专利名称：一种4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原的合成方法
技术领域：
一种4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。
背景技术：
菊酸，英文名称Chrysanthemic Acid，分子式为C10H16O2，是合成含菊酸类拟除虫菊酯农药的中间体。拟除虫菊酯是一类在天然除虫菊酯化学结构研究基础上发展而来的仿生药物。天然除虫菊的应用已有悠久的历史，由于其具有击倒力强，杀虫作用快，广谱性，易降解，对高等动物及鸟类低毒性，使用安全，对环境污染小等特点，被广泛用于茶园、果园、农田等害虫的防治。随着国际标准的提高，我国贸易的国际化，绿色壁垒森严，我国农副产品特别是茶叶、水果中的农药残留问题成为出口贸易的主要障碍，要求开发应用快速残留检测技术来加强产地农副产品中多种农药残留的监控。而传统的农药残留分析主要依靠气相色谱、液相色谱、气质联用、液质联用等，这些方法需要有昂贵的仪器，而且需要经过繁琐的前处理，很难达到快速简便的现场检测要求。因此，有必要研究更有效快捷的检测方法，即拟除虫菊酯农药多残留检测技术。这就需要有中间体菊酸的衍生物。有报道曾有用中间体菊酸直接做为半抗原，效果有待提高，也有报道如果在特征基团的末端接上四到六个的碳链，会提高免疫得到的抗体的效价，本发明是在菊酸的末端羧基上接上4-氨基丁酸，使特征基团更好的暴露出来，从而提高多残留抗体的效价。
发明内容
本发明的目的是提供一种拟除虫菊酯中间体菊酸衍生物4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原的合成方法，以便于含菊酸拟除虫菊酯农药的酶联免疫检测，为今后人们的研究提供了方便的途径。
本发明的技术方案以菊酸和4-氨基丁酸为原料，通过两步反应，合成4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原。其反应方程式为
工艺步骤为 (1)在一装有搅拌器的小型反应瓶中把0.01mol菊酸溶于3mL N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入少量正丁胺，搅拌30min后加入0.01mol氯甲酸异丁酯，温度降至0℃，反应1h，称为反应液A；另外称取0.01mol 4-氨基丁酸溶于5mLpH 9.6的碳酸盐缓冲溶液中，称为溶液B；然后在0℃的条件下把反应液A缓慢滴加到溶液B中，反应1.5小时，称为反应液C； (2)薄层层析法检测终点硅胶薄板下端1cm处作一水平线，吸取反应液C 1μL点于线上，点样结束后吹干，将薄板放入层析缸中，层析液为甲醇和丙酮，甲醇/丙酮体积比为1∶1，展开至薄板3/4处，取板，吹干溶剂；将薄板置于紫外分析仪中，在254nm波长观察，在Rf为0.4处观察到显色点作为反应终点。
(3)提纯湿法真充硅胶柱，然后用体积比为1∶1的甲醇和丙酮混合液平衡，流量为五个柱体积后，流速稳定，梯度洗脱，洗脱剂依次为甲醇/丙酮体积比为1∶1，6∶4，7∶3，每个梯度的洗脱剂用量分别为7倍，9倍，5倍柱体积，每收集完一个梯度的洗脱液后换一次洗脱剂，检测在甲醇/丙酮体积比为1∶1的展开剂下展开，在紫外分析仪254nm波长观察，Rf为0.45处观察到显色点的组分，然后脱溶剂，即得成品。
本发明的有益效果本发明成功合成了拟除虫菊酯的中间体菊酸的衍生物4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原，合成步骤简洁，经过后处理，纯度高达98％以上，完全可以用作标准品，为以后人们对含菊酸类拟除虫菊酯类农药多残留的酶联免疫检测研究提供了方便的途径，可以满足国内外对其研究的需要。
图14-氨基丁酸缩合菊酸半抗原的正负离子扫描图。
图24-氨基丁酸缩合菊酸半抗原的正负离子质谱图。
具体实施例方式 实施例1 (1)在一装有搅拌器的小型反应瓶中把1.68g(0.01mol)菊酸溶于3mL DMF(N，N-二甲基甲酰胺)中，然后加入少量正丁胺，搅拌30min后加入1.3658g氯甲酸异丁酯(0.01mol)，温度降至0℃，反应1h，称为反应液A；另外称取1.03g4-氨基丁酸(0.01mol)溶于5mL pH9.6的碳酸盐缓冲溶液中，称为溶液B；然后在0℃的条件下把反应液A缓慢滴加到溶有4-氨基丁酸的碳酸盐缓冲溶液B中，反应1.5小时，称为反应液C。
(2)薄层层析法检测终点硅胶薄板下端1cm处作一水平线，吸取反应液C 1μL点于线上，点样结束后吹干，将薄板放入层析缸中，层析液为甲醇和丙酮，甲醇/丙酮体积比为1∶1，展开至薄板3/4处，取板，吹干溶剂；将薄板置于紫外分析仪中，在254nm波长观察，在Rf为0.4处观察到显色点作为反应终点。
(3)提纯湿法真充硅胶柱，然后用体积比为1∶1的甲醇和丙酮混合液平衡，流量为五个柱体积后，流速稳定，梯度洗脱，洗脱剂依次为甲醇/丙酮体积比为1∶1，6∶4，7∶3，每个梯度的洗脱剂用量分别为7倍，9倍，5倍柱体积，每收集完一个梯度的洗脱液后换一次洗脱剂，检测在甲醇/丙酮体积比为1∶1的展开剂下展开，在紫外分析仪254nm波长观察，Rf为0.45处观察到显色点的组分，然后脱溶剂，即得成品。
权利要求
1.一种菊酸的衍生物4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原的合成方法，其特征是以菊酸和4-氨基丁酸为原料，通过两步反应，合成4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原；
(1)在一装有搅拌器的小型反应瓶中把0.01mol菊酸溶于3mL N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入少量正丁胺，搅拌30min后加入0.01mol氯甲酸异丁酯，温度降至0℃，反应1h，称为反应液A；另外称取0.01mol 4-氨基丁酸溶于5mLpH9.6的碳酸盐缓冲溶液中，称为溶液B；然后在0℃的条件下把反应液A缓慢滴加到溶液B中，反应1.5小时，称为反应液C；
(2)薄层层析法检测终点硅胶薄板下端1cm处作一水平线，吸取反应液C 1μL点于线上，点样结束后吹干，将薄板放入层析缸中，层析液为甲醇和丙酮，甲醇/丙酮体积比为1∶1，展开至薄板3/4处，取板，吹干溶剂；将薄板置于紫外分析仪中，在254nm波长观察，在Rf为0.4处观察到显色点作为反应终点；
(3)提纯湿法真充硅胶柱，然后用体积比为1∶1的甲醇和丙酮混合液平衡，流量为五个柱体积后，流速稳定，梯度洗脱，洗脱剂依次为甲醇/丙酮体积比为1∶1，6∶4，7∶3，每个梯度的洗脱剂用量分别为7倍，9倍，5倍柱体积，每收集完一个梯度的洗脱液后换一次洗脱剂，检测在甲醇/丙酮体积比为1∶1的展开剂下展开，在紫外分析仪254nm波长观察，Rf为0.45处观察到显色点的组分，然后脱溶剂，即得成品。
全文摘要
一种4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以菊酸和4-氨基丁酸为原料，通过两步反应，合成菊酸的衍生物4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原。本发明成功合成了菊酸的衍生物4-氨基丁酸缩合菊酸半抗原，合成步骤简洁，经过后处理，纯度高达98％以上，完全可以用作标准品，为以后人们对含菊酸拟除虫菊酯的酶联免疫检测研究提供了方便的途径，可以满足国内外对其研究的需要。
文档编号C07C233/63GK101219965SQ20081001904
公开日2008年7月16日 申请日期2008年1月11日 优先权日2008年1月11日
发明者胥传来, 郝晓蕾, 殷祥刚, 冀宝庆 申请人:江南大学