向剂；并且D包括一个结构式其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原子、一个单键之一员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；员；X是选自0、S、以及NR"中的一个成员；R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基之-的成R3是0R11，其中，R"是选自下组之一的成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(0)R12R13、C(0)OR12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12、以及SiR12R13R14，其中，R12、R"、以及R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基之一的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R4、R4'、R5以及RS'是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、0C(0)NR15R16、OC(O)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5，的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系；其中n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH2_，其中X1是一个离去基团，其中，R11将所述药物连接至L1(若存在的话)上，或连接至F上；或它的一种药学上可接受的盐。另一个实施方案是具有以下化学式的一种化合物射L1是一个自消连接物；m是一个整数0、l、2、3、4、5、或6;F是一个连接物，包括以下结构式其中AA1是独立地选自下组的一个或多个成员，该组的构成为天然氨基酸类和非天然a氨基酸类；c是从1到20的一个整数；L2是一个自消连接物；o是0或1;L4是一个连接物成员；P是0或1;f是选自下组的一个成员，该组的构成为受保护的反应性官能团、未受保护的反应性官能团、可检测的标记、以及靶向剂；并且D包括一个结构式其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原子、一个单键之一的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及服23中的一个成员；R"是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；W是选自下组的一个成员，该组的构成为(=0)、SR"、NHR11以及0R11，其中，R"是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(0)R12R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12以及SiR12R13R14，其中，RR"、以及R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R4、R4'、R5以及RS'是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、OC(0)NR15R16、OC(O)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5，的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，其中n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；其中，R4、R4'、R5、以及R5'中的至少一个将所述药物连接至L1上(若存在的话)，或连接至F上，并且包括其中v是从1到6的一个整数；并且每一个R"、R"'、R28以及R"'独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH2_，其中X1是一个离去基团；或它的一种药学上可接受的盐。又另一个实施方案是具有以下化学式的一种化合物其中U是一个自消连接物；m是一个整数0、l、2、3、4、5、或6;F是一个连接物，包括以下结构式其中AA1是独立地选自下组的一个或多个成员，该组的构成为天然氨基酸类和非天然(Op—F—(L')巾——Da氨基酸类；c是从1到20的一个整数；L3是一个包括伯胺或仲胺或羧基官能团的一个间隔基团；其中如果L3存在，m是0并且或者L3的胺与D的一个悬垂的羧基官能团形成一个酰胺键，或者L3的羧基与D的一个悬垂的胺官能团形成一个酰胺键；o是0或1;!^是一个连接物成员，其中！^包括直接附联于(AA^的N末端，其中R2Q是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员，每一个RR^、R，以及R^独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；并且s和t独立地是从l到6的整数；p是l;f是选自下组的一个成员，该组的构成为受保护的反应性官能团、未受保护的反应性官能团、可检测的标记、以及靶向剂；并且D包括一个结构式其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原子、一个单键的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及服23中的一个成员；R"是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；R3是选自下组的一个成员，该组的构成为(=0)、SR"、NHR11以及0R11，29其中R"是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(O)R12R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12以及SiR12R13R14，其中RR"、以及R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R4、R4'、R5以及RS'是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、0C(0)NR15R16、OC(O)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5，的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，其中n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X'是一个离去基团，其中，R4、R4'、R5、R5'、R15或R16中的至少一个将所述药物连接至L1上(若存在的话)，或连接至F上；或它的一种药学上可接受的盐。另一个实施方案是具有以下结构式的一种化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>其中，L1是一个自消间隔物；m是一个整数0、l、2、3、4、5、或6;X2是一个可切割的底物；并且D包括一个结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原子、一个单键的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及服23中的一个成员；R"是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；R3是选自下组的一个成员，该组的构成为(=0)、SR"、NHR11以及0R11，其中R"是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(O)R12R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12以及SiR12R13R14，其中RR"、以及R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X'是一个离去基团R4、R4'、R5以及RS'是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、0C(0)NR15R16、OC(O)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5，的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，其中n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；其中，RA、R"、RS、以及RS'中的至少一个将所述药物连接至U上(若存在的话)，或连接至X2上，并且是选自下组，其构成为其中每一个R，R^、R31以及R"'独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；并且v是从l到6的一个整数；或它的一种药学上可接受的盐。另一个实施方案是具有以下结构式的一种化合物其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；z和X独立地是选自0、S以及NR23中的成员；R"是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；R3是选自下组的一个成员，该组的构成为(=0)、SR"、NHR11以及0R11，R"是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(O)R12R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12以及SiR12R13R14，其中RR"、以及R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X1是一个离去基团；并且RS、RS'、以及R"是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=服16、以及0(CH2)nN(CH3)2n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；或它的一种药学上可接受的盐。另一个实施方案是具有以下结构式的一种化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；Z和X独立地是选自0、S以及NR23中的成员；R"是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；R4、R4'、R5、R5'以及R^是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NR化、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5'的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系；其中n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子，其中，R^包括一个或多个可切割的基团；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X'是一个离去基团；或它的一种药学上可接受的盐。另一个实施方案是选自以下化学式的一种化合物34<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>其中r是在从0到24的范围中的一个整数。这些化合物中的任何一种都可用作药物_配体偶联物物或用来形成药物_配体偶联物物。在又另一个方面，本发明涉及药学配制品。此类配制品典型地包含本发明的一种偶联化合物以及一种药学上可接受的载体。在又另一个方面，本发明涉及使用本发明的偶联化合物的方法。例如，本发明提供一种杀细胞的方法，其中本发明的偶联化合物以足够杀死该细胞的量施予该细胞。在一个优选的实施方案中，该细胞是一种肿瘤细胞。在另一个实施方案中，本发明提供一种在哺乳动物受试者中延缓或停止肿瘤生长的方法，其中本发明的偶联化合物是以足够延缓或停止肿瘤生长的量施予该受试者。从以下详细说明的综述，本发明的其他方面、优点、以及目的将是明显的。附图简要说明参照下列各图来说明本发明的非限制性且非排他性实施方案。在附图中，除非另外指明，类似的参考符号是指各图中类似的部分。为了更好理解本发明，将参照后文详细说明部分结合附图研读作说明，附图中图1至图3为第一体内调查研究中，肿瘤体积平均数、肿瘤体积中位数、及体重变化％中位数分别相对于给药后天数的图；图4至图6为第二体内调查研究中，肿瘤体积平均数、肿瘤体积中位数、及体重变化％中位数分别相对于给药后天数的图；图7包含对数曲线，这些曲线匹配LNCaP细胞及786-0细胞中多种抗体_毒素偶联物及所得EC5。值；图8包含了第三体内研究中，肿瘤体积平均数相对于给药后天数的线图；图9包含了第三体内研究中，体重变化中位数相对于给药后天数的线图；图10包含了第四体内研究中，肿瘤体积平均数相对于给药后天数的线图；图11包含了第四体内研究中，体重变化中位数相对于给药后天数的线图；图12是第五体内研究中，肿瘤体积平均数相对于给药后天数的线图；图13是第六体内研究中，肿瘤体积平均数相对于给药后天数的线图；图14是第七体内研究中，肿瘤体积平均数相对于给药后天数的线图；图15是第八体内研究中，肿瘤体积平均数相对于给药后天数的线图；以及图16是第九体内研究中，肿瘤体积平均数相对于给药后天数的线图。本发明的详细说明縮写"Ala"表示丙氨酸。"Boc"表示叔丁氧羟基。"CPI"表示环丙基吡咯并喷哚。"Cbz"表示苄氧羰基。"DCM"表示二氯甲烷。"DDQ"表示2，3_二氯_5，6_二氰基_1，4_苯醌。"DIPEA"表示二异丙基乙胺"DMDA"表示N，N'_二甲基乙二胺"RBF"表示圆底烧瓶"DMF"表示N，B-二甲基甲酰胺"HATU"表示N-[[(二甲氨基)-l氢-l，2，3-三唑[4，5_b]吡啶-l-基]亚甲基]-N-甲基甲胺鎗六氟磷酸N-氧化物符号"E"代表酶可切割的基团。"EDCI"表示1_(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺。38"FM0C"表示9-芴甲氧羰基。"HOAt"表示7-氮杂-羟基苯并三唑。"Leu"表示亮氨酸。"PABA"表示对氨基苯甲酸。"PEG"表示聚乙二醇。"DBU"表示1，8_重氮二环(5.4.0)十-碳_7_烯。"DIEA"表示二异丙基乙胺。"PMB"表示对甲氧节基。"TBAF"表示氟化四丁基铵。"TBSO"表示叔丁基二甲基硅烷基醚。"TEA"表示三乙胺。"TFA"表示三氟乙酸。"EDC"表示(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)"TBTU"表示(2-(1氢-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基四氟硼酸脲鎗)"HOBT"表示N_羟基苯并三唑符号"Q"表示一种治疗剂、诊断剂、或可检测的标记。除非另外限定，此处所使用的所有技术和科学术语具有本发明所属
技术领域：
普通技术人员所通常理解的相同意义。总体而言，此处所使用的命名法以及下文说明的细胞培养、分子遗传学、有机化学及核酸化学及杂交中的实验室程序都是本领域所熟知且常用的程序。使用标准技术进行核酸合成及肽合成。总体上，酶促反应及纯化步骤是根据制造商的说明书来进行的。技术及程序总体上是根据本领域的常规方法及本文件全文所提供的不同的一般性参考文献来进行(总体上参见，Sambrooketa1.^LECULARCL0ning:AL旭oRATORYMANUAL，2ded.(1989)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.，该文献通过引用接合在此)，将它们提供用于贯穿本文件全文。此处所使用的命名以及后文说明的分析化学及有机合成的实验室程序为本领域所熟知且常用的程序。标准技术或其修改用于化学合成及化学分析。术语"治疗剂"旨在表示一种化合物，当该化合物以一种治疗上有效的量存在时，可对哺乳动物产生一种所希望的治疗效果。用于治疗癌症，希望该治疗剂也能够进入靶标细胞。术语"细胞毒素"旨在表示一种治疗剂，该治疗剂对癌细胞具有所希望的细胞毒性的效应。细胞毒性一词表示该药剂可中止细胞的生长或杀死细胞。示例性的细胞毒素包括(通过举例而不限于)考布他汀、多卡霉素、CC-1065抗肿瘤抗生素、蒽环类及相关化合物。其他细胞毒素包括真菌毒素、蓖麻毒蛋白及其类似物、剌孢霉素(calicheamycins)、阿霉素(doxirubicin)及美登素衍生物。术语"药物前体"以及术语"药物偶联物"在此处互换使用。两术语都指一种化合物，该化合物当仍以偶联形式时对细胞相对无毒，但通过位于靶标细胞内部或靶标细胞附近的条件(例如酶)可被选择性分解成为药理学活性形式。术语"标记物"旨在表示在肿瘤或其他医疗病情的表征中有用的一种化合物，例如可用于诊断、肿瘤的进展及由肿瘤细胞所分泌的各项因子的检定分析的化合物。标记物被视为"诊断剂"的一个子集。与酶的切割结合所使用的术语"可选择的"是指连接物部分的切割速率高于具有随机氨基酸序列的肽的切割速率。术语"靶定基"及"靶向剂"旨在表示一个部分，该部分(1)可导引其所附联的实体(例如治疗剂或标记物)至靶标细胞，例如导引至特定类型的肿瘤细胞或(2)优选地在靶标组织(例如肿瘤)被活化。靶定基或靶向剂可以是小分子，旨在包括非肽类及肽类二者。靶定基也可以是大分子，包括糖类、凝集素、受体、受体的配体、蛋白质(如BSA、抗体等)。在一个优选的实施方案中，耙定基是抗体或抗体片段，更优选地是单克隆抗体或单克隆抗体片段。术语"自消间隔物"指一个双官能的化学部分，该化学部分可共价连接两个化学部分到一个正常稳定的三联分子中。如果键合至第一部分的键被切割，则该自消间隔物可自发从第二部分分离。术语"可检测的标记"旨在表示具有可检测的物理特性及化学特性的一个部分。术语"可切割的基团"旨在表示在体内不稳定的部分。优选地"可切割的基团"允许通过从偶联物的其余部分切割标记物或治疗剂而让该标记物或治疗剂活化。就工作上的定义，连接物优选在体内由生物环境切割。这种切割可来由任何方法来进行而没有限制，例如酶法、还原法、pH法等方法。优选地，可切割的基团被选择以使得活化发生在所希望的作用部位，该希望的作用部位可位于或接近于靶标细胞(例如癌细胞)或组织的位置，如在治疗剂作用部位或标记物活性部位。此类切割可以是酶的，并且示例性经酶可切割的基团包括天然氨基酸或以天然氨基酸为端基的肽序列，并且这些基团在它们的羧基端被附联至该连接物。虽然切割速率提升的程度对本发明并非关键性的，但可切割连接物的优选实例是其中至少约10%的可切割基团在给药后的24小时内在血流中进行切割，最优选至少是35%。术语"配体"表示与受体、底物、抗原决定簇、或靶细胞或靶组织上的其他结合部位进行特异性结合或反应性关联或复合的任何分子。配体的实例包括抗体及其片段(例如单克隆抗体或其片段)、酶菜(例如溶解纤维蛋白的酶)、生物反应修饰剂(例如白介素、干扰素、促红细胞生成素、或集落剌激因子)、肽激素、及其抗原结合片段。术语"环化反应"当用来表示肽连接物、肼连接物、或二硫化物连接物的环化时，指示该连接物环化成为一个环，并起始药物_配体复合体的分离。环化率可于非原位测定，并且当至少形成90%、95%、或100%产物时反应完成。术语"多肽"、"肽"、以及"蛋白"在本文中可以互换使用，指氨基酸残基的聚合物。这些术语应用于这样的氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是对应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物，连同应用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。这些术语也涵盖术语"抗体"。术语"氨基酸"是指天然存在的氨基酸及合成的氨基酸，连同氨基酸类似物及氨基酸模拟物，该氨基酸类似物与氨基酸模拟物是以类似于天然存在的氨基酸的方式发挥功能的。天然存在的氨基酸是由遗传密码子编码的氨基酸，连同随后被修饰的那些氨基酸，例如羟基脯氨酸、Y-羧基谷氨酸酯(盐)、以及邻磷酸丝氨酸。氨基酸类似物指的是具有与天40然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，即，键合至氢的a碳、羧基、氨基及R基，例如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基硫鎗。这些类似物具有被修饰的R基团(如正亮氨酸)或被修饰的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。一个可以使用的氨基酸具体是瓜氨酸，它是精氨酸的前体，并与肝脏中尿素的形成有关。氨基酸模拟物指的是这样的化学化合物，它具有与氨基酸的普通化学结构不同的结构，但发挥作用的方式与天然存在的氨基酸类似。术语"非天然氨基酸"旨在表示上述20种天然氨基酸的"D"立体化学形式。进一步须了解术语非天然氨基酸包括天然氨基酸的同系物及天然氨基酸的合成修饰形式。合成修饰形式包括但不限于具有縮短或延长至不超过两个碳原子的亚烷基链的氨基酸、包括任选取代的芳基的氨基酸、以及包括卣化基团(优选是卣化烷基和芳基)的氨基酸。当附联至本发明的连接物或偶联物时，氨基酸是处于"氨基酸支链"形式，此处氨基酸的羧酸基已经以酮基(C(O))替换。因此，例如丙氨酸侧链是-C(0)-CH(Mg-CH3坐坐寸寸。氨基酸及肽可通过封闭基团而受到保护。封闭基团是保护氨基酸或肽的N-端避免发生不希望的反应的一个原子或一个化学部分，并可在药物_配体偶联物物合成过程中使用。整个合成期间封闭基团应仍附联至N-端，而在药物偶联物的合成完成后，可通过化学或其他条件移除，这些条件选择性地达成封闭基团的移除。适合用于N-端保护的封闭基团是肽化学领域所熟知的。封闭基团的实例包括但不限于氢、D-氨基酸、及苄氧羰基(Cbz)氯。"核酸"是指脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其呈单链或双链形式的聚合物。该术语涵盖含有已知的核苷酸类似物或修饰的主链残基或连接的核酸，这些核酸是合成的、天然存在的、及非天然存在的，具有类似于参照物核酸的相似结合特性，并以类似于参照物核苷酸的方式代谢。此等类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯类、氨基磷酸酯类、甲基磷酸酯类、手性_甲基磷酸酯类、2-0_甲基核糖核梯苷酸类、肽_核酸类(PNA)。除非另行指示，一个特定核酸序列也隐含地涵盖其保守修饰的变体(例如简并密码子取代)及互补序列，连同明确指示的序列。确切地，简并性密码子被取代可通过产生序列来实现，其中一个或多个选定的(或全部)密码子的第三位置是用混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代(Batzeretal.，NucleicAcidRes.19:5081(1991);Ohtsukaetal.，J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985);Rossolinietal.，Mol.Cel1.Probes8:91-98(1994))。术语核酸与基因、cDNA、mRNA、寡核苷酸及多核苷酸互换使用。符号^,不论是用作一个键或显示为垂直于一个键时均表明一个点，在该点处所展示的部分(moiety)被附联在分子、固相支撑部分等的其余部分上。除非另作说明，术语"烷基"，就其本身或作为另一个取代基的部分，是指一个直链或支链、或环烃基、或它们的组合，它可能是完全饱和的、单不饱和的、或多不饱和的，并且能包括二价以及多价基，具有所指定的碳原子数目(即C「Q。是指1到10个碳原子)。饱和烃基的实例包括但不限于以下基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基、以及(例如)正戊基、正己基、正庚基、正辛基的同系物或异构物、以及类似物。不饱和烷基基团是具有一个或多个双键或三键的基团。不饱和烷基基团的实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、2-异戊烯基、2-(丁41二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(l，4-戊二烯基)、乙炔基、l-丙炔基以及3-丙炔基、3-丁炔基，以及更高级同系物以及异构物。除非另有说明，术语"烷基"还意在包括那些以下详细说明的烷基衍生物，如"杂烷基"。限于烃基基团的烷基基团被称为"同源烷基"。术语"亚烷基"其本身或作为另一个取代基的部分是指一个衍生自烷烃的二价基团，例如但不局限于_CH2CH2CH2CH2-，并且进一步包括那些如下说明为"杂亚烷基"的基团。典型地，一个烷基(或亚烷基)基团应具有1到24个碳原子，其中具有IO个或更少的碳原子的那些基团在本发明中是优选的。"低级烷基"或"低级亚烷基"是较短的链烷基或亚烷基基团，一般具有八个或更少的碳原子。除非另作说明，术语"杂烷基"就其本身或与另一个术语组合，是指一个稳定的直链或支链、或环烃基、或它们的组合，由所说明的数目的碳原子以及至少一个杂原子组成，该杂原子选自下组，其构成为0、N、Si、以及S，并且其中氮、碳、以及硫原子会可任选地被氧化，并且氮杂原子会可任选地被季铵化。一个或多个杂原子0、N、S、及Si可位于杂烷基基团的任何内部位置，或可位于该烷基团附联于该分子的其余部分的位置。实例包括但不限于-CH2-CH2-0-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2_N(CH3)_CH3、-CH2-S_CH2-CH3、_CH2_CH2、-S(0)-CH3、-CH2-CH2-S(0)2-CH3、-CH=CH_0-CH3、-Si(CH3)3、_CH2_CH=N-OCHp及CH=CH-N(CH3)-CH3。多达两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-0CH3以及CH2_0_Si(CH3)3。类似地，术语"杂亚烷基"就其本身或作为另一个取代基的部分是指一个衍生自杂烷基的二价基，例如但不限于-CH2-CH2-S-CH2-CH2-以及CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。对于杂亚烷基基团，杂原子也可占据链末端的任一端或两端(例如，亚烷氧基、亚烷二氧基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基、以及类似物)。术语"杂烷基"与"杂亚烷基"包括聚(乙二醇)及其衍生物(参见例如，ShearwaterPolymersCatalog,2001)。此外，对于亚烷基以及杂亚烷基连接基团，书写连接基团的分子式的方向并不表示连接基团的方向。例如，式C(0)2R'-代表C(0)2R'-以及R'C(0)2-。与术语"烷基"或"杂烷基"组合使用的术语"低级"是指具有1到6个碳原子的部分。术语"烷氧基"、"烷氨基"、"烷基磺酰基"、以及"烷硫基"(或硫代烷氧基)都是以它们的常规意义使用，并分别指通过氧原子、氨基基团、S(^基团、或硫原子附联于该分子的其余部分的那些烷基基团。术语"芳香磺酰基"是指通过S02基团附联于该分子其余部分的芳基基团，且术语"巯基"是指SH基团。—般而言，"酰基取代基"也选自以上所给出的组。在此使用的术语"酰基取代基"指附联于羰基碳并满足其化合价的基团，该羰基碳直接或间接地附联于本发明的此合物的多环核上。除非另作说明，术语"环烷基"与"杂环烷基"，就它们本身或与其他术语组合，分别表示环型的取代或未取代的"烷基"以及取代或未取代的"杂烷基"。另外，对于杂环烷基，杂原子可占据杂环附联于分子的其余部分的位置。环烷基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基、以及类似物。杂环烷基的实例包括但不限于1-(1，2，5，6-四氢妣啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃_2-基、四氢呋喃_3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2_哌嗪基、以及类似物。环结构的杂原子以及碳原子可任选地被氧化。除非另作说明，术语"卤"或"卤素"，就它们自身或作为另-个取代基的部分，是指氟、氯、溴、或碘原子。此外，术语如"卤烷基"是指包括单卤烷基以及聚卤烷基。例如，术语"卤(C「C4)烷基"是指包括但不局限于，三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、以及类似物。除非另作说明，术语"芳基"是指取代或未取代的多不饱和的芳香烃取代基，它可以是一个单一的环或多环(优选地从1至3个环)，这些环稠合在一起或以共价键相连接。术语"杂芳基"涉及芳基基团(或环)，这些芳基基团含有从一至四个选自N、0、以及S的杂原子，其中氮、碳、以及硫原子可任选地被氧化，并且这个或这些氮原子可任选地被季铵化的。杂芳基团可以通过杂原子附联于该分子的其余部分。芳基以及杂芳基基团的非限制性实例包括苯基U-萘基、2_萘基、4_联苯基、1_吡咯基、2_吡咯基、3_吡咯基、3_吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、卩比嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5_苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-喷哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基、以及6-喹啉基。以上提到的每一个芳基以及杂芳基环状体系的取代基选自以下说明的可接受的取代基的组。"芳基"以及"杂芳基"也包括环体系，其中一个或多个非芳香族环体系被稠合、或者以其他方式结合至芳基或杂芳基体系上。简言之，术语"芳基"当与其他术语(如芳氧基、芳硫代基、芳烷基)组合使用时，包括以上定义的芳基环以及杂芳基环。因此，术语"芳烷基"意在包括那些基团，其中芳基基团附联于烷基基团(例如，苯甲基、苯乙基、吡啶甲基、以及类似物)，包括那些烷基基团，其中一个碳原子(例如，亚甲基基团)已被(例如)一个氧原子(如苯氧甲基、2-吡啶氧甲基、3-(l-萘氧基)丙基、以及类似物)替换。以上术语(如"烷基"、"杂烷基"、"芳基"、以及"杂芳基")各自均包括指定基团的取代以及未取代这两种形式。以下提供每个类型基团的优选取代基。烷基、以及杂烷基的取代基(包括那些经常提到的如亚烷基、链烯基、杂亚烷基、杂烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、以及杂环链烯基)一般分别称为"烷基取代基"以及"杂烷基取代基"，并且它们可以是一个或多个基团，这些基团选自下组但不限于-0R'、=0、=NR'、=N-0R'、-NR'R"、-SR'、-卣素、-SiR'R"R"，、-OC(O)R'、-C(O)R，、-C02R，、-C0NR，R"、-0C(0)NR，R"、-NR"C(0)R，、-NR，-C(0)NR"R"，、-NR"C(0)2R，、-NR-C(NR，R"R，")=NR""、-NR-C(NR，R")=NR，"、-S(0)R，、-S(0)2R，、-S(0)2NR，R"、_NRS02R，、-CN、以及N(^，数量在从0到(2m'+1)的范围内，其中m'是这种基团的碳原子的总数。R'、R"、R"'以及R""各自均优选地独立地指氢、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基，例如取代有1至3个卤素的芳基、取代或未取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基基团、或芳烷基基团。当本发明的化合物包括多于一个R基团时，(例如)，当这些基团中多于一个基团存在时这些R基团各自均被独立地选为R'、R"、R'"以及R""基团。当R'和R"附联于相同的氮原子时，它们可与氮原子组合成一个5-、6-、或7-元环。例如，-NR'R"旨在包括，但不局限于，1-吡咯烷基以及4-吗啡啉基。从以上取代基的讨论中，本领域中的技术人员会明白术语"烷基"旨在包括结合到基团上而不是氢基上的碳原子的基团，例如卤烷基(如_CF3以及_CH2CF3)以及酰基(如-C(0)CH3、-C(0)CF3、_C(0)CH20CH3、以及类似物)。类似于对烷基基团所说明的取代基，芳基取代基以及杂芳基取代基通常分别被称为"芳基取代基"以及"杂芳基取代基"，并且是被改变的并选自，例如卤素、-0R，、=0、=NR，、=N-OR，、-NR，R"、-SR，、-卤素、-SiR，R"R"，、-OC(0)R，、_C(0)R，、_C02R，、-CONR，R，，、-0C(0)NR，R，，、-NR，，C(0)R，、_NR，_C(0)NR"R"，、-NR"C(0)2R，、-NR-C(NR，R")=NR，"、-S(0)R，、-S(0)2R，、-S(0)2NR，R"、_NRS02R，、-CN以及冊2、-R，、-N3、-CH(Ph)2、氟(CrC4)烷氧基、以及氟(Q-Q)烷基，并且其数目从0到芳香环状体系上开放(open)化合价的总数的范围内；并且其中R'、R"、R"'以及R""是优选地独立地选自氢、(C「C8)烷基以及杂烷基、未取代的芳基以及杂芳基、(未取代的芳基)-(c「c;)烷基、以及(未取代的芳基)氧-(C「Q)烷基。当本发明的化合物包括多于一个R基团时，(例如)，当这些基团中多于一个基团存在时这些R基团各自均被独立地选为R'、R"、R'"以及R""基团。可任选地，在该芳基或杂芳基环的相邻原子上的芳基的两个取代基可被具有式为T-C(0)-(CRR'),-U-的取代基替换，其中，T和U独立为NR-、-0-、-CRR'-或单键，且q是从0到3的整数。可替代地，在该芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选被具有式为A-(CH2)「B-的取代基代替，其中，A和B独立地为CRR'-、-0-、-NR-、_S-、-S(0)-、-S(0)2-、-S(0)2NR'_或单键，且r是从1到4的整数。如此形成的新环的单键之一可任选被双键代替。可替代地，在该芳基或杂芳基环的相邻原子的取代基上的两个取代基可任选地被具有式为-(CRR')S-X-(CR"R'")d-的取代基代替，其中s和d独立地是从0至3的整数，并且X是-0-、-NR'-、-S-、-S(0)、-S(0)2-、或-S(0)2NR，-。优选地，取代基R、R，、R"以及R，"独立地选自氢或取代或未取代的(C「C》烷基。此处使用的术语"二磷酸酯"包括但不局限于包含两个磷酸酯基团的磷酸的酯。术语"三磷酸酯"包括但不局限于包含三个磷酸酯基团的磷酸的酯。例如，具有二磷酸酯或三磷酸酯的特定的药物包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>此处使用的术语"杂原子"包括氧(0)、氮(N)、硫(S)、以及硅(Si)。符号"R"是一个通用縮写，它代表取代基，该取代基是选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环基基团。如此处所用的术语"药学上可接受的载体"表示参与携带或运输化学剂的一种药学上可接受的材料、组合物或载体(vehicle)，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包胶囊材料。药学上可接受的载体包括药学上可接受的盐类，其中，"药学上可接受的盐类"包括活性化合物的盐类，取决于此处所述化合物中出现的特定取代基，该盐类可使用相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物含有相对酸性官能度时，碱加成盐可通过中性形式的此类化合物与足量的所希望的碱，净接触或于适宜惰性溶剂内接触获得。药学上可接受的碱加成盐的实例包括钠、钾、钙、铵、有机胺、或镁盐、或类似盐。当本发明的化合物含有相对酸性官能度时，酸加成盐可通过中性形式的此类化合物与足量的希望的酸，净接触或于适当惰性溶剂内接触获得。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自以下无机酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸、或亚磷酸及类似物；连同包括衍生自以下相对无毒有机酸的盐类，例如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸及类似物。也包括氨基酸盐类，如精氨酸盐(arginate)及类似物，及有机酸盐类，如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸及类似物(例如见，Bergeetal./'PharmaceuticalSalts，，，JournalofPharmaceuticalScience,1977，66，1-19)。本发明的某些特定化合物含有碱性官能度及酸性官能度二者，允许化合物被转变成碱加成盐或酸加成盐。该化合物的中性形式优选是通过盐与碱或与酸接触，以常规的方式分离亲代化合物而再生。该化合物的亲代形式在某些物理特性(例如在极性溶剂中的溶解度)上与各种盐形式不同，但在其他性质上这些盐与用于本发明的目的的化合物的亲代形式是等效的。除了盐形式之外，本发明提供处于药物前体形式的化合物。此处所述化合物的药物前体是在生理条件下容易进行化学变化来提供本发明的化合物的那些化合物。此外，于活体外环境下，通过化学方法或生物化学方法，可将药物前体转变成本发明的化合物。例如，当药物前体置于经皮贴片贮器内部时用适宜的酶试剂或化学剂可将药物前体缓慢转变成本发明的化合物。某些本发明的化合物能够以未经溶剂化形式及溶剂化形式(包括水合形式)存在。总体上，溶剂化形式是等效于未经溶剂化形式并且被涵盖在本发明的范围之内。本发明的某些化合物可以多种晶体形式或无定形的形式存在。通常全部物理形式对于由本发明所考虑的用途来说是等效的，并意在涵盖于本发明的范围之内。本发明的某些化合物具有非对称碳原子(光学中心)或双键；消旋体、非对映异构物、几何异构物及个别异构物都被涵盖于本发明的范围之内。本发明的化合物也可在组成此类化合物的一个或多个原子处包含非天然比例的原子同位素。例如，化合物可用放射性同位素(例如氚(3、碘-125(1251)、或碳-14(140)进行标记。本发明的化合物的全部同位素变化，无论是放射性或非放射性的，意在都涵盖于本发明的范围之内。术语"附联部分"或"用于附联靶定基的部"是指一个部分，该部分允许靶定基附联至连接物。典型的附联基团以举例说明的方式包括但不限于烷基、氨基烷基、氨基羰基烷基、羧基烷基、羟基烷基、烷基_顺丁烯二酰亚胺、烷基-N-羟基丁二酰亚胺、聚(乙二醇)-顺丁烯二酰亚胺及聚(乙二醇)-N-羟基丁二酰亚胺，全部都可进一步被取代。连接物也可具有实际上附加至该靶定基的附联部分。如此处所使用的"离去基团"是指在反应中从底物所切割的底物的一部分。此处提及的术语"抗体"包括整个抗体以及它们的任何抗原结合片段(S卩"抗原结合部分")或它们的单链。"抗体"指一种包括至少两条重(H)链及两条轻(L)链的糖蛋白或其抗原结合部分，其中两条重链以及两条轻链之间通过二硫键相互连接。每一条重链均包括一个重链可变区(VH)以及一个重链恒定区。重链恒定区是由三个结构域C『C^及C^所组成，且可以是P、S、Y、a或e同型。每一条轻链均包括一个轻链可变区(VJ以及一个轻链恒定区。轻链恒定区由一个结构域(^所组成，可以是k或A同种型。Vh和、区能进一步被分成多个高可变性区，被称为互补决定区(CDR)，其间散布有更保守的被称为框架结构区(FR)的多个区。每个VH以及、均由三个CDR及四个FR构成，按照以下顺序从氨基端至羧基端排布FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链及轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。这些抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，这些宿主组织或因子包括免疫系统的不同细胞(例如效应细胞)以及经典补体系统的第一成分(Clq)。在此所使用的术语"抗体的片段"或抗体的"抗原结合部分"(或简称为"抗体部分")指一个或多个保留了特异性结合抗原的能力的抗体的片段。已经发现抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来实现。术语抗体的"抗体片段"或"抗原结合部分"中所涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由V。VH、及CH1结构域构成的一个单价片段；(ii)F(ab'h片段，包括在铰链区由二硫桥连接的两个Fab片段的一个二价片段；(iii)由VH及CH1结构域构成的Fd片段；(iv)由抗体的一个单臂的、及VH结构域构成的Fv片段；(v)由VH结构域构成的dAb片段(Wardetal.，(1989)Nature341:544-546);以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，虽然Fv片段的两个结构域、与VH是由单独的基因编码的，但是可以使用重组方法通过一个合成连接子将它们连接起来，使它们形成一个单一蛋白链，其中^与VH区配对形成单价分子(被称为单链Fv(scFv);见，如Birdetal.(1988)Science242:423-426:以及Hustonetal.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA祖5879-5883)。术语抗体的"抗原结合部分"也旨在涵盖此类单链抗体。这些抗体片段是使用本领域技术人员已知的常规方法获得，并且对这些片段采用与完整抗体相同的方式进行有用性筛选。此处使用的术语"单克隆抗体"是指具有单一分子组成的抗体分子的制品。单克隆抗体组合物展示了针对某一特定表位的单一结合特异性及亲和力。对于单克隆或多克隆抗体的制备，可使用在本领域中熟知的任何一种技术(参见，例如Kohler&Milstein，Nature256:495-497(1975);Kozboretal.，ImmunologyToday4:72(1983);Coleetal.，pp.77—96inM0N0CL0NALANTIB0DIES細CANCEKTHEKAPY，AlanR.Liss，Inc.(1985))。单克隆抗体的生产方法是本领域的技术人员已知的。近交品系的小鼠(例如BALB/C小鼠)或兔子使用标准佐剂(例如弗氏佐剂)及标准免疫接种方案用蛋白质进行免疫接种。动物对免疫原制剂的免疫反应通过采测试血液并测定对P亚单元的反应性的效46价进行监测。当获得对免疫原的适当高抗体效价时，从动物采血并制备抗血清。如果希望，可针对血清进行进一步分级分离来富集对该蛋白质具有反应性的抗体。可通过多种本领域的普通技术人员所熟悉的方法获得单克隆抗体。简言之，得自用希望的抗原进行免疫接种的动物的脾细胞通常通过与骨髓瘤细胞融合而被无限增殖化(参见Kohler&Milstein，Eur.J.Immunol.6:511-519(1976))。可替代的无限增殖化方法包括使用爱泼斯坦_巴尔病毒、癌基因或反录病毒或其他本领域所熟知的方法的转化。在一个优选的实施方案中，抗体为嵌合型抗体或人源化抗体。可以基于鼠类单克隆抗体的序列来制备本发明的嵌合抗体或人源化抗体。从感兴趣的鼠类杂交瘤可以获得对重链和轻链免疫球蛋白进行编码的DNA，并且使用标准的分子生物学技术进行工程处理，以包括非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。例如，为生成嵌合抗体，可使用本领域中已知的方法将鼠类可变区与人恒定区连接(见，如Cabilly等人的美国专利号4，816，567)。为了生成人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠类CDR区插入人类构架(见，如Winter等人的美国专利号5，225，539、以及Queen等人的美国专利号5，530，101;5，585，089;5，693，762;以及6，180，370)。在另一个优选的实施方案中，该抗体是一种人类抗体。此种人类抗体可通过免疫接种转基因或转染色体小鼠而产生，其中内源性鼠免疫球蛋白基因经过失活，而导入外源性人免疫球蛋白基因。此类小鼠为本领域所已知(例如参见美国专利号5，545，806;5，569，825;5，625，126;5，633，425;5，789，650;5，877，397;5，661，016;5，814，318;5，874，299;及5，770，429;全部都核发给Lonberg及Kay;美国专利号5，939，598;6，075，181;6，114，598;6，150，584及6，162，963核发给Kucherl即ati等人；及核发给Ishida等人的PCT公开文件WO02/43478)。通过用于筛选人类免疫球蛋白基因文库的噬菌体展示方法也可以制备人类抗体。此类用于分离人类抗体的噬菌体展示方法在本领域内也是已知的(见，例如Ladner等人的美国专利号5，223，409;5，403，484;以及5，571，698;Dower等人的美国专利号5,427,908以及5，580,717;McCafferty等人的美国专利号5，969，108以及6，172，197;以及Griffiths等人的美国专利号5，885，793;6，521，404;6，544，731;6，555，313;6，582，915以及6，593，081)。如此处所使用的"固体支撑体"表示一种材料，该材料基本上不溶于所选用的溶剂系统，或容易地(例如通过沉淀)从选定的溶剂系统(它可溶于其中)分离。实施本发明有用的固体支撑体包括被活化或可活化来允许选定的种类结合至固体支撑体的组群。固体支撑体也可以是本发明的个别化合物或多于一种化合物结合至其上的基质，例如芯片、晶片或孔。如此处所使用的"反应性官能团"一词是指以下基团，包括但不限于烯烃类、炔类、醇类、酚类、醚类、氧化物类、卤化物类、醛类、酮类、羧酸类、酯类、酰胺类、氰酸酯类、异氰酸酯类、硫氰酸酯类、异硫氰酸酯类、胺类、肼类、腙类、酰肼类、重氮基(diazo)、重氮基(diazonium)、硝基、腈类、硫醇类、硫化物类、二硫化物类、亚砜类、砜类、磺酸类、亚磺酸类、縮醛类、縮酮类、酸酐类、硫酸盐类、次磺酸类、异腈类、脒类、酰亚胺类、亚氨酸酯类、硝酮类、羟胺类、肟类、氧肟酸类、硫羟酰胺酸类(thiohydroxamicacid)、丙二烯类、原酸酯类、亚硫酸酯类、烯胺类、炔胺类、脲类、假脲类、氨基甲酰肼类、碳二亚胺类、氨基甲酸酯类、亚胺类、叠氮化物类、偶氮化合物、氧化亚氮化合物、及亚硝基化合物。反应性官能团也包括用来制备生物偶联物的那些反应性官能团，例如N-羟基丁二酰亚胺酯类、顺丁烯二酰亚胺及类似物(参见例如，Hermanson，B腦wugateTec腿ques，Academicpress，SanDiego，1996)。这些官能团各自的制法为本领域所熟知，其应用于特定目的或修饰用于特定目的是在本领域的普通技术人员的會g力之内(参见例如，SandlerandKaro，eds.0KGANICFracTI0NALGK0UPPKEPAKATI0NS，AcademicPress,SanDiego，1989)。反应性官能团可受到保护或未受保护。本发明的化合物可制备成单一异构物(例如对映异构物、顺式异构物、反式异构物、位置异构物、非对映异构物)，或制备成异构物的混合物。在一个优选的实施方案中，化合物被制备成基本上单一的异构物。制备基本上同分异构纯的化合物的方法为本领域所已知。例如，富含旋光异构的混合物及纯的旋光异构化合物可通过使用旋光异构纯的合成中间体来制备，该合成中间体与留下手性中心的立体化学不变或导致其完全转化的反应相组合使用。可替代地，终产物或合成途径沿线的各个中间物可被分成为单一立体异构物。转化或留下不变的特定立构中心的技术以及立体异构物混合物的技术为本领域所熟知，并且对一个特定情况选择适当方法完全是在本领域的技术人员的能力之内。总体上参见Furnissetal.(eds.)，V。gel'sEncyclopediaofPractical0rganicChemistry5ED.，LongmanScientificandTechnicalLtd.，Essex,1991，pp.809—816;andHeller，Acc.Chem.Res.23:128(1990)。连接物本发明提供药物-配体偶联物物，其中药物通过化学连接物而连接至配体。在一些实施方案中，连接物为肽基连接物，并且在此描绘为(L"p-F-(L"m。其他的连接物包括肼连接物以及二硫键连接物，并在此被分别描绘为(L"p-H-(L、或(L"p-J-(L。除了与附联于药物的连接物之外，本发明还提供了适用于附联于基本上任何分子种类的可切割的连接臂。本发明的连接臂方面是在此通过提及它们对一个治疗部分的附联来举例说明。然而，对本领域的熟练人员来说很明显，这些连接物可被附联于多个种类上，包括但不局限于，诊断试剂、分析试剂、生物分子、耙向剂、可检测的标记、以及类似物。在药物-配体偶联物物中肽基和其他连接物的使用说明于美国临时专利申请系列号60/295，196;60/295，259;60/295342;60/304，908;60/572，667;60/661，174;60/669，871;60/720，499;60/730，804;以及60/735，657;以及美国专利申请序列号10/160，972;10/161，234;11/134，685;11/134，826;及11/398，854以及美国专利号6，989，452以及PCT专利申请号PCT/US2006/37793，所有文献都通过引用结合在此。—方面，本发明涉及用于将靶定基团附联于治疗试剂以及标记物的连接物。另一方面，本发明提供了连接物，该连接物赋予化合物稳定性、减小其体内毒性、或者另外有利地影响其药物动力学、生物利用度和/或药效学。通常优选的是在此类实施方案中，一旦药物被输送至其作用部位，连接物即被切割，释放出该活性药物。因此，在本发明的一个实例中，本发明的连接物是无痕迹的，使得一旦连接物从治疗剂或标记物上去除(例如在活化期间)，该连接物的存在不留下痕迹。在本发明的另一个实施方案中，连接物的特征在于它们在一个位点或临近靶细胞处(如在治疗作用位点或标记物活性位点)被切割的能力。此类切割本质上具有酶促性。这一特性有助于该治疗剂或标记物的激活作用、减少毒性、以及系统副作用。用于酶促切割的优选的可切割基团包括肽键、酯连接物、以及二硫化物连接物。在其他的实施方案中，该连接物对PH敏感，并且通过改变pH而被切割。本发明的一个重要的方面是控制连接物的切割速度的能力。一个快速切割的连接物经常是所希望的。然而，在一些实施方案中，可能优选切割较慢的连接物。例如，在缓释配制品或同时具有快速释放成分以及慢速释放成分的配制品中，提供较慢切割的连接物是有用的。WO02/096910提供了几种具有肼连接物的特异的配体-药物复合物。然而，无法根据所需的环化速度来"调节"连接物构成，并且所说明的特定化合物以慢于所优选的许多药物-连接物偶联物的速度从该药物上切割该配体。相比之下，本发明的肼连接物提供了从很快到很慢的环化速度的范围，从而使得基于所希望的环化速度挑选特定的肼连接物成为可能。例如，用经切割产生单一5元环的肼连接物可实现非常快速的环化。用于将细胞毒素试剂靶向传递至细胞的优选环化速度，可使用在切割时产生来自在偕位置具有两个甲基的连接物的两个5元环或一个单一6元环的肼连接物而实现。已显示，与在偕位置没有两个甲基的单一6元环相比，这种偕-二甲基(gem-dimetyl)效应加快了环化反应的速度。这是因为张力在环中得以释放。然而有时，取代基可能减慢反应速度而不是使它变快。通常延迟发生的原因可追溯至空间的阻隔。如实例2.4中所表明，与偕碳是一个CH2时相比，该偕_二甲基取代使环化反应发生得更快。然而，重要的是应注意，在一些实施方案中，切割较慢的连接物也许是优选的。例如，在缓释配制品或同时具有快速释放成分以及慢速释放成分的配制品中，提供较慢切割的连接物是有用的。在某些实施方案中，使用一个肼连接物可实现慢速环化，一旦切割肼连接物，将产生没有该偕二甲基取代的一个单一6元环、或一个单一7元环。这些连接物也有助于在循环中稳定治疗剂或标记物，防止其降解。这一特性提供了重要的有利因素，因为这种稳定性导致所附联的试剂或标记物的循环半衰期延长。该连接物还可用于减弱所附联的试剂或标记物的活性，使得该偶联物在循环时相对为良性，而配偶体在所希望的作用位点激活后具有所希望的效应，例如具有细胞毒性。对于治疗剂偶联物而言，连接物这一特点用于改善该试剂的治疗指数。稳定基团被优选地选择出来，以限制由可能存在于血液或者非靶组织中的酶限制治疗剂或标记物的清除及代谢，并且进一步选择这些稳定基团，以限制该试剂或者标记物运输进入细胞。这些稳定基团用于阻止该试剂或者标记物的降解，并且也可能在提供该试剂或标记物的其他物理特性中发挥作用。稳定基团也可能在贮藏中以经配置或未经配置的形式改善试剂或标记物的稳定性。理想情况下，该稳定基团对于稳定一种治疗剂或标记物是有用，条件是该稳定基团所起的作用是在通过将一种治疗剂或标记物在人类血液中于37t:贮藏2小时而进行测试时保护了该治疗剂或标记物免于降解、并且导致了在给定的测定条件下由存在于人类血液中的酶对该治疗剂或标记物的少于20%，优选的少于10%，更优选的少于5%、以及甚至更优选的少于2%的切割。本发明还涉及包含这些连接物的偶联物。更特别地，本发明涉及药物前体，这些药物前体可用于治疗疾病，特别是癌症化疗。具体而言，使用在此说明的连接物提供了多种药物前体，这些药物前体相对于相似结构的药物前体而言，展示出高的作用特异性、降低的毒性、以及改进的稳定性。在此说明的本发明的连接物可位于细胞毒素偶联物内的多种位置。因此，提供了一种连接物，该连接物可包含多种基团中的任何基团作为其链的一部分，相对于缺乏此类基团的构造体而言，这些基团在体内(例如，在血流中)切割的速率会增强。还提供了连接臂与治疗剂以及诊断试剂的偶联物。这些连接物对于形成治疗剂的药物前体的类似物是有用的，并且对可逆地将治疗剂或诊断试剂连接至靶试剂、可检测的标记、或固相支撑体是有用的。连接物可被结合进入包括本发明的细胞毒素的复合体中。除了可切割的肽、肼、或二硫基基团外，一个或多个的自消连接物基团U可任选地被引入至细胞毒素与靶试剂之间。这些连接物基团还可能被说明为间隔基团，并且包含至少两个反应性官能团。典型地，间隔基团的一个化学官能度键合至该治疗剂(例如细胞毒素)的化学官能度上，而间隔基团的其他化学官能度被用于键合至靶试剂或者可切割的连接物的化学官能度上。间隔基团的化学官能度的实例包括羟基、巯基、羰基、羧基、氨基、酮基、以及巯基基团。该自消连接物由LM戈表，一般是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、或取代或未取代的杂烷基。在一个实施方案中，该烷基或芳基基团可能包含1至20个碳原子。它们还可能包含一个聚乙二醇部分。示例性间隔基团包括，例如6-氨基己醇、6-巯基己醇、10-羟基癸酸、甘氨酸以及其他氨基酸、l，6-己二醇、e-丙氨酸、2-氨基乙醇、半胱胺(2-氨基乙烷硫醇)、5-氨基戊酸、6_氨基己酸、3_马来酰亚胺基苯甲酸、苯酞、a-取代的苯酞、羰基基团、縮醛胺酯、核酸、肽、以及类似物。该间隔物可以用于引导另外的分子量以及化学官能度进入该细胞毒素-靶向剂复合物。通常，另外的质量以及官能度将影响该复合物的血清半衰期以及其他特性。因此，通过仔细挑选间隔基团，可以制得血清半衰期在一定范围内的细胞毒素复合物。位于与药物部分直接相邻的位置的一个或多个间隔物也表示为(L"m，其中m是选自0、1、2、3、4、5、以及6的一个整数。当多个1^间隔物存在时，可使用相同或不同的间隔物。U可以是任何自消基团。!^是一个连接物部分，利用包含该部分或改变该偶联物的水解速率的连接物，它优选地赋予偶联物增大的溶解性或减小的聚集特性。1^连接物并非必须是自消亡的。在一个实施方案中，L4部分是取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂烷基、或未取代的杂烷基，这些基团中的任一种可能是直链、支链、或环状的。这些取代基可能是例如低级(e-c6)烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、或者二烷基氨基。在一些实施方案中，L4包括非环状部分。在另一个实施方案中，L4包括带正电或负电的氨基酸聚合物，如聚赖氨酸或聚精氨酸。！^可包括例如聚乙二醇部分的聚合物。另外丄4连接物可以包括，例如一个多聚体成分以及一个小分子化学部分。在一个优选的实施方案中，L4包括一个聚乙二醇(PEG)部分。L4的PEG部分可以是长度为1到50个单元。优选地，PEG含有1到12个重复单元，更优选3到12个重复单元，更优选2到6个重复单元，或甚至更优选3到5个重复单元，并且最优选4个重复单元。L4可仅仅含有PEG部分，或也可包括其他的取代或未取代的烷基或杂烷基。将PEG作为L4部分的一部分进行组合可以用于提高复合物的水溶性。另外，该PEG部分在药物与抗体偶联时降低了聚集度。在一些实施方案中，L4包括直接附联于(AA1)。的N末端。12°是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基的成员。Rf、R，以及R26，各自独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；并且s和t独立地是1至6的整数。优选地，R2°、R25、R25'、R26、以及R26'是疏水的。在一些实施方案中，R^是H或烷基(优选未取代的低级烷基)。在一些实施方案中，R25、R25'、R26以及R26'独立地是H或烷基(优选未取代的C^C4烷基)。在某些实施方案中，R25、R25'、R26、以及R26'均为H。在某些实施方案中，t是1并且s是1或2。肽连接物(F)如以上所述，本发明的肽连接物可用通式(L"p-F-(L"m表示，其中F表示包括肽部分的连接物部分。在一个实施方案中，该F部分包括一个或多个任选的附加自消连接物L2以及一个羰基基团。在另一个实施方案中，该F部分包括一个氨基基团以及一个或多个任选的间隔基团L3。因此，在一个实施方案中，包括该肽连接物的偶联物包括具有化学式4的结构(4)在这一实施方案中，L1为一个自消连接物，如以上所述，并且L4为一个部分，该部分优选地赋予增强的溶解性，或减少的聚集特性，或改变水解速率，如以上所述。L2表示一个或多个自消连接物。此外，m是0、l、2、3、4、5、或6;并且o和p独立地是O或1。AA1表示一个或多个天然的氨基酸和/或非天然的a-氨基酸；c是从1到20的一个整数。在某些实施方案中，c在2到5的范围内或c是2或3。在本发明的具有化学式4的肽连接物中，AA1在其氨基末端直接连接到L4或，当L4不存在时，直接连接到^基团(即，靶向剂、可检测的标记、受保护的反应性官能团或不受保护的反应性官能团)。在某些实施方案中，当1^存在时丄4不含直接附联到(AA"。的N末端的羧基酰基基团。因此，在这些实施方案中，不必存在一个直接在L4或X4与AA1之间的羧基酰基单位，而它在美国专利6，214，345的肽连接物中是必需的。在另一个实施方案中，包括该肽连接物的偶联物包括具有化学式5的结构在这一实施方案中，L4是一个部分，该部分优选赋予增加的溶解性、或减少的聚集特性，或改变水解速率，如上所述；L3是一个间隔基团，该间隔基团包括一个伯胺或仲胺或一个羧基官能团，且L3的胺与D的侧羧基官能团形成酰胺键或者L3的羧基与D的侧胺基官能团形成酰胺键；且o和P独立地为0或1。AA1代表一种或多种天然氨基酸，和/或非天然a氨基酸；c是从1到20的一个整数。在这个实施方案中，L1不存在(即该通式中m是0)。在本发明的具有化学式5的肽连接物中，AA1在其氨基末端直接连接到L4或，当L4不存在时，直接连接到^基团(即，靶向剂、可检测的标记、受保护的反应性官能团或不受保护的反应性官能团)。在某些实施方案中，当1^存在时丄4不含直接附联到(AA"。的N末端的羧基酰基基团。因此，在这些实施方案中，不必存在一个直接在L4或X4与AA1之间的羧基酰基单位，而它在美国专利6，214，345的肽连接物中是必需的。自消连接物L2自消连接物L2是一个双官能化学部分，它能将两个间隔的化学部分共价连接成通常稳定的三节分子，通过酶切割的方法从该三节分子释放所述间隔的化学部分中的一个；并且在所述酶切割之后，从该分子的其余部分中自发切割而释放所述间隔的化学部分中的另一个。根据本发明，自消间隔物在其一端与肽部分共价连接，而在其另一端与药物部分的化学反应基因座共价连接，药物部分的衍生作用抑制药理活性，以间隔并将肽部分与药物部分共价连接在一起成为一个三结合的分子，该三结合的分子在靶酶不存在的情况下是稳定的且无药理活性，但通过这种靶酶可在共价连接间隔物部分与肽部分的键发生酶切割，从而影响肽部分从该三结合的分子释放。反过来，这种酶切割能激活间隔物部分的自消性质，并引发将间隔物部分共价连接至药物部分的键的自发切割，由此影响药理活性形式的药物的释放。自消连接物L2可以是任何自消基团。L2优选是取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、未取代的杂环烷基、取代的杂环烷基、取代以及未取代的芳基、以及取代以及未取代的杂芳基。—个特别优选的自消间隔物L2可以由下式6表示氨基苄基基团的芳环可被一个或多个"K"基团取代。"K"基团是芳香环上的取代物，它替换原本附联于为部分环结构的四个未取代的碳之一的氢。"K"基团可能是一个单一原子，如卤素，或可能是多原子的基团，如烷基、杂烷基、氨基、硝基、羟基、烷氧基、卤烷基、以及氰基。每一个K均是独立地选自下组的成员，该组的构成是取代的烷基、未取代52的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR21R22、NR21C0R22、0C0NR21R22、0C0R以及0R"，其中R21和R22是独立地选自下组，其构成是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、以及未取代的杂环烷基。示例性K取代基包括但不限于F、Cl、Br、I、N02、OH、0CH3、NHC0CH3、N(CH3)2、NHC0CF3、以及甲基。对于"Ka"，a是0、1、2、3或4的一个整数。在一个优选的实施方案中，a是O。以上显示地构建物的醚氧原子与一个羰基基团相连。从NR24官能度进入芳环的线表示胺官能度可能被键合至5个碳的任何一个，这5个碳都形成环、并且未被CH2-0-基团取代。优选地，X的NRM官能度以相对于CH厂0-的対位与芳环共价结合。RM是选自下组的成员，该组的构成是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、以及未取代的杂烷基。在一个具体的实施方案中，RM是H。在一个实施方案中，本发明提供具有上式(4)的肽连接物，其中F包含以下结构其中，RM是选自下组的成员，该组的构成是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、以及未取代的杂烷基。每一个K均是独立地选自下组的成员，该组的构成是取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR21R22、NR"C0R"、0C0NR"R"、0C0R以及0R"，其中R21和R22是独立地选自下组，其构成是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、以及未取代的杂环烷基，并且i是整数0、1、2、3、或4。在另一个实施方案中，具有上式(4)的肽连接物包括-F-(L"m-，它含有以下结构R4R24e24-AA1其中，每一个R24均是选自下组的成员，该组的构成是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、以及未取代的杂烷基。在一些实施方案中，自消间隔物L1或L2包括53<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>其中R"、R，以及R"各自均独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基，并且w是从0到4的一个整数。在一些实施方案中，R17和R18独立地是H或烷基(优选未取代的Cl-4烷基)。优选地，R17和R18是C「C4烷基，如甲基或乙基。一些实施方案中，w是0。尽管不希望被任何特定的理论束缚，已经有实验发现，这个特定的自消间隔物成环速度相对较快。在一些实施方案中，L1或L2包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>间隔基团L3间隔基团L3的特征在于它包括伯胺或仲胺或羧基官能度基团，并且1^基团的胺基与D的侧羧基官能团形成酰胺键，或者L3的羧基与D的侧胺基官能团形成酰胺键。L3可选自下组，其构成是取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、或取代或未取代的杂环烷基。在一个优选的实施方案中，L3包括一个芳香族基团。更优选地，！^包括苯甲酸基团、苯胺基团、或吲哚基团。用作-CH-间隔物的结构的非限制性实例包括以下结构式其中Z是选自0、S和NR23的成员，并且其中R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基基团的成员。切割本发明的包含L3的连接物后，L3部分仍然附联在药物D上。因此，选择L3部分，使得它附联到D的存在不会显著地影响D的活性。在另一个实施方案中，药物D的一部分其本身起L3间隔物的功能。例如，在一个实施方案中，药物D是多卡霉素的衍生物，其中药物的部分起L3间隔物的作用。此类实施方案的非限制性实例包括那些实例，其中NH2-(L3)-D具有一个结构，该结构选自下组，其构成为V5Z以及其中，Z是选自0、S、以及NR23的成员，其中R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及或酰基的成员；并且其中各个结构上的M^基团均与(AA、进行反应形成-(AA"e-NH-。肽序列AA1基团A^表示一个单一氨基酸或由酰胺键连接到一起的多个氨基酸。这些氨基酸可能是自然氨基酸和/或非自然a-氨基酸。肽序列(AA"。在功能上是单一氨基酸(c=1时)或通过酰胺键连接在一起的多个氨基酸的酰胺化残基。选择本发明的肽序列用于在生物系统中在感兴趣的位置指导由酶产生的肽的酶催化切割。例如，使用靶向剂而靶向于一个细胞的偶联物，然后通过细胞摄取，对该偶联物而言，肽系选择可通过一种或多种溶小体蛋白菜切割的肽，让肽于溶小体内部作细胞内切割。在肽中的氨基酸的数目可在从1到20的范围内；但是更优选的组成(AA1)c的是2至8个氨基酸、2至6个氨基酸、或2、3、或4个氨基酸。容易被特定的酶或酶类切割的肽链的序列在本领域是已经熟知的。许多被血清、肝、肠等中的酶切割的肽的序列在本领域是已知的。本发明的示例性肽序列包括一种被蛋白酶切割的肽序列。以下关于蛋白酶敏感序列的用途的讨论的中心是为了阐述的清晰性，并不用于限制本发明的范围。当切割该肽的酶是蛋白酶时，该连接物一般包括包含蛋白酶切割识别序列的肽。蛋白酶的切割识别序列是在蛋白水解的切割过程中被蛋白酶所识别的特定的氨基酸序列。许多蛋白酶切割位点在本领域中是已知的，并且这些以及其他切割位点可以被包括在该连接物部分中。见，例如Matayoshietal.Science247:954(1990);Dunnetal.Meth-Enzymol.241:254(1994);Seidahetal.Meth.Enzymol.244:175(1994);Thornberry，Meth.Enzymol.244:615(1994);Weberetal.Meth.Enzymol.244:595(1994);Smithetal.Meth.Enzymol.244:412(1994);Bouvieretal.Meth.Enzymol.248:614(1995)，Hardyetal.，inAj^LomPR0TEINPrecursorinDevelop肥nt，AGING,超。ALZHEIMER'sDISEASE，ed.Mastersetal.pp.190-198(1994)。基于肽序列的氨基酸对于由特定分子(例如肿瘤相关蛋白酶)进行选择性酶切的适宜性，对肽序列(AA、的氨基酸进行选择。所用的氨基酸可以是自然或非自然氨基酸。它们可能是L或D构型。在一个实施方案中，使用了至少三种不同的氨基酸。在另一个实施方案中，仅仅使用了两种氨基酸。在一个优选的实施方案中，选择肽序列(AA1)。是基于它被溶酶体蛋白酶切割的能力，这些蛋白酶的非限制性实例包括组织蛋白酶B、C、D、H、L、以及S。优选地，该肽序列(AA、在体外能被组织蛋白酶B切割，这可以使用本领域已知的体外蛋白酶切割测定法进行测试。在另一个实施方案中，选择肽序列(AA、是基于它被肿瘤相关蛋白酶切割的能力，该蛋白酶例如在肿瘤细胞附近在细胞外发现的一种蛋白酶，其非限制性实例包括甲拌磷寡肽酶(TOP)和CDIO。肽能被TOP或CDIO切割的能力可用本领域已知的体外蛋白酶切割测定法进行测试。适宜的但非限制性的适宜在本发明的偶联物中使用的肽序列实例包括Val-Cit、Cit-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe_N9_tosyl_Arg、Phe_N9_nitro_Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ.IDNO:1)、P_Ala_Leu_Ala_Leu(SEQ.IDNO:2)、Gly_Phe_Leu_Gly(SEQ.IDNO:3)、Val-Ala，Leu-Leu-Gly-Leu(SEQ.IDNO:14)、Leu-Asn-Ala、以及Lys-Leu-Val。优选的月太序列是Val-Cit和Val-Lys。在另一个实施方案中，位于与药物部分最近的位置的氨基酸选自下组，其构成为Ala、Asn、Asp、Cit、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、以及Val。在又一个实施方案中，位于与药物部分最近的位置的氨基酸选自下组，其构成为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、以及Val。蛋白酶与癌症转移有关。蛋白酶尿激酶合成的增加在许多癌症中与转移能力的增加相关。尿激酶将纤溶酶原激活为纤溶酶，它在细胞外间隙中广泛存在，并且其激活作用导致细胞外基质中的蛋白降解，由此转移性肿瘤细胞侵入。纤溶酶也可以激活胶原酶，因此促进在围绕毛细管以及淋巴系统的基底膜中胶原的降解，由此允许肿瘤细胞侵入到靶组织中(Dano，etal.Adv.Cancer.Res.，44:139(1985))。因此，使用通过尿激酶切割的肽序列作为连接物也在本发明的范围内。本发明也提供对类胰蛋白酶切割敏感的肽序列的用途。人类的肥大细胞表达至少四种不同的类胰蛋白酶，被指定为a、PI、PII、以及PIII。这些酶不被血浆蛋白酶抑制剂控制，并且仅在体外切割一些生理学的底物。丝氨酸蛋白酶的类胰蛋白酶家族与涉及肥大细胞的多种过敏性疾病以及炎症有关，因为在患有这些病症的患者的体液里发现了类胰蛋白酶水平升高。然而，仍需要对类胰蛋白酶在疾病的病理生理学中的确切作用进行描绘。类胰蛋白酶的生物学功能的范围以及相应的生理学结果基本上由它们的底物的特异性限定。类胰蛋白酶是前-尿激酶血纤维蛋白溶酶原活化子(uPA)的有效的激活剂，uPA是与肿瘤转移以及侵入有关的蛋白酶的酶原形式。纤维溶酶原级联反应的活化，导致细胞外基质的破损而产生细胞溢出物及迁移，可能是在Pro-Arg-Phe-Lys的P4-P1序列(SEQ.IDNO:4)上的尿激酶原纤维溶酶激活物的类胰蛋白酶活化的一个功能(Stack,etal.，JournalofBiologicalChemistry269(13):9416-9419(1994))。血管活性肠肽(一种神经肽，与血管渗透性的调控有关)也被类胰蛋白酶进行切割，主要在Thr_Arg_Leu_Arg(SEQ.IDNO:5)序列上(Tam，etal.，Am.J.Respir.CellMol.Biol.3:27-32(1990))。G-蛋白结合受体PAR-2可在Ser-Lys-Gly-Arg(SEQ.IDN0:6)序列上被切割并被类胰蛋白酶激活，以促进成纤维细胞的增殖，然而凝血酶激活受体PRA-l在Pro-Asn-Asp-Lys(SEQ.IDNO:7)序列上被类胰蛋白酶失活(Molinoetal.，JournalofBiologicalChemistry272(7):4043-4049(1997))。综合在一起，这一证据提示类蛋白激酶作为疾病导致的结果在组织重塑中起核心作用。这与在几个肥大细胞介导的病症中观察到的深刻变化一致。慢性哮喘以及其他的长期的呼吸道疾病的特点是下面的组织(underlyingtissue)的纤维化以及增厚，这可能是类胰蛋白酶激活其生理学耙的结果。类似地，一系列报道已经表明血管生成与多种癌症中的肥大细胞密度、类胰蛋白酶活性、以及不良的预后有关(Coussensetal.，GenesandDevelopment13(11):1382-97(1999));Takanamietal.，Cancer88(12):2686-92(2000);Toth-Jakaticsetal.，HumanPathology31(8):955-960(2000);Ribattietal.，InternationalJournalofCancer85(2):171-5(2000))。本领域已知评价一个特定的蛋白酶是否切割已选择的肽序列的方法。例如，7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)荧光的肽底物的用途是一种已建立的确定蛋白酶特异性的方法(Zimmerman,M.，etal.，(1977)AnalyticalBiochemistry78:47-51)。苯胺键(anilidebond)的特异性切割释放荧光AMC离去基团，使对各个底物的切割速率进行简单确定成为可能。近来，通过在单一实验中对广范围的底物进行取样，采用测定(Lee，D.，etal.，(1999)BioorganicandMedicinalChemistryLetters9:1667-72)以及AMC肽底物文库的位置扫描库(positional-scanninglibrary)(Rano，T.A.，etal.，(1997)ChemistryandBiology4:149-55)快速描绘蛋白酶的N末端的特异性。因此，本领域中的技术人员可能容易地评定肽序列的阵列，以确定它们在本发明中的效用，而不用采取不适当的实验。本发明的药物-配体偶联物物可能可任选地包含两个或更多个连接物。这些连接物可能相同或不同。例如，肽基连接物可能用于将药物连接到配体上，并且第二肽基连接物可能将诊断试剂附联到复合物上。另外的连接物的其他用途包括连接分析试剂、生物分子、靶向剂、以及药物_配体复合物的可检测标记。同样在本发明的范围之内的是本发明的多种化合物，它们是多聚的或多价的种类(species)，包括，例如，例如本发明的化合物或其反应性类似物的二聚体、三聚体、四聚体、或更高的同系物。多聚以及多价的种类可由本发明的一个单一种类或多于一个种类装配而成。例如，二聚体构建物可以是"同源二聚体"或者"异源二聚体"。此外，多聚和多价的构建物(例如聚赖氨酸、右旋糖酐、羟乙基淀粉、以及类似物)也是在本发明的范围内，在这些构建物中本发明的化合物或其反应性类似物附联至寡聚体或多聚体的构架上。该构架优选是多官能的(即，具有一批用于附联本发明的化合物的反应性位点)。此外，该构架可用本发明的单一种类或本发明的多于一个的种类进行衍生。此外，本发明包括多种化合物，这些化合物相对于没有类似地被官能化的类似的化合物而言，被官能化以产生具有增强了的水溶性的化合物。因此，在此给出的取代基中的任何取代基可被类似的具有增强了的水溶性的基团替换。例如，用二醇或具有季铵、羟基胺或类似的更具有水溶性部分的胺替换一个羟基基团，这也在本发明的范围内。在一个优选的实施方案中，通过用增强亲本化合物水溶性的部分对在此给出的化合物的离子通道的活性没有重要作用的位点进行取代，赋予了附加的水溶性。增强有机化合物水溶性的方法在本领域中是已知的。此类方法包括，但不局限于，用永久带电的部分，例如季铵、或在生理学上相关的pH条件下带电的基团(例如羧酸、胺)使一个有机核官能化。其他方法包括向有机核添加包含羟基或胺的基团，例如醇、多元醇、聚醚、以及类似物。代表性的例子包括但不局限于，聚赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚(乙二醇)以及聚(丙二醇)。这些化合物的适宜的官能化的化学品以及方案在本领域中是已知的。见，例如，Dunn，R.L.，etal.，Eds.P。raEKICDrugsandDkugDelivekySystems，ACSSymposiumSeriesVol-469，AmericanChemicalSociety，Washington,D.C.1991。[O376]肼连接物(H)在一个第二实施方案中，本发明的偶联物包括一个肼自消连接物，其中该偶联物具有以下结构式x4-(L4)p-H-(L"m-D其中，D、L1、L4、以及X4如上所限定，并且在此处进一步说明，并且H是包含以下结构的连接物C(R24)3『W射&是从1至10的一个整数；n2是0、1、或2;每个RM均是独立地选自下组的成员，该组的构成是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、以及未取代的杂烷基；并且I是一个键(即，主链的碳与临近的氮之间的键)或r24、r24其中，n3是0或1，条件是当n3是0时，n2不是0;并且!14是1、2或3，其中，当I时一个键时，是3且n2是1，D不能是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>其中R是Me或CH2-CH2_NMe2。在一个实施方案中，苯环上的取代是对位取代。在优选的实施方案中，ni是2、3、或4或&是3。在优选的实施方案中，化是l。在优选的实施方案中，I是一个键(即，主链上的碳原子与临近氮原子之间的键)。一方面，肼连接物H可在切割时形成一个6元环的自消连接物，例如当n3是0并且n4是2时。另一方面，肼连接物H可在切割时形成两个5元环的自消连接物。在其他方面，切割时H形成一个5元环的自消连接物、H形成一个7元环的自消连接物、或H形成一个5元环的自消连接物、以及一个6元环的自消连接物。切割速率受切割时形成的环大小的影响。因此，依据所希望的切割速率，可选择切割时形成的适宜大小的环。五元的连接物在一个实施方案中，该肼连接物包括一个5元的肼连接物，其中H包括以下结构式在一个优选的实施方案中，ni是2、3或4。在另一个优选的实施方案中，是3。在以上结构中，每个RM是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、以及未取代的杂烷基。在一个实施方案中，每个RM均独立地为H或一个QCe烷基。在另一个实施方案中，每个R24均独立地为H或烷基，更优选H或CH3。在另一个实施方案中，至少一个RM为甲基基团。在另一个实施方案中，每个RM均是H。每个R24被选择为对该化合物的空间位阻效应进行调整并且用于改变溶解性。5元的肼连接物可经历一次或更多环化反应，将药物与连接物分开，并且可以通过例如下式进行说明制备本发明的5元的连接物的示例性合成路线为在亚硫酰二氯溶液中，受Cbz保护的DMDAb与2，2_二甲基丙二酸a进行反应，形成Cbz-DMDA-2，2-二甲基丙二酸c。在EDC存在下，化合物c与Boc-N-甲基肼d反应，形成DMDA-2，2-二甲基丙二酸-Boc-N-甲基肼e。式A亓扁连機在另一个实施方案中，该肼连接物包括--水6元的肼连接物，其中H包括以下结构<formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula>在一个优选的实施方案中，ni是3。在以上结构中，每个R24均是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、以及未取代的杂烷基。在一个实施方案中，每个R24均独立地为H或一个QCe烷基。在另一个实施方案中，每个R24均独立地为H或CA烷基，更优选H或CH3。在另一个实施方案中，至少一个R24为甲基基团。在另一个实施方案中，每个R24均是H。每个R24被选择为对该化合物的空间位阻效应进行调整并且用于改变溶解性。在一个优选的实施方案中，H包括以下结构式在一个实施方案中，H包括一个偕二甲基取代物。在以上结构的一个实施方案中，每个R24均独立地为H或取代或未取代的烷基。6元肼连接物会经历一次环化反应，该反应将该药物与该连接物分开，并可被说明为制备本发明的6元的连接物的示例性合成路线为在含二氯甲烷的溶液中，受Cbz保护的二甲基丙氨酸a与H0At、以及CPI进行反应，形成受Cbz保护的二甲基丙氨酸肼b。该肼b通过甲醇作用而被脱保护，形成化合物c。其他肼连接物考虑本发明包括一个七元的连接物。这一连接物不可能像五元或六元连接物那样快的进行环化，但对一些药物_配体偶联物物而言这可能是优选的。类似地，该肼连接物可包括两个六元环或具有一个六元及一个五元环化产物的肼连接物。还考虑了一个五元以及七元连接物连同一个六元以及七元的连接物。另一种肼结构H具有下式其中q是0、l、2、3、4、5、或6;并且每个RM均是独立地选自下组的成员，该组的构成是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、以及未取代的杂烷基。该肼结构也可形成五_、六_、或七_元环，并且可以加入附加成分以形成多个环。二硫化物连接物(.T)在又一个实施方案中，该连接物包括可进行酶促切割的二硫化物基团。在一个实施方案中，本发明提供一种具有式3结构的细胞毒性药物_配体化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>其中，D、L1、L4、以及X4如以上所限定，并且在此进-下结构式的基团的二硫化物连接物(3)-步说明，并且J是包括具有以<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>其中每个RM均是独立地选自下组的成员，该组的构成是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、以及未取代的杂烷基；各个K是选自下组的一个成员，该组的构成为取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR21R22、NR21C0R22、0C0NR21R22、0C0R以及OR21其中R21及R22独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、及未取代的杂环烷基；a是一个整数0、l、2、3、或4;并且d是一个整数0、l、2、3、4、5、或6。该二硫化物连接物的芳香环可用一个或多个"K"基团取代。"K"基团是芳香环上的取代物，它替换原本附联于为部分环结构的四个未取代的碳之一的氢。"K"基团可能是一个单一原子，如卤素，或可能是多原子的基团，如烷基、杂烷基、氨基、硝基、羟基、烷氧基、卤烷基、以及氰基。示例性的K取代基独立地包括但不限于F、Cl、Br、I、N02、0H、0CH3、NHC0CH3、N(CH》2、NHC0CF3、以及甲基。对于"Ka"，a是0、1、2、3或4的一个整数。在一个特定的实施方案中，a是0。在一个优选的实施方案中，该连接物包含具有下式的可酶促切割的二硫化物基团<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>5、或6'在这一实施方案中，lA^、p、以及RM的身份已如以上说明，并且d是0、1、2、3、4、在一个特定实施方案中，d是1或2。更确切的二硫化物连接物如下式所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula>优选地，d是l或2。另一种二硫化物连接物如下式所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula>这一实施方案的一个特定实例如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula>优选地，d是l或2。在不同的实施方案中，二硫化物在胺的邻位。在另一个特定的实施方案中，a是O。在一个优选的实施方案中，RM独立地选自H和CH3。制备本发明的二硫化物连接物的示例性合成路线为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula>3-巯基丙酸a的溶液与二硫二吡啶进行反应，形成3_甲基苯并噻唑鎗碘化物(3-methylbenzothiazoliumiodide)b。3-甲基苯并噻唑鎗碘化物c与氢氧化钠进行反应，形成化合物d。化合物d的甲醇溶液与化合物b进一步反应，形成化合物e。通过乙酰氯与甲醇的作用，化合物e被脱保护，形成化合物f。靴勿-胃鹏l,細魏在此处表示为"D"的药物可在本发明中提供为药物-可切割的底物偶联物的一部分，其中药物任选地通过一种自消连接物L1而连接至可切割的底物X2。这种偶联物可以是药物前体。药物典型具有希望的生物活性，并包含连接至可切割的底物的反应性官能团。希望的生物活性包括体诊断、治疗、减轻、处理或预防动物中(如人)的疾病。优选的反应性官能团包括伯胺或仲胺、羟基、巯基、羧基、醛及酮。更优选的反应性官能团包括羟基、伯胺或仲胺、巯基、以及羧酸官能团。甚至更优选的反应性官能团包括羟基、伯胺和仲胺以及羧酸官能团。药物典型具有至少一个，但可有2、3、4、5、6或更多个反应性官能团。药物-可切割的底物偶联物对于相应的药物有效的通常目的来说是有效的，但因具有将药物运送至特别有益的希望的细胞(例如肿瘤细胞)的能力，也可能具有优异疗效。例如，药物可选择在肿瘤细胞的部位通过偶联至肿瘤特异性可切割的底物而被活化。这些肿瘤特异性药物-可切割的底物偶联物具有来自于可切割的底物的特异性的肿瘤特异性。当该可切割的底物优选地在肿瘤细胞内部或周围被切割时出现该特异性。实例包括这样的偶联物，它们是肿瘤特异性的酶或天然或人工地与肿瘤相关联的酶的高度选择性的底物。这些酶以充足的量存在于肿瘤附近以便在肿瘤附近产生胞毒性水平的游离态药物。在另一称作抗体导向的酶药物前体治疗(ADEPT)的方法中，一种酶被附联至对肿瘤抗原有特异性的抗体，藉此将该酶导向至肿瘤细胞部位。然后将药物偶联至一种底物，该底物可由附联至该肿瘤特异性抗体的酶切割。如此，这些药物_可切割的底物偶联物具有肿瘤特异性，该肿瘤特异性产生于通过将酶附联至肿瘤特异性抗体，让酶在肿瘤细胞的部位定位。药物-可切割的底物复合体的一个优点是比相对应的游离态药物的毒性低；此外，因特异性增高将导致较高百分比的复合体存在于肿瘤部位，故复合体特异性允许比较游离态药物使用更低的总浓度。在一个实施方案中，本发明提供具有根据式2结构式的细胞毒性药物-可切割的底物化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula>其中符号LM戈表一个自消间隔物，其中m是0、l、2、3、4、5、或6的一个整数。优选地，M是0、1或2。符号x2代表可切割的底物，优选地是一种酶可切割的底物。在此处表示为"D"的药物可在本发明中提供为药物-可切割的底物偶联物的一部分，其中药物通过一种肽基或其他连接物、或作为具有可切割的底物的一种偶联物而连接至配体。药物必须具有希望的生物活性，并包含一种反应性官能团以便连接至配体。希望的生物活性包括体诊断、治疗、减轻、处理或预防动物中(如人)的疾病。如此只要具有所需反应性官能团，术语"药物"是指在官方美国药典、官方美国顺势疗法药典或官方国家处方集或其任何补充中识别为药物的化学品。示例性药物陈述于医师参考手册(PDR)及美国食品药物管理局(FDA)所维持的橙皮书中。新药持续地被发现与开发，本发明提供这些新药也并入本发明的药物_配体复合体中。优选的官能团包括伯胺或仲胺、羟基、巯基、羧基、醛及酮。更优选的官能团包括羟基、伯胺或仲胺、巯基、以及羧酸官能团。甚至更优选的官能团包括羟基、伯胺和仲胺以及羧酸官能团。药物必须具有至少一个，但可有2、3、4、5、6或更多个反应性官能团。此外，自消间隔物L1可并入至药物的反应性官能团与肽或其他连接物或可切割的底物之间。药物-配体偶联物物对于相应的药物有效的通常目的来说是有效的，但因其将药物运送至特别有益的希望的细胞的能力(对于至少一些配体来说是固有的)而具有优异疗效。示例性药物包括蛋白质、肽、及包含连接至配体的官能团的小分子药物。更确切地说，这些药物包括(例如)酶抑制剂，如二氢叶酸还原酶抑制剂、胸甘酸合酶抑制剂、DNA插层剂、DNA切割剂、拓朴异构酶抑制剂、蒽环类抗生素家族药物、长春胺药物、丝裂霉素、博来霉素、细胞毒性核苷、蝶啶家族药物、伸二炔(diynene)类、鬼臼毒素、分化诱导剂及紫杉酚类。本发明优选的药物包括在癌症治疗中有用的细胞毒类药物及其他具有希望的生物活性的小分子、蛋白质或多肽，如毒素。药物可选择在肿瘤细胞通过偶联至肿瘤特异性配体而被活化。这些肿瘤特异性药物-配体偶联物物具有来自于配体的特异性的肿瘤特异性。其实例是药物_配体偶联物物，药物_配体偶联物物是对肿瘤特异性酶的高度选择性底物，其中这些酶以充足的量存在于肿瘤附近以便在肿瘤附近产生细胞毒性水平的游离态药物。这些肿瘤特异性药物-配体复合体的一个优点是它们对人血清中的伺机性蛋白是稳定的。药物-配体复合体的另一个优点是比相对应的游离态药物的毒性低；此外，因特异性增高将导致较高百分比的复合体存在于肿瘤部位，故复合体特异性允许比较游离态药物使用更低的总浓度。细胞毒素在本发明中有用的细胞毒类药物例如包括多卡霉素类及CC-1065、以及及它们的类似物，包括多卡霉素的基于CBI(l，2，9，9a-四氢环丙烷[c]苯并[e]吲哚_4_酮)的类似物，基于MCBI(7-甲氧基-l，2，9，9a-四氢环丙烷[c]苯并[e]吲哚-4-酮)的类似物，以及(^1(7-氰基-1，2，9，9&-四氢环丙烷[c]苯并[e]吲哚-4-酮)的类似物及CC-1065，阿霉素及阿霉素偶联物(如吗啉代_阿霉素及氰基吗啉代_阿霉素)、多拉司他汀类(如多拉司他汀-10、考布他汀、剌孢霉素、美登素、美登素类似物、DM-1、欧瑞抑制素(auristatin)E、欧瑞抑制素EB(AEB)、欧瑞抑制素EFP(AEFP)、一甲基欧瑞抑制素E(MMAE)、5-苯甲酰基戊酸-AE酯(AEVB)、管溶解素类(tubulysins)、戴索拉左(disorazole)、埃博霉素(印othilones)、紫杉醇、多西他赛、SN-38、拓扑替康、根霉素、棘霉素、秋水仙碱、长春碱、长春地辛、雌莫司汀、西马多丁、伊鲁色洛冰(eleutherobin)、甲氨蝶呤、甲基叶酸、二氯甲氨喋呤、5_氟尿嘧啶、6-巯嘌呤、阿糖胞苷、美法仑、洛诺生、异长春碱、放线菌素、柔红霉素及柔红霉素偶联物、丝裂霉素C、丝裂霉素A、洋红霉素、丝裂霉素、太利苏霉素)，鬼臼毒素及鬼臼毒素衍生物(如依托泊苷或磷酸依托泊苷、长春新碱、紫杉酚、多西他赛、视黄酸、丁酸、N8-乙酰基亚精胺、喜树碱及它们的类似物)。其他已知药物也可经改性来提供偶联至此处所述连接物的一个官能团。这种种化学修饰为本领域所已知。优选的用于本发明的细胞毒素包括多卡霉素类、CC-1065及其基于CCBI的类似物及基于MCBI的类似物、吗啉代_阿霉素、氰基吗啉代_阿霉素、多拉司他汀-10、考布他汀、剌孢霉素、美登素、匿-l、欧瑞抑制素E、AEB、AEFP、MMAE、管溶解素A、戴索拉左、埃博霉素A及埃博霉素B。本发明的特别优选的细胞毒素是强力活性的多卡霉素衍生物及CC-1065。亲代药剂是格外强力的抗肿瘤抗生素，可通过DNA的可逆的空间电子控制序列选择性烷化来衍生其生物功效(Bogeretal.J.Org.Chem.55:4499(1990);Bogeretal.J.Am.Chem.Soc.112:8961(1990);Bogeretal.，J.Am.Chem.Soc.113:6645(1991);Bogeretal.J.Am.Chem.Soc.115:9872(1993);Bogeretal.，Bioorg.Med.Chem.Lett.2:759(1992))。于最初揭示多卡霉素类之后，有全面性研究致力于阐明多卡霉素类的DNA烷化选择性及其结构起源。本发明的一个特别优选的方面提供了一种细胞毒素化合物，该化合物具有根据下式7的一个结构其中，环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基中的成员。示例性的环状体系包括苯基以及吡咯。符号E和G独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原67子、一个单键，或者E和G可任选地进行结合形成一个环状体系，该系统选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基。符号X表示选自0、S以及NR23中的成员。R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基的成员。符号R3表示选自(二0)、SR"、NHR11以及OR"中的成员，其中R"是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(0)R12R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12或SiR12R13R14。符号R12、R13、以及R14独立地表示H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含2个或多个杂原子。RR"、或R14中的一个或多个在其结构内可包括一个可切割的基团。R4、R4'、R5以及15'是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2的成员，其中，n是从1到20的一个整数，或者R4、R4'、15及15'的任何相邻的一对与它们所附着的碳原子一起结合，形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系。R15和R16独立地表示H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中R15和R16与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子。一个示例性的结构是苯胺。R4、R4'、R5、R5'、R11、R12、R13、R15以及R16在其他们的结构内可任选地包括一个或多个可切割的基团，例如可切割的连接物或可切割的底物。示例性的可切割的基团包括，但不限于肽、氨基酸、肼、二硫化物、以及头孢菌素衍生物。在一些实施方案中，R4、R4，、R5、R5，、R"、R。、R"、R15以及R16中的至少一个用于将药物与本发明的连接物或酶可切割的底物相结合，如此处所说明的，例如连接至U上(若存在的话)，或连接至F、H、J、或X2上。在又另一个示例性实施方案中，R4、R4'、R5、R5'、R11、R12、R13、R15以及R16中的至少一个带有适合用于偶联该化合物的一个反应基团。在另一个示例性实施方案中，^、R^、R5、R5'、R"、R12、R13、R15以及R"独立地选自H、取代的烷基以及取代的杂烷基，且在烷基或杂烷基部分的自由末端具有一个反应性功能基团。R4、R4'、R5、R5'、R11、R12、R13、R15以及R16中的一个或多个可结合至其他的种类上，例如靶试齐U、可探测的标记、固相支撑体等。R6是一个单键，该单键存在或不存在。当R6存在时，R6和R7结合形成一个环丙基的环。R7是CH厂f或-CH厂。当R7是-CH厂时，它是环丙烷环的一个组成部分。符号f表示离去基团如卤素，例如Cl、Br或F。以不会违反化学价原则的方式解释R6和R7的组合。f可以是任何离去基团。有用的离去基团包括但不限于卤素、叠氮化物、磺酸酯类(如烷基磺酰基、芳基磺酰基)、氧鎗离子、高氯酸烷基酯、铵基烷基磺酸酯、烷基氟代磺酸酯以及氟化化合物(如三氟甲磺酸盐、全氟丁基甲磺酸盐、三氟乙磺酸盐)以及类似物。作为离去基团有用的具体的卤素是F、C1以及Br。对于特定的反应条件组合来说适当的这些以及其他离去基团的选择是在本领域的普通技术人员的能力之内(参见，例如，MarchJ，Advanced0kganicCHEMISTKY，2ndEdition，JohnWileyandSons，1992;SandlerSR，KaroW，OrganicFunctionalGroupPreparations'2ndEdition，AcademicPress，Inc.，1983;以及WadeLG，Compendiumof0RGANICSYNTHETICMEra0DS，JohnWileyandSons，1980)。六元环中的曲线表明该环可具有一个或多个不饱和度，并且它可以是芳香的。因此，环结构(如以下所给出)、以及相关结构在式8的范围内<formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>以及<formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>在一些实施方案中，R4、R4'、R5、以及R5'中的至少一个将所述药物连接至L1(若存在的话)上，或连接至F、H、J、或f上，并且包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>其中v是从1到6的整数；并且R27、R27'、R28以及尺28'各自均独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基。在一些实施方案中，R27、R27'、R28和R28'都是H。在一些实施方案中，v是一个从1到3的整数(优选是1)。这一单位可用于将芳基取代基与药物分开，并因此阻碍或避免产生为多重抗药性的底物的化合物。在一个实施方案中，R11包括一个部分，X5，它不会自我环化，并将药物连接至L1(若存在的话)上，或连接至F、H、J、或f上。部分XM尤选使用酶可切割的，并被切割时提供活性药物。作为一个实例，R"可具有以下结构式(其右侧与药物的其余部分相偶合)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>在一个示例性实施方案中，具有式7的环状体系A是一个取代或未取代的苯基环。环状体系A可被在此限定部分中给出的一个或多个芳基基团取代基所取代。在一些实施方案中，该苯基环被CN或甲氧基部分所取代。在一些实施方案中，R4、R4'、R5、以及R"中的至少一个将所述药物与L1(若存在的话)相连接，或与F、H、J、或X2相连接，并且R3选自SR11、NHR11以及0R11。R11选自_S0(0H)2、_P0(0H)2、_AAn、_Si(CH3)2C(CH3)3、_C(0)0PhNH(AA)m、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage70</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>及其药学上可接受的盐，其中n是1到10范围内的任意整数，m是1到4范围内的任意整数，P是1到6范围内的任意整数，并且AA是任何自然或非自然氨基酸。在一些实施方案中，AAn或AAm选自以上所述的相同氨基酸序列用于肽连接物(F)并且任选地与R4、R"、R5或R5'的连接物部分所用的氨基酸序列相同。在至少一些实施方案中，R3在体内是可切割的以提供一种活性药物化合物。在至少一些实施方案中，R3提高化合物在体内的溶解度。在一些实施方案中，血液中活性药物浓度降低的速率基本上快于提供活性药物的R3的切割速率。当活性药物的毒性基本上高于药物前体形式的毒性时，这可能是特别有用的。在其他的实施方案中，为提供活性药物而切割R3的速率快于血液中活性药物浓度的降低的在另一个示例性实施方案中，本发明提供了具有根据式9的结构的一种化合物在这个实施方案中，取代基R^R^R4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>(9)。R5、R5，、R6、R7以及X的身份，连同对于特定的实施方案的优选项，基本上如同以上对于式7所做的说明所述。符号Z是独立选自0、S和NR23的成员。符号R23表示选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基的成员。对每个R23进行独立地选择。符号W代表H、取代或未取代的低级烷基，或C(0)R8或C02R8。R8是选自取代的烷基、未取代的烷基、NRY。、NRHR1。以及0W的成员。R9和R10独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基。f是H、或取代或未取代的低级烷基。通常优选的是当R2是取代的烷基时，它不同于全氟烷基，例如CF3。在一个实施方案中，R2是一个取代的烷基，其中该取代物不是卤素。在另一个实施方案中，R2是一个未取代的烷基。在一些实施方案中，R1是一个酯部分，例如C02CH3。在一些实施方案中，R2是一个低级的烷基基团，它可以是取代或未取代的。一个目前优选的低级烷基基团是CH3。在一些优选的实施方案中，R1是C02CH3且R2是CH3。在一些实施方案中，R4、R4'、R5、以及R"是独立地选自H、卤素、NH2、OMe、0((^2)2^129)2、以及冊2的成员。每个R"均独立地是H或低级烷基(例如甲基)。在一些实施方案中，对药物进行选择，使离去基团X1是选自下组的成员，该组的构成为卤素、烷基磺酰基、芳基磺酰基、以及叠氮化物。在一些实施方案中，X1是F、Cl、或Br。在一些实施方案中，Z是O或NH。在一些实施方案中，X是O。在又另一个示例性实施方案中，本发明提供了具有根据式10或11的结构的化合物具有式7的多卡霉素类似物的另一个优选的结构是一个结构，其中环状体系A是一个未取代的或取代的苯基环。当环状体系A是吡咯时，在以上说明的具有式7的结构的药物分子上的优选的取代物也是当环状体系A是未取代的或取代的苯基环时优选的取代物。例如，在一个优选的实施方案中，药物(D)包含一个结构(12):在这个结构中，lf、Re、lf、X是如以上对式7所说明。此外，Z是选自0、S以及NR23的成员，其中R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、和酰基的成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)18、或C02R8，其中R8是选自NR9R1Q和OR9的成员，其中R9和Rw是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基的成员；R1'是H、取代或未取代的低级烷基、或C(0)R8，其中R8是选自NR9R1Q和OR9的成员，其中R9和Rw是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基的成员；f是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基、或氰基、或烷氧基；而R2，是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基。R^R"、RS、RS'、R"、RR"、R"或RW中的至少一个将药物连接至匸(若存在的话)上，或连接至F、H、J、或f上。药物(D)的另一个实施方案包括一个结构式(13)，其中R4和R4'已相结合形成一个杂环烷基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>在这个结构中，RS、RS、RS'、Re、R、X是如以上对式7所说明。此外，Z是选自0、S以及NR23的成员，其中R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、和酰基的一个成员；R32选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NR"、以及0(CH2)nN(CH3)2，其中，n是从1到20的一个整数。R15禾口R16独自地表示H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基以及取代或未取代的肽基，其中R15和R16与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有从4到6元，任选地包含两个或更多个杂原子。R32在其结构内任选地包含一个或多个可切割的基团，例如可切割的连接物或可切割的底物。示例性的可切割的基团包括，但不限于肽、氨基酸、肼、二硫化物、以及头孢菌素衍生物。而且，此处说明的R4、R4'、R5、R5'、R15、以及R16的取代基的任何选择对于R32也是可应用的。R5、R5，、R"、RW6或R32中的至少一个将药物连接至匸(若存在的话)上，或连接至F、H、J、或f上。在至少一些实施方案中，R"将药物连接至L、若存在的话)上，或连接至F、H、J、或f上。这个化合物的一个优选的实施方案是R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是选自NR9R1Q和OR9的成员，其中R9和RW是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基的成员；R1'是H、取代或未取代的低级烷基、或C(0)R8，其中R8是选自NR9R1Q和OR9的成员，其中R9和Rw是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基的成员；!^是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基、或氰基、或烷氧基；而R2，是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基。另一个实施方案具有下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage74</formula>在这个结构中，A、R6、R7、X、R4、R4，、R、以及R5，是如以上对式7所说明。此夕卜，Z是选自0、S以及NR23的成员，其中R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、和酰基的一个成员；R33选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NR"、以及0(CH2)nN(CH3)2，其中，n是从1到20的一个整数。R15禾口R16独自地表示H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基以及取代或未取代的肽基，其中R15和R16与它们所附着的氮原子一起任选地结合，形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有从4到6元，任选地包含两个或更多个杂原子。R^将药物连接至L、若存在的话)上，或连接至F、H、J、或f上。优选地，A是取代或未取代的苯基或取代或未取代的吡咯。另外，此处说明的用于R11的取代基的任何选择也可应用于R33。配体f表示一种配体，该配体选自下组，其构成为受保护的反应性官能团、未受保护的反应性官能团、可检测的标记、以及靶向剂。优选的配体是靶向剂，如抗体及其片段。在一些实施方案中，基团f可以被说明为选自R"、C00R，C(0)NR，以及C(0)NNR29的成员，其中R29是选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的杂芳基的一个成员。在又另一个示例性的实施方案中，I^是选自H;0H;NHNH2;;中的一个成员。O9其中R^代表取代或未取代的烷基，该烷基以一个反应性官能团封端；取代或未取代的杂芳基，该杂芳基以一个官能团封端。以上结构可以充当反应保护基团，这些反应保护基团可以与(例如)靶向剂(如抗体)的一个氨基酸的侧链进行反应，由此使该靶向剂连接至该连接物-药物部分上。靶向剂本发明的连接物臂及细胞毒素可连接至靶向剂，该靶向剂选择性递送一个有效负载至身体的细胞、器官或区域。示例性的靶向剂类，如各种抗体(例如嵌合型抗体、人源化抗体及人抗体)、用于受体的配体、凝集素类、糖类、抗体类、等等在本领域内是已知的并且是有用的而对实施本发明没有限制。其他一些靶向剂包括一类化合物，这些化合物不包括特定的分子辨识基序，而包括大分子类，如聚(乙二醇)、多糖、聚氨基酸等，它们增加细胞毒素的分子量。额外分子量影响细胞毒素的药物代谢动力学，例如血清半衰期。在一个具体实施方案中，本发明提供具有靶向剂的细胞毒素、连接物或细胞毒素-连接物偶联物，该靶向剂是生物分子，例如抗体、受体、肽、凝集素、糖、核酸或它们的一个组合。可用于实施本发明的生物分子可衍生自任何来源。生物分子可从天然来源分离，或可通过合成方法产生。蛋白质可以是天然蛋白质或突变蛋白质。可通过本领域的普通技术人员已知的化学诱变、位点定向诱变、或其他诱导突变的手段执行突变。可用于实施本发明的蛋白质包括(例如)酶、抗原、抗体、以及受体。抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体，但最优选为单克隆抗体。肽及核酸可分离自天然来源，或可以是全部合成或部分合成来源。在一个优选的实施方案中，靶向剂是一种抗体或抗体片段，该抗体或抗体片段是基于它对于在所感兴趣的靶细胞或靶位点上表达的抗原的特异性来进行选择。已经识别广泛的多种肿瘤特异性抗原或其他疾病特异性抗原，并且这些抗原的抗体已被使用或已经提出用于治疗此类肿瘤或其他疾病。本领域已知的抗体可用于本发明的偶联物，特别用于治疗靶抗原相关联的疾病。本发明的抗体-连接物-药物偶联物可锁定目标的靶抗原(及其相关疾病)的非限制性实例包括Her2(乳癌)、CD20(淋巴瘤)、EGFR(实体瘤)、CD22(淋巴瘤，包括非何杰金氏淋巴瘤)、CD52(慢性淋巴细胞白血病)、CD33(急性骨髓性白血病)、CD4(淋巴瘤、自身免疫疾病，包括类风湿性关节炎)、CD30(淋巴瘤，包括非何杰金氏淋巴瘤)、Mucl8(黑素瘤)、整联蛋白类(实体瘤)、PSMA(前列腺癌、良性前列腺增生)、CEA(结肠直肠癌)、CDlla(牛皮癣)、CD80(牛皮癣)、CD23(气喘)、CD40L(免疫性血小板减少性紫癜)、CTLA4(T细胞淋巴瘤)、以及BLys(自身免疫疾病，包括系统性红斑狼疮)。在这些实施方案中，其中识别部分为蛋白质或抗体的，蛋白质可被系至表面或自我组装单层(SAM)组件，或蛋白质通过蛋白质表面上可用的任一个反应性肽残基而通过一个间隔物连接。在一个优选的实施方案中，反应基团为胺或羧酸根。在特别优选的实施方案中，反应基团是赖氨酸残基的e-胺。此外，这些分子可通过非特异性相互作用(例如化学吸附、物理吸附)而吸附至基质或SAM表面。属于抗体的识别部分可用来识别分析物，分析物为蛋白质，肽，核酸，糖类或小分子(例如药物、除草剂、杀虫剂)，工业用化学品、以及战争试剂。对特定分子提引出抗体的方法为本领域普通技术人员所熟知。参见美国专利号5/147，786，1992年9月15日核发给Feng等人；美国专利号5/334，528，1994年8月2日核发给Stanker等人；美国专利号5/686，237，1997年11月11日核发给Al-Bayati，M.A.S.;及美国专利号5/573，922，1996年ll月12日核发给Hoess等人。抗体附联至表面的方法也是本领域已知的。参见Delamarcheetal.Langmuir12:1944-1946(1996)。靶向剂可通过任一种可用的反应基团附联至本发明的连接物。例如，肽可通过胺、羧基、巯基或羟基而附联。这样一种基团可驻在肽末端或驻在肽链内部的一个位置。核酸可通过碱基上的反应基团(例如环外胺)或糖部分上可用的羟基(例如3'_羟基或5'-羟基)而附联。肽及核酸链可进一步在一个或多个部位衍生来允许适当反应基团附联至链上。参见Chriseyetal.NucleicAcidsRes.24:3031-3039(1996)。当肽或核酸为全部合成分子或部分合成分子时，反应基团或经过遮蔽的反应基团可在合成过程结合入其中。多种适合结合于肽及核酸二者的反应基团的衍生单体为本领域普通技术人员所已知。参见例如T皿Peptides:Analysis，Synthesis'Biology，Vol.2:SpecialMethodsinPeptideSynthesis,，，Gross,E.andMelenhofer，J.，Eds.，AcademicPress,NewYork(1980)。许多有用的单体是可商购的(Bachem、Sigma等)。然后这种经遮蔽的基团在合成后被解除遮蔽，此时变成可供与本发明化合物的组分反应。核酸靶向剂例如包括适体、反义化合物、以及形成三螺旋的核酸。典型地，糖残基的羟基、来自于碱残基的氨基、或核苷酸的磷酸氧被用作为所需化学官能度，来将基于核苷酸的靶向剂偶合至细胞毒素。然而，本领域普通技术人员将容易地理解其他"非天然"反应官能度可通过常规技术附加至核酸。例如，糖残基的羟基可使用本领域所熟知的技术而转换成为巯基或氨基。适体(或核酸抗体)是可与特定的分子标靶结合的单链或双链DNA或单链RNA分子。通常，适体是通过与血液中循环的标靶汇集物结合，通过抑制分子标靶(例如蛋白质)的作用来发挥功能。适体具有化学官能度，并因此可因此处所述而共价键合至细胞毒素。虽然广泛的多种分子标靶可与适体形成非共价关联但为特异性关联，包括小分子药物、代谢产物、辅因子、毒素、基于糖的药物、基于核苷酸的药物、糖蛋白、以及类似物，但通常分子标靶将包含蛋白质或肽，包括血清蛋白、激肽、类二十烷酸类、细胞表面分子等。适体的实例包括吉里(Gilead's)抗凝血酶抑制剂GS522、以及其衍生物(GileadScience,FosterCity，Calif.)。还参见Macayaetal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:3745-9(1993);76Bocketal.Nature(London)355:564-566(1992)andWangetal.Biochem.32:1899-904(1993)。给定生物分子的特定适体可使用本领域已知的技术识别。参见例如Toole等人(1992)PCT公开号WO92/14843;Tuerk及Gold(1991)PCT公开号WO91/19813;Weintraub及Hutchinson(1992)PCT公开号92/05285;及EllingtonandSzostak，Nature346:818(1990)。简言之，这些技术典型地涉及分子标靶与寡核苷酸的随机混合物复合。适体-分子标靶复合体从未经复合的寡核苷酸分离。适体从分离的复合体中回收及扩增。这种循环被重复进行来识别出对分子标靶具有最高亲和力的这些适体分子。对于由于基因的不适当表达所导致的疾病，特异性预防或减少此类基因的表达代表着理想的治疗。原则上，通过与mRNA中可接近的一个序列、或前mRNA加工所必需的转录本内部的一个序列、或基因本身内部的一个序列互补的单链脱氧核苷酸或核糖脱氧核苷酸的杂交，可抑制、减少、或关闭特定基因产物的产生。这种基因控制模式通称为反义抑制或反基因抑制。通过偶联至烷化剂的核酸(例如本发明的烷化剂的核酸)可赋予额外疗效。反义化合物是一些核酸，这些核酸被设计用来结合并使之失去功能、或防止负责生成特定蛋白质的mRNA的产生。反义化合物包括反义RNA或反义DNA、单链或双链寡核苷酸或它们的类似物，它们可特异地杂交至个别mRNA种类，并防止该mRNA种类的转录和/或RNA加工，和/或防止所编码的多肽的翻译，并由此执行个别编码多肽量的减少。Chingetal.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:10006-10010(1989);Broderetal.Ann.Int.Med.113:604-618(1990);Loreauetal.FEBSLetters274:53-56(1990);Holcenberg等人的W091/11535;W091/09865;W091/04753;W090/13641;W091/13080，W091/06629，以及EP386563)。由于其优异的标靶敏感度、以及选择性，反义寡核苷酸可用于将治疗剂例如本发明的细胞毒素递送至期望的分子标靶。其他文献已近报道，核酸可通过三股螺旋的形成而结合至双螺旋DNA，并抑制转录和/或DNA合成。三股螺旋化合物(也称作为三股药物)是寡核苷酸，该寡核苷酸结合至双链DNA序列并意在选择性抑制致病基因的转录，致病基因例如是病毒基因(如HIV病毒及单纯疱疹病毒)、以及致癌基因，即三股螺旋化合物停止细胞核的蛋白质的产生。这些药物可直接结合至细胞基因组中的双链DNA来形成三股螺旋，并阻止细胞制造靶蛋白质。参见例如PCT公开文件号W092/10590、W092/09705、W091/06626、以及美国专利号5，176,996。因此，本发明的细胞毒素也可与形成三股螺旋的核酸序列相偶联。核酸(例如反义化合物、以及三股螺旋药物)的位点特异性不会显著受到磷酸二酯键的修饰、或受到寡核苷酸末端的化学修饰的显著影响。结果，这些核酸可经过化学修饰；提升总的结合稳定性，提高对化学分解的稳定性，提高寡核苷酸转运入细胞内部的速率，并对分子给予化学反应性。组成反义治疗中有用的各种核酸的总体办法已由vanderKroletal.，Biotechniques6:958-976(1988)andSteinetal.CancerRes.48:2659-2668(1988)综述。因此，在一个示例性实施方案中，本发明的细胞毒素系通过磷酸二酯键的修饰而与核酸相偶联。此外，本发明的适体、反义化合物、以及载有细胞毒素的三股螺旋药物也包括核苷酸置换、添加、缺失或转座，只要保有与相关靶序列特异性杂交或结合作为寡核苷酸的功能特性即可。例如，一些实施方案采用硫代磷酸酯类似物，它们比其天然存在的磷酸二酯相似物，对被核酸酶分解更具有抵抗力，因此预期在体内将有更高持久性与更大强度(参见例如Campbelletal.，J.Biochem.Biophys.Methods20:259-267(1990))。寡核苷酸的氨基磷酸酯衍生物也已知可结合至互补的多核苷酸，有额外适应共价附联配体种类的能力，并适合用于本发明方法。参见例如Froehleretal.，NucleicAcidsRes.16(11):4831(1988)。在一些实施方案中，适体、反义化合物、以及三股螺旋药物将包含0-甲基核糖核苷酸(EP公告号360609)。也可使用嵌合型寡核苷酸(Dagleetal.，NucleicAcidsRes.18:4751(1990))。为了一些应用，反义寡核苷酸、以及三股螺旋可包括聚酰胺核酸(Nielsenetal.'Science254:1497(1991)以及PCT公开号WO90/15065)或其他阳离子衍生物(Letsingeretal.，J.Am.Chem.Soc.110:4470-4471(1988))。其他应用可利用寡核苷酸，其中磷酸二酯键中的一个或多个已经以电子等排基团例如长2-4个原子的核苷酸间键合取代，如PCT公开号WO92/05186及91/06556所述，或以甲酰縮醛基(formacetal)取代(Matteuccietal.，J.Am.Chem.Soc.113:7767-7768(1991))或以酰胺基取代(Nielsenetal.，Science254:1497-1500(1991))。此外，核苷酸类似物(例如其中糖或碱经过化学修饰)可在本发明中采用。嘌呤类、以及嘧啶类的"类似的"形式是本领域通常已知的那些形式，其中多种被用作化学治疗剂。示例性的但未穷尽的名单包括4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羧基甲基胺基甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧基甲基胺基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、肌苷、^-异戊烯腺嘌呤、1-甲基腺嘌呤u-甲基假尿嘧啶u-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-甲基腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氨基甲尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、P-D-甘露糖基奎辛(mannosylqueosine)、5'-甲氧羰基甲尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、伟伯妥索辛(wybutoxosine)、假尿嘧啶、奎辛(queosine)、2-硫胞嘧啶、5_甲基_2_硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲尿嘧啶、N-尿嘧啶_5-氧基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、假尿嘧啶、奎辛、2-硫胞嘧啶、及2，6-二氨基嘌呤。此外，常规碱基为卤化碱基。此外，碱基上的2'-呋喃糖位置可具有未带电的庞大基团取代。未带电的庞大基团的实例包括支链烷基、糖、以及支链糖。末端修饰也提供有用程序来将细胞毒素偶联至核酸，修饰细胞型特异性、药物代谢动力学、核通透性、以及寡核苷酸药剂的绝对细胞摄取速率。例如，在5'端与3'端包括反应基团的一系列取代包括反应基团是已知的，允许细胞毒素的共价附联。参见例如Oligodeoxynucleotides:AntisenseInhibitorsofGeneExpression，(1989)Cohen，Ed.，CRCPress;Pr。spectsforANTISENSENUCLEICACIDTHERAPEUTICSF0RCANCER細AIDS,(1991)，Wickstrom，Ed.，Wiley-Liss;Ge冊Regulation:BiologyofANTISENSERNA超。DNA，(1992)EricksonandIzant，Eds.，RayenPress;以及A醫鹏eRNA細DNA，(1"2)，Murray,Ed.，Wiley-Liss。有关反义化合物的总体方法可参见ANT!s鹏ERNA細DNA，(1988)，D.A.Melton，Ed.，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,N.Y.)。在至少一个实施方案中，如美国临时申请号系列号60/957，271(其全文由此通过引用进行结合)所说明，通过引入一个半胱氨酸残基来修饰抗体的C末端。此类修饰包括但不限于在全长重链序列的C端处或在其附近替换现有的氨基酸残基，连同将一个包含半胱氨酸的延长序列(extension)引入至一个全长重链序列的c端。在一个实施方案中，包含半胱氨酸的延长序列包括序列丙氨酸_丙氨酸_半胱氨酸(从n端至c端)。在至少一些实施方案中，此类c末端的半胱氨酸修饰的存在为化合物的偶联提供了位点，该配偶体分子例如一种治疗剂或标记物分子。特别是，由于c末端半胱氨酸修饰而出现的反应活性硫醇基团可采用以下详细说明的连接物与化合物相偶联。抗体与配偶体分子以这一方式的偶联使得可以增强对所附联的特异的位点的控制。此外，通过在c末端或在其附近引入该附联点，更优化了偶联，使得它减少或者消除对该抗体的功能特性的干扰，并且使得偶联物制备物的简化分析以及质量控制成为可能。可柃测l的标记与本发明的化合物结合使用的特定的标记或可检测的基团以及本发明的方法，只要它不显著干扰本发明的化合物的活性或使用，通常不是本发明的关键方面。可检测的基团可以是任何具有可检测的物理或化学特性的物质。此类可检测的标记在免疫测定的领域中已得到很好的发展，并且通常，在此类方法中有用的大部分任何标记都能被应用至本发明中。因此，标记是可通过光谱学、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学手段可检测的任何组分。本发明中有用的标记包括磁珠(例如dynabeadstm)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素、德克萨斯红、碱性玫瑰精等)、放射性标记(例如^，iss、"c、或"p)、酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶以及其他在elisa中常用的酶)、以及比色标记，如胶体金或有色玻璃或塑料珠(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、胶乳等)。根据本领域熟知的方法，标记可直接或间接偶合到本发明的化合物上。如以上所指，可使用多种标记，标记的选择取决于所需的灵敏度、与化合物的结合的容易程度、稳定性需求、可用的仪器操作、以及可支配的供应物。当本发明的化合物与可检测的标记相偶联时，该标记优选是一个成员，该成员选自下组，其构成为放射性同位素、荧光试剂、荧光试剂前体、生色团、酶类、以及它们的组合。将各种基团结合到抗体的方法在本领域是熟知的。例如，经常被偶联到抗体的可检测的标记是一种酶，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、P_半乳糖苷酶、以及葡萄糖氧化酶。非放射性标记常常是通过间接手段附联的。通常，配体分子(例如生物素)被共价地结合到该偶联物的一个成分上。然后该配体与另一个分子(如抗生蛋白链菌素)结合，该分子是固有地可检测的或者与信号系统(如可检测的酶、荧光化合物、或化学发光化合物)共价结合。本发明的偶联物的成分还可以直接偶联到产生信号的化合物上，例如通过与酶或荧光团相偶联。作为标记的所感兴趣的酶主要是水解酶，特别是磷酸酶、酯酶以及糖苷酶、或氧化酶(oxidotase)，特别是过氧化物酶。荧光化合物包括荧光素及其衍生物、碱性玫瑰精及其衍生物、丹酰、伞形酮等。化学发光化合物包括荧光素、以及2，3-二氢酞嗪二酮，例如鲁米诺。对于可以使用的各种标记或信号产生体系的评述，参见美国专利号4，391，904。检测标记的手段是本领域普通技术人员熟知的。因此，例如，当该标记是一种放射性标记时，检测手段包括闪烁计数器或如在放射自显影法中的照相胶片。当该标记是荧光标记时，可通过用适当光波长激发荧光染料并检测产生的荧光可对其进行检测。可通过照相胶片、通过使用电子探测器(例如电荷耦合器件(ccd)或光电倍增管、以及其类似物)，可对该荧光进行视觉上的检测。类似地，可通过提供酶的适当底物并检测产生的反应产物来对酶标记进行检测。最后，可通过观察与该标记相关的颜色对简单的比色标记进行简单地检测。因此，在各种试纸条测定(dipstickassay)中，所偶联的金经常显示成粉红色，而各种结合的珠显示出珠的颜色。荧光标记是目前优选的，因为它们具有操作上需要的预防措施少、并适合高通量显像技术(光学分析包括在包含计算机的集成系统中用于分析的图像的数字化)的优点。优选的标记典型地具有以下的一项或多项特征高灵敏度、高稳定性、低背景、低环境敏感性、以及标记的高特异性。许多荧光标记可从以下公司商购获得SIGMA化学公司(SaintLouis，M0)、MolecularProbes(Eugene,OR)、R&Dsystems(Minneapolis,MN)、PharmaciaLKBBiotechnology(Piscataway，NJ)、(XONTECHLaboratories,Inc.(PaloAlto，CA)、ChemGenesCorp.、AldrichChemicalCompany(Milwaukee,WI)、GlenResearch,Inc.、GIBCOBRLLifeTechnologies,Inc.(Gaithersburg，MD)、FlukaChemica-BiochemikaAnalytika(FlukaChemieAG，Buchs，Switzerland)、以及AppliedBiosystems(FosterCity，CA)、以及许多技术人员已知的其他的商业来源。此外，本领域的技术人员知道如何选择合适的荧光团用于特定的应用中，并且如果商业上不容易获得，则能够从头合成必需的荧光团或对可商购的荧光化合物进行合成地修饰以达到希望的荧光标记。除了小分子荧光团外，自然发生的荧光蛋白以及此类蛋白的经工程处理的类似物在本发明中也是有用的。此类蛋白包括(例如)剌胞动物的绿色荧光蛋白(Wardetal.，Photochem.Photobiol.35:803-808(1982);Levineetal.，Comp.Biochem.Physiol.，72B:77-85(1982))、来自费氏弧菌菌株的黄色荧光蛋白(Baldwinetal.，Biochemistry29:5509-15(1990))、来自共生甲藻属甲藻(dinoflagellateSymbiodiniumsp.)的多甲藻黄素-叶绿素(Morrisetal.，PlantMolecularBiology24:673:77(1994))、来自海底蓝细菌如蓝藻的藻胆蛋白，例如藻红蛋白和藻蓝蛋白(Wilbanksetal.，J.Biol.Chem.268:1226-35(1993))，及类似物。通常，在细胞毒素与靶向(或其他)试剂的间形成连接(并且任选是间隔基团)之前，这些化学官能度中的至少一个会被激活。本领域的普通技术人员将理解，使用许多种标准方法和条件可以激活化学官能度，包括羟基、氨基以及羧基基团。例如，可以通过用碳酰氯处理形成相应的氯甲酸盐或用对硝基苯氯甲酸盐处理形成相应的碳酸盐来激活细胞毒素或靶试剂的羟基。在一个示例性实施方案中，本发明利用包括一个羧基官能度的靶向剂。羧基可通过(例如)转变为相应的酰基卤化物或活性酯而被激活。这个反应可在如March,suprapp.388-89中所阐述的各种条件下进行。在一个示例性实施方案中，通过含羧基的基团与草酰氯进行反应来制备酰基卤化物。被激活的试剂与细胞毒素或细胞毒素-连接物臂结合体进行反应，以形成本发明的偶联物。本领域的普通技术人员将理解使用含羧基的靶向剂仅仅是说明性的，并且具有许多其他官能团的试剂可偶联到本发明的连接物上。反应官能团为了说明清楚，后面的讨论集中在本发明的细胞毒素对靶试剂的结合上。焦点例证本发明的一个实施方案，从这个实施方案，本领域的技术人员很容易推断出其他的实施方案。集中讨论单一的实施方案并不意味着对本发明的限制。本发明的示例性化合物含有一个反应官能团，该官能团通常位于取代或未取代的烷基或杂烷基链上，使它们易附联于其他种类上。该反应官能团的一个有利位置是该链的末端位置。在操作本发明时有用的反应基团和反应种类通常是那些在生物结合化学领域所熟知的反应基团和反应种类。反应官能团可以是受保护的或未受保护的，并且该官能团的受保护的本性可以通过有机合成领域已知的方法进行改变。用反应性细胞毒素类似物可获得的目前偏爱的反应种类是那些在相对温和的条件下进行的反应种类。这些反应种类包括担不限于亲核取代(例如，胺以及醇与酰基卤化物、活性酯的反应)、亲电取代(例如，烯胺反应)以及碳-碳以及碳-杂原子多重键的加成(例如，迈克尔反应、狄尔斯-阿尔德反应)。这些以及其他有用的反应讨论于例如March,Advanced0RGANICCHEMISTRY，3rdEd.，JohnWiley&Sons，NewYork,1985;Hermanson，BI0C0NJUGATETECHNIQUES，AcademicPress,SanDiego，1996;以及Feeneyetal.，M0DIFICATI0N。FP丽腦；AdvancesinChemistrySeries,Vol.198，AmericanChemicalSociety,Washington,D.C.，1982。示例性反应类型包括羧基及其不同的衍生物的反应，羧基衍生物包括但不限于N-羟基丁二酰亚胺酯、N-羟基苯并三唑(N-hydroxybenztriazole)酯、酰基卤、酰基咪唑、硫代酸酯、对硝基苯基酯、烷基、链烯基、炔基以及芳香酯。羟基基团可被转变为酯、醚、醛等。通过与例如胺、羧酸阴离子、硫醇阴离子、碳负离子或醇盐离子进行反应，卤烷基基团可被转变为新的种类。二烯亲合物(例如马来酰亚胺)基团参与狄尔斯-阿尔德反应。醛基或酮基基团可被转变为亚胺、腙、縮氨基脲或肟，或通过例如Grignard加成反应或烷基锂加成反应这样的机制完成这些转变。磺酰基卤化物容易与胺进行反应，例如形成磺酰胺。胺或巯基基团被(例如)酰化、烷基化或氧化。使用环加成作用、酰化作用、迈克尔加成等，可将烯转变为一系列新的种类。环氧化物容易与胺以及羟基化合物进行反应。本领域的普通技术人员将容易理解，这些连接中有许多可通过多种方法并使用多种条件产生。对酯的制备，见例如，Marchsupraatl157;对于硫代酸酯，见March,supraat362-363，491，720-722，829，941，and1172;对于碳酸酯，见March,supraat346-347;对于氨基甲酸酯，见March,supraat1156-57;对于酰胺，见Marchsupraat1152;对于脲及硫脲，见Marchsupraat1174;对于縮醛以及縮酮，见Greeneetal.supra178-210和Marchsupraatll站；对于酰氧基烷基衍生物，见PmKUGS:T。PICAL細0CULAKDKUGDELIVEKY，K.B.Sloan，ed.，MarcelDekker，Inc.，NewYork,1992;对于烯醇酉旨，见Marchsupraat1160;对于N-亚磺亚酰胺(N-sulfonylimidates)，见例如Bundgaardetal.，J.Med.Chem.，31:2066(1988);对于酸酐，见Marchsupraat355-56，636-37，990-91，and1154;对于N-酰胺，见Marchsupraat379;对于N_曼尼希碱，见Marchsupraat800-02，and828;对于羟甲基酮酯，见Petraceketal.AnnalsNYAcad.Sci.，507:353-54(1987);对于二硫化物，见Marchsupraat1160;以及对于磷酸酯及膦酰胺酯的制备。反应官能团可以未被保护并被选择，这样它们不参与或干涉反应。可替代地，反应官能基团可通过保护基团的存在受到保护而不参与反应。本领域的普通技术人员将领会怎样保护特定官能团不干扰已选择的一组反应条件。对于有用的保护基的例子，参见Greeneetal.，PKOTECTIVEGraPSIN0KGANICSYNTHESIS，JohnWiley&Sons，NewYork，1991。典型地，使用标准的化学技术将靶向剂通过它们各自的化学官能度被共价连接至细胞毒素上。任选地，连接物或试剂通过一个或多个间隔基团与该试剂进行偶合。当组合使用时，间隔基团可以是等效的或不同的。通常，在细胞毒素与反应官能团(并且任选地是间隔基团)之间形成连接之前，化学官能团中的至少一个将被激活。本领域的普通技术人员将理解，使用许多种标准方法和条件可以激活化学官能度，包括羟基、氨基以及羧基基团。在一个示例性实施方案中，本发明包含了一个作为反应官能团的羧基官能度。羧基可以如以上说明被激活。可切割的底物本发明的可切割的底物被说明为"X2"。优选地，可切割的底物是一种可被酶切割的可切割的酶底物。优选地，这种酶优选直接或间接与待处理的肿瘤或其他靶细胞相关联。该酶可以由待处理的肿瘤或其他靶细胞产生。例如，该可切割的底物可以是一种肽，该肽优选可被肿瘤或其他靶细胞周围或在其中发现的一种酶切割。另外地或可替代地，该酶可被附联于与肿瘤细胞进行特异结合的靶向试剂，例如对肿瘤抗原特异的抗体。作为适宜于偶合到以上说明的药物的酶可切割的底物的例子，PCT专利申请公开文件号W000/33888、W001/95943、WO01/95945、W002/00263以及WO02/100353(它们均通过引用结合在此)披露了可切割的肽附联于一种药物上。这种肽可被一种酶切割，例如trouase(如甲拌磷寡肽酶)、CD10(脑啡肽酶)、基质金属蛋白酶(如匪P2或匪P9)、II型跨膜丝氨酸蛋白酶(如H印sin、睾蛋白、TMPRSS4或matriptase/MT-SPl)、或与肿瘤相关的组织蛋白酶。在这个实施方案中，药物前体包括以上说明的药物、肽、稳定化基团、以及任选地在药物与肽之间的连接基团。稳定化基团附联于肽末端，以保护药物前体在到达肿瘤或其他靶细胞前不被降解。适宜的稳定化基团的例子包括非氨基酸，例如琥珀酸、二甘醇酸、马来酸、聚乙二醇、焦谷氨酸、醋酸、萘羧酸、对苯二酸、以及戊二酸衍生物；连同在天冬氨酸的P-羧基或谷氨酸的Y-羧基处附联于肽N末端的非遗传编码的氨基酸、或天冬氨酸、或谷氨酸。肽典型地包括3至12(或更多)个氨基酸。特定氨基酸的选择将依赖于，至少部分取决于将用于切割该肽的酶，以及这种肽在体内的稳定性。适宜的可切割肽的一个例子是P-AlaLeuAlaLeu(SEQIDNO.2)。这可与一个稳定化基团结合，形成琥珀酰-13-AlaLeuAlaLeu(SEQIDNO.2)。其他适宜的可切割肽的例子提供于以上引用的文献中。作为一个说明实例，CD10，也被称为脑啡肽酶、中性肽链内切酶(NEP)、以及共同的急性淋巴细胞性白血病抗原(CALLA)，是一种II型细胞-表面锌依赖型金属蛋白酶。适宜用于CD10可切割的底物包括LeuAlaLeu以及IleAlaLeu。其他已知的用于CD10的底物包括长度达50个氨基酸的肽，尽管催化效率常随底物变大而降低。另一个说明性实例基于基质金属蛋白酶(匪P)。作为也许是与肿瘤有关得到最佳表征的蛋白水解酶，在肿瘤微环境中匪P的激活存在明显的相关性。特别是，已经对可溶性基质酶匪P2(明胶酶A)以及匪P9(明胶酶B)进行了深入研究，并且它们在包括肿瘤生长在内的组织重塑中显示出被选择性地激活。已设计出可被匪P2和匪P9切割的肽设计序列并测试了下列物质的偶联物葡聚糖和甲氨喋呤(Chauetal.，BioconjugateChem.15:931-941(2004));PEG(聚乙二醇)和阿霉素(Baeetal.，DrugsExp.Clin.Res.29:15-23(2004));以及白蛋白和阿霉素(Kratzetal.，Bioorg.Med.Chem.Lett.11:2001-2006(2001))。适合与匪Ps—起使用的序列的实例包括但不限于ProValGlyLeuIleGly(SEQ.IDNO.8)、GlyProLeuGlyVal(SEQ.IDNO.9)、GlyProLeuGlyIleAlaGlyGln(SEQ.IDNO.10)、ProLeuGlyLeu(SEQ.IDNO.11)、GlyProLeuGlyMetLeuSerGln(SEQ.IDNO.12)、以及GlyProLeuGlyLeuTrpAlaGln(SEQ.IDNO.13)。(参见例如，前文引用的参考文献以及Klineetal.，Mol.Pharmaceut.1:9-22(2004)以及Liuetal.，CancerRes.60:6061-6067(2000).)。还可以使用其他可切割的底物。又一个实例是II型跨膜丝氨酸蛋白酶。这一组酶包括例如h印sin、睾蛋白、以及TMPRSS4。GlnAlaArg是一种底物序列，该序列与蛋白切割酶(matriptase)/MT-SP1(在乳腺癌和卵巢癌中被过表达)一起是有用的，并且LeuSerArg与h印sin(在前列腺和其他一些肿瘤类型中被过表达)一起是有用的。(参见例如，Leeetal.，J.Biol.Chem.275:36720-36725以及KurachiandYamamoto，HandbookofProeolyticEnzymesVol.2，2ndedition(BarrettAJ，RawlingsND&WoessnerJF，eds)pp.1699-1702(2004))。也可以使用其他可切割的底物。另一类型的可切割的底物的安排包括制备能够切割该可切割的底物的一种单独的酶，该底物变得与肿瘤或细胞相关联。例如，一种酶能够偶合到肿瘤特异的抗体(或其他实体，该实体优选地被吸引至肿瘤上或其他靶细胞上，例如受体配体)上，并接着酶_抗体偶联物可提供给病人。酶-抗体偶联物可定向到肿瘤相关的抗原并与之结合。随后，将该药物_可切割的底物的偶联物作为一种药物前体提供给病人。当药物_可切割的底物偶联物与已变得与肿瘤相关的酶相互作用时，药物只在肿瘤附近释放，这样可切割的底物被切割并且药物被释放。例如，美国专利号4，975，278;5，587，161;5，660，829;5，773，435;以及6，132，722(全部通过引用结合在此)披露了这种安排。适宜的酶以及底物的例子包括但不限于，13_内酰胺酶以及头孢菌素衍生物、羧肽酶G2及谷氨酸、以及天冬氨酸叶酸酯衍生物。在一个实施方案中，酶_抗体偶联物包括一种抗体或抗体片段，该抗体或抗体片段是基于它对于在所感兴趣的靶细胞或靶位点上表达的相关抗原的特异性来进行选择。在上文提供了抗体的讨论。适宜的头孢菌素_可切割的底物的一个例子是COOH鹏麵糊本发明的连接物和可切割的底物可被用在包含多卡霉素或CBI作细胞毒剂的偶联物中。本发明的偶联物的例子在以下作进一步详尽的说明。除非另外指明，如以上所给出的在有关细胞毒素、连接物、以及可切割的底物的部分中对取代基进行限定。A.连接物偶联物适宜的偶联物的一个例子是具有下式的一个化合物83<formula>formulaseeoriginaldocumentpage84</formula>LI是一个自消连接物；m是一个整数0、l、2、3、4、5、或6;F是一个连接物，包括以下结构式其中AA1是一个或多个成员，该成员独立地选自下组，其构成为天然氨基酸和非天然a氨基酸；c是从1到20的一个整数；L2是一个自消连接物并且包括其中每一个R17、R18、以及R19均独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基，并且w是从0到4的一个整数；o是1;」是一个连接物成员；p是0或1;f—个成员，该成员选自下组，其构成为受保护的反应官能团、未受保护的反应官能团、可检测的标记、以及靶向试剂；并且D包括一个结构<formula>formulaseeoriginaldocumentpage85</formula>其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、杂原子、单键的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及NR23中的一个成员；123是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；R3是0R11，其中，R"是一个成员，该成员选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磺酸酯、酰基、C(0)R"R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12以及SiR12R13R14，R4、R4'、15、以及15'是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NRW、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4'、R5、以及R5，的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子连接在一起以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系；其中n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是存在或不存在的一个单键，并且当R6存在时，R6和R7相连接以形成一个环丙基环；并且R7是所述环丙基环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X'是一个离去基团，其中，R11将所述药物连接至L1上，如果存在，或连接至F上。在一些实施方案中，药物具有以上的结构(9)或(12)。适宜作为偶联物使用的化合物的一个具体的例子是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage86</formula>类偶联物的另一个例子是具有下式的化合物其中Ll是一个自消连接物；m是一个整数0、l、2、3、4、5、或6;F是一个连接物，包括以下结构式其中AA1是一个或多个成员，该成员独立地选自下组，其构成为天然氨基酸和非天然a氨基酸；c是从1到20的一个整数；!^是一个自消连接物；o是0或1;L4是一个连接物成员；p是0或1;f—个成员，该成员选自下组，其构成为受保护的反应官能团、未受保护的反应官能团、可检测的标记、以及靶向试剂；并且D包括一个结构其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、杂原子、单键的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及服23中的一个成员；R"是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；R3是一个成员，该成员选自下组，其构成为(=0)、SR"、NHR11、以及0R11，其中，R"是一个成员，该成员选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磺酸酯、酰基、C(0)R"R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12、以及SiR12R13R14，其中，RR"、以及R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R4、R4'、15、以及15'是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NRW、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4'、R5、以及R5，的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子连接在一起以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，其中n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；其中，RA、R"、RS、以及RS'中的至少一个将所述药物连接至1^上，如果存在，或连接至F上，并且包括其中v是从1到6的一个整数；并且每一个RR27，、R28、以及R"'独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；R6是存在或不存在的一个单键，并且当R6存在时，R6和R7相连接以形成一个环丙基环；并且R7是所述环丙基环中与R6相连接的CH厂X1或CH2_，其中X'是一个离去基团。在一些实施方案中，药物具有以上的结构(9)或(12)。适宜作为偶联物使用的化合物的一个具体的例子是其中r是范围从0到24的一个J适宜的偶联物的另一个例子是具有下式的一个化合物X4-(L4)p-F—(L1)m—一D射匸是m是一F是个自消连接物；个整数0、1、2、3、4、5、或6;个连接物，包括以下结构式(H、、其中AA1是一个或多个成员，该成员独立地选自下组，其构成为天然氨基酸和非天然a氨基酸；c是从1到20的一个整数；L3是一个包括伯胺或仲胺或羧基官能团的一个间隔基团；其中如果L3存在，m是0并且或者L3的胺与D的一个下垂的羧基官能团形成一个酰胺键，或者L3的羧基与D的一个下垂的胺官能团形成一个酰胺键；o是O或l;L4是一个连接物成员，其中L4包括员，FT。FT直接附联于(AA"。的N末端，其中R2°是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基的一个成每一个RR^、R，以及R^独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；并且s和t独立地是从1到6的整数；p是1;f—个成员，该成员选自下组，其构成为受保护的反应官能团、未受保护的反应官能团、可检测的标记、以及靶向试剂；并且D包括一个结构其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、杂原子、单键的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S、以及NR23中的一个成员；123是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；W是一个成员，该成员选自下组，其构成为(=0)、SR"、NHR11以及0R11，其中R"是一个成员，该成员选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磺酸酯、酰基、C(0)R12R13、C(O)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12、以及SiR12R13R14，其中RR"、以及R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R4、R4'、15、以及15'是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NRW、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4'、R5、以及R5，的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子连接在一起以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，其中n是从1到20的一个整数；R"和R"独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是存在或不存在的一个单键，并且当R6存在时，R6和R7相连接以形成一个环丙基环；并且R7是所述环丙基环中与R6相连接的CH厂X1或CH2_，其中X'是一个离去基团，其中，R4、R4'、R5、R5'、R"、或R16中的至少一个将所述药物连接至L1上，如果存在，或连接至F上。在一些实施方案中，药物具有以上结构(9)或(12)。适宜作为偶联物使用的化合物的一个确切的实例是H20,H-〉OOHONHHO,0-o-NO0其中r是范围从0到24的一个作为偶联物使用的适宜的化合物的其他例子包括H;o90OOao<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage93</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>其中R是并且r是在从0到24范围内的一个整数。还可以用具有结构(13)或o的药物形成偶联物，例如以下化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage95</formula>适宜的偶联物的一个例子是具有以下结构的一种化合物其中，L1是一个自消间隔物；m是一个整数0、l、2、3、4、5、或6;X2是一个可切割的底物；并且D包括一个结构<formula>formulaseeoriginaldocumentpage96</formula>其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、杂原子、单键的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及NR23中的一个成员；123是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；R3是一个成员，该成员选自下组，其构成为(=0)、SR11、NHR"、以及OR11，其中R"是一个成员，该成员选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磺酸酯、酰基、C(0)R12R13、C(O)OR12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12、以及SiR12R13R14，其中RR"、以及R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是存在或不存在的一个单键，并且当R6存在时，R6和R7相连接以形成一个环丙基环；并且R7是所述环丙基环中与R6相连接的CH厂X1或CH2_，其中f是一个离去基团，R4、R4'、15、以及15'是一些成员，该成员独立地选自下组，其构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NR化、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5'的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子连接在一起以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，其中n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；其中，RA、R"、RS、以及RS'中的至少一个将所述药物连接至L1上，如果存在，或连接至X2上，并且是选自下组，其构成为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage97</formula>其中每一个R，R^、R"、以及R"'独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；并且v是从1到6的一个整数。适宜的可切割的连接物的例子包括P-AlaLeuAlaLeu以及<formula>formulaseeoriginaldocumentpage97</formula>在一些实施方案中，药物具有以上的结构(9)或(12)。化合物类型的实例包括其中，R是F、Cl、Br或I。药物配方与给药在另一个优选的实施方案中，本发明提供一种包括本发明化合物及药学上可接受的载体的药物配方。此处所述化合物包括药学上可接受的载体(如加成盐类或其水合物)，可使用多种途径或多种给药模式递送给病人。适宜的给药途径包括但不限于吸入、经皮、口服、直肠、经黏膜、经肠道、及肠胃外给药，包括肌内注射、皮下注射、以及静脉内注射。优选地，本发明的偶联物系经肠胃给药，更优选地经静脉内给药。如此处使用，"给药"或"给药方式"等词意图涵盖直接或间接递送化合物至其预期作用部位的全部手段。此处所述的化合物或其药学上可接受的盐和/或水合物可单独给药或组合本发明的其他化合物给药，和/或与其他治疗剂组合成混合液给药。当然，可与本发明的化合物共同给药的治疗剂的选择将部分取决于处理的病情。例如，当对患有由依赖自体诱导剂的有机体引发的疾病状态的病人给药时，本发明化合物可以包含药剂的混合液给药，该药剂用来治疗与该疾病常见相关联的疼痛、感染、以及其他症状和副作用的药剂的。此类药剂包括止痛剂、抗生素等。当对接受癌症治疗的病人给药时，化合物可在包含抗癌剂和/或补充增强剂的混合液中给药。化合物也可在包含治疗放射性治疗的副作用的药剂的混合液中给药，该药剂例如止吐剂、辐射保护剂等。可与本发明化合物共同给药的补充增强剂包括(例如)三环抗抑郁剂(丙米嗪、去甲丙咪嗪、阿米替林、氯米帕明、曲米帕明、多塞平、去甲替林、普罗替林、氯氧平、马普替林)；非三环抗抑郁药(舍曲林、曲唑酮、及西塔洛潘(citalopram));Ca+2拮抗剂(例如维拉帕米、硝苯地平、尼群地平、及卡罗维林)；两性霉素；曲帕拉醇类似物(例如它莫西芬)；抗心律不齐药(例如奎尼丁)；抗高血压药(例如利血平)；硫醇排空剂(例如布席欧宁(buthionine)、以及舒服希敏(sulfoximine));及亚叶酸牵丐。本发明的活性化合物可本身给药，或以药物组合物的形式给药，其中该活性化合物混合一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。根据本发明使用的药物组合物典型地是以常规方式配制，使用一种或多种包含赋形剂及助剂的生理上可接受的载体，该载体促进将活性化合物加工成为制剂，该制剂可供药用。适当配方系取决于所选择的给药方式的途径。对于经黏膜的给药方式，在配方中使用了适合欲穿透的障壁的穿透剂。此类渗透剂通常在本领域是已知的。对于口服给药方式，可容易地通过将活性化合物与本领域所熟知的药学上可接受的载体相组合来配制化合物。此类载体使得本发明化合物能够配制成为片剂、丸剂、糖锭剂、胶囊剂、液剂、凝胶剂、糖浆、料浆、悬浮液等，供待治疗的病人口服食用。供口服用的药物制剂可通过固体赋形剂获得，任选地将所得的混合物磨碎，并加工颗粒混合物(如果希望的话，可在添加合适的助剂后)，从而得到片剂或糖锭剂核心。适当赋形剂特别地是填充剂，例如糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羧基甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯酮(PVP)。如果希望，可添加崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或海藻酸或它的盐，例如海藻酸钠。糖锭剂核心用合适的涂层提供。为此目的，可使用浓縮的糖溶液，该糖溶液可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆胶(carbopolgel)、聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液，以及合适的多种有机溶剂或多种溶剂混合物。可将染料或颜料添加到片剂或糖锭剂的涂层以用于识别或标明活性化合物剂量的不同组合。可用于口服的药物配制品包括由明胶制成的插接式胶囊(push-fitc即sule)以及由明胶和一种增塑剂(例如甘油或山梨醇)制成的密封式软胶囊。插接式胶囊可含有与一种填料(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)，和/或润滑剂(如滑石粉或硬脂酸镁)以及，任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，该活性化合物可溶解或悬浮于合适的液体中(如脂肪油、液体石蜡，或液体聚乙二醇)。此外，可添加稳定剂。所有用于口服给药方式的制剂应当是处于适合于这种给药方式的剂量中。对于口腔含化给药方式，组合物可采用以常规方式配制的片剂或锭剂形式。对于通过吸入给药，根据本发明所使用的化合物可方便地使用适宜的推进剂(例如二氯二氟乙烷、三氯氟甲烷、克立氟烷、二氧化碳、或其他适宜气体)从加压包装或雾化器以气雾剂喷雾的形式递送。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供一阀以递送经过计量的量来决定。所制成的供在吸入器或吹入器使用的的胶囊和药筒(例如明胶的)被配制成包含化合物与适当粉末基(例如乳糖或淀粉)的粉状混合物。可配制化合物用于通过注射进行肠胃外给药方式，例如通过大剂量注射或通过连续输注。注射是本发明组合物的一种优选的给药方法。注射用的配制品可呈现在单位剂型中，单位剂型例如包装于安瓿剂或包装于多剂量容器中。组合物可采取油性或水性载体中悬浮液、溶液或乳液形式，并可含有配方剂，例如可添加悬浮剂、稳定剂和/或分散剂，例如交联聚乙烯基吡咯酮、琼脂或海藻酸或例如海藻酸的盐。肠胃外给药方式用的药物配制品包括呈水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，可将活性化合物的悬浮液制备成适当油性注射悬浮液。适宜的亲脂溶剂或亲脂载体包括脂肪油类(例如芝麻油)、或合成脂肪酸酯类(例如油酸乙酯或甘油三酯类)、或脂质体。水性注射悬浮液剂可包含提高悬浮液的黏度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，悬浮液也可包含适宜的稳定剂或试剂，它们可提高化合物的溶解度，允许制备高度浓縮溶液。用于注射，本发明药剂可在水性溶液中配制，优选地在生理上可相容的缓冲液中配制，例如汉克氏溶液、林格氏溶液、或生理食盐水缓冲液。可替代地，活性成分可呈粉末形式供在使用前用适宜载体(例如无菌无热原水)配制。化合物也可配制成直肠用组合物，例如栓剂或灌肠剂，例如包含常规栓剂基例如可可缓冲液或其他甘油酯类。除了先前说明的配制品之外，化合物还可配制成长效制剂。此类长时间作用的配制品可通过植入或通过经皮递送(例如皮下递送或肌内递送)、肌内注射或经皮贴片给药。因此，例如，化合物可使用适宜聚合物料或疏水性材料(例如，接受的油中的乳液剂)或离子交换树脂、或呈极微溶性衍生物(例如极微溶性盐)配制。药物组合物也可包含适宜的固相或凝胶相载体或赋形剂。此类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖类、淀粉类、纤维素衍生物、明胶、以及聚合物(例如聚乙二醇)。优选的药物组合物是配制供注射用的组合物，例如静脉内注射，并基于总的药物组合物的100%重量，包括约0.01%到约100%按重量计的药物偶联物。药物偶联物可以是抗体_细胞毒素_偶联物，其中已经选择该抗体来靶向特定癌症。在本发明的范围内也包含细胞毒素、细胞毒素_连接物、以及细胞毒素的药剂_连接物偶联物的文库、本发明的连接物的文库、以及本发明的细胞毒素-可切割的底物的文库。例性的文库示包括至少IO种化合物，更优选地至少100种化合物，又更优选地至少1000种化合物，及又更优选地至少100，000种化合物。文库是以方便查询具体的特性的形式，例如查询胞毒性、连接物或底物通过酶或其他切割剂的切割。示例的形式包括芯片格式、微列阵等。平行合成或组合合成的主要目的是生成多样化分子的一个文库，这些分子全部共享一个共同的特征，该共同特征在本文说明中称作为支架。通过在支架分子的可变部分(part)各自取代不同部分(moiety)，在文库中可探测的空间的量生长。理论及现代药物化学提倡一种概念，占据的空间作为决定一种给定化合物作为针对一种给定生物靶标的效力的关键因素。通过产生一个多样的分子文库(该文库探索大量百分比的靶向空间)，大大增加了发展高度有效导向化合物的机率。平行合成通常是在固相支撑体例如聚合物树脂上进行。支架或其他适宜的中间体可通过化学连接物可切割地被系到树脂。进行反应来修饰支架同时反应被系到颗粒。反应物和/或反应条件的变化产生结构的多样性，这是各个文库的正字标记。"小"分子(具有分子量200至1000的非寡聚物)的平行合成在1990年的前罕见100尝试进行合成。参见例如Camps,etal.，AnnaksdeQuimica，70:848(1990)。最近Ellmann披露了ll种苯并二氮类似物连同一些前列腺素及P-转模拟物(beta-turnmimetic)的固相支撑的并列(也称作为"组合的")合成。这些披露举例说明于美国专利号5，288，514。小分子的平行合成的另一项相关披露可在美国专利号5，324，483中找到。这项专利披露在十六个不同支架中各自平行合成4至40种化合物。Chen等人也在聚合物支撑体上使用多步骤方法，应用有机合成策略来发展的非肽文库。(Chenetal.，J.Am.Chem.Soc.，116:2661-2662(1994))。—旦制备了独特化合物的文库，可使用自动诱导剂文库作为起点并使用此处所述方法来制备免疫偶联物或抗体的文库。i式齐检在另一方面，本发明提供包含一种或多种本发明化合物或组合物以及该化合物或组合物的使用指南的试剂盒。在一个示例性实施方案中，本发明提供将本发明的连接物臂偶联至另一个分子的试剂盒。试剂盒包括连接物及将连接物附联至特定官能团的指南。试剂盒还可以或可替代地包括细胞毒类药物、耙向剂、可检测的标记、可切割的底物、药物盐类或药物缓冲液中的一种或多种。试剂盒还包括一个容器及任选地一种或多种小瓶、试管、烧瓶、瓶子、或注射器。试剂盒的其他形式对本领域的普通技术人员将是明白的并是在本发明的范围之内。^iJl在另一个示例性实施方案中，本发明提供一种分离本发明的配体-细胞毒素或可切割的底物-细胞毒素的分子靶标的方法，该分子靶标是结合至可切割的底物f或配体x4。该方法优选的包含包括靶标的细胞制剂与制动化合物接触，由此形成受体与制动化合物间的复合物。本发明的细胞毒素可通过本领域了解的任一种手段制动在亲和支撑体上。可替代地，细胞毒素可使用本发明的可切割的底物或连接物中的一种或多种来制动。在又另一个具体实施方案中，本发明提供一种亲和纯化基体。本发明的靶标分离方法典型是利用一项或多项亲和层析技术。亲和层析术允许利用对某些所支载的化学结构式有高度选择性的辨识位置，来有效分离各种化合物，例如生物分子或生物聚合物。文献有大量的关于亲和层析术主题的文章、专著及书籍，包括亲和层析术支撑体、交联成员、配体及其制备及其使用的文章。这些参考文献例如包括0strove，MethodsEnzymol.182:357-71(1990);Ferment，Bioeng.70:199-209(1990).Huangetal.，J.Chromatogr.492:431_69(1989);"Purificationofenzymesbyh印arin-S印haroseaffinitychromatography，，，J.Chromatogr.，184:335-45(1980);Farooqi，EnzymeEng.，4:441-2(1978);Nishikawa，Chem.Technol.，5(9):564—71(1975);Guilfordetal.，in，PKACT.HIGHPEKF0KM.LIQ.CHK0MT0GK.，Simpson(ed.)，193-206(1976);Nishikawa，Proc.Int.WorkshopTechnol.ProteinSep.Improv.BloodPlasmaFractionation,Sandberg(ed.)，422-35;(1977)"Affinitychromatographyofenzymes,"AffinityChromatogr.，Proc.Int.Symp.25-38，(1977)(Pub.1978);andAffinitychr0matography:Apracticalapproach'Deanetal.(ed.)，IRLPressLimited，Oxford，England(1985)。本领域的普通技术人员利用本发明材料发展特殊亲和层析术方法有大量指南。在本方法中，可使用多种化学结构式的亲和层析术介质来作为支撑体。例如，琼脂糖凝胶及交联琼脂糖凝胶由于其亲水性，让其相对不含非特异性结合故也可用作为支撑体材料。其他有用的支撑体例如包括具有经过控制孔隙的玻璃(CPG)珠粒、纤维素颗粒、聚丙烯酰胺、凝胶珠粒及由葡聚糖及表氯醇所制造的西法戴斯(S印hadexTM)凝胶珠粒。靴威魏,ffl诚除了前文说明的组合物及构建体之外，本发明也提供可利用本发明化合物及偶联物实施的多种方法。使用本发明的药物_配体偶联物物及药物_可切割的底物偶联物的方法包括杀死或抑制肿瘤细胞或癌细胞的生长或复制；治疗癌症；治疗前期癌症；杀死或抑制可表现自体免疫抗体的细胞的生长或复制；治疗自身免疫疾病；治疗传染病；预防肿瘤细胞或癌细胞的增生；预防癌症；预防可表现自体免疫抗体的细胞繁殖；预防自身免疫疾病；及预防传染病。这些使用方法包含对有需要的动物例如哺乳动物或人类，施予有效量的药物_配体偶联物物或药物_可切割的底物偶联物。在一些实施方案中，酶可分开给药，故酶变成与肿瘤或靶标细胞结合。本发明的药物-配体偶联物物或药物-可切割的底物复合物例如可用于治疗例如动物体的癌症、自身免疫疾病及传染病。通过对个体以药学上可接受的方式提供肿瘤治疗用组合物及方法，是通过以药学上有效量的本发明组合物对个体以药学上可接受的方式提供该组合物。本发明特别可用于治疗动物体的癌症，以及用于抑制肿瘤细胞或癌细胞的增生。癌症或癌前病变包括但不限于肿瘤、肿瘤转移或以未经控制的细胞生长为特征的任一种疾病或病症可通过给药本发明的药物-配体偶联物物或药物-可切割的底物复合物来治疗或预防。该复合物递送药物至肿瘤细胞或癌细胞。在使用药物_配体复合物的一个实例中，配体特异性结合或关联癌细胞相关的抗原或肿瘤细胞相关的抗原。由于药物与配体的紧密接合，药物可通过受体所媒介的吞噬作用而被吞噬入肿瘤细胞或癌细胞内部。抗原可附联至肿瘤细胞或癌细胞，或抗原可以是与肿瘤细胞或癌细胞结合的胞外基质蛋白质。一旦偶联物在细胞内部，连接物被肿瘤细胞或癌细胞相关的蛋白酶水解切割，由此释放药物。释放出的药物可自由扩散且诱导细胞毒活性。在另一个实施方案中，药物是由肿瘤细胞或癌细胞外侧的药物-配体复合物切割，随后药物穿透细胞。配体可结合至(例如)肿瘤细胞或癌细胞、在肿瘤细胞或癌细胞表面上的肿瘤细胞或癌细胞的抗原、或属于肿瘤细胞或癌细胞相关胞外基质蛋白质的肿瘤细胞或癌细胞的抗原。配体可对特定肿瘤细胞类型或癌细胞类型设计。因此，通过配体的选择可改变可有效治疗的肿瘤类别或癌症类别。在使用药物-可切割的底物复合物的一个实施方案中，可切割的底物是通过与肿瘤或其他靶标细胞相关联的酶(或其他可切割该基质的实体)来切割。一旦与酶接触，可切割的底物通过酶切割，由此释放药物。释放出的药物可自由扩散且诱导细胞毒活性。可切割的底物可在肿瘤或靶标细胞内部或外部切割。通过可切割的底物及相关酶的选择，可改变可有效治疗的肿瘤或癌症类别。可由偶联物所靶向的癌前病变的代表性实例包括但不限于化生、超常增生、发育异常、结肠直肠息肉、光化性角化症、光化性唇炎、人乳头瘤病毒、粘膜白斑病、扁平苔藓及博温氏病。可由偶联物所靶向的癌症或肿瘤的代表性实例包括但不限于肺癌、结肠癌、前列腺癌、淋巴瘤、黑素瘤、乳癌、卵巢癌、睪丸癌、中枢神经系统癌、肾细胞癌(renalcancer)、肾癌、胰腺癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、子宫颈癌、及白血病。用于偶联物中的特定配体或可切割的底物可选择让其将该药物靶向于欲使用该药物治疗的肿瘤组织，这对于本领域的普通技术人员是容易明白的。在一个实施方案中，本发明提供一种杀死细胞的方法。该方法包括对该细胞施予足够杀死该细胞的量的本发明化合物。在一个示例性实施方案中，对有该细胞受试者施予该化合物。在又一个示例性实施方案中，该给药是用来延缓或中止包括该细胞(例如细胞可以是肿瘤细胞)的肿瘤的生长。用于延缓生长的给药，细胞生长速率须比给药前的生长速率至少低10%。优选的，生长速率须延缓至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或完全停止。有效剂量适合用于本发明的药物组合物包括其中含有治疗有效量，即可有效达成其所希望的目的的量的活性成分的组合物。对特定应用的实际有效量将依据待治疗的病症决定。有效量的确定是在本领域的那些技术人员的能力范围之内，特别是鉴于在此处的详细披露。对此处所述的任何化合物，治疗有效量初步是由细胞培养检定分析测定。目标血浆浓度为可抑制细胞生长或细胞分裂的活性化合物的浓度。在优选的实施方案中，细胞活性为至少抑制25%。目前以可诱导抑制细胞活性至少约50%、75%、或甚至90%或以上的活性化合物的目标血浆浓度是优选的。病人体内细胞活性的抑制百分比可经监测来评估所达成的血浆药物浓度的适宜性，剂量可向上或向下调整来达成期望的抑制百分比。如本领域所熟知，供人体使用的治疗有效量也可由动物模型测定。例如，供人类使用剂量可经配制来达成在动物体内有效的循环浓度。人体剂量可通过监测细胞抑制作用且如前文说明上下调整剂量来进行调整。治疗有效剂量还可以从已知具有类似的药理活性的化合物用于人体的数据来确定。应用剂量可基于给药化合物比较已知化合物的相对生物利用率及强度进行调整。基于前文说明的方法及本领域的普通技术人员所熟知的其他方法，调整剂量来在人体达成最大功效，是在本领域的普通技术人员的能力范围之内。在局部给药的情况下，给药化合物的系统循环浓度并无特殊重要性。在此类情况下，化合物经给药来以便在局部区域达到可有效获得预期结果的浓度。为用于与细胞增殖异常有关的疾病预防和/或治疗，所给化合物的循环浓度优选为大约0.001iiM到20iiM，其中优选大约0.01iiM到5iiM。此处说明的化合物的患者口服给药方式的剂量典型地是从大约lmg/天到大约10，OOOmg/天的范围内，更典型地从大约10mg/天到大约1，OOOmg/天，并且最典型地从大约50mg/天到大约500mg/天。按照患者体重所述，典型的剂量是从大约0.01到大约150mg/kg/天的范围内，更典型地从大约0.1到大约15mg/kg/天，并且最典型地从大约1到大约10mg/kg/天，例如5mg/kg/天或3mg/kg/天。在至少一些实施方案中，患者的延缓或抑制肿瘤生长的剂量可以是lymol/kg/天或者更少。例如，患者的剂量可以是0.9、0.6、0.5、0.45、0.3、0.2、0.15、或者0.1ymo1/kg/天或者更少(按照药物的摩尔量)的药物或药物偶联物，如抗体-药物偶联物。优选地，药物或药物偶联物当在至少5天时间内以日剂量给药时，延缓肿瘤的生长。在至少一些实施方案中，该肿瘤为SCID小鼠体内的人类型的肿瘤。作为一个例子，SICD小鼠可以是CB17.SCID小鼠(可从Taconic，Germantown，NY获得)。至于其他给药模式，剂量及间隔可个别调整来获得对待治疗的临床适应症是有效的给药化合物的血浆水平。例如，在一个实施方案中，根据本发明的化合物可以相对高浓度每天给药多次。可替代地，更希望的是以最低有效浓度且使用较不频繁的给药方案来施予本发明化合物。因此将提供识别个别疾病严重程度的治疗方案。利用此处所提供的教导，可计划有效的治疗方案，该方案不会造成实质毒性，但又可完全有效治疗由特定病人所表现的临床症状。这项计划应通过考虑下列因素来仔细选择活性化合物，这些因素例如化合物强度、相对生物利用率、病人体重、是否存在有副作用及副作用严重程度、所选药剂的优选的给药模式、及毒性性质。本发明的化合物、组合物及方法将通过下列实例进一步展示。提供这些实例是为了展示但并不限制本申请所请求的发明。实例材料和方法在以下实例中，除非另外说明，否则温度是以摄氏度数(°C)给出；操作是在室温或环境温度(典型于约18-25t:的范围)进行；溶剂的蒸发是使用旋转蒸发器在减压下(典型为4.5-30mmHg)、浴温达到6(TC进行；反应过程典型是通过TLC追踪，并且提供反应时间仅用于说明；熔点是未校正的；产物显示了满意的力-NMR资料和/或微分析资料；提供产量仅用于举例说明；也使用下列常规縮写mp(熔点)、L(升)、mL(毫升)、mmo1(毫摩尔)、g(克)、mg(毫克)、min(分钟)、LC-MS(液相色谱-质谱)、以及h(小时)。在VarianMercury300MHz光谱仪上测量^-NMR光谱，并与所设计的结构符合一致。化学移位是以距四甲基硅烷低磁场的每百万份的份数(卯m)报告。在PerkinElmerSciexAPI365质谱仪上记录电喷射质谱数据。由罗博森微里特实验室(RobertsonMicrolitLaboratories,Madison，NJ)进行元素分析。用于快速层析法的硅胶是E.Merck等级(230-400筛目)。在HP1100或VarianProStar210仪器上进行反相分析HPLC，HP1100或VarianProStar210仪器带有PhenomenexLuna5iimC-18(2)150mmX4.6mm柱或VarianMicrosorb-MV0.1iimC_18150mmX4.6mm柱。使用lmL/min流速，使用0%至50%缓冲液B梯度经15分钟，或10%至100%缓冲液B梯度经10分钟，通过UV在254nm处检测。缓冲液A，20mM甲酸铵+20%乙腈或0.1X乙腈中的三氟乙酸；缓冲液B，20mM甲酸铵+80%乙腈或0.1%水性三氟乙酸。在VarianProStar215仪器上进行反相制备性HPLC，该仪器带有WatersDeltaPak15iimC_18300mmX7.8mm柱。实例1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage105</formula>化合物1的合成向DMF(50mL)中的2-溴乙基胺溴化物(5g，24.4毫摩尔)添加二异丙基乙胺(8.5mL，48.8毫摩尔)及氯甲酸苄酯(3.48mL，24.4毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌2小时。反应混合物经浓縮，并将残余物在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(3/7)梯度通过快速层析法纯化以给出呈油状的化合物l(4g，64%)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage105</formula>化合物2的合成向DMF(50mL)中的化合物1(3.34g，12.99毫摩尔)和缬氨酸叔丁基酯(3.27g，15.59毫摩尔)的一个溶液中添加碳酸钾(5.39g，38.97毫摩尔)和碘化钾(2.59g，15.59毫摩尔)。如此获得的混合物在IO(TC下搅拌过夜。反应混合物经浓縮，并将残余物在硅胶上用乙酸乙酯/己烷(2/8)梯度通过快速层析法纯化以给出呈油状的化合物2(3.12g，69%)。'HNMR(CDC13)S0.92(m，6H)，1.46(s，9H)，1.86(m，1H)，2.53(m，1H)，2.80(m，2H)，3.18(m，1H)，3.31(m，1H)，5.10(s，2H)，5.25(bs，1H)，7.36(m，5H);LC-MS(ESI)296(M+H-叔丁基+)，352(M+H+)。化合物3的合成将化合物2(3.4g，9.72毫摩尔)和甲醇(30mL)中的钯炭(200mg)的一个溶液在室温置于氢气大气压下。如此获得的混合物在室温下搅拌2小时。将钯过滤，并反应混合物浓縮至干燥以给出呈油状的化合物3(2.lg，98%)。^NMR(CD3OD)S0.94(m，6H)，1.47(s，9H)，1.63(bs，2H)，1.90(m，1H)，2.47(m，1H)，2.73(m，2H)。化合物4的合成向二氯甲烷(30mL)中的化合物3(2.lg，9.72毫摩尔)的溶液内，在(TC添加FmocOSu(N-(9-芴基甲氧羰基氧基)丁二酰亚胺(3.28g，9.72毫摩尔)。如此所得的混合物于0t:搅拌2小时。将混合物浓縮至干燥，然后将残余物在硅胶上通过快速层析法用100%二氯甲烷纯化，接着用二氯甲烷中的0.5%甲醇，及最后为二氯甲烷中的1%甲醇作为梯度以给出呈无色油状的化合物4(2.558，60%)。力-NMR(CDCl》S1.03(d，3H)，1.14(d，3H)，1.52(s，9H)，2.28(m，1H)，3.14(m，2H)，3.46(m，2H)，3.89(d，1H)，4.24(m，1H)，4.44(m，2H)，7.29(m，2H)，7.40(m，2H)，7.64(m，2H)，7.80(d，2H);LC-MS(ESI)383(M+H-tbutyl+)，440(M+H+)，462(M+Na+)，478(M+K+)。化合物5的合成向四氢呋喃-水(3/1，8mL)的化合物4(177mg，0.4毫摩尔)的溶液内，通入HC1气体5分钟。将反应混合物在37t:搅拌过夜，然后将混合物浓縮至干燥以给出呈固体的化合物5(168mg，98X)，该化合物未经进一步纯化即用于下一步骤。力-画R(CDCl3)S1.04(d，3H)，1.14(d，3H)，2.32(m，1H)，3.18(m，2H)，3.46(m，2H)，3.95(d，1H)，4.22(m，1H)，4.42(m，2H)，7.29(m，2H)，7.39(m，2H)，7.64(m，2H)，7.79(d，2H);LC-MS(ESI)383(M+H+)，405(M+Na+)。化合物6的合成向THF(15mL)的N-甲基_1，2_苯二胺(2mL，17.6毫摩尔)的溶液内添加二_叔丁基重碳酸酯(3.32g，15.2毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂除去，并将残余物在硅胶上用己烷中的30%乙酸乙酯作为梯度通过快速层析法纯化以给出呈无色油状的化合物6(1.12g，32%)。^NMR(CDC13)S1.46(bs，9H)，3.15(s，3H)，3.73(bs，2H)，6.75(d，2H)，7.06(m，2H)。化合物7的合成向二氯甲烷(30mL)中的化合物6(777mg，3.05毫摩尔)的溶液内，在0。C添加2-硝基苯磺酰氯(811mg，3.66毫摩尔)及二异丙基乙胺(796yL，4.57毫摩尔)。如此所得的混合物在室温搅拌过夜。将溶剂除去，并将残余物在硅胶上用10%己烷中的乙酸乙酯作为梯度通过快速层析法纯化以给出呈黄色固体的化合物7(1.17g，94%)。力NMR(CDC13)S1.49(bs，9H)，2.47及2.61(2bs，3H)，7.05(bd，1H)，7.27(m，2H)，7.56-7.92(m，5H)。化合物8的合成向DMF(50mL)中的化合物7(326mg，0.8毫摩尔)内添加碳酸钾(164mg，1.19毫摩尔)及甲基碘(148iiL，2.39毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂除去，并将残余物在硅胶上用10%己烷中的乙酸乙酯作为梯度通过快速层析法纯化以给出呈黄色固体的化合物8(370mg，65%)。NMR(CD30D)S1.35及1.52(2s，9H)，3.16及3.21(2s，3H)，3.26及3.29(2s，3H)，6.93(d，1H)，7.20(m，1H)，7.6(m，2H)，7.68-7.80(m，4H);LC-MS(ESI)444(M+Na+)，460(M+K+)。化合物9的合成在室温下向二氯甲烷(5mL)中的化合物8(355mg，0.85毫摩尔)的溶液中添加三氟乙酸(5mL)。将反应混合物搅拌30分钟，然后分配于乙酸乙酯(lOOmL)以及饱和碳酸氢钠铵(200mL)之间。将有机层用盐水(100mL)洗涤，在Na2S04上进行干燥并进行浓縮以给出作为一种白色固体(270mg，98%)的游离胺(化合物9)。^NMR(CDC13)S2.68(s，3H)，3.30(s，3H)，6.56(m，2H)，6.88(m，1H)，7.20(m，1H)，7.48(m，1H)，7.57(m，1H)，7.65(m，2H)。化合物10的合成在0°C向化合物9(270mg,0.84毫摩尔)的二氯甲烷溶液(10mL)内添加2当量的甲苯中的碳酰氯(440iiL，2.5毫摩尔)。将混合物搅拌30分钟，并浓縮至干燥以给出作为白色固体的化合物10(297,92%)，该化合物未经进一步纯化即用于下一步骤。'HNMR(CDC13)S3.25及3.30(2s，3H)，3.34及3.44(2s，3H)，6.98(m，1H)，7.25-7.40(m，2H)，7.45(m，1H)，7.55—7.80(m，4H);LC-MS(ESI)384(M+H+)，407(M+Na+)，422(M+K+)。化合物ll的合成向含10%DMF的THF溶液(3mL)中的化合物10(120mg，0.31毫摩尔)内，添加Boc-Cit-PAB0H((S)-叔丁基-l-(4-(羟甲基)苯氨基)_1_氧代_5_脲基戊烷(ureidopentan)-2-基氨基甲酸酯(238mg，0.62毫摩尔)、N，N-二甲基氨基吡啶(76mg，0.62毫摩尔)、以及二异丙基乙胺(55iiL，0.31毫摩尔)。如此获得的混合物在65。C下搅拌10天。将溶剂除去，并将残余物在硅胶上用二氯甲烷中的5%甲醇为梯度通过快速层析法纯化以给出呈固体的化合物ll(90mg，40%)。力NMR(CD3OD)S1.43(bs，9H)，1.56-1.70(m，3H)，1.79(m，1H)，3.06-3.27(m，8H)，4.17(2m，1H)，5.04and5.17(2bs，2H)，6.89and6.95(2d，1H)，7.15-7.26(m，2H)，7.37-7.72(m，8H)，7.80(m，1H);LC-MS(ESI)729(M+H+)，751(M+Na+)，767(M+K+)。化合物12的合成向DMF(2mL)中的化合物11(84mg，0.11毫摩尔)的溶液内添加碳酸钾(48mg，0.33毫摩尔)及苯硫酚(60yL，O.55毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌2小时。将溶剂除去，并将残余物在硅胶上用二氯甲烷中的5%甲醇为梯度通过快速层析法纯化以给出呈固体的化合物12(55mg，87%)。NMR(CD3OD)S1.44(bs，9H)，1.56-1.70(m，3H)，1.78(m，1H)，2.76(bs，3H)，3.05-3.20(m，5H)，4.17(bs，1H)，4.99(bs，2H)，6.62(m，2H)，6.93(m，1H)，7.15(m，2H)，7.40—7.60(m，3H);LC—MS(ESI)，566(M+Na+)，581(M+K+)。化合物13的合成向二氯甲烷(3mL)中的化合物12(65mg，0.12毫摩尔)的溶液内添加2N甲苯中的碳酰氯(180iiL，O.36毫摩尔)。如此获得的混合物在0"C下搅拌1小时。然后将混合物浓縮至干燥以给出油(72mg，100X)，该油未经进一步纯化即用于下一步骤。向含有5%N-甲基吡咯烷酮的二氯甲烷(lmL)中的油(72mg，0.12毫摩尔)的溶液内，添加化合物18(参见以下实例2)(25mg，0.06毫摩尔)及N，N-二甲基氨基吡啶(22mg，0.18毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物13(15mg，35%)。^NMR(CD3OD)Sl.42(bs，9H)，1.45-1.80(m，4H)，2.97(bs，6H)，3.10—3.36(m，7H)，3.57(bs，3H)，3.98(bs，1H)，4.10-4.35(m，4H)，4.50-4.75(m，3H)，5.15(bs，2H)，7.16-7.95(m，16H)，8.2(d，1H);LC-MS(ESI)，1034(M+H+)，1056(M+Na+)，1073(M+K+)。化合物14的合成在室温下向二氯甲烷(0.5mL)中的化合物13(13mg，0.011毫摩尔)的溶液中添加三氟乙酸(0.5mL)。如此获得的混合物在室温下搅拌30分钟。然后将混合物浓縮至干燥以给出一种油，该油未经进一步纯化即用于下一步骤。向含TFA盐化胺的二氯甲烷(0.5mL)的溶液内，添加化合物5(5mg，0.012毫摩尔)、苯并三唑-l-基-氧代-三-(二甲氨基)-磷鎗六氟磷酸盐(BOP)(6mg，0.013毫摩尔)及二异丙基乙胺(8iiL，0.044毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌l小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物14(9mg，50%)。'HNMR(CD3OD)S1.03及1.10(2m，6H)，1.60(m，2H)，1.80(m，2H)，2.20(m，1H)，2.99(s，6H)，3.04-3.50(m，11H)，3.60(bs，3H)，3.8(bs，1H)，4.OO(bs，1H)，4.20-4.45(m，6H)，4.50-4.75(m，4H)，5.15(bs，2H)，7.20—7.70(m，22H)，7.77(d，2H)，7.90(bs，2H);LC-MS(ESI)，1300(M+tf)。化合物15的合成在室温下向DMF(0.5mL)中的化合物14(9mg，0.006毫摩尔)的溶液中添加哌啶(6yL，O.06毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌1小时。然后将混合物浓縮至干燥以给出一种油，该油未经进一步纯化即用于下一步骤。向含10%DMF的二氯甲烷的溶液(lmL)的含该油的溶液内，添加N-{y-maleimidobutyrloxy}丁二酰亚胺酯(GMBS)(3.5mg，0.012毫摩尔)及二异丙基乙胺(2iiL，0.012毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌l小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物15(6.5mg，75%)。^NMR(CD3OD)S1.04-1.13(m，6H)，1.65(m，2H)，1.75(m，1H)，1.90(m，3H)，2.23(m，3H)，2.98and3.01(2s，6H)，3.05-3.25(m，6H)，3.60(m，2H)，3.45-3.55(m，6H)，3.64(t，2H)，3.80(m，2H)，4.05(m，1H)，4.35(bs，1H)，4.41(m，2H)，4.55(m，2H)，4.80(m，1H)，5.15(bs，2H)，6.78(s，2H)，7.22(dd，2H)，7.35—7.65(m，11H)，7.90—8.00(m，3H)，7.77(d，2H)，7.90(bs，2H);LC-MS(ESI)，1243(M+H")。实例2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage109</formula>的10X甲醇及最后二氯甲烷中的30X甲醇为梯度以给出呈无色油状的H-Cit-PAB0H(lg，90%)。向于DMF(4mL)中的H_Cit_PABOH(80mg，0.28毫摩尔)的溶液内，添加化合物5(100mg，0.24毫摩尔)(见实例l制备)，HATU(100mg，0.26毫摩尔)及二异丙基乙胺(125iiL，0.84毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌l小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物16(119mg，66%)。^NMR(CD3OD)S1.03-1.11(2d，6H)，1.58(m，2H)，1.77(m，1H)，1.88(m，1H)，2.23(m，1H)，3.05—3.20(m，4H)，3.44(m，2H)，3.83(d，1H)，4.21(m，1H)，4.39(m，2H)，4.54(bs，2H)，4.60(m，1H)，7.30(m，4H)，7.37(m，2H)，7.51(m，2H)，7.62(m，2H)，7.77(m，2H)，8.80(d，1H)，10.05(s，1H);LC-MS(ESI)，646(M+H")，668(M+Na+)，684(M+K+)。化合物17的合成向含0%NMP的二氯甲烷(4mL)的化合物16(190mg，0.25毫摩尔)的溶液内，添加二异丙基乙胺(131iiL，0.75毫摩尔)，N，N-二甲基氨基吡啶(15mg，0.12毫摩尔)及4-硝基苯基氯甲酸酯(101mg，0.5毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌1小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物17(151mg，65%)。(CD3OD)S1.04-1.11(2d，6H)，1.59(m，2H)，1.79(m，1H)，1.89(m，1H)，2.24(m，1H)，3.05-3.20(m，4H)，3.44(m，2H)，3.83(d，1H)，4.20(m，1H)，4.39(m，2H)，4.60(m，1H)，5.22(bs，1H)，7.29(m，2H)，7.39(m，4H)，7.60(m，4H)，7.75(d，2H)，8.81(d，1H)，10.05(s，1H);LC-MS(ESI)，811(M+H")，833(M+Na+)，848(M+K+)。化合物19的合成在OC向含40%THF的二氯甲烷(8mL)的化合物18(50mg，0.11毫摩尔)的溶液内，添加4-硝基苯基氯甲酸酯(87mg，0.43毫摩尔)及三乙胺(88yL，0.64毫摩尔)。如此获得的混合物让其温热至室温并搅拌过夜。将溶剂蒸发，在醚中将残余物通过沉淀而分离，接着过滤以给出呈黄色固体的PNPC-18(60mg，90%)。向二氯甲烷(5mL)中的PNPC-18(60mg，0.095毫摩尔)的溶液内添加化合物boc哌嗪(71mg，0.38毫摩尔)及三乙胺(53yL，O.38毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物18(77mg，90%)。LC-MS(ESI)，678(M+H+)，700(M+Na+)，716(M+K+)。化合物20的合成在室温下向二氯甲烷(0.5mL)中的化合物19(28mg，0.035毫摩尔)的溶液中添加三氟乙酸(0.5mL)。如此获得的混合物在室温下搅拌30分钟。然后将混合物浓縮至干燥以给出一种油，该油未经进一步纯化即用于下一步骤。向DMF(lmL)中的油的溶液内添加化合物17(28mg，0.035毫摩尔)及二异丙基乙胺(18iiL，0.105毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物20(36mg，70X)。^NMR(CD3OD)S1.03-1.10(2d，6H)，1.58(m，2H)，1.77(m，1H)，1.87(m，1H)，2.23(m，1H)，2.97(bs，6H)，3.05-3.20(m，4H)，3.30—3.85(m，14H)，3.97(m，1H)，4.19—4.41(m，6H)，4.60(m，2H)，4.69(m，1H)，5.11(bs，2H)，7.16(dd，1H)，7.27—7.38(m，7H)，7.45(m，1H)，7.51—7.63(m，7H)，7.76(d，2H)，7.85(d，2H)，8.24(bs，1H)，8.79(d，1H)，10.00(s，1H);LC-MS(ESI)，1248(M+H+)。化合物21的合成在室温下向DMF(lmL)中的化合物20(36mg，0.024毫摩尔)的溶液中添加哌啶(12iiL，O.12毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌1小时。然后将混合物浓縮至干燥以给出一种油，该油未经进一步纯化即用于下一步骤。向含10%DMF的二氯甲烷(lmL)所含的油的溶液内添加MAL_PEG4_NH酯(19mg，0.037毫摩尔)及二异丙基乙胺(8.5iiL，O.048毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌1小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物21(25mg，62%)。丄HNMR(CD30D)S1.06—1.12(2d，6H)，1.59(m，2H)，1.78(m，1H)，1.89(m，1H)，2.24(m，1H)，2.44(t，2H)，2.50(t，2H)，2.99(bs，6H)，3.05-3.20(m，4H)，3.46-3.85(m，34H)，3.99(m，1H)，4.25(m，1H)，4.35(m，2H)，4.59—4.73(m，3H)，5.13(bs，2H)，6.79(s，2H)，7.18(dd，1H)，7.31(d，1H)，7.36(m，2H)，7.47(m，1H)，7.58(m，5H)，7.89(m，2H)，8.24(bs，1H)，8.79(d，1H);LC-MS(ESI)，1423(M+H")。化合物22的合成在室温下向DMF(lmL)中的化合物20(26mg，0.017毫摩尔)的溶液中添加哌啶(9yL，O.088毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌1小时。然后将混合物浓縮至干燥以给出一种油，该油未经进一步纯化即用于下一步骤。向含10%DMF的二氯甲烷(lmL)中所含的油的溶液内添加GMBS(7.5mg，0.025毫摩尔)及二异丙基乙胺(6iiL，0.034毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌l小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物22(13mg，52%)。Si.07-1.13(2d，6H)，1.60(m，2H)，1.78(m，1H)，1.90(m，3H)，2.24(m，3H)，3.00(bs，6H)，3.05-3.24(m，4H)，3.42—3.74(m，16H)，3.78—3.90(m，4H)，4.00(m，1H)，4.34(m，1H)，4.39(m，2H)，4.60(m，1H)，4.80(m，2H)，5.14(bs，2H)，6.81(s，2H)，7.22(dd，1H)，7.37(m，3H)，7.50(m，1H)，7.60(m，5H)，7.92(m，2H)，8.24(bs，1H)，8.79(d，1H)，10.05(s，1H);LC-MS(ESI)，1191(M+tf)。实例3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage112</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage113</formula>化合物23的合成将乙基-5-硝基吲哚-2-羧酸酯(2g，8.5毫摩尔)和含50%甲醇的二氯甲烷(lOOmL)中的钯炭(200mg)的一个溶液在室温置于氢气大气压下。如此获得的混合物在室温下搅拌2小时。将钯过滤，并反应混合物浓縮至干燥以给出呈无色油的化合物23(1.68g，97%)。^NMR(CD30D)S1.38(t，3H)，4.34(q，2H)，6.86(dd，1H)，6.95(d，1H)，6.98(d，1H)，7.25(d，1H)。化合物24的合成向二氯甲烷(5mL)中的化合物23(300mg，1.47毫摩尔)的溶液内添加Boc20(385mg，1.76毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓縮，并将残余物在硅胶上用己烷中的10%乙酸乙酯作为梯度通过快速层析法纯化以给出呈白色固体的化合物24(272mg，61%)。丄HNMR(CD3OD)S1.39(t，3H)，1.52(s，9H)，4.37(q，2H)，7.07(s，1H)，7.23(dd，1H)，7.34(d，1H)，7.68(bs，1H)。化合物25的合成向乙醇(3mL)中的化合物24(100mg，0.33毫摩尔)的溶液内添加溶于水(lmL)中的LiOH溶液(12mg，0.49毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下50C搅拌2小时。将反应混合物浓縮至干燥，产生一种油。将残余物溶解于水中，并用10%HC1使之酸化到pH3，随后用EtOAc萃取。将有机溶液通过Na2S04干燥，过滤并浓縮至干燥以给出呈无色油的化合物25(85mg，92X)。力NMR(CD3OD)S1.51(s，9H)，7.07(d，1H)，7.23(dd，1H)，7.33(d，1H)，7.68(bs，1H)。化合物26的合成向含30%DMF的二氯甲烷的溶液(3mL)中所含Fmoc-Cit-0H(206mg，0.52毫摩尔)的溶液内，在室温添加EDC(120mg，0.62毫摩尔)、H0Bt(84mg，0.62毫摩尔)及叔丁基-4-氨基苯甲酸酯(120mg，0.62毫摩尔)。将如此所得的混合物搅拌10分钟，然后添加氯化铜(84mg，0.62毫摩尔)到混合物中。将该混合物搅拌过夜。将混合物浓縮至干燥，然后将残余物在硅胶上用二氯甲烷中的5%甲醇为梯度通过快速层析法纯化以给出呈无色油状的化合物26(184mg，62X)。^NMR(CD3OD)S1.53-1.58(m，2H)，1.57(s，9H)，1.71(m，1H)，1.82(m，1H)，3.08(m，1H)，3.19(m，1H)，4.21(m，1H)，4.28(m，1H)，4.38(m，2H)，7.28-7.39(m，3H)，7.49(m，2H)，7.56-7.86(m，5H)，7.89(m，2H);LC-MS(ESI)，573(M+H+)，595(M+Na+)，611(M+K+)。化合物27的合成在室温下向DMF(18mL)中的化合物26(lg，1.75毫摩尔)的溶液中添加哌啶(2mL)。如此获得的混合物在室温下搅拌l小时。将混合物浓縮至干燥，然后残余物通过快速层析法纯化，使用100%二氯甲烷，接着为二氯甲烷中的5%甲醇及最后二氯甲烷中的20%甲醇为梯度以给出无色的油(561mg，92%)。在室温下，在DMF(10mL)中的油溶液(561mg，1.6毫摩尔)内添加二异丙基乙胺(679iiL，3.9毫摩尔)、化合物5(509mg，l.3毫摩尔)(参见实例1制备)及HATU(494mg，1.3毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌3小时。将混合物浓縮至干燥，然后将残余物在硅胶上用二氯甲烷中的5%甲醇为梯度通过快速层析法纯化以给出呈无色油状的化合物27(691mg，65%)。'HNMR(CD30D)S1.36(dd，6H)，1.58—1.62(m，2H)，1.6(s，9H)，1.71(m，1H)，1.82(m，1H)，2.00(m，1H)，2.65(m，2H)，3.2-3.3(m，4H)，3.70(m，1H)，4.21(m，1H)，4.28(m，2H)，4.38(m，2H)，4.60(m，1H)，7.28—7.39(m，4H)，7.60—7.70(m，4H)，7.8(d，2H)，7.89(d，2H);LC—MS(ESI)，716(M+tf)，737(M+Na+)，753(M+K+)。化合物28的合成在室温下向DMF(9mL)中的化合物27(300mg，0.45毫摩尔)的溶液中添加哌啶(lmL)。如此获得的混合物在室温下搅拌1小时。然后将混合物浓縮至干燥以给出一种油，将该油临时存放于醚(20mL)中。将该材料过滤，得到一种白色固体(186mg，84%)。向二氯甲烷(lmL)中的游离胺(32mg，0.065毫摩尔)的溶液内添加MAL_PEG4_NH酯(50mg，0.097毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌4小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物28(47mg，95%)。^NMR(CD3OD)S1.10及1.15(2d，6H)，1.58-1.62(m，2H)，1.6(s，9H)，1.75(m，1H)，1.90(m，1H)，2.25(m，1H)，2.45(t，2H)，2.5(t，2H)，3.10-3.25(m，4H)，3.30(m，2H)，3.45-3.65(m，16H)，3.75(m，4H)，3.85(d，1H)，4.65(m，1H)，6.80(s，2H)，7.67(d，2H)，7.90(d，2H)，8.80(d，1H)，10.20(s，1H);LC-MS(ESI)，891(M+H")，913(M+Na+)，929(M+K+)。化合物29的合成在室温下向化合物28(47mg,0.062毫摩尔)的二氯甲烷(0.5mL)溶液中添加三氟乙酸(0.5mL)。如此获得的混合物在室温下搅拌30分钟。然后将混合物浓縮至干燥以给出呈油状的化合物29，该油未经进一步纯化即用于下一步骤(40mg，92%)。'HNMR(CD3OD)S1.10and1.15(2d，6H)，1.60(m，2H)，1.80(m，1H)，1.90(m，1H)，2.25(m，1H)，2.45(t，2H)，2.5(t，2H)，3.10-3.25(m，4H)，3.30(m，2H)，3.45-3.65(m，16H)，3.75(m，4H)，3.85(d，1H)，4.65(m，1H)，6.80(s，2H)，7.67(d，2H)，7.95(d，2H)，8.80(d，1H);LC-MS(ESI)，836(M+H+)，858(M+Na+)，874(M+K+)。化合物31的合成在室温下向30中(100mg，0.2毫摩尔)的EtOAc(2mL)溶液中添加浓縮的HBr的EtOAc(3mL)溶液。1小时后完成Boc脱保护。将沉淀出的材料过滤(定量的产量)。然后将TFA盐化胺溶解于DMF(3mL)。向此溶液内添加化合物25(55mg，0.2毫摩尔)、二异丙基乙胺(173iiL，l毫摩尔)及HATU(79mg，0.2毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌3小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物31(86mg，57幻？HNMR(CD3OD)S1.54(s，9H)，2.91(s，3H)，3.10-3.60(m，8H)，3.72(m，1H)，3.97(m，1H)，4.30-4.60(m，3H)，6.94(bs，1H)，7.05(m，1H)，7.12(d，1H)，7.45(m，2H)，7.68(d，1H)，7.75(bs，1H)，7.86(d，1H)，8.23(bs，1H);LC—MS(ESI)，562(M+H—100+)，606(M+H-56+)，662(M+H+)，685(M+Na+)，701(M+K+)。化合物32的合成在室温下向二氯甲烷(0.5mL)中的化合物31(30mg，0.039毫摩尔)的溶液中添加茴香醚(100iiL)及三氟乙酸(0.4mL)。如此获得的混合物在室温下搅拌30分钟。然后将混合物浓縮至干燥以给出一种油，该油未经进一步纯化即用于下一步骤。向该油的DMF溶液(lmL)内添加化合物29(36mg，0.039毫摩尔)、二异丙基乙胺(40iiL，0.23毫摩尔)、以及HATU(15mg，0.039毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌1小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈油状的化合物32(36mg，60%)HNMR(CD30D)S1.09and1.15(2d，6H)，1.62(m，2H)，1.81(m，1H)，1.93(m，1H)，2.27(m，1H)，2.45(t，2H)，2.51(t，2H)，2.98(s，3H)，3.13—3.25(m，4H)，3.47—3.62(m，24H)，3.76(m，4H)，3.82(m，1H)，3.85(d，1H)，4.20(m，1H)，4.55-4.70(m，4H)，6.79(s，2H)，7.06(s，1H)，7.36(bs，1H)，7.43-7.54(m，2H)，7.72-7.81(m，3H)，7.91(m，3H)，8.05(s，1H)，8.25(bs，1H)，8.82(d，1H)，10.25(s，1H);LC-MS(ESI)，691(M+2H+)/2，1381(M+H+)，1419(M+K+)。实例4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage115</formula>化合物3的合成将浪乙酰氯2(240yL,2.86毫摩尔)在0。C逐滴添加至2-氨基乙基氨基甲酸苄酯1(500mg，2.6毫摩尔)及10mL二氯甲烷中的TEA(800iiL，5.7毫摩尔)的一个溶液。让反应混合物搅拌2小时，并将温度逐渐升高至室温。将溶剂蒸发，接着进行水的后续处理以及用乙酸乙酯萃取。将有机层用10%柠檬酸、水、以及饱和碳酸氢钠、以及盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥以给出3(260mg，32X产率)MS:M+1315.3.tfNMR(CDCL3):7.37ppm(5H)，5.1lppm(2H)，3.83ppm(2H)，3.40ppm(4H)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage115</formula>化合物6的合成1.5克Fmoc-Citruline5(0.0038摩尔)、0.88克叔丁基_4_氨基苯甲酸酯4(0.0045摩尔)、0.6克HOBt(0.0045摩尔)、0.68克EDC(0.0043摩尔)及催化量的氯化铜在DCM/DMF(2:1)的混合物9mL中搅拌过夜。去除溶剂，并将产物通过硅胶急骤柱层析法使用DCM中的5-10%MeOH进行纯化以给出6(1.54g，71%产率)。MS:M+1=573.9。化合物8的合成化合物6(300mg，0.66毫摩尔)中的Fmoc保护基的脱保护是使用DMF中的5%吡啶在20分钟时间内进行的。将溶剂蒸发，并将粗产物固体使用二乙醚漂洗以给出230mg化合物7(99X产率)。MS:M+1=352。230mg化合物7(0.65毫摩尔)与Fmoc-缬氨酸333mg(0.98毫摩尔)及DMF中的188mgEDC(O.98毫摩尔)及DCM进行反应，在硅胶上用DCM中的5-10%MeOH纯化后以给出240mg化合物8(55%产率)。MS:M+1=673。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage116</formula>化合物10的合成500mg化合物8(0.75毫摩尔)使用吡啶在DMF中脱保护获得化合物9，在去除溶剂后将该化合物用二乙醚漂洗。未经进一步纯化的化合物9与235mg化合物3(0.75毫摩尔)在125mgKI(0.75毫摩尔)及313yL三乙胺存在下在4(TC反应2小时。将粗反应混合物浓縮，并通过反相HPLC纯化获得300mg化合物10，55.8%产率。MS:M[+1]=685。化合物11的合成用HCL-EA将化合物10(300mg)脱保护3小时。将溶剂蒸发，并将产物于高度真空下干燥以给出11。MS:M[+1]=628。tfNMR(DMSO):10.45卯m(lH)，8.8ppm(lH)，8.5(1H)，7.88ppm(2H)，7.75ppm(2H)，7.3ppm(5H)，6.1(1H)，5.5(2H)，4.99(2H)，4.5ppm(lH)，3.7_3.4(3H)，3.2_2.9(5H)，2.16(1H)，1.45(2H).1.1(3H)，0.92卯m(3H)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage117</formula>化合物14的合成将溶于含4NHBr的EtOAc(5mL)中的化合物12(42mg，0.09毫摩尔)的溶液在25t:搅拌45分钟。将溶剂去除，并在高度真空下进一步干燥4小时。向DMF(2mL)中的残余物内添加5-(氨基-叔丁基-丁氧基羰基)-茚酮_2_羧酸(39.2mg，0.14毫摩尔)及B0P(71mg，0.16毫摩尔)，接着添加DIPEA(83iiL，0.48毫摩尔)。将反应混合物在25t:搅拌20分钟并使之通过硅胶短的管柱。溶剂经去除，并将粗产物在硅胶上用己烷中的20XEtOAc层析洗脱以给出14(49mg，88%)。'HNMRDMS0_d6)S11.63(s，1H)，9.18(brs，1H)，8.19(d，1H，J=8.4Hz)，8.09(brs，1H)，7.90(d，1H，J=8.4Hz)，7.79(brs，1H)，7.53-7.58(m，3H)，7.39-7.43(m，3H)，7.28-7.35(m，3H)，7.11(s，1H)，5.29(s，2H)，4.80(t，1H，11.2Hz)，4.54(dd，1H，8.8Hz)，4.31(m，1H)，3.92(dd，1H，J=10.2Hz)，3.82(dd，1H，J=10.7Hz)，1.47(s，9H)。14化合物15的合成化合物14(49mg，0.08毫摩尔)及MeOH/CH2Cl2(1/2，10mL)中的10%Pd-C(35mg)的一个混合物在真空下除气40s。所得混合物置于氢气气氛下，并在25°C下搅拌7小时。反应混合物经西莱特(Celite)过滤(MeOH/CH2Cl2洗涤)。将溶剂在真空中去除。在硅胶上用DCM中的2XMeOH洗脱的层析法获得化合物15(40.6mg，97X)。'NMRDMS0-d6)S11.59(s，1H)，10.43(s，1H)，9.18(brs，1H)，8.09(d，1H，J=8.2Hz)，7.93(brs，lH)，7.81(d，lH，J=8.2Hz)，7.78(brs，1H)，7.49(t，1H，J=8.4Hz)，7.27-7.35(m，3H)，7.08(s，1H)，4.80(t，1H，11.2Hz)，4.54(dd，1H，8.8Hz)，4.31(m，1H)，3.92(dd，1H，J=10.2Hz)，3.82(dd，1H，J=10.7Hz)，1.47(s，9H)。1111化合物16的合成将化合物15(36mg，0.07毫摩尔)、4-甲基_1_哌嗪碳酰氯盐酸盐(20mg，0.10毫摩尔)、丙烯醇(0.ImL)及CH2C12(7mL)中的无水吡啶(63yml)的溶液混合物在室温下搅拌16小时。未去除溶剂，并将粗产物在硅胶上层析，用CH2C12中的2%-10%MeOH洗脱以给出16(32.4mg，73%)。'NMRDMS0_d6)S11.59(s，1H)，9.18(brs，1H)，8.09(d，1H，J=8.2Hz)，7.93(brs，1H)，7.81(d，1H，J=8.2Hz)，7.78(brs，1H)，7.49(t，1H，J=8.4Hz)，7.27-7.35(m，3H)，7.08(s，1H)，4.80(t，1H，11.2Hz)，4.54(dd，1H，8.8Hz)，4.31(m，1H)，3.92(dd，1H，J=10.2Hz)，3.82(dd，1H，J=10.7Hz)，3.77(brs，2H)，3.47(brs，2H)，3.37(brs，2H)，2.63(s，3H)，2.38(brs，2H)，1.47(s，9H)。H2N—H11II化合物17的合成将溶于含4NHBr的EtOAc(4mL)中的化合物16(32mg，0.05毫摩尔)的溶液在25t:搅拌45分钟。将溶剂去除，并在高度真空下进一步干燥4小时。向DMF(2mL)中的残余物内添加化合物11(48.2mg，0.07毫摩尔)及苯并三唑-l-基-氧代_三_(二甲氨基)_磷鎗六氟磷酸盐(BOP)(34.5mg，0.08毫摩尔)，接着添加DIPEA(68uL)，并将反应混合物在25t:搅拌25min。在真空下去除溶剂，并将产物通过制备性HPLC(Sy騰trPr印C18，7iim，19X150mm柱)纯化，以10ml/min(在水/乙腈中的0.01%TFA)的以下述梯度洗脱10%乙腈5分钟，10%至50%乙腈15分钟，维持50%乙腈5分钟，50%至100%乙腈5分钟以给出17(42.lmg，64%)。MS:C58H67BrN1201(l(M+H)m/z的计算值1171.43，实测值1172.40。HIZ11化合物18的合成向溶于MeOH(5mL)中的化合物17(33.6mg，0.025毫摩尔)的溶液内添加10%Pd-C(28mg)，并且混合物用N2除气。反应混合物用H2冲洗，然后在H2气氛下搅拌。在反应完成时(40min)，将反应混合物过滤并浓縮以给出18(31.5mg，96%)。MS:C5。H61BrN1208(M+H)m/z的计算值1037.39，实测值1038.20。118化合物19的合成向DMF(2mL)中的化合物18(31.5mg，0.024毫摩尔)的溶液内添加DCM(O.5mL)中的Mal-PEG4-NHS酉旨(42mg，0.08毫摩尔)。反应混合物于25。C搅拌1小时。将终产物通过制Pr印HPLC(SymmetrPr印C18，7iim，19X150mm柱)纯化，在10m1/min(在水/乙腈中的0.01%TFA)用以下述梯度洗脱10%乙腈5分钟，10%至50%乙腈15分钟，维持50%乙腈5分钟，50%至100%乙腈5分钟以给出19(29.7mg，77%)。MS:C68H87BrN14016(M+H)m/z的计算值1435.56，实测值1437.00。实例5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage119</formula>54mg(0.107毫摩尔)化合物A在HBr-乙酸乙酯中搅拌30分钟，蒸发去除溶剂获得化合物B，将该化合物在高真空下干燥。33.3mg(0.053毫摩尔)B与5-Boc-氨基-吲哚_2-羧酸29.6mg(0.107毫摩尔)在EDC22.6mg(0.118毫摩尔)的存在下，在1.5mLDMF中反应2小时获得C。化合物C通过硅胶管柱层析5-10%MeOH/DCM进行纯化以给出21mg(60X产率)化合物C。MSM[+1]=662，M[+Na]=685，M[+K]=701。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage119</formula>21mg(0.032毫摩尔)化合物C以HBr_乙酸乙酯溶液处理30分钟，蒸发去除溶剂，并将残余物在高真空下干燥，并进一步与11.4mg(0.032毫摩尔)Boc-4-氨基苯甲酸在18.3mg(0.053毫摩尔)HATU、10yL三乙胺(0.63毫摩尔)的存在下在2mL无水DMF中在室温反应4小时。溶剂经蒸发去除，并通过反相HPLC进行纯化以给出14mg(0.018毫摩尔)，56X产率化合物E。M[+1]=782。化合物E的Boc保护是在HBr-乙酸乙酯溶液中进行，通过反相HPLC纯化以给出12mg化合物F。98%产率:实例6CHOM681.8N3CH2CQ2MeNaOMe,MeOH化合物2。向喷哚_4-羧醛(indole-4-carboxaldehyde)(1，583mg，4毫摩尔)及无水甲醇(20mL)中的叠氮乙酸甲酯(460mg，40毫摩尔)的溶液内，在-25"(干冰/CC14)在N2下逐滴添加溶于甲醇中的甲醇钠(6.9mL25%NaOMe，32毫摩尔)。将反应混合物温热至(TC并搅拌3.5小时。反应混合物倒入水(120mL)中，并用EtOAc(2X60mL)萃取。将组合的萃取物用饱和水性NaCl(60mL)洗涤并干燥(MgS04)。将溶剂在真空下去除以给出2(890mg，91%)。'HNMR(CDCl3)S8.28(brs，1H)，8.06(d，1H，J=7.6Hz)，7.45(s，1H)，7.42(d，1H，J=7.6Hz)，7.30(t，1H，J=3.2Hz)，7.26(s，1H)，6.73(brs，1H)，3.96(s，3H)。二甲笨.，14000Me02C'22化合物3.将无水二甲苯(lOOmL)中的2_叠氮基_3_(1H_喷哚_4_基)丙烯酸甲酯(2，890mg，3.68毫摩尔)的悬浮液在N2下回流1小时。在真空下去除溶剂，并使残余物通过硅胶柱(30%EtOAc-己烷)以给出3(663mg，85%)。'HNMR(CDCl3)S8.97(brs，1H)，8.36(brs，1H)，7.47(d，1H，J=2Hz)，7.40(d，1H，J=9.2Hz)，7.26(t，1H，J=2.8Hz)，7.22(d，1H，J=9.2Hz)，6.82(t，1H，J=2.4Hz)，3.95(s，3H)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage120</formula>化合物4.在氮气下在15。C向甲基吡咯并[3，2_e]吲哚-2-羧酸甲酯(3，663mg，3.1毫摩尔)的冰醋酸溶液(9mL)中添加氰基硼氢化钠(600mg，9.5毫摩尔)，并将反应混合物搅拌2.5小时(13-18°C)。将反应混合物倒入水(60mL)内，通过小心添加固体碳酸钠调整至pH8-9。用EtOAc(3X60mL)萃取水性混合物，并将组合萃取物干燥(MgS04)。将溶剂在真空中去除。快速层析法(硅胶，20^EtOAc-己烷)获得4(562mg，84X)。她R(CDCl3)S8.85(brs，1H)，7.15(d，1H，J=8.4Hz)，7.04(s，1H)，6.89(d，1H，J=8.4Hz)，3.94(s，3H)，3.68(t，2H，J=8.4Hz)，3.24(t，2H，J=8.4Hz)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage121</formula>化合物5.无水THF(8mL)中的1，2_二氢_3H_吡咯并[3，2_e]喷哚_7_羧酸甲酯(4，450mg，1.42毫摩尔)的溶液在25。C在N2下用二-叔丁基-重碳酸酯(621g，2.8毫摩尔)进行处理。将反应混合物搅拌16h，然后在真空下去除溶剂。快速层析法(硅胶，30%EtOAc-己烷)产生5(551mg，84%)。丄匪R(CDCl3)S8.78(brs，1H)，7.26(s，1H)，7.25(d，1H，J=8.5Hz)，7.07(s，1H)，4.12(brs，2H)，3.94(s，3H)，3.27(t，2H，J=8.8Hz)，1.57(s，9H)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage121</formula>化合物6.将LiOH水溶液(2.2mL4.OM溶液，8.7毫摩尔)添加至含3-(叔-丁氧羟基)-l，2-二氢-3H-吡咯并[3，2-e]吲哚-7-羧酸甲酯(5，551mg，1.74毫摩尔)的60mLTHF/MeOH/H20(3:2:1)的桨料中，将反应混合物在25。C搅拌14小时。反应混合物用水(30mL)稀释，然后用2NHC1调整pH至4，产生一种白色沉淀。通过过滤收集固体，并用水(lOmL)洗涤。在高真空下干燥固体获得化合物6(524mg，99X)。力NMR(DMS0_d6)S12.93(brs，1H)，11.69(s，1H)，7.80(brs，1H)，7.20(d，1H，J=8.8Hz)，6.91(s，1H)，3.96(t，2H，J=8.8Hz)，3.18(t，2H，J=8.8Hz)，1.48(s，9H)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage121</formula>化合物9.将4NHBr中的7(48mg，0.1毫摩尔)的EtOAc溶液(5mL)在25。C在氮气下搅拌45分钟。将溶剂去除，并在高度真空下进一步干燥4小时。向残余物内添加3-(叔-丁氧羟基)-l，2-二氢-3H-吡咯并[3，2-e]吲哚-7-羧酸(6，36.24mg，0.12mmol)。将EDC(22.9mg，0.12毫摩尔)的DMF(3mL)溶液加入并且将反应混合物在25。C搅拌6小时。去除溶剂。将粗产物在硅胶上层析，用CH2C12中的3%-10%MeOH洗脱以给出9(26mg，40%)。'HNMR(DMS0-d6)S11.69(s，1H)，8.17(s，1H)，8.01(d，1H，J=8.4Hz)，7.81(d，2H，J=8.8Hz)，7.59(t，1H，J=7.6Hz)，7.49(t，1H，J=7.6Hz)，7.29(d，1H，J=9.2Hz)，7.07(s，1H)，4.87(t，1H，10Hz)，4.54(d，1H，8.8Hz)，4.43(brs，1H)，3.89-4.03(m，4H)，3.76(brs，2H)，3.46(brs，2H)3.26(m，2H)，2.46(brs，2H)，2.38(brs，2H)，2.24(s，3H)，1.49(s，9H)。910化合物10.将4NHBr中的化合物9(26mg，0.04毫摩尔)的EtOAc(5mL)溶液在25t:在氮气下搅拌45分钟。去除溶剂，并进一步在真空下干燥14小时以给出10(27.7mg，98%)。丄HNMR(DMS0-d6)S12.09(s，1H)，8.25(s，1H)，8.03(d，1H，J=8.4Hz)，7.92(d，1H，J=8.8Hz)，7.63(t，1H，J=7.6Hz)，7.49—7.55(m，2H)，7.34(d，1H，J=8.8Hz)，7.32(s，1H)，4.91(t，1H，10.8Hz)，4.54(d，1H，10.8Hz)，4.47(brs，1H)，3.84—3.99(m，4H)，3.27-3.50(m，10H)，2.88(s，3H)。化合物12.化合物11(20mg，0.05,1)及MeOH/CH2Cl2(1/2，10mL)中的10%Pd-C(15mg)的一个溶液在真空下除气40s。所得混合物置于氢气气氛下，并在25t:下搅拌7小时。反应混合物经西莱特(Celite)过滤((^(:12洗涤)。将溶剂在真空中去除。在硅胶上用EtOAc/Hex(2/8)洗脱的层析获得化合物12(15.4mg，98%)。"NMR(DMS0_d6)S10.36(s，1H)，8.04(d，1H，J=8.2Hz)，7.72(d，1H，J=8.2Hz)，7.61(brs，1H)，7.45(t，1H，J=8.4Hz)，7.261(t，1H，J=8.4Hz)，4.06(m，4H)，3.73(brs，1H)，1.52(s，9H)。化合物13.将溶于含4NHC1的EtOAc(3mL)中的化合物12(14mg，0.04mmo1)的溶液在25t:在氮气下搅30-45min。将溶剂去除，并在高度真空下进一步干燥14小时。向残余物内添加3-(叔-丁氧羟基)-l，2-二氢-3H-吡咯并[3，2-e]吲哚-7-羧酸(6，15.lmg，0.05翻1)。添加溶于DMF(2ml)中的EDC(9.6mg，0.05mmo1)的溶液，反应混合物在25°C搅拌15小时。去除溶剂。将粗产物在硅胶上层析，用CH^l2中的3^-10^MeOH洗脱以给出13(18.6mg，86%)。'HNMR(CDCl3)S9.45(s，1H)，8.31(s，1H)，8.29(d，1H，J=8.4Hz)，8.02(s，2H)，7.63(d，1H，J=8.4Hz)，7.54(t，1H，J=6.8Hz)，7.43(t，1H，J=6.8Hz)，7.29(d，1H，J=8.0Hz)，6.89(s，1H)，4.75(d，1H，10.8Hz)，4.64(t，1H，8.8Hz)，4.12(brs，2H)，4.03(t，1H，J=8.8Hz)，3.93(dd，1H，J=11.2Hz)，3.42(t，1H，J=10.8Hz)，3.22-3.31(m，2H)，1.61(s，9H)。131415化合物14.向DMF(3mL)中的化合物13(19mg，0.04毫摩尔)的溶液内在0°C_5°C添加甲氧钠(0.5M溶于MeOH中，79iiL，0.04毫摩尔)及搅拌5分钟。向反应混合物中加水(20mL)，并用EtOAc(2X10mL)萃取水性混合物。对组合萃取物进行干燥(MgS04)。在真空中去除溶剂，并将粗产物在硅胶上用CH2C12中的10%MeOH层析洗脱以给出14(15.3mg，87%)。"NMR(CDCl3)S9.24(brs，1H)，8.25(dd，1H，J=9.2，1.6Hz)，8.02(s，1H)，7.54(tt，1H，J=7.6，1.6Hz)，7.43(tt，1H，J=7.6，1.6Hz)，7.28(d，1H，J=9.2Hz)，7.20(s，1H)，6.94(d，1H，J=7.6Hz)，6.88(s，1H)，4.49(m，2H)，4.12(brs，2H)，3.26(m，2H)，2.92(m，1H)，1.76(dd，2H，J=7.6Hz)，1.61(s，9H)。化合物15.溶于含4NHBr的EtOAc(3mL)的化合物14(6.4mg，0.013mmo1)的溶液在25t:在氮气下搅拌30min。在真空中去除溶剂，并进一步在真空下干燥14小时以给出15(7.lmg，99%)。'HNMR(DMS0-d6)S12.16(s，1H)，10.45(s，1H)，8.ll(d，lH，J=8.4Hz)，7.94(brs，1H)，7.83(d，1H，J=8.OHz)，7.51(m，2H)，7.34(m，2H)，7.27(s，1H)，4.81(t，1H，10.8Hz)，4.48(d，1H，10.8Hz)，4.28(brs，1H)，3.77—3.91(m，4H)，3.41—3.48(m，2H)。化合物16:化合物10(0.033毫摩尔，2HBr盐)与2.5mLDMF中的实例3的化合物29(45mg，0.054毫摩尔)在HATU(20mg，0.054毫摩尔)及TEA(15-20yL)的存在下反应50分钟。将溶剂蒸发，并将粗产物通过反相HPLC纯化以给出10mg化合物16(21%产率)。123<formula>formulaseeoriginaldocumentpage124</formula>MS:1405.6、1427.8及1444.6。化合物19.化合物10(25mg，0.033毫摩尔，2HBr盐)与2.5mLDMF中的实例5的化合物D(21.5mg，0.043毫摩尔)在HATU(16.5mg，0.0433毫摩尔)及TEA(10-15iiL)的存在下进行反应45分钟。将溶剂蒸发，并将粗产物通过反相HPLC纯化以给出25mg化合物17(71%产率)。MS:1067.0。化合物17(0.0187毫摩尔)用DMF(3mL)中的5%吡啶进行脱保护45分钟。溶剂经蒸发去除，残余物用二乙醚洗涤获得化合物18(MS:845.2)。向溶于3mLDMF的0.00935毫摩尔化合物18的溶液内，添加溶于DCMlmL的Mal-dPEG4-NHS酯(lOmg，O.019毫摩尔)，接着添加TEA(5yL)。30分钟后将溶剂蒸发，并将粗产物通过反相HPLC纯化以给出5.2mg的化合物19(MS:1243.2、1266.8以及1281.2)。实例7aS0C12、CH2C12100%bTFA、CH2C12100%c『妣啶、CH2C1267%dTFA、茴香醚、CH2C12100%e10，、HATU，DMF、DIEA69%f哌啶、在CH2C12中的DMF98%g20%DMF、DIEA、N-丁二酰亚胺基_4-顺丁烯二酰亚胺基丁酸酯53%化合物ll:向甲苯(lOmL)中的化合物3(236mg，0.86毫摩尔)的溶液内添加1_甲基-2-吡咯烷酮(502iiL、5.13mmol)。如此所得的混合物冷却至0°C。然后添加甲苯(4mL)中的亚硫酰二氯(502L，2.58mmol)，所得溶液在Ot:搅拌10分钟。去除溶剂，产物未经进一步纯化即用于下一步骤(252mg，100%)。化合物13:向二氯甲烷(3mL)中的化合物12(137mg，0.27毫摩尔)的溶液内添加TFA(6mL)。所得溶液搅拌20分钟。在真空下将溶剂与甲苯共同蒸发两次。残余物(171mg，100%)未经进一步纯化即用于下一步骤。化合物14:向二氯甲烷(6mL)中的化合物13(171mg，0.27毫摩尔)的溶液内，在(TC添加吡啶(0.6mL)及化合物11(159mg，0.54毫摩尔)。如此所得混合物在(TC搅拌1小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物14(152mg，72%)。'HNMR(CD3OD)S1.54(s，9H)，2.91(s，3H)，3.00—3.60(m，8H)，3.72(m，1H)，3.99(m，1H)，4.31—4.50(m，3H)，6.94(s，1H)，7.05(m，1H)，7.13(d，1H)，7.45(m，2H)，7.68(d，1H)，7.75(s，1H)，7.86(d，1H)，8.23(s，1H);LC-MS(ES+)563(M+H-Boc)+，607(M+H-56)+，663(M+H)+，686(M+Na)+，701(M+K)+。I~16,RFmoe:剛2化合物15:向二氯甲烷(2mL)中的化合物14(198mg，0.25mmol)的溶液内添加茴香醚(0.2mL)及TFA(O.8mL)。所得溶液搅拌20分钟。将溶剂在真空中去除。残余物(201mg，100%)未经进一步纯化即用于下一步骤。化合物16:在室温向DMF(3mL)中的化合物15(143mg，0.25毫摩尔)的溶液内添加化合物10(197mg，0.25毫摩尔)、二异丙基乙胺(218yL，1.25毫摩尔)及HATU(95mg，0.25毫摩尔)。将如此获得的混合物搅拌2小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物16(252mg，69%)。力NMR(CD3OD)(1.06(d，3H)，1.14(d，3H)，1.60(m，2H)，1.81(m，1H)，1.90(m，1H)，2.25(m，1H)，2.91(s，3H)，3.05—3.25(m，6H)，3.40-3.70(m，8H)，3.70(d，1H)，3.85(d，1H)，4.00(m，1H)，4.19(t，1H)，4.30—4.50(m，5H)，4.65(m，1H)，7.02(s，1H)，7.28—7.50(m，8H)，7.60(m，2H)，7.70(d，2H)，7.76(d，2H)，7.87(m，3H)，8.03(s，1H)，8.25(bs，1H);LC_MS(ES+)1203(M+H)+，1227(M+Na)+，1243(M+K)+。化合物17:参见实例3中化合物28的制备有关Fmoc脱保护的总体程序。化合物16(235mg，0.16毫摩尔)的脱保护以给出161mg化合物17(98%)。残余物未经进一步纯化即用于下一步骤。LC-MS(ES+)983(M+H)+、1005(M+Na)+、1021(M+K)+。化合物18:在室温下向含20%DMF的二氯甲烷(lmL)中的化合物17(48mg，0.049毫摩尔)的溶液内，添加二异丙基乙胺(34iiL，0.19毫摩尔)及N_丁二酰亚胺基-4-顺丁烯二酰亚胺基丁酸酯(21mg，0.073毫摩尔)。将如此获得的混合物搅拌2小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物18(36mg，53%)。^NMR(CD3OD)S1.10(d，3H)，1.15(d，3H)，1.61(m，2H)，1.80(m，1H)，1.91(m，3H)，2.25(m，3H)，3.01(s，3H)，3.12-3.24(m，6H)，3.47-3.65(m，10H)，3.84(d，1H)，3.90(dd，1H)，4.34(m，1H)，4.62—4.80(m，4H)，6.82(s，2H)，7.17(s，1H)，7.46(d，2H)，7.50(m，1H)，7.60(m，1H)，7.76(d，2H)，7.93(m，4H)，8.07(s，1H)，8.25(bs，1H);LC-MS(ES+)574(M+2H/2)+，1148(M+H)+，1168(M+Na)+，1186(M+K)+。实例8<formula>formulaseeoriginaldocumentpage127</formula>aH2、Pd/C、甲醇、(^2(:1298%b丙烯醇、卩比啶、CH2C12、4_甲基哌嗪_1_碳酰氯72%cS0C12，、CH2C12100%dTFA、CH2C12100%611、妣啶、(^2(:1267%fTFA、茴香醚、CH2Cl2l00Xg10、HATU、DMF、DIEA69%h哌啶、DMF68%i20%DMF于CH2Cl2、DIEA、MAL_dPEG4-NHS酯(28,60%)或N-丁二酰亚胺基-4-顺丁烯二酰亚胺基丁酸酯(29,51%)化合物21:将化合物20(520mg，1.22mmol)及甲醇和二氯甲烷(2和4mL)中的钯炭(100mg)的一个溶液在室温置于氢气大气压下。如此获得的混合物在室温下搅拌过夜。将钯过滤，并将所得溶液浓縮至干燥以给出灰色固体(400mg，98%)。^NMR(CD3OD)S1.59(bs，9H)，3.52(m，1H)，3.89-4.00(m，2H)，4.07(m，1H)，4.18(m，1H)，7.26(m，1H)，7.45(m，1H)，7.55(bs，1H)，7.65(d，1H)，8.13(d，1H)。化合物22:向二氯甲烷(lOmL)中的化合物21(400mg，1.20毫摩尔)的溶液内，添加丙烯醇(lmL)、吡啶(lmL，1.2毫摩尔)及4-甲基-1-哌嗪碳酰氯(364mg，1.8毫摩尔)。如此获得的混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物22(509mg，72%)。'HNMR(DMS0_d6)S1.50(s，9H)，2.21(s，3H)，2.36(s，2H)，2.42(s，2H)，3.42(s，2H)，3.78(s，2H)，3.90(m，1H)，3.98(m，1H)，4.08(m，2H)，4.14(m，1H)，4.22(m，1H)，7.42(t，1H)，7.58(t，1H)，7.82(d，1H)，7.88(m，1H)，7.92(d，1H);LC-MS(ES+)，460(M+H)+，483(M+Na)+，499(M+K)+。化合物23:向二氯甲烷(3mL)中的化合物22(250mg，0.43mmol)的溶液内添加TFA(6mL)。所得溶液搅拌20分钟。在真空下将溶剂与甲苯共同蒸发两次。残余物(256mg，100%)未经进一步纯化即用于下一步骤。LC-MS(ES+)360(M+H)+，383(M+Na)+，399(M+K)+。化合物24:向二氯甲烷(8mL)中的化合物23(256mg，0.43mmo1)的溶液内，在(TC添加吡啶(1.6mL)及化合物11(252mg，0.86,1)(参见实例7)。如此所得混合物在(TC搅拌1小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物24(213mg，67X)。丄HNMR(CD3OD)S1.54(s，9H)，2.87(s，3H)，3.00-3.60(m，8H)，3.79(m，1H)，3.89(m，1H)，4.31—4.48(m，3H)，6.91(s，1H)，7.08(m，2H)，7.43(m，2H)，7.65(d，1H)，7.74(s，1H)，7.84(d，1H)，8.23(s，1H);LC-MS(ES+)518(M+H-Boc)+，562(M+H-56)+，619(M+H)+，641(M+Na)+，657(M+K)+。化合物25:向二氯甲烷(2mL)中的化合物24(50mg，0.08mmo1)的溶液内添加茴香醚(0.2mL)及TFA(0.8mL)。所得溶液搅拌20分钟。将溶剂在真空中去除。残余物(60mg，100%)未经进一步纯化即用于下一步骤。力NMR(CD3OD)S3.01(s，3H)，3.40-3.60(bs，4H)，3.79(m，2H)，4.02(m，2H)，4.32(m，2H)，4.73—4.90(m，3H)，7.26(m，2H)，7.51(m，1H)，7.63(m，2H)，7.77(d，1H)，7.94(d，1H)，8.30(s，1H)。化合物26:在室温向DMF(2mL)中的化合物25(60mg，0.08mmo1)的溶液内添加化合物10(53mg，0.08mmo1)、二异丙基乙胺(59iiL，0.4,1)及HATU(26mg，0.08mmo1)。将如此获得的混合物搅拌2小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物26(66mg，69%)。丄HNMR(CD3OD)S1.06(d，3H)，1.14(d，3H)，1.60(m，2H)，1.82(m，1H)，1.95(m，1H)，2.25(m，1H)，2.95(s，3H)，3.05—3.25(m，6H)，3.40-3.70(m，8H)，3.85(d，1H)，3.90(m，1H)，4.06(m，1H)，4.20(m，1H)，4.30-4.70(m，6H)，7.02(s，1H)，7.28-7.50(m，8H)，7.60(m，2H)，7.70(d，2H)，7.76(m，2H)，7.87(m，3H)，8.03(s，1H)，8.25(bs，1H);LC-MS(ES+)580(M+2H/2)+，1159(M+H)+。化合物27:参见实例3中化合物28的制备有关Fmoc脱保护的总体程序。化合物26(66mg，0.05mmo1)的脱保护以给出44mg化合物27(98%)。残余物未经进一步纯化即用于下一步骤。LC-MS(ES+)937(M+H)+，959(M+Na)+。化合物28:在室温下向含20%DMF的二氯甲烷(lmL)中所含的化合物27(23mg，0.024mmo1)的溶液内，添加二异丙基乙胺(16yL，0.09mmo1)及MAL_dPEG4-NHS酯(18mg，0.036mmo1)。将如此获得的混合物搅拌2小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物28(23mg，60%)。^NMR(CD3OD)S1.09(d，3H)，1.15(d，3H)，1.60(m，2H)，1.82(m，1H)，1.95(m，1H)，2.30(m，1H)，2.45(t，2H)，2.51(t，2H)，2.97(s，3H)，3.10-3.25(m，6H)，3.46-3.70(m，24H)，3.75(t，4H)，3.85(d，1H)，3.90(m，lh)，4.10(m，1H)，4.50-4.70(m，4H)，6.78(s，2H)，7.04(s，1H)，7.34(m，2H)，7.45(m，1H)，7.50(m，1H)，7.71-7.79(m，2H)，7.90(m，3H)，8.04(s，1H)，8.25(bs，1H);LC—MS(ES+)668(M+2H/2)+。化合物29:在室温下向含20%DMF的二氯甲烷(lmL)中的化合物27(31mg，0.033mmo1)的溶液内，添加二异丙基乙胺(22yL，0.13mmo1)及N-丁二酰亚胺基-4-顺丁烯二酰亚胺基丁酸酯(14mg，0.049mmo1)。将如此获得的混合物搅拌2小时。将溶剂蒸发，并将残余物通过半制备性HPLC纯化以给出呈白色固体的化合物29(32mg，51%)。'HNMR(CD30D)S1.09(d，3H)，1.15(d，3H)，1.62(m，2H)，1.84(m，1H)，1.92(m，3H)，2.25(m，3H)，2.97(s，3H)，3.12—3.25(m，6H)，3.39—3.68(m，10H)，3.85(d，1H)，3.93(dd，1H)，4.08(m，1H)，4.50—4.67(m，4H)，6.80(s，2H)，7.03(s，1H)，7.34(m，2H)，7.44(m，1H)，7.50(m，1H)，7.72(d，2H)，7.77(d，1H)，7.90(m，3H)，8.04(s，1H)，8.25(bs，1H);LC-MS(ES+)552(M+2H/2)实例9<formula>formulaseeoriginaldocumentpage129</formula>叔丁基5-(4-乙酰基苯甲酰氨基)-lH-吲哚-2-羧酸酯(2)。叔丁基5-氨基-1H-口引哚-2-羧酸酉旨(220mg，0.94,1)、4-乙酰基苯甲酸(155mg，0.94,1)、及DMF(6mL)中TBTU(303mg，0.94mmo1)在4。C用二异丙基乙胺(329uL，1.89mmo1)处理，并在0-5t:下搅拌40min。将溶剂在真空下去除。将粗产物在硅胶上层析，用CH2C12中的1%MeOH洗脱以给出2(350mg，98%)。丄匪RDMS0_d6)S11.66(bs，1H)，10.34(s，1H)，8.09(d，1H，J=8.8Hz)，8.07(s，4H)，7.55(d，1H，J=8.8Hz)，7.41(d，1H，J=8.8Hz)，7.03(s，1H)，2.63(s，3H)，1.56(s，9H)。5-(4-乙酰基苯甲酰氨基)-lH-喷哚-2-羧酸(3)。向二氯甲烷(4mL)中的化合物2(350mg，0.92mmo1)的溶液用TFA(4mL)处理并在室温下搅拌15分钟。将溶剂去除，并将残余物进一步在高真空下干燥以给出3，几乎呈定量产率？HNMRDMS0-d6)S12.92(bs，1H)，11.74(bs，1H)，10.33(s，1H)，8.04(d，1H，J=8.8Hz)，8.06(s，4H)，7.52(d，1H，J=8.8Hz)，7.38(d，1H，J=8.8Hz)，7.06(s，1H)，2.63(s，3H)。seco-CBI-Boc(5).化合物4(100mg，0.24mmol)及MeOH/CH2Cl2(1/2，10mL)中的10%Pd-C(35mg)的一个溶液在真空下除气40s。所得混合物置于氢气气氛下，并在25°C下搅拌7小时。反应混合物经西莱特(Celite)过滤(CH2C12洗涤)。将溶剂在真空中去除。在硅胶上用Et0Ac/Hex(2/8)洗脱的层析获得化合物5(77mg，98%)。丄NMRDMS0_d6)S10.36(s，1H)，8.04(d，1H，J=8.2Hz)，7.72(d，1H，J=8.2Hz)，7.61(brs，1H)，7.45(t，1H，J=8.4Hz)，7.261(t，1H，J=8.4Hz)，4.06(m，4H)，3.73(m，1H)，1.52(s，9H)。seco-CBI(Cl)-喷哚(6).将4NHC1中5(35mg，0.lmmol)的EtOAc(5ml)溶液在25t:搅拌30分钟至45分钟。将溶剂去除，并在高度真空下进一步干燥4小时。向残余物内添加5-(4-乙酰基苯甲酰氨基)-lH-吲哚-2-羧酸(3，117mg，0.44mmol)及DMF中的EDC(5mL)，并将反应混合物在室温下搅拌5小时。将溶剂在高真空中去除。在硅胶上用2-8%MeOH-CH2Cl2洗脱的层析法获得6(118.3mg，50%)。丄匪RDMS0_d6)S11.73(s，1H)，10.43(s，1H)，10.36(s，1H)，8.18(s，1H)，8.08(s，5H)，7.92(s，1H)，7.83(d，1H，J=8.4Hz)，7.55(t，1H，J=8.4Hz)，7.51(t，J=8.4Hz，1H)，7.45(d，J=8.4Hz，1H)，7.19(s，1H)，4.80(t，J=10.8Hz，1H)，4.55(d，1H，J=10.8Hz)，4.22(m，1H)，4.0(dd，1H，J=10.8Hz)，3.86(dd，J=llHz，1H)，2.63(s，3H)。seco-CBI(Br)-口引哚(7).向无水DMF(lmL)中的6(35.5mg，0.066mmol)的溶液内，在(TC添加60%NaH(5.3mg，0.13mmol)并搅拌15-30分钟。在高真空下去除溶剂。将粗产物在硅胶上层析，用CH2C12中的3%MeOH洗脱以给出环丙烷(31mg，94%)。所得环丙烷以4NHBr用乙酸乙酯(3mL)处理，将反应混合物搅拌15分钟。在真空下去除溶剂。在硅胶上用2-8%MeOH-CH2Cl2洗脱的层析法获得7(34.5mg，96%)。丄匪RDMS0_d6)S11.73(s，1301H)，10.43(s，1H)，10.36(s，1H)，8.18(s，1H)，8.08(s，5H)，7.92(s，1H)，7.83(d，1H，J=8.4Hz)，7.55(t，1H，J=8.4Hz)，7.51(t，J=8.4Hz，1H)，7.45(d，J=8.4Hz，1H)，7.19(s，1H)，4.80(t，J=10.8Hz，1H)，4.55(d，1H，J=10.8Hz)，4.26(m，1H)，4.0(dd，1H，J=10.8Hz)，3.86(dd，J=llHz，1H)，2.63(s，3H)。氨基甲酸酯(8).将7(34mg，0.06毫摩尔)、4-甲基-l-哌嗪碳酰氯盐酸盐(15.9mg，0.08毫摩尔)、丙烯醇(80uL)及(^2(]12(51111)中的无水吡啶(80yml)的一个溶液在室温下搅拌16h。粗产物的纯化在硅胶上进行，用CH2C12中的2%-10%MeOH洗脱以给出8(41.3mg，78%)。丄HNMRDMS0_d6)S11.73(s，1H)，10.38(s，1H)，8.18(bs，2H)，8.08(s，4H)，8.02(d，1H，J=8.4Hz)，7.83(d，J=8.4Hz，1H)，7.60(t，1H，J=8.4Hz)，7.56(d，J=8.4Hz，1H)，7.50(t，J=8.4Hz，1H)，7.47(d，1H，J=8.4Hz)，7.24(s，1H)，4.89(t，J=10.8Hz，1H)，4.58(d，1H，J=10.8Hz)，4.45(m，1H)，3.97(dd，1H，J=10.8Hz)，3.91(dd，J=llHz，1H)，3.77(bs，2H)，3.47(bs，2H)，2.63(s，3H)，2.47(bs，2H)，2.40(bs，2H)，2.25(s，3H)。化合物10:将溶于含5%乙酸的无水二氯甲烷(2mL，经分子筛预先干燥)中的8(11.35mg，0.016毫摩尔)及9(17mg，0.032毫摩尔)的一个溶液在25。C搅拌10-15分钟。将溶剂去除并在高真空中进一步过夜干燥。通过分析性HPLC2)(NovaPakC18，5iim，3.9X150mm柱)，检查腙的形成，以lml/min(乙腈/20mM甲酸铵，pH7)洗脱，使用梯度10%至100%甲酸铵10分钟(滞留时间6.93分钟)。腙10最后通过制备性HPLC进行纯化(SymmetrPr印C18，7iim，19X150mm柱)，以10ml/min(乙腈/20mM甲酸铵，pH7)洗脱，使用梯度10%至70%乙腈20分钟，维持70%乙腈3分钟，70%至100%乙腈7分钟(滞留时间26.1分钟)洗脱以给出10(14.7mg，82%)。MS:C55H62BrN9012(M+H)m/z的计算值1121.04，实测值1121.1。实例10<formula>formulaseeoriginaldocumentpage132</formula>化合物(3).DMF(1.5mL)中的氢溴酸盐1(12mg，0.016毫摩尔)(见实例6里的化合物10)及2(25mg，0.032毫摩尔)的一个溶液用二异丙基乙胺(11yL，0.064毫摩尔)进行处理，在25t:在氮气下搅拌48h。溶剂经去除，粗产物通过制备性HPLC纯化获得3(6.4mg，30%)。MS:C64H67BrN^A。(M+H)m/z之计算值1216.18，实测值1216.40。化合物(4)向DMF(lmL)的TFA盐3(6.4mg，4.9微摩尔)的溶液内添加吡啶(50L)，将反应混合物在25t:在氮气下搅拌15分钟。去除溶剂，粗产物通过制备性HPLC进行纯化以给出4(3.8mg，66%)。MS-C^H^BrN^CV(M+H)m/z之计算值994.94，实测值994.80。化合物(6)向DMF(lmL)中的TFA盐4(3.8mg，3.2翻1)的溶液内添加5(3.3mg，6.4umo1)和吡啶(10uL)，将反应混合物在25。C在氮气下搅拌30分钟。去除溶剂，粗产物通过Pr印HPLC进行纯化，产生6(3.4mg，71%)。MS:C67H83BrN12016(M+H)m/z的计算值1393.35，实测值1393.60。实例11[O951]化合物A(O.033毫摩尔，2HBr盐)(参见实例6的化合物10)与2.5mLDMF中的化合物B(45mg，0.054毫摩尔)在HATU(20mg，0.054毫摩尔)及TEA(15-20iiL)的存在下反应50分钟。将溶剂蒸发，并将粗产物通过反相HPLC纯化以给出10mg化合物C(21X产率)。MS:1405.6、1427.8及1444.6。实例12:CI+H3NFmoc-OSuFmoc、OHDsss-Nl3rtinFmoc、HO1232的合成1.44克(0.015摩尔)的2_氨基乙醇的HC1酸盐(1)，5.0克(0.018摩尔)的Fmoc-丁二酰亚胺(2)溶解于圆底烧瓶中的20mL乙腈及20mL10%水性碳酸钾溶液中，并在室温搅拌30分钟。反应用10%柠檬酸溶液淬灭并浓縮去除乙腈。水层用30mL乙酸乙酯萃取三次，而有机层用20mL盐水洗涤两次。尽管该化合物足够纯，在硅胶上用DCM中的2-5%MeOH进行纯化以给出2.5克2，64%产率。3的合成使1.3克(4.58毫摩尔)2在圆底瓶内在50mL二氯甲烷中，在2.5克(5.6毫摩尔)迪斯马丁试剂的存在下搅拌2小时。粗反应混合物在硅胶上纯化，用20-50%乙酸乙酯洗脱。获得1.06克醛3，82%产率。MS+1=281.8O丫吗EDC-HOBt-CuCIHO0「moc叔丁基4-氨基苯甲酸酯FmocCftmline4的合成将1.5克(3.77毫摩尔)Fmoc-Citruline溶解于圆底烧瓶内的3mLDMF中，向其中添加0.87克(4.5毫摩尔)EDC、0.61克(4.5毫摩尔)HOBt。然后加入6mLDCM，接着添加0.88克(4.5毫摩尔)4-氨基苯甲酸叔丁基酯及催化量的氯化铜。将反应混合物搅拌过夜。蒸发去除溶剂，粗产物在硅胶上用DCM中的5%至10%MeOH进行纯化以给出2克4，92%产率。M+1=574<formula>formulaseeoriginaldocumentpage134</formula>5和6的合成将205mg(0.36毫摩尔)化合物4用3mLDMF中的2.5%吡啶溶液处理30分钟。将反应混合物浓縮至干燥，用己烷(20-30mL)漂洗两次，然后用二乙醚(20-30mL)漂洗两次。游离态胺5在高真空下干燥，未经任何进一步纯化即于下一步骤反应。M+1=352.2将167mg(0.42毫摩尔)的Fmoc-Citruline溶解于6mLDMF中。添力口160mg(0.42毫摩尔)的HATU。将如以上制备的化合物5(0.35毫摩尔)溶解于2mLDMF中，并添加至以上的Fmoc-瓜胺酸及HATU的一个溶液中。将146yL(1.05毫摩尔)三乙基胺添加至反应混合物，让其搅拌1.5小时。将溶剂蒸发，并将粗产物通过反相HPLC纯化以给出产率为78%的199mg化合物6。M"1=731.2、M+Na=753.4并且M+K769.0<formula>formulaseeoriginaldocumentpage134</formula>7和8的合成将280mg(0.38毫摩尔)化合物6在与化合物5的合成相类似的3mL2.5%吡啶中进行脱保护以给出7。M+1=509化合物8是通过以上制备的化合物3与7的还原性胺化反应来合成的。将0.38毫摩尔化合物7溶解于圆底烧瓶内的6mL甲醇中，用冰浴冷却至Ot:，接着添加250mg(3.0毫摩尔)乙酸钠。将120mg(0.43毫摩尔)化合物3添加至如上烧瓶内，所得反应混合物在(TC搅拌30分钟。然后加入68mg(1.0毫摩尔)的氰基硼氢化钠。让反应混合物在冰浴温度下搅拌20分钟，然后在室温下搅拌1小时。将粗反应混合物浓縮，并通过反相HPLC纯化获得150mg51%产率的所希望的产物8。M+1=774.4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage135</formula>25分钟c时并继续进行下NH2酸9的合成33mg(0.045毫摩尔)的8用3mLDCM:TFA为2:1的混合物处理蒸发去除溶剂，残余物用乙醚滴定两次，弃醚层。所得的酸9在高真空下干燥数小步骤。MS+1=718<formula>formulaseeoriginaldocumentpage135</formula>11的合成20mg(0.032毫摩尔)的10用3mLDCM:TFA为2:1的混合物处理5分钟。蒸发去除溶剂，残余物用乙醚滴定两次，弃醚层。所得的胺11的TFA盐在高真空下干燥数小时并继续进行下一步骤。MS+1=519<formula>formulaseeoriginaldocumentpage136</formula>12的合成将以上制备的胺11:2TFA溶解于3mLDMF中，并转移到包含酸9的烧瓶内，接着添加20mg(0.045毫摩尔)B0P及100yL二异丙基胺，在室温搅拌2小时。将粗反应混合物浓縮，并通过反相HPLC纯化获得35mg89%产率的所希望的化合物12。MS+1=1217.6，m/2z=609.2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage136</formula>13及最终的化合物14的合成35mg(0.029毫摩尔)的12用包含lOOuL吡啶的4mLDMF处理15分钟。蒸发去除溶剂，所得的胺13用lOmL己烷滴定，接着用lOmL乙醚滴定(2次)，在高真空下干燥，未经任何进一步纯化即继续进行下一步骤。M+1=996.0，m/2z=498将以上制备的0.029毫摩尔13溶解于2mLDMF中，接着添加17mg(0.06毫摩尔)可商购获得的15及32L二异丙基胺。产生的反应混合物在室温下搅拌1小时。溶剂经蒸发去除，粗产物用乙腈及含O.1%TFA的水通过反相HPLC进行纯化以给出21mg14(MED-2500)，呈其TFA盐，52X产率。MS:M"1=1159.47，m/2z=580.2。实例13:化合物2合成向l(350mg，0.82毫摩尔)的二氯甲烷(3mL)溶液中的添加TFA(6mL)。将所得溶液搅拌20分钟。在真空中将溶剂与甲苯共同蒸发(两次)。残余物未经进一步纯化即用于下一步骤。向二氯甲烷(8mL)中的这种Boc经脱保护的材料(0.82毫摩尔)的溶液内，于Ot:添加吡啶(2mL)及10(0.98毫摩尔，参见下文)。如此所得混合物在Ot:搅拌1小时。将溶剂除去，并将残余物在硅胶上通过快速层析法进行纯化，并用二氯甲烷中的5X甲醇洗脱以给出呈白色泡沫的化合物2(417mg，90X)。^NMR(CD3OD)S1.55(s，9H)，3.46(t，1H)，3.90(dd，1H)，4.15(t，1H)，4.65(t，1H)，4.8(d，1H)，5.27(m，2H)，6.55(bs，1H)，7.03(d，1H)，7.18(dd，1H)，7.34—7.41(m，5H)，7.43—7.56(m，3H)，7.70(d，1H)，7.85(bs，1H)，8.20(s，1H)，8.34(d，2H)，9.65(bs，1H);LC—MS(ES+)582(M+H)+;604(M+Na)+。化合物3的合成将2(315mg，0.6mmo1)及甲醇/二氯甲烷(6mL)中的钯炭(100mg)的一个溶液在室温置于氢气大气压下。如此获得的混合物在室温下搅拌过夜。将钯过滤，并反应混合物浓縮至干燥以给出呈白色泡沫的化合物3(175mg，66X)。111NMR(CD3OD)S1.52(s，9H)，3.46(t，1H)，3.90(dd，1H)，4.00(t，1H)，4.50—4.60(m，2H)，6.98(s，1H)，7.20(d，1H)，7.30-7.45(m，4H)，7.60(d，1H)，7.70(d，1H)，7.85(bs，1H)，8.20(d，1H);LC-MS(ES+)436(M+H-56)+;493(M+H)+。化合物4的合成向3(350mg)的二氯甲烷(3mL)溶液内添加TFA(3mL)。所得溶液搅拌20分钟。在真空中与甲苯(两次)共同蒸发去除溶剂获得化合物4。该固体未经进一步纯化即用于下一步骤。化合物5的合成向乙腈(lOmL)中的4(300mg，0.59mmo1)的悬浮液内添加DBU(440iiL，2.96mmo1)。所得溶液搅拌30分钟。将溶剂在真空中去除。将反应混合物溶解于二氯甲烷(50mL)中，用饱和碳酸氢钠洗涤。有机层以盐水洗涤，用NS04干燥，过滤并在真空下浓縮以给出呈黄色固体的化合物5(200mg，90X)。^NMR(CD3OD)S3.55(m，1H)，3.75(m，2H)，4.45(m，2H)，5.49(s，1H)，6.85(dd，1H)，6.97-7.01(m，2H)，7.15(d，1H)，7.25(d，1H)，7.40(t，1H)，7.60(t，1H)，8.10(d，1H);LC-MS(ES+)356(M+H)+;379(M+Na)+;394(M+K)+。NHBocS0CI2NHBoc1089化合物10的合成向5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯(Acros，10g，42.7mmo1)、二叔丁基重碳酸酯(10.24克，46.97毫摩尔)的无水甲醇(Acros，lOOmL)悬浮液内添加钯(Aldrich，10X于活性碳上，400mg)。将反应混合物在室温在氢气气氛下搅拌3小时。当氢气不再被消耗时反应完成。反应混合物经过滤，滤液经浓縮并在高真空下干燥以给出黄色残余物8，无需经过进一步纯化。向甲醇(150mL)中的黄色残余物8的溶液内，添加含氢氧化锂的水的溶液(150mL，0.57M)。反应混合物在6(TC加热过夜。基于HPLC分析完成水解。反应混合物用水(300mL)稀释，在高真空下浓縮以去除甲醇。所得溶液用EtOAc(2X150mL)萃取。通过加入KHS04溶液将水层酸化至pH=4。所得混合物再次用EtOAc(3X150mL)萃取。有机层经组合，用无水MgS04干燥并在真空下浓縮以给出褐色固体9(9.7克，82X)。9未经进一步纯化即用于下一步骤。向无水DCM(Acros，60mL)中的9(2.16克，7.84毫摩尔)于及1-甲基-2-妣咯烷酮(Fluka，5.03mL，52.32mmo1)的一个溶液内添加S0C12(Aldrich，1.9mL，26.16mmo1)。反应混合物在Ot:搅拌0.5小时并在室温搅拌0.5小时。反应混合物经浓縮并在高真空下干燥过夜以给出10。小量10用甲醇及三乙胺处理来形成甲酯，它用于HPLC分析来检查乙酰氯的形成完全。H7NFmoc-OSuHCIFmocHNDess-MartinFmocHMONa2C031314化合物14的合成向乙腈(80mL)及碳酸钠(Aldrich，10%，80mL)中的2_胺基乙醇盐酸盐(Aldrich，5g，51.25mmo1)的悬浮液内，添加Fmoc—0Su(BaChem，17.28g，51.25mmo1)。将反应混合物在室温搅拌2小时，HPLC分析表明反应完成。反应混合物用水(500mL)稀释，并通过过滤收集粗产物。将固体溶解于EtOAc(500mL)，所得有机层用盐酸溶液(1^，2X150mL)、饱和碳酸氢钠溶液(2X150mL)及盐水(1X150mL)洗涤。有机层经浓縮获得白色固体13(13.9克，95%)，未经进一步纯化即用于下一步骤。向13(13.9克，49.12毫摩尔)的无水DCM(ACR0S，150mL)溶液内添加迪斯马丁过碘烷(Dess-martinperiodinane)(27.08克，63.85毫摩尔)。室温搅拌反应混合物溶液4小时。HPLC显示反应完成。将反应混合物装载至急速管柱层析上且使用己烷中的10-50%EtOAc进行纯化以给出白色固体14(12.l克)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage139</formula>化合物22的合成向Na-Fmoc-L-Citruline(Fluka，10g，25.16mmol)、4-氨基苯甲酸叔丁酯(Fluka，5.84g，30.2mmo1)、N_(3-二甲氨基丙基)-N'_乙基碳二亚胺盐酸盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage139</formula>30.2,1)、在无水DMF(Acros，lOOmL)中的1-羟基苯并三唑(Chem-Impex，4.08g，30.2,1)的溶液内，添加CuCl2(Aldrich，4.05g，30.2,1)。室温搅拌反应混合物溶液过夜。HPLC显示反应完成。反应混合物经浓縮并使用乙酸乙酯和水进行后续处理。有机层用盐水洗涤，并浓縮以给出呈粗产物的褐色残余物15。向以上提及的无水DMF(Acros，140mL)中的粗产物15的溶液内，添加哌啶(Aldrich，7mL)。将反应混合物在室温搅拌15分钟。HPLC分析表明反应完成。反应混合物经浓縮，残余物在120克CombiFlash柱上用在DCM中的0-20%甲醇进行纯化。希望的产物用DCM的14%甲醇进行洗脱。希望的产物的馏分经组合并在高真空下浓縮以给出褐色固体16(7.34克，83.3%)。向无水DMF(Acros，lOOmL)及1-甲基-2-妣咯烷酮(Fluka，25mL，188.6,1)中的16(6.6g，18.86,1)的一个溶液内添加Fmoc-Val-OSu(BaChem，8.23g，18.86mmol)。室温搅拌反应混合物溶液2小时。HPLC显示反应完成。向反应混合物中添加哌啶(Aldrich，7mL)。室温搅拌反应混合物溶液0.5小时。HPLC分析显示Fmoc保护基被完全去除。反应混合物经浓縮，残余物在120克CombiFlash柱上用0-20%甲醇在DCM中进行纯化。希望的产物的馏分经组合并在高真空下浓縮以给出黄色固体18(7.4g，87%)。向18(7.4g，16.48mmol)及无水甲醇(Aldrich，175,1)中的14(4.63g，16.48mmo1)的一个溶液中添加乙酸钠(Aldrich，20g)。在(TC搅拌反应混合物1.5小时。向这个反应混合物中添加NaBH3CN(Aldrich，1.55g，24.72mmol)。室温搅拌反应混合物溶液过夜。HPLC显示反应完成。反应混合物经浓縮，然后使用乙酸乙酯和水进行后续处理。有机层经组合，用盐水洗涤并浓縮。残余物在120克CombiFlash柱上用DCM中的0-10%甲醇进行纯化。希望的产物的馏分经组合并在高真空下浓縮以给出褐色固体19(7.lg，60%)。向19(6.7g，9.38mmol)在无水DMF(Acros，120mL)的溶液内添加哌啶(Aldrich，6mL)。室温搅拌反应混合物溶液0.5小时。HPLC显示反应完成。反应混合物经浓縮，残余物用乙腈和水冻干，产生未经纯化的黄色固体20。向化合物20(假设8.40毫摩尔)、苹果酰亚胺基丁酸(Aldrich，1.85克，10.08毫摩尔)、0-(7-氮杂苯并三唑-l-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲鎗(Aldrich，3.83克，10.08毫摩尔)的无水DMF(Acros，50mL)溶液内添加N，N-二异丙基乙胺(Aldrich)来调整反应混合物之pH值超过8。将反应混合物在室温下搅拌0.5小时。HPLC显示反应完成。反应混合物经浓縮，残余物在120克CombiFlash柱上用10-20%甲醇在DCM中进行纯化。希望的产物用DCM的14-16%甲醇进行洗脱。希望的产物的馏分经组合并在高真空下浓縮以给出白色固体21(4.7g，85%)。向21(4.7g，7.17,1)的无水DCM(Acros，30mL)溶液内添力口TFA(Fisher，30mL)。室温搅拌反应混合物溶液0.5小时。HPLC显示反应完成。反应混合物经浓縮，并用乙腈和水冻干，产生白色固体22(4.9g，TFA盐)。140化合物24的合成向无水DMF(Acros，lmL)中的22(50mg，0.083mmol)的溶液内添加0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N，，N'-四甲基脲鎗(Aldrich，28.4mg，0.075,1)。通过添加DIEA(Alrdich)将反应混合物的pH值调整至超过8。将反应混合物在室温搅拌0.5小时，HPLC分析表明反应完成。添加4(68.2mg，0.14mmol)，并通过添加DIEA将反应混合物的pH值再次调整至超过8。将反应混合物在室温搅拌O.5小时，HPLC分析表明偶合完成。反应混合物在高真空下浓縮，残余物与PBS缓冲液(Mediatech，Inc，pH=7.4，10mL)共同搅拌0.5小时。将悬浮液过滤，并将所收集的固体溶解于甲醇。得到的溶液经浓縮，并且桨料在4克CombiFlash柱上用DCM中的10-20%甲醇进行纯化。正确的馏分经浓縮并在乙腈和水中冻干以给出白色粉末化合物24(45mg，45X)。^NMR(CD3OD)S1.10(d，3H)，1.15(d，3H)，1.62(m，2H)，1.89—1.94(m，4H)，2.25(m，3H)，3.80(m，2H)，3.50(t，2H)，3.60(m，3H)，3.84(d，1H)，4.00(dd，1H)，4.20(m，1H)，4.65(m，1H)，4.72(m，2H)，6.83(s，2H)，7.18(s，1H)，7.37(t，2H)，7.50(m，3H)，7.75—7.81(m，3H)，7.97(d，2H)，8.06(s，1H)，8.20(d，1H)，8.83(d，1H);LC-MS(ES+)976(M+H)+，999(M+Na)+。化合物23的合成在室温向22(500mg，0.7mmo1)的DMF(6mL)溶液内添加二异丙基乙胺(250iiL，1.4mmo1)以及HATU(279mg，0.73mmo1)。将如此获得的混合物搅拌30分钟。将溶剂蒸发，并将残余物在硅胶上通过快速层析法进行纯化，并用二氯甲烷中的15%甲醇洗脱以给出所希望的化合物。将这种固体(81mg)在室温缓慢添加至含20%1-甲基-2-妣咯烷酮的二氯甲烷(2mL)的5(40mg，0.ll毫摩尔)的溶液内。将如此获得的混合物搅拌2小时。将所希望的化合物通过添加6ml的二氯甲烷进行沉淀。黄色固体经过滤，干燥，并且未经进一步纯化即用于下一步骤(86mg，82%)。或以不同方式，将残余物通过半制备性HPLC纯化(20mM甲酸铵缓冲溶液，pH二7及乙腈)以给出呈白色固体的化合物23。力NMR(CD3OD)S1.02(d，6H)，1.62(m，2H)，1.70(t，1H)，1.75—1.95(m，5H)，2.05(m，1H)，2.25(t，3H)，3.80(m，2H)，3.10-3.30(m，4H)，3.35(m，2H)，3.55(t，2H)，4.55(2s，1H)，4.60-4.70(m，2H)，6.77(s，2H)，7.07(s，1H)，7.15-7.20(m，2H)，7.40-7.50(m，3H)，7.60(m，1H)，7.75(d，2H)，7.95(d，1H)，8.10(s，1H)，8.15(d，1H);LC-MS(ES+)940(M+H)+，962(M+Na)+。实例14:化合物3的合成在冰醋酸(9.6mL)及氢溴酸于水(16mL，48%)中的4_甲氧基-2-萘胺(230mg，1.33毫摩尔)的溶液在N2下回流4小时。小量样品(0.lmL)用乙酸乙酯(0.5mL)稀释，然后加水(0.5mL)及三乙胺(0.lmL)。有机层的TLC(20:1DCM/甲醇)未显示起始原料及一个新的低得多的点(Rf=0.1)。在真空下去除溶剂，并将产物在高真空下干燥以给出中间体4-羟基-2-萘胺，该中间体未经进一步纯化即用于下一步骤。向二噁烷(lOmL)中的4-羟基-2-萘胺的溶液内，添加TEA(lmL)及二叔丁基重碳酸酯(1.149克，5.27毫摩尔)。将反应混合物在N2下回流4小时。TLC(4:1己烷/乙酸乙酯)显示不含起始原料及显示一个较高点(Rf=0.55)。反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用水洗涤。水层用乙酸乙酯(2X50mL)萃取，有机层经组合并用盐水洗涤。有机层用无水化2504脱水，过滤并在真空下浓縮以给出呈油状的N-(叔丁氧羰基)-4-0-(叔丁氧羰基)_2-萘胺(2，80%产率)。向化合物2的丙酮溶液(lOmL)内添加氢氧化钠的水溶液(10mL，1M)。在室温下将应混合物搅拌反过夜。TLC(4:1己烷/乙酸乙酯)显示不含起始原料及一个新的较低点。反应混合物用乙酸乙酯(50mL)萃取，并用水洗涤。水层用乙酸乙酯(2X50mL)萃取，有机层用盐水洗涤，用无水NS04进行干燥并浓縮。残余物在IO克硅胶柱上用己烷中的10-20%乙酸乙酯进行纯化以给出呈油状的化合物3(181mg，53%)。化合物4的合成将化合物3(5克，19.3毫摩尔)的无水DMF(50mL)溶液在氮气下用苄基溴(4克，23.l摩尔)、碳酸钾(3.7克，27摩尔)及四丁基碘化铵(70mg，0.01毫摩尔)进行处理。将反应混合物在室温搅拌8小时。将反应混合物在真空下浓縮。层析分离(4X10cmSi02，10-20%EtOAc-己烷梯度洗脱)获得呈奶酪色粉末的纯的化合物4(5.48克，83%)HNMR(CDCl3，400MHz，ppm)8.22(d，1HJ=8.1Hz，C5-H)，7.68(d，1H，J=8.2Hz，C8-H)，7.3-7.5(m，8H，Cl—H，C6—H，C7—H，CH2C6H5)，7.06(d，1H，J=1.1Hz，C3-H)，6.62(brs，1H，NH)，5.23(S，2H，OCH2(C6H5)，1.55(s，9H，OC(CH3)3)。化合物5的合成将装配有搅棒及橡皮隔膜的一个1000mL圆底烧瓶与化合物4(13克，O.0372摩尔)及THF(300mL)进行组合。澄清黄色溶液在氮气下用干冰浴冷却至-2(TC。添加对甲苯磺酸(0.IO克，O.0005摩尔)至该反应，并搅拌溶液10分钟。将N-碘代丁二酰亚胺(10克，O.0446摩尔)溶解于MTHF(50mL)中，并通过套管添加至反应(约1小时)。将溶液在冰浴中冷却2小时，转成褐色。移开冰浴，让其在氮气下温热至室温1.5小时。TLC(2:1己烷/DCM)显示不含起始原料及一个新的较高点。反应用NaHC03(200mL)淬灭，形成白色固体。搅拌溶液10分钟后，将EtOAc(200mL)及水(100mL)添加至反应。水层用EtOAc(2X100mL)萃取，有机层经组合并用盐水(100ml)萃取。有机层用MgS04干燥、过滤、并在真空下浓縮成深红褐色固体。固体通过柱层析法纯化，使用2:l己烷/DCM作洗脱液以给出呈褐色固体的化合物5(14克，79%)。化合物6的合成将装配有搅棒及氮气进气口的250mL圆底烧瓶与化合物5(8.4克，O.0177摩尔)及无水DMF(125mL)进行组合。黄褐色溶液在氮气下用冰/盐浴冷却至(TC。一次添加NaH(60X，2.22克，0.0554摩尔)至反应。溶液转混浊，形成气体。反应在冰浴中搅拌15分钟，然后移开冰浴，溶将液再搅拌15分钟。通过注射器添加顺/反-1，3-二氯丙烯(5.3mL，0.0571摩尔)至反应。反应在氮气下在室温搅拌3小时且转成混浊褐色。TLC(4:1己烷/EtOAc)显示不含起始原料及一个新的较低点。以水(250ml)将反应淬灭。水层用乙酸乙酯(3X100ml)萃取，而有机层用盐水(2X50ml)洗涤。有机层用MgS04干燥，过滤，并在真空下浓縮成褐色油。产物通过柱层析术纯化，使用1:1DCM/己烷作为洗脱液以给出(E/Z)-叔丁基4-(节氧基)-l-碘代萘-2-基(3-氯丙烯基)氨基甲酸酯(6)(9克，93%)，呈黄色油。化合物7的合成将装配有搅棒、温度探针、回流冷凝器及氮气进气口的500mL三颈圆底烧瓶与化合物6(9克，O.0164摩尔)、甲苯(200mL)、2，2'-偶氮二(2-甲基丙腈)(0.15克，O.0009摩尔)及氢化三丁基锡(1.5mL，0.0056摩尔)(通过注射器)进行组合。氮气通过溶液鼓泡15分钟，然后反应在氮气下加热至80°C。在8(TC加热15分钟后，通过注射器添加氢化三丁基锡(1.5mL，0.0056摩尔)至反应。在又加热15分钟后，通过注射器添加氢化三丁基锡(1.5mL，0.0056摩尔)至反应。又经15分钟后，藉注射器添加氢化三丁基锡(l.OmL，0.0037摩尔)至反应。氢化三丁基锡是总添加量是5.5mL、0.0204摩尔。反应在8(TC加热30分钟，然后让其冷却至室温。TLC(10%EtOAc/己烷)显示不含起始原料及一个新的较高点。溶液在真空下浓縮成黄色油。将该油通过柱层析法纯化，使用100%己烷至5%乙酸乙酯/己烷至10%乙酸乙酯/己烷作洗脱液以给出浅黄色固体。固体从己烷再结晶(100mL，45°C30分钟，在冰箱中冷却2小时，通过过滤收集，在真空下干燥)获得呈白色固体的化合物7(4.16克，60%产率)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage144</formula>将外消旋化合物7溶解于DCM(50mg，lmL)中。然后溶液用己烷(9mL)稀释。然后将溶液装载至ChiralcelOD制备柱(10微米，20X250毫米)，使用己烷/异丙醇(99:1，15mL/分钟)进行分离。分析柱(ChiralcelOD，O.46X25cm，20微米)获得1的滞留时间为10.6分钟(99:1己烷/IPA，lml/min，15分钟回合)。NMR(1H，CDC13，400MHz):d1.61(9H，s，C-(CH3)3);3.44(1H，t，J=25Hz，CH_CH2_N);3.9—4.0(2H，m，C1_CH2_CH);4.12(1H，t，J=26Hz，CH-CH2-N);4.25(1H，m，CH2-CH_CH2);5.26(2H，s，0_CH2-C6H5);7.2—7.5(8H，m，0-CH2-C6H5，C10H5);7.63(1H，d，J=21Hz，C10H5);8.3(1H，d，J=21Hz，C10H5)[1000]实例15:[1001]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage144</formula>2)在DMF中的5yJ跟啶化合物2的合成向Fmoc-Val-0H(200mg，0.59毫摩尔)与含5%DMF的DCM(5mL)的溶液中的叔丁基-4-氨基苯甲酸酯(114mg，0.59毫摩尔)的一个溶液内在室温加入HATU(224mg，0.59毫摩尔)，接着加入二异丙基乙胺(410iiL，2.36毫摩尔)。将反应混合物搅拌30分钟。将溶剂蒸发，并将残余物在硅胶上通过快速层析法进行纯化，用二氯甲烷中的5%甲醇洗脱。所得产物溶解于含5X吡啶的DMF，在室温下搅拌10分钟。将溶剂在真空中去除。粗产物通过半制备性HPLC纯化以给出2(149mg，87%)。^NMR(DMS0_d6)S8.2(br，s，1H)，7.91(d，2H)，7.75(d，2H)，3.54(m，1H)，2.33(m，1H)，2.12(br，2H)，1.47(s，9H)，1.10(m，3H)，0.94(m，3H)。C16H24N203(MS:292.18)，实测值M+l=293.31。[1003]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage145</formula>2)在DMF中的5'/J报啶23化合物3的合成:将2(149mg，0.51毫摩尔)的溶液、Fmoc-Ala-0H(159mg，0.51毫摩尔)、HATU(194mg，0.51毫摩尔)、以及二异丙基乙胺(355yL，2.04毫摩尔)的含5%DMF的DCM(4mL)溶液搅拌30分钟。将溶剂在真空蒸发，并将残余物在硅胶上通过快速层析法进行纯化，用二氯甲烷中的5%甲醇洗脱。所得产物直接接受Fmoc保护基的脱保护，脱保护是在室温下在DMF中的5X吡啶中进行10分钟。将溶剂在真空中去除。粗产物通过半制备性HPLC纯化以给出3(149mg，79%)。力NMR(DMS0_d6)S8.2(br，s，1H)，8.09(br，1H)，7.91(d，2H)，7.75(d，2H)，3.75(m，1H)，3.54(m，1H)，2.33(m，1H)，2.25(br，2H)，1.47(s，9H)，1.29(d，3H)，1.12(m，3H)，0.96(m，3H)。C19H29N304(MS:363.22)，实测值M+1=264.01。[1005]H9OHC、HFm。c"、入人，2j^435化合物5的合成向化合物3(146mg，0.4毫摩尔)与无水甲醇(5mL)的乙酸钠(98.4mg，1.2毫摩尔)的一个溶液内，在0-5t:添加化合物4(135mg，0.48毫摩尔)。将反应混合物维持搅拌20分钟。添加氰基硼氢化钠(76mg，1.2毫摩尔)至以上溶液。所得反应混合物又搅拌10分钟，让其温热至室温1小时。然后将反应溶液浓縮并通过半制备性HPLC进行纯化以给出5(230mg，77%)。'HNMR(DMS0_d6)S8.2(br，s，1H)，8.09(br，1H)，7.91(d，2H)，7.84(d，2H)，7.75(d，2H)，7.55(d，2H)，7.38(m，2H)，7.28(m，2H)，4.73(d，2H)，4.45(m，1H)，3.75(m，1H)，3.54(m，1H)，3.08(t，2H)，2.81(t，2H)，2.33(m，1H)，2.20—2.25(br，2H)，1.47(s，9H)，1.29(d，3H)，1.13(m，3H)，0.92(m，3H)。C36H44N406(MS:628.33)，实测值M+1=629.45。[1007]TFA/DCMHO56化合物5的合成将5(72mg，0.11毫摩尔)的溶液与TFA/DCM(1:2，2mL)结合15分钟。将溶剂在真空中蒸发，进一步在高真空干燥，并且准备用于下一反应(76.8mg，98.4%)。^NMR(DMS0-d6)S11.55(br，s，lH)，8.2(br，s，lH)，8.09(br，lH)，7.91(d，2H)，7.84(d，2H)，7.75(d，2H)，7.55(d，2H)，7.38(m，2H)，7.28(m，2H)，4.73(d，2H)，4.45(m，1H)，3.75(m，1H)，3.54(m，1H)，3.08(t，2H)，2.81(t，2H)，2.33(m，1H)，2.20—2.25(br，2H)，1.29(d，3H)，1.11(m，3H)，0.95(m，3H)。C32H36N406(MS:572.26)，实测值M+l=573.38。[1009]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage146</formula>[1010]0.033化合物8的合成在室温下向化合物7(25mg，0.033毫摩尔)、5、以及HATU(13mg，;摩尔)的DMF(l.5mL)溶液内添加二异丙基乙胺(23yL，O.13毫摩尔)。将反应混将溶剂在真空中去除。粗产物直接通过半制备性HPLC进行纯化以给出C6。H62C1N908(MS:1077.44)，实测值M+l=1078.31。合物搅拌30分钟。8(33.3mg，76%)。[1011]nH瞧OH3在DMF中的5W哌啶2'2TFAVy。o0S*"0.》JP0M〖6h1Ho，2TFA!11化合物10的合成将化合物8(33mg，0.025毫摩尔)用DMF(lmL)中的5%妣啶在室温进行脱保护达10分钟。反应混合物在真空下浓縮，粗产物用醚(5mLX2)漂洗，未经进一步纯化。所得产物与9(llmg，0.038毫摩尔)在二异丙基乙胺(6.6iiL，0.038毫摩尔)及DMF(lmL)的存在下反应3小时。然后将反应混合物浓縮并通过半制备性HPLC进行纯化以给出10(24mg，75%)。C53H59C1N1(I09(MS:1014.42)，实测值M+l=1015.02。[1013]实例16:[1014]OMeOMe(Me'OAc八入zO、乂OHd日U,'OAc''OAcOAcOAcOAc化合物2的合成将1克(2.66毫摩尔)1，2，3，4-四-0-乙酰基-P-D-葡萄糖醛酸甲酯化合物(1)在圆底烧瓶内溶解于lmLDMF以及4mLTHF中。将400yL苄基胺添加至烧瓶内，并将反应混合物搅拌过夜。溶剂经蒸发去除，产物在硅胶上用己烷中的10%至50%乙酸乙酯于进行纯化。获得600mg(2)的呈浅绿色油。产率67%。NMR:H1NMR(400MHz，DMSO—d6):S7.5(d，1H)，S5.3(m，1H)，S5.28(m，1H)，S4.9(t，lH)，S4.74(m，lH)，S4.38(d，lH)，S3.6(s，3H)，S1.99—1.96(3s，9H)146[1016]化合物3的合成将600mg(l.79毫摩尔)化合物(2)溶解于圆底烧瓶内的无水二氯甲烷中。添加66.5iiL(0.45毫摩尔)DBU，接着添加1.26mL(12.7毫摩尔)的三氯乙腈。让反应混合物搅拌l-2小时。使用磷钼酸染色剂通过TLC检测反应。反应完成后蒸发去除溶剂，产物用硅胶进行纯化。硅胶柱内用己烷中的O.1XTEA进行填充。产物用己烷中的5%至50%乙酸乙酯洗脱以给出600mg(70X产率)化合物(3)。M+1=477.0M+1[Na]=499.0。H1NMR(400MHz，DMS0-d6):S10.08(s，1H)，S6.48(broad，1H)，S5.43(t，lH)，S5.20(m，2H)，S4.32(d，lH)，S3.63(s，3H，Me)，S1.98-1.96(9H，3XAcO)。C13画R(IOOMHZ，DMS0-d6):S170.2，170.1，169.8，167.4，158.2，92.3，90.5，70.5，69.5，68.9，53.48,21.0，20.8，20.8，[1017]OAcBocAcOt)Ac345化合物5的合成344mg(0.72毫摩尔)化合物3及200mg(0.6毫摩尔)化合物4溶解于含无水分子筛的圆底烧瓶内的无水DCM中。烧瓶置于-l(TC的氯化钠/冰浴上。在-l(TC添加30iiL(O.24毫摩尔)三氟化硼二乙醚至该反应混合物。让温度徐缓升高至-5t:，在这个温度下搅拌1小时，然后在ot:搅拌半小时。于Ot:添加3当量226iiL(l.8毫摩尔)三氟化硼乙醚，让温度升高至室温。持续搅拌2小时。蒸发去除溶剂，产物通过反相HPLC纯化以给出250mg(0.45毫摩尔)化合物(5)(75%产率，以化合物4为基准)。M+1=550.0567化合物7的合成在(TC向20mg(0.07毫摩尔)的化合物6的2mL无水DCM溶液内添加32mg(0.048毫摩尔)的化合物5的2mL无水DCM溶液，接着在Ot:添加400yL吡啶。在这个温度下将反应混合物搅拌15分钟。产物通过反相HPLC纯化以给出33mg化合物7(84%产率)。M+1=808及M+[Na]=830[1021]14778化合物8的合成化合物8是用二噁烷中的4摩尔浓度HC1溶液制备成其盐酸盐，或是用DCM中的33%TFA溶液制备成其TFA盐。通过HPLC监测反应直至反应完成。蒸发去除溶剂，将产物在高度真空下干燥过夜并就此用于下一步骤。M+1=708.2[1023]化合物10的合成在圆底瓶内，将2mLDMF中的31mg(0.04毫摩尔)化合物9与15.5mg(0.04毫摩尔)HATU及DIPEA(足量确保pH为7.0，21iiL，O.12毫摩尔)进行20分钟的预先活化反应。然后将30mg(0.036毫摩尔)化合物8的TFA盐的ImLDMF溶液添加至以上烧瓶内，接着添加14iiL(0.08毫摩尔)的DIPEA。让反应混合物搅拌3小时，接着蒸发去除溶剂，通过反相HPLC纯化以给出31mg所希望的化合物10的TFA盐，59%产率。,1=1348.8[1025]O^NH211[1026]化合物11的合成通过在2.5mL甲醇及4yL2当量NaOH溶液中进行5小时的搅拌对30mg化合物10(0.02毫摩尔)进行脱保护。将反应混合物用乙酸中和并通过反相HPLC以给出17mg(0.014毫摩尔)化合物11的双TFA盐。M+1=986.6[1027]HO,,12化合物12的合成17mg化合物11的双TFA盐(0.014毫摩尔)与3mLDMF中的5.lmg(O.018毫摩尔)可商购获得的N-丁二酰亚胺基4-顺丁烯二酰亚胺基丁酸酯、以及12.2iiL(O.07毫摩尔)的DIPEA进行反应达1小时。溶剂经蒸发，通过反相制备性HPLC纯化后以给出14mg(0.011毫摩尔)所希望的化合物12的TFA盐(76%产率)。,1=1151.8[1030]实例17Fmoc-Leu-Ala-Leu-OHFmoc-Leu-Ata-Leii^2.TFA/DCM一cHATU，DIEALeu-AIa-LeU"Fmoc1.。底咬CH3H3°°化合物2的合成向Fmoc-Leu-Ala-Leu-0H(200mg，0.37毫摩尔)以及叔丁基-4-氨基苯甲酸酯(114mg，0.59毫摩尔)的含5%DMF的DCM(5mL)溶液中加入HATU(224mg，0.59毫摩尔)，随后在室温下加入二异丙基乙胺(410iiL，2.36毫摩尔)。将反应混合物搅拌30分钟。将溶剂蒸发，并将残余物在硅胶上通过快速层析法进行纯化，用二氯甲烷中的5%甲醇洗脱。将所得产物溶解于DMC/TFA(1:1，10mL)中，在室温下将混合物搅拌达90分钟。将溶剂在真空中去除。粗产物用醚沉淀来获得化合物2(206mg，80X)。[1032]化合物4的合成向化合物2(20.6mg)的DMF溶液中添加HATU(IO.3mg)，并且在室温下将所得反应混合物搅拌10分钟，接着在室温下添加3(20mg)及二异丙基乙胺(23yL)。149将反应混合物搅拌60分钟。将溶剂在真空中去除。粗产物直接通过半制备性HPLC进行纯化以给出4(28mg，76%)。化合物5的合成化合物4(28mg)用DMF(lmL)中的5%吡啶在室温进行脱保护达IO分钟。反应混合物在真空下浓縮，粗产物用醚(5mLX2)漂洗，未经进一步纯化。所得产物与N-丁二酰亚胺基-6-顺丁烯二酰亚胺基己酸酯(10mg)在二异丙基乙胺(12iiL)及DMF(lmL)的存在下反应3小时。然后将反应混合物浓縮并通过半制备性HPLC进行纯化以给出5(17mg)。(MS:1100)，实测值M+1=1101实例18:(实例18中的肽由SEQIDNO:15所涵盖)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage150</formula>化合物2的合成向Fmoc-Pro-Leu-Gly-Leu-Leu-OH(SEQIDN0:15)(200mg，0.27毫摩尔)与含5XDMF的DCM(5mL)的溶液中的叔丁基_4_氨基苯甲酸酯(114mg，0.59毫摩尔)的一个溶液内在室温加入HATU(224mg，0.59毫摩尔)，接着加入二异丙基乙胺(410iiL，2.36毫摩尔)。将反应混合物搅拌30分钟。将溶剂蒸发，并将残余物在硅胶上通过快速层析法进行纯化，用二氯甲烷中的5X甲醇洗脱。将所得产物溶解于DMC/TFA(1:1，lOmL)中，混合物在室温搅拌90分钟。粗产物用醚沉淀，产生化合物2(190mg)。[1037]化合物4的合成向化合物2(42mg，0.049mmo1)的DMF溶液内添加HATU(20mg)，在室温下将所得反应混合物搅拌10分钟，接着在室温添加3(40mg)及二异丙基乙胺(35yL)。将反应混合物搅拌60分钟。将溶剂在真空下除去，并将粗产物直接通过半制备性HPLC进行纯化以给出4(33mg)。化合物5的合成化合物4(33mg)用DMF(lmL)中的5%吡啶在室温进行脱保护IO分钟。反应混合物在真空中浓縮，粗产物用醚(5mLX2)漂洗，未经进一步纯化。所得产物与N-丁二酰亚胺基-6-顺丁烯二酰亚胺基己酸酯(10mg)在二异丙基乙胺(12iiL)及DMF(lmL)的存在下反应3小时。然后将反应混合物浓縮并通过半制备性HPLC进行纯化以给出5(15mg)。(MS:1296)，实测值M+l=1297[1039]实例19:[1040]Fmoc-Ala-Asn-Leu-OHFmoc-Ala-Asn-Leu^SA^.TFA/DCMHATU>DIEAHLeu-Asn-Aia-Fmoc《、o"。"^1.。泉啶2.《。C"化合物2的合成向Fmoc-Ala-Asn-Leu-0H(200mg，0.37毫摩尔)与含5%DMF的DCM(5mL)的溶液中的叔丁基-4-氨基苯甲酸酯(114mg，0.59毫摩尔)的一个溶液内在室温加入HATU(224mg，0.59毫摩尔)，接着加入二异丙基乙胺(410yL，2.36毫摩尔)。将反应混合物搅拌30分钟。将溶剂蒸发，并将残余物在硅胶上通过快速层析法进行纯化，用二氯甲烷中的5%甲醇洗脱。将所得产物溶解于匿C/TFA(1:1，10mL)中，混合物在室温搅拌90分钟。将溶剂在真空中去除。粗产物用醚沉淀来获得2(190mg，72X)。[1042]化合物4的合成向化合物2(20mg)的DMF溶液内添加HATU(13mg)，在室温下将所得反应混合物搅拌达10分钟，接着在室温下添加化合物3(25mg)以及二异丙基乙胺(22iiL)。将反应混合物搅拌60分钟。将溶剂在真空中去除。粗产物直接通过半制备性HPLC进行纯化以给出4(21mg，60%)。化合物5的合成化合物4(23mg)用DMF(lmL)中的5%吡啶在室温进行脱保护IO分钟。反应混合物在真空下浓縮，粗产物用醚(5mLX2)漂洗，未经进一步纯化。所得产物与N-丁二酰亚胺基-6-顺丁烯二酰亚胺基己酸酯(8mg)在二异丙基乙胺(12iiL)及DMF(lmL)的存在下反应3小时。然后将反应混合物浓縮并通过半制备性HPLC进行纯化以给出5(10mg)。(MS:1101)，实测值M+1=1102。[1044]实例20:药物-连接物分子与抗体的偶联腙连接物本实例说明了将本发明的药物-偶联物分子(视需要包括其他基团，如间隔物、反应官能团等)偶联至作为靶向剂的抗体^的反应条件及方法。这些条件及方法仅是示例性而非限制性的。将药物-连接物分子偶联至抗体的其他办法在本领域中是已知的。此处所述的偶联方法是基于将游离的硫醇基团引入至抗体，这种引入是通过抗体的赖氨酸与2-亚氨基硫烷的反应，接着通过药物连接物分子与活性马来酰亚胺基的反应而进行的。最初待偶联的抗体经缓冲液交换入包含50mMNaCl、2mMDTPA、pH8.0的0.1M磷酸盐缓冲液pH8.0内并浓縮至5-10mg/ml。通过向抗体添加2-亚氨基硫烷来实现硫醇化。待添加的2-亚氨基硫烷的量是在初步实验中确定，并因各种抗体而异。在初步实验中，增加量的2-亚氨基硫烷的滴定添加至抗体，紧接着在室温下与抗体孵育1小时，使用S印hadexG-25柱将抗体脱盐进入50mMHEPES缓冲液pH6.0，并通过与二硫基二吡啶(DTDP)的反应来快速测定导入的硫醇基数目。硫醇基与DTDP反应，导致释放出硫吡啶，在324nm对硫吡啶进行检测。使用蛋白质浓度为0.5-1.Omg/ml的样本。在280nm处的吸光度用来准确测定样本中的蛋白质浓度，然后每份样本的等分部分(0.9mL)与O.lmLDTDP(乙醇中的5mM备料溶液)在室温下孵育10分钟。单独缓冲液加DTDP的空白样本也一起培养。经10分钟后，测量324nm的吸光度，并使用硫吡啶的消光系数19800M—1来对所存在的硫醇数目进行定量。典型地，每个抗体含三个硫醇基的硫醇化水平是所希望的。例如，使用一种特定抗体，通过添加15倍摩尔过量2-亚胺基硫烷，接着在室温下孵育1小时可达成此项目的。因此，将待偶联的抗体与2-亚胺基硫烷以希望的摩尔比进行孵育，然后脱盐入偶联缓冲液(包含5mM甘胺酸的50mMHEPES缓冲液pH6.0、3%甘油及2慮DTPA)。将硫醇化材料维持在冰上，同时如以上所说明对所弓I入的硫醇数目进行定量。证实所引入的硫醇数目后，以每个硫醇3倍摩尔过量，添加包含活性顺丁烯二酰亚胺基的药物-连接物分子。偶联反应是在偶联缓冲液内进行，偶联缓冲液还含有终浓度为5%的乙二醇二甲醚(或适合的可替代的溶剂)。常见地，将药物-连接物母液溶解于90%乙二醇二甲醚，10%二甲亚砜中。为了添加至抗体，将母液直接添加至硫醇化抗体，该抗体经过充分添加乙二醇二甲醚来调整终浓度至5%;或将母液在包含终浓度10%乙二醇二甲醚的偶联缓冲液中进行预稀释，接着添加至等体积的硫醇化抗体。[1049]偶联反应用搅拌在室温下孵育2小时。孵育后，反应混合物以14000RPM离心15分钟，如果没有立即纯化，则将pH调整至pH7.2。使用多种方法通过层析法实现偶联物的纯化。可使用尺寸排阻层析法在S印hacrylS200柱上对偶联物进行纯化，柱子用含5mM甘氨酸、50mMNaCl及3%甘油的50mMHEPES缓冲液pH7.2进行预平衡。以线性流速28cm/h进行层析法。收集、汇集并浓縮包含偶联物的馏分。可替代地，可通过离子交换层析实现纯化。条件随抗体而变化，并且在每种情况下需要被优化。例如，抗体-药物偶联物反应混合物应用于SP-S印harose柱，该柱用50mMHEPES、5mM甘氨酸、3%甘油、pH6.0进行预平衡。使用平衡缓冲液中0-1MNaCl的一个梯度将抗体偶联物洗脱。汇集含偶联物的馏分，将pH调整至7.2，可视需要浓縮样本。肽连接物本实例说明了将本发明的药物-偶联物分子(视需要包括其他基团，如间隔物、反应官能团等)偶联至作为靶向剂的抗体^的反应条件及方法。这些条件及方法仅是示例性而非限制性的。将药物-连接物分子偶联至抗体的其他办法在本领域中是已知的。此处所述的偶联方法是基于将游离的硫醇基团引入至抗体，这种引入是通过抗体的赖氨酸与2-亚氨基硫烷的反应，接着通过药物连接物分子与活性马来酰亚胺基的反应而进行的。最初待偶联的抗体经缓冲液交换入包含50mMNaCl、2mMDTPA、pH8.0的0.1M磷酸盐缓冲液pH8.0内并浓縮至5-10mg/ml。通过向抗体添加2-亚氨基硫烷来实现硫醇化。待添加的2-亚氨基硫烷的量是在初步实验中确定，并因各种抗体而异。在初步实验中，增加量的2-亚氨基硫烷的滴定添加至抗体，紧接着在室温下与抗体孵育1小时，使用S印hadexG-25柱将抗体脱盐进入50mMHEPES缓冲液pH6.0，并通过与二硫基二吡啶(DTDP)的反应来快速测定导入的硫醇基数目。硫醇基与DTDP反应，导致释放出硫吡啶，在324nm对硫吡啶进行检测。使用蛋白质浓度为O.5-1.0mg/ml的样本。在280nm处的吸光度用来准确测定样本中的蛋白质浓度，然后每份样本的等分部分(0.9mL)与O.lmLDTDP(乙醇中的5mM备料溶液)在室温下孵育10分钟。单独缓冲液加DTDP的空白样本也一起培养。经10分钟后，测量324nm的吸光度，并使用硫吡啶的消光系数198001来对所存在的硫醇数目进行定量。典型地，每个抗体含三个硫醇基的硫醇化水平是所希望的。例如，使用一种特定抗体，通过添加15倍摩尔过量2-亚胺基硫烷，接着在室温下孵育1小时可达成此项目的。因此，将待偶联的抗体与2-亚胺基硫烷以希望的摩尔比进行孵育，然后脱盐入偶联缓冲液(包含5mM甘胺酸的50mMHEPES缓冲液pH6.0、0.5%聚乙烯妣咯酮(10k)及2mMDTPA)。将硫醇化材料维持在冰上，同时如以上所说明对所引入的硫醇数目进行定量。[1053]证实所引入的硫醇数目后，以每个硫醇3倍摩尔过量，添加包含活性顺丁烯二酰亚胺基的药物-连接物分子。偶联反应是在偶联缓冲液内进行，偶联缓冲液还含有终浓度为5%DMSO(或适合的可替代的溶剂)。常见地，将药物-连接物母液溶解于100%二甲亚砜中。为了添加至抗体，将母液直接添加至硫醇化抗体，该抗体经过充分添加匿SO来调整终浓度至10%;或将母液在包含终浓度10%的DMSO的偶联缓冲液中进行预稀释，接着添加至等体积的硫醇化抗体。偶联反应用搅拌在室温下孵育2小时。孵育后，将反应混合物离心并通过0.2微米过滤器进行过滤。使用多种方法通过层析法实现偶联物的纯化。可使用尺寸排阻层析法在S印hacrylS200柱上对偶联物进行纯化，柱子用含5mM甘氨酸、50mMNaCl及O.5%聚乙烯吡咯酮(10k)的50mMHEPES缓冲液pH7.2进行预平衡。以线性流速28cm/h进行层析法。收集、汇集并浓縮包含偶联物的馏分。可替代地，可通过离子交换层析实现纯化。条件随抗体而变化，并且在每种情况下需要被优化。例如，抗体_药物偶联物反应混合物应用于SP-S印harose柱，该柱用50mMHEPES、5mM甘氨酸、0.5%聚乙烯妣咯酮(10k)、pH5.5进行预平衡。使用平衡缓冲液(pH5.5)中O-IMNaCl的一个梯度将抗体偶联物洗脱。将包含偶联物的相关馏分汇集并对配方缓冲液进行透析(使用包含5mM甘氨酸、100mMNaCl及0.5%聚乙烯吡咯酮(10k)的50mMHEPES缓冲液pH7.2)。[1055]实例21:体内研究[1056]A.化合物A-G使用标准的实验室程序在体外对786-0(ATCC登记号CRL-1932)细胞进行扩增。在每只6-8周龄的雄性CB17.SCID小鼠(Taconic，Hudson,NY)右侧经皮下植入0.2ml含250万786-0的PBS/基质胶(Matrigel)(1:1)。植入后每周两次对小鼠称重，并使用电子测径器来测量肿瘤的三维。肿瘤体积计算为高X宽X长。将具有平均为200咖3肿瘤的小鼠随机分配入各个处理组。第0天用PBS载体、细胞毒素_偶联的同种型对照抗体、或细胞毒素-偶联的抗-CD70HuMAb2H5对小鼠经腹膜内给药。每个组包括7只小鼠。[1058]研究下列细胞毒素[1059]153[化62]化合物B[1063]化合物C[1065]O'N、J化合物D[1067]/<formula>formulaseeoriginaldocumentpage155</formula>[化68]化合物E[1069]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage155</formula>化合物F[1071]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage155</formula>化合物G表1是基于毒素(化合物A-G)的毫摩尔数的各给药组的摘要。表1研究摘要<table>tableseeoriginaldocumentpage155</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage156</column></row><table>[1076]图1显示肿瘤体积平均数对给药后的天数，图2显示中值肿瘤体积对给药后的天数。基于这些实验，疗效显然是以如下顺序递减化合物D〉化合物A〉化合物F〉化合物B>化合物C>化合物E>裸CD70.1/化合物G。图3显示体重变化百分比对给药后的天数。B.化合物A、F、H-J使用标准的实验室程序在体外对786-0(ATCC登记号CRL-1932)细胞进行扩增。在每只6-8周龄的雄性CB17.SCID小鼠(Taconic，Hudson,NY)右侧经皮下植入0.2ml含250万786-0的PBS/基质胶(Matrigel)(1:1)。植入后每周两次对小鼠称重，并使用电子测径器来测量肿瘤的三维。肿瘤体积计算为高X宽X长。将具有平均为200mm3肿瘤的小鼠随机分配入各个处理组。第0天用PBS载体、细胞毒素_偶联的同种型对照抗体、或细胞毒素-偶联的抗-CD70HuMAb2H5对小鼠经腹膜内给药。每个组包括8只小鼠。研究下列细胞毒素[1080]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage156</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage157</formula>[1090]表2是基于细胞毒素(化合物A、F、H-J)的毫摩尔数的各给药组的摘要。表2.研究摘要<table>tableseeoriginaldocumentpage158</column></row><table>图4显示肿瘤体积平均数对给药天数，图5显示中值肿瘤体积对给药后天数。基于这些实验，疗效显然是以如下顺序递减化合物J/化合物C>化合物H>化合物G/化合物I>裸CD70.1。图6显示体重变化百分比对给药后的天数。[1094]实例22:LNCaP和786_0细胞的肿瘤活化活性将来自ATCC的粘附细胞LNCaP(前列腺癌)及786_0(肾细胞癌)根据ATCC的指南在包含10%热失活胎牛血清(FCS)的RPMI培养基内进行培养。在研究当天，用胰蛋白酶溶液使细胞从培养板分离。洗涤所收集的细胞并在分别培养LNCaP和786-0细胞的RPMI(含10%FCS)中以0.25或0.1X106细胞/ml浓度重新悬浮。将100y1的细胞悬浮液加至96孔板中，孵育培养板板3小时使细胞粘附。孵育后，将特异性抗体-细胞毒素偶联物(始于300nM细胞毒素(实例21的化合物J)的l:3的连续稀释液加至各板孔。然后培养板孵育48小时，用10ill的100iiCi/ml3H-胸腺嘧啶核苷脉冲追踪(pulse)，然后再孵育72小时。使用96孑LHarvester(PackardInstruments)收集培养板内细胞，并用PackardTopCountCounter计数。使用Prism软件，以四参数对数曲线拟合作为药物摩尔浓度的函数的3H_胸腺嘧啶的掺入量，以确定EC5。值。针对分别在LNCaP和786-0细胞中的各种_抗体细胞毒素偶联物进行拟合的对数曲线及其得到的EC5。值描绘在图7中。[1097]对抗SCID小鼠中的LNCaP/前列腺间质共培养肿瘤的疗效如下所述进行LNCaP异种移植研究用2百万LNCaP细胞及1百万前列腺间质细胞((cat#CC-2508，CambrexBioScienceWalkersville，Inc，Walkersville，MD)对120CB17.SCID小鼠各自在胁腹区经皮下进行注射，这些细胞再悬浮于0.2mLPBS/基质胶(1:1)(BDBioscience)。植入后，每周两次对小鼠称重并用电子测径器对肿瘤进行立体测量。肿瘤体积计算为高X宽X长/2。将肿瘤平均为50mm3的小鼠在第一天随机分入16个处理组，每组7只小鼠，在第0天按照表1所示的剂量方案用载体、抗体、或抗体_细胞毒素偶联物经静脉内对小鼠进行处理。在第62天结束研究。[1099]表3.SCID小鼠的给药[1100]<table>tableseeoriginaldocumentpage159</column></row><table>图8描绘了所研究的16个不同组中每组七只小鼠肿瘤体积的中位数增大。如左上图所示，抗-RG-1和抗-ED-B裸抗体对肿瘤生长没有抑制作用。抗-PSMA裸抗体具有一定的抗肿瘤生长效果。然而，这种抗肿瘤效果在细胞毒素与抗-PSMA抗体偶联时被显著增强。当将以前对于非内化抗原无效的抗体与细胞毒素偶联时，观察到与针对内化抗原的偶联抗体抗肿瘤活性类似的抗肿瘤活性。这些结果确定了细胞毒素的抗肿瘤活性可通过针对非内化抗原连同内化的抗原(如PSMA)的抗体介导。图9描绘了所研究的16个不同组中每组七只小鼠体重变化中位数。因LNCaP肿瘤造成小鼠的恶病质，预期无效的治疗(导致无法控制的肿瘤生长)会导致体重丧失。在用载体或裸抗体进行处理的小鼠中观察到这项结果，推定是由于肿瘤生长的缘故。当本研究中所用的小鼠模型为免疫妥协模型时，它们无法预期通过强劲的ADCC反应来控制肿瘤的生长，如用裸抗-PSMA抗体的治疗产生的反应。相反，用抗体_药物偶联物治疗的小鼠在刚给药后体重最低，表明所有被测试剂量(0.03-0.3)完全可以耐受。偶联物组中小鼠体重增加这一事实表明由于肿瘤的生长受到控制使恶病质得到减轻。[1103]对抗SCID小鼠中LNCaP肿瘤的疗效如下所述进行LNCaP异种移植研究用重悬于O.2mLPBS/基质胶(1:1)(BDBioscience)的250万LNCaP细胞对120只CB17.SCID小鼠各自在胁腹区经皮下进行注射。植入后，每周两次对小鼠称重并用电子测径器对肿瘤进行立体测量。肿瘤体积计算为高X宽X长/2将肿瘤平均为80mm3的小鼠在第l天随机分入13个处理组，每组7只小鼠，在第0天按照表2所示的剂量方案用载体、抗体、或抗体_细胞毒素偶联物经静脉内对小鼠进行处理。在第55天结束研究。[1105]表4.SCID小鼠的给药[1106]<table>tableseeoriginaldocumentpage160</column></row><table>图IO描绘了所研究的13个不同组中每组八只小鼠肿瘤体积的平均增加。与LNCaP/间质模型类似，抗-RG-1裸抗体对肿瘤生长不具有抑制作用。抗-PSMA裸抗体具有一定的抗肿瘤生长效果。抗-PSMA抗体与细胞毒素偶联时其抗肿瘤效果明显增强。类似的却未预料到的是，当非内化抗-RG-1抗体与细胞毒素偶联时观察到了抗肿瘤活性。这些结果进一步证明，细胞毒素的抗肿瘤活性可由针对非内化抗原的抗体来介导。[1108]图11描绘了所研究的16个不同组中每组七只小鼠体重变化中位数。如上所述，LNCaP肿瘤导致小鼠产生恶病质。而该恶病质造成用媒介物或裸抗体治疗的小鼠体重减轻，推测是由于肿瘤生长的增加且缺乏对内化的抗体固定强劲ADCC反应所致。相反，用抗体-药物偶联物治疗的小鼠在刚给药后体重最低，表明所有被测试剂量(0.03-0.3)完全可以耐受。偶联物组中小鼠体重增加这一事实表明由于肿瘤的生长受到控制使恶病质得到减轻。对抗SCID小鼠中大型LNCaP肿瘤的疗效[1110]抗-PSMA-细胞毒素的活性接下来在荷有非常大LNCaP细胞肿瘤异种移植模型的SCID小鼠中得到证明。将LNCaP细胞(0.lmlPBS+0.lmlMatrigel中250万个/小鼠)经皮下植入到雄性SCID小鼠中，并且当肿瘤达到310mm3的平均大小时，向8只小鼠的各组通过腹膜内注射单剂量的抗-PSMA-细胞毒素，剂量为0.1或0.3iimol/kg体重。此外，用单独的赋形物注射一个对照组。在这项研究的整个实验过程中记录肿瘤体积和小鼠的重量，进行到给药后约60天。图12所示结果证明单剂量的抗-PSMA-2460偶联物即使当始于非常大的肿瘤时仍然对小鼠有效。实例23:抗-CD70-细胞毒素对肿瘤生长的体内抑制这个实例证明了在肾癌的两个异种移植模型中抗-CD70-细胞毒素的疗效。包含CD70抗体的胞毒素偶联物连接至以下的细胞毒素化合物在荷有A498肿瘤异种移植模型的SCID小鼠中证明了抗-CD70-细胞毒素的活性。将A498细胞(在0.lmlPBS和0.lmlMatrigel中500万个/小鼠)经皮下植入到SCID小鼠中，并且当肿瘤达到110mm3的平均大小时，对8只小鼠的组通过腹膜内注射单剂量的0.liimol/kg体重的抗-CD70细胞毒素。此外，用单独的赋形物注射一个对照组。在这项研究的整个实验过程中记录肿瘤体积(LWH/2)和小鼠的重量，持续进行到给药后约60天。结果示于图13中。这些结果证明抗-CD70-细胞毒素偶联物抗肾癌是有效的。[1115]为了证明抗-CD70-细胞毒素在Caki-l细胞异种移植模型上的活性，每只SCID小鼠皮下植入0.1mlPBS和0.1mlMatrigel中的250万Caki-1细胞，并且当肿瘤达到130mm3的平均大小时，对8只小鼠的各组通过腹膜内注射单剂量的抗-CD70-细胞毒素，剂量为0.03、0.1或0.3iimol/kg体重。此外，用单独的载体、或连接至细胞毒素的一种同种型对照抗体注射对照组，剂量为0.1iimol/kg和0.3iimol/kg。在整个研究过程中记录肿瘤体积(LWH/2)和小鼠的重量，持续进行到给药后61天。结果示于图14中。这些结果证明在本试验中单独的抗-CD70抗体以及同种型对照偶联物对肿瘤的生长有很小的影响，而抗-CD70-细胞毒素处理的小鼠清楚地表现出剂量依赖性的抗肿瘤疗效。[1116]实例24:抗-CD70-细胞毒素对肿瘤生长的体内抑制这个实例证明了抗-CD70-细胞毒素在肾癌的两个异种移植模型(SCID小鼠中的786-0细胞和裸大鼠中的Caki-1细胞)中的疗效。包含CD70抗体的胞毒素偶联物连接至以下的细胞毒素化合物OO在荷有786-0肿瘤异种移植模型的SCID小鼠中证明了抗-CD70-细胞毒素的活性。将786-0细胞(在0.lmlPBS和0.lmlMatrigel中250万个/小鼠)经皮下植入到SCID小鼠中，并且当肿瘤达到170皿3的平均大小时，对6只小鼠的各组通过腹膜内注射单剂量的抗-CD70细胞毒素，剂量0.005iimol/kg体重。此外，用单独的赋形物注射一个对照组。在该研究的整个过程中记录肿瘤体积(LW2/2)和小鼠的重量。结果示于图15中。这些结果证明抗-CD70-细胞毒素偶联物抗肾癌是有效的。为了证明在多个物种中能够观察到疗效，在裸大鼠中的一个异种移植模型进行了测试。在这个模型中，对裸大鼠经皮下植入Caki-l细胞(在0.2mlRPMI-1640中1000万个/大鼠)，并且当肿瘤达到平均大小100mm3时，通过经腹膜内注射0.3ymol/kg体重的单剂量的抗-CD70-细胞毒素对大鼠的各组进行处理。此外，对照组用0.3mol/kg体重的单独的赋形物、单独的抗-CD70抗体、或者同种型对照抗体细胞毒素偶联物注射。在该研究的整个过程中记录肿瘤体积(LW2/2)和大鼠的重量。结果示于图16中。这些结果证明单独的CD70抗体对肿瘤生长有很小的影响，并且同种型对照偶联物未表现出对肿瘤生长的影响。然而，抗-CD70-细胞毒素偶联物显示了显著的抗肿瘤效果。肿瘤消退得以实现。因此，抗-CD70-细胞毒素偶联物在多个物种中显示了抗肿瘤效果。本说明书中所提及或所指的各个专利申请、专利、公开文本及其他公开的文件均以全文通过引用结合在此，就像通过引用将单独的每一项专利申请、专利、公开文本及其他公开的文件是专门结合在此一样。本专利申请还将美国临时专利申请号60/882，461通过引用结合在此。虽然已经对本发明参照其特定的实施方案进行了说明，但本领域的普通技术人员应该理解，无须背离本发明的精髓及范围以及随附的权利要求即可进行多项改变并可进行等效物代换。此外，可做多项变更来调整特殊的情况、材料、物质组成、方法、方法步骤或步骤，使之适合本发明的目的、精髓及范围。全部此类变更意在涵盖在这项发明随附的权利要求的范围之内。权利要求一种具有以下化学式的化合物其中L1是一个自消连接物；m是一个整数0、1、2、3、4、5、或6；F是一个连接物，包括以下结构式其中AA1是独立地选自下组的一个或多个成员，该组的构成为天然氨基酸类以及非天然α氨基酸类；c是从1到20的一个整数；L2是一个自消连接物并且包括其中R17、R18、以及R19各自独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基，并且w是从0到4的一个整数；o是1；L4是一个连接物成员；p是0或1；X4是选自下组的一个成员，该组的构成为受保护的反应性官能团、未受保护的反应性官能团、可检测的标记、以及靶向剂；并且D包括一个结构式其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原子、一个单键中的成员，或者E和G相连接以形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自O、S以及NR23中的一个成员；R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R3是OR11，其中，R11是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(O)R12R13、C(O)OR12、C(O)NR12R13、P(O)(OR12)2、C(O)CHR12R13、SR12、以及SiR12R13R14，其中，R12、R13、以及R14是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R4、R4’、R5以及R5’是独立地选自下组的成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、NO2、NR15R16、NC(O)R15、OC(O)NR15R16、OC(O)OR15、C(O)R15、SR15、OR15、CR15＝NR16、以及O(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4’、R5以及R5’中的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系；其中n是从1到20的一个整数；R15和R16独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中R15和R16与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH2-X1或CH2-，其中X1是一个离去基团，其中，R11将所述药物连接至L1上(若存在的话)，或连接至F上；或它的一种药学上可接受的盐。F2007800518095C00011.tif,F2007800518095C00012.tif,F2007800518095C00013.tif,F2007800518095C00021.tif2.如权利要求1所述的化合物，其中D具有以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>Z是选自0、S以及NR23中的一个成员射R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8;其中R8是选自下组的一个成员，该组的构成为取代的烷基、未取代的烷基、NRY°、NR9NHR1Q、以及OR9其中，R9和R1Q独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；并且R2是H、取代的烷基或未取代的低级烷基。3.如权利要求1所述的化合物，其中D具有以下结构式射Z是选自0、S以及NR23中的一个成员射R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的个成员，射W和1^°独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R1'是H、取代或未取代的低级烷基、或C(0)R8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的一个射W和1^°独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R2是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基、或氰基、或烷氧基；并且R2'是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基。成员，4.如权利要求l所述的化合物，其中(AA"。是一个肽序列，该肽序列可被肿瘤组织中表达的一种蛋白酶切割。5.如权利要求4所述的化合物，其中该蛋白酶是一种溶酶体蛋白酶。6.如权利要求l所述的化合物，其中，在(AA、中位于最接近药物部分处的氨基酸是选自下组，其构成为Ala、Asn、Asp、Cit、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、以及Val。7.如权利要求l所述的化合物，其中，(AA"。是选自下组的一个肽序列，该组的构成为Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe_N9_tosyl_Arg、Phe_N9_nitro_Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys丄eu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQIDNO:1)、P-Ala-Leu-Ala-Leu(SEQIDNO:2)、以及Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ.IDNO:3)。8.如权利要求1所述的化合物，其中，(AA"e是Val-Cit或Val-Lys。9.如权利要求1所述的化合物，其中，R17和R18是低级烷基。10.如权利要求1所述的化合物，其中w是0。11.如权利要求l所述的化合物，其中，该化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>12.—种具有以下化学式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>一个自消连接物；个整数0、1、2、3、4、5、或6;个连接物，包括以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>AA1是独立地选自下组的--水或多个成员，该组的构成为天然氨基酸类和非天然ac是从1到20的一个整数；L2是一个自消连接物；O是0或l;L4是一个连接物成员；P是0或1;X4是选自下组的一个成员，该组的构成为受保护的反应性官能团、未受保护的反应性官能团、可检测的标记、以及靶向剂；并且D包括一个结构式其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原子、一个单键的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及NR23中的一个成员；R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R3是选自下组的一个成员，该组的构成为(=0)、SR"、NHR11以及0R11，其中，R11是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单憐酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(0)R12R13、C(0)OR12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12、以及SiR12R13R14，其中，R12、R13、以及R14是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R4、R4'、R5以及R5'是独立地选自下组的成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4'、R5以及R5'的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，射n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中R"和Rw与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；其中，RA、Rb、RS、以及RS'中的至少一个将所述药物连接至U上(若存在的话)，或连接至F上，并且包括其中V是从1到6的一个整数；并且R27、R27'、R28以及R28，各自独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X1是一个离去基团；或它的一种药学上可接受的盐。13.如权利要求12所述的化合物，其中D具有以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>Z是选自0、S以及NR23中的一个成员射R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是选自下组的一个成员，该组的构成为取代的烷基、未取代的烷基、NRY°、NR9NHR1Q、以及OR9其中，R9和R1Q独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；并且R2是H、取代的烷基或未取代的低级烷基。14.如权利要求12所述的化合物，其中D具有以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>Z是选自0、S以及NR23中的一个成员射R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的一个成员，射W和1^°独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R1'是H、取代或未取代的低级烷基、或C(0)R8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的一个成员，射Rg和R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R2是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基、或氰基、或烷氧基；并且R2'是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基。15.如权利要求12所述的化合物，其中(AA"。是一个肽序列，该肽序列可被肿瘤组织中表达的一种蛋白酶切割。16.如权利要求15所述的化合物，其中该蛋白酶是一种溶酶体蛋白酶。17.如权利要求12所述的化合物，其中，(AA"。中位于最接近药物部分处的氨基酸是选自下组，其构成为Ala、Asn、Asp、Cit、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、以及Val。18.如权利要求12所述的化合物，其中，(AA、是选自下组的一个肽序列，该组的构成为Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe_N9_tosyl_Arg、Phe_N9_nitro_Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Leu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQIDNO:1)、P-Ala-Leu-Ala-Leu(SEQIDNO:2)、以及Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ.IDN0:3)。19.如权利要求12所述的化合物，其中，(AA"e是Val-Cit或Val-Lys。20.如权利要求12所述的化合物，其中，RR"'、R28以及R"'独立地是H或低级烷基。21.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>22.如权利要求12所述的化合物，其中，v是l或2。23.如权利要求12所述的化合物，其中，R15是H或低级烷基。24.如权利要求12所述的化合物，其中，该化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中r是在从0到24的范围中的一个整数。25.—种具有以下化学式的化合物'(Op—F—(L1),射匸是m是-F是--个自消连接物；个整数0、1、2、3、4、5、或6;个连接物，包括以下结构式射AA1是独立地选自下组的一个或多个成员，该组的构成为天然氨基酸类和非天然a氨基酸类；C是从1到20的一个整数；L3是包括一个伯胺或仲胺或一个羧基官能团的一个间隔基团；其中如果L3存在，m是0并且或者L3的胺与D的一个悬垂的羧基官能团形成一个酰胺键，或者L3的羧基与D的一个悬垂的胺官能团形成一个酰胺键；o是0或l;L4是一个连接物成员，其中！^包括直接附联于(AA1)。的N末端，其中R2°是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员，R25、R25'、R26以及R26，各自独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；并且s和t独立地是从1到6的整数；P是l;X4是选自下组的一个成员，该组的构成为受保护的反应性官能团、未受保护的反应性官能团、可检测的标记、以及靶向剂；并且D包括一个结构式其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原子、一个单键中的成员，或者E和G相结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及NR23中的一个成员；R23是一个成员，选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基；R3是选自下组的一个成员，该组的构成为(=0)、SR"、NHR11以及OR11，射R"是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(0)R"R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12以及SiR12R13R14，射R12、R13、以及R14是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R4、R4'、R5以及R5'是独立地选自下组的成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4'、R5以及R5'的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，射n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中R"和Rw与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X1是一个离去基团，其中，R4、R4'、R5、R5'、R15或R16中的至少一个将所述药物连接至L1上(若存在的话)，或连接至F上；或它的一种药学上可接受的盐。26.如权利要求25所述的化合物，其中D具有以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>Z是选自0、S以及NR23中的一个成员射R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是选自下组的一个成员，该组的构成为取代的烷基、未取代的烷基、NRY°、NR9NHR1Q、以及OR9其中，R9和R1Q独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；并且R2是H、取代的烷基或未取代的低级烷基。27.如权利要求25所述的化合物，其中D具有以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>Z是选自0、S以及NR23中的一个成员射R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的个成员，射Rg和R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R1'是H、取代或未取代的低级烷基、或C(0)R8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的一个Rg和R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R2是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基、或氰基、或烷氧基；并且成员，R2'是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基。28.如权利要求25所述的化合物，其中(AA"。是一个肽序列，该肽序列可被肿瘤组织中表达的一种蛋白酶切割。29.如权利要求28所述的化合物，其中该蛋白酶是一种溶酶体蛋白酶。30.如权利要求25所述的化合物，其中，(AA"。中位于最接近药物部分处的氨基酸是选自下组，其构成为Ala、Asn、Asp、Cit、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、以及Val。31.如权利要求25所述的化合物，其中，(AA"。是一个肽序列，该肽序列是选自下组，其构成为Val-Cit、Val-Lys、Phe-Lys、Lys-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp、Cit、Phe-Ala、Phe_N9_tosyl_Arg、Phe_N9_nitro_Arg、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys丄eu-Ala-Leu、Ile-Ala-Leu、Val-Ala-Val、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQIDNO:1)、P-Ala-Leu-Ala-Leu(SEQIDNO:2)、以及Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ.IDNO:3)。32.如权利要求25所述的化合物，其中，(AA"e是Val-Cit或Val-Lys。33.如权利要求25所述的化合物，其中，Rf、R26以及R^独立地是H或低级烷基。34.如权利要求25所述的化合物，其中，s和t独立地是1或2。35.如权利要求25所述的化合物，其中，R2°是H或低级烷基。36.如权利要求25所述的化合物，其中，该化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中r是在从0到24的范围中的一37.—种具有以下结构式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中，L1是一个自消间隔物；m是一个整数0、l、2、3、4、5、或6;X2是一个可切割的底物；并且D包括一个结构式其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；E和G是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、一个杂原子、一个单键中的成员，或者E和G进行结合形成一个环状体系，该环状体系选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；X是选自0、S以及NR23中的一个成员；R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R3是选自下组的一个成员，该组的构成为(=0)、SR"、NHR11以及OR11，射R"是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(0)R"R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12以及SiR12R13R14，射R12、R13、以及R14是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X1是一个离去基团R4、R4'、R5以及R5'是独立地选自下组的成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4'、R5以及R5'的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系，射n是从1到20的一个整数；R"和RW独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中R"和Rw与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；其中，RA、Rb、RS、以及RS'中的至少一个将所述药物连接至U上(若存在的话)，或连接至^上，并且是选自下组，其构成为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>R3°、R3°'、R31以及R"'是各自独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基；并且v是从1到6的一个整数；或它的一种药学上可接受的盐。38.如权利要求37所述的化合物，其中D具有以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>Z是选自0、S以及NR23中的一个成员射R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是选自下组的一个成员，该组的构成为取代的烷基、未取代的烷基、NRY°、NR9NHR1Q、以及OR9其中，Rg和R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；并且R2是H、取代的烷基或未取代的低级烷基。39.如权利要求37所述的化合物，其中D具有以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>Z是选自0、S以及NR23中的一个成员射R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的一个成员，射W和1^°独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R1'是H、取代或未取代的低级烷基、或C(0)R8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的一个成员，射Rg和R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R2是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基、或氰基、或烷氧基；并且R2'是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基。40.如权利要求37所述的化合物，其中X2包括P-AlaLeuAlaLeu(SEQIDNO:2)或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>其中，R是F、Cl、Br或I。41.42.—种具有以下结构式的化合物其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；Z和X是独立地选自0、S以及NR23中的成员；R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R3是选自下组的一个成员，该组的构成为(=0)、SR"、NHR11以及0R11，R"是选自下组的一个成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的杂烷基、未取代的杂烷基、单磷酸酯类、二磷酸酯类、三磷酸酯类、磺酸酯类、酰基、C(0)R"R13、C(0)OR12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR12以及SiR12R13R14，射R12、R13、以及R14是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及取代或未取代的芳基中的成员，其中R12和R13与它们所附联的氮原子或碳原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X1是一个离去基团；并且R5、R5'、以及R32是独立地选自下组的成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=服16、以及0(CH2)nN(CH3)2n是从1到20的一个整数；R"和RW是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子；或它的一种药学上可接受的盐。43.如权利要求42所述的化合物，其中该化合物具有以下结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>其中，R1是H、取代或未取代的低级烷基、C(0)R8、或(AR8，其中R8是选自NR9R1Q以及OR9中的一个成员，射Rg和R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R1'是H、取代或未取代的低级烷基、或C(0)R8，其中R8是选自NR9R1Q以及0R9中的一个成员，射Rg和R"是独立地选自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的杂烷基中的成员；R2是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基、或氰基、或烷氧基；并且R2'是H、或取代或未取代的低级烷基、或未取代的杂烷基。44.如权利要求42所述的化合物，其中，R32包括一个或多个可切割的基团。45.如权利要求44所述的化合物，其中，该一个或多个可切割的基团是选自一个可切割的连接物以及一个可切割的底物。46.具有以下结构式的一种化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>其中，该环状体系A是选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、以及取代或未取代的杂环烷基基团中的一个成员；Z和X是独立地选自0、S以及NR23中的成员；R23是选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、以及酰基中的一个成员；R4、R4'、R5、R5'以及R^是独立地选自下组的一些成员，该组的构成为H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的杂芳基、未取代的杂芳基、取代的杂环烷基、未取代的杂环烷基、卤素、N02、NR15R16、NC(O)R15、0C(0)NR15R16、OC(O)0R15、C(O)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5，的任何相邻的一对与它们所附联的碳原子一起连接以形成一个具有4到6元的、取代或未取代的环烷基或杂环烷基环状体系；射n是从1到20的一个整数；R"和RW是独立地选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环烷基、以及取代或未取代的肽基，其中115和116与它们所附联的氮原子一起可任选地相连接以形成一个取代或未取代的杂环烷基环状体系，该环状体系具有4到6元，可任选地包含两个或更多个杂原子，其中，R^包括一个或多个可切割的基团；R6是一个单键，该单键存在或不存在，并且当其存在时，R6与R7相连接以形成一个环丙基的环；并且R7是所述环丙基的环中与R6相连接的CH厂X1或CH厂，其中X1是一个离去基团，或它的一种药学上可接受的盐。47.如权利要求46所述的化合物，其中，该一个或多个可切割的基团是选自一个可切割的连接物以及一个可切割的底物。48.—种化合物，选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中r是在从0到24的范围中一个整数。全文摘要本披露提供了药物-配体偶联物物以及药物-可切割的底物偶联物，它们是强力的细胞毒素。本披露还针对包含这些药物-配体偶联物的组合物以及使用它们的治疗方法。文档编号C07D487/04GK101795711SQ200780051809公开日2010年8月4日申请日期2007年12月28日优先权日2006年12月28日发明者B·苏菲,D·B·帕斯摩,S·甘格沃,V·古尔拉维斯,张谦,陈良申请人:梅达莱克斯公司