专利名称：一种从钩藤中提取制备熊果酸的方法
技术领域：
本发明属于天然药物领域，涉及一种有重要药用价值的天然产物的提取，尤其涉及 一种从钩藤中提取制备熊果酸的方法。
背景技术：
熊果酸(Ursolic acid, U A )又名乌苏酸或乌索酸，是一种弱极性的五环三萜酸， 其以游离形式或与糖结合成苷的形式分布于约7个科46个属62种植物中，具有 镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖、抗癌抑瘤等多种生物学效应， 还具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。钩藤为茜草科植物钩藤[Uncaria rhynch叩hylla(Miq.) Jacks.]的干燥带钩茎枝。 始载于《名医别录》，列为下品。甘，凉。归肝、心包经。具清热平肝，息风定惊的功 能。 一直以来对钩藤的研究多集中在钩藤生物碱的提取分离(钩藤提取工艺研究中成 药2000， 22(5);钩藤碱提取工艺研究吉林林学院学报1998， (2);大孔吸附树脂 分离提取大叶钩藤总生物碱广西科学2006， (2))。现有中国专利申请如 CN200310111479. 8从女贞叶中，如CN200410025770. 8从柿叶中，如CN200310122716. 0 从枇杷叶中提取有效成分熊果酸的方法。研究表明，钩藤中除含有大量的钩藤碱、异钩 藤碱等吲哚类生物碱外，还含有丰富的三萜成分熊果酸(钩藤的三萜成分云南植物研 究1995， 17(2);钩藤化学成分的研究天然产物研究与开发2009， 21)。发明内容本发明的目的在于提供一种从钩藤中提取制备熊果酸的方法，该方法能够得到含量 达90%以上的熊果酸，且适于工业生产，该方法所用柱吸附剂可再生循环使用，成本低 且"三废"污染小。为实现上述目的，从钩藤中提取制备熊果酸的方法按以下步骤进行-1. 提取以6 10倍于钩藤原料重量的80 95机％乙醇进行热回馏提取2 3次，每次 1 2小时，抽滤，提取液浓縮至浸膏；2. 水洗加入8 12倍浸膏重量的水，搅拌使充分分散，静置，过滤，弃去水洗液，得 沉淀，重复此步骤一次，得二次沉淀；3. 除杂向上述二次沉淀中加入纯化剂，所述的纯化剂为碱性溶 ，然后加热至沸腾，保持微沸5 15分钟，放冷，静置12小时，过滤，沉淀水洗至中性，抽滤，干燥， 重复此步骤一次得干燥物；4. 纯化将上述干燥物加入10倍重量的95wt。/。乙醇中，加热溶解，过滤，滤液过层析 柱，收集洗液；5. 脱色向上述洗液中加入2wt。/。的活性炭，加热至微沸20 40分钟，热滤，得滤液并 浓縮至原体积的1/3 2/3时，室温放置析晶，过滤，滤液继续浓縮至1/3 2/3体 积，放置析晶，过滤，合并结晶得熊果酸粗品；6. 重结晶将上述熊果酸粗品溶于80 95wt。/。乙醇，室温放置析晶，过滤干燥得熊果酸， 含量90%以上。上述制备方法中，提取步骤所用原料钩藤经干燥处理并过10目筛；除杂步骤纯化 剂为1 3wty。氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，纯化剂用量优选为固体沉淀重量的10 20 倍；纯化步骤所用层析柱的吸附剂优选酸性氧化铝，酸性氧化铝的用量优选为沉淀干燥 物重量的10 20倍，使用后的酸性氧化铝经50(TC90iiiin处理后能再生循环使用；重结 晶步骤优选80 95wty。乙醇的用量为熊果酸粗品重量的80 100倍。与现有技术相比，本发明的优益效果在于(1) 本技术方法提供了一种制备药用有效成分熊果酸的新方法，按照此技术方法能够 得到含量达90%以上的熊果酸，且稳定可行，能应用于工业生产；(2) 本技术方法所使用的柱吸附剂酸性氧化铝可再生循环使用，大大降低了生产成本；(3) 本技术方法避免了使用大量的多种有机溶媒，"三废"污染小。
具体实施方式
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容。实施例1:称取经干燥处理并过10目筛后的钩藤原料粗粉50kg，投入提取罐内，加入10倍重 量的80wty。乙醇进行热回馏提取2次，每次1小时，趁热抽滤，合并2次的提取液，浓 縮至浸膏；加入IO倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤，弃去 水洗液，沉淀再加入10倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤， 弃去水洗液，得沉淀；加入沉淀重量20倍的lwt。/。的氢氧化钠溶液，加热至沸腾，保持 微沸15分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去，沉淀再加其重量20倍的lwt呢的氢氧化钠溶 液，加热至沸腾，保持微沸15分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去，沉淀用水洗至中性， 抽净水分，干燥；将此干燥物加入10倍重量的80机％乙醇中，加热使分散溶解，过滤，4收集滤液；取干燥物20倍重量的酸性氧化铝，装柱，将洗液加入层析柱中，使溶液通 过层析柱，收集洗液(用后的柱吸附剂酸性氧化铝经50(TC90min处理后能再生循环使 用)；向洗液中加入2wt呢的活性炭，加热至沸腾，保持微沸30分钟，趁热滤过，用少量 80wty。乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液并浓縮至原体积的1/2时，置结晶罐中室温放 置析晶，过滤，母液继续浓縮至l/2体积，室温放置析晶，合并结晶得熊果酸粗品；将 熊果酸粗品溶于100倍重量的80wty。乙醇中，室温放置析晶，过滤干燥得192. 3g熊果酸 成品，收率0.3鄉，含量测定采用Waters高效液相色谱系统Water600泵，996 二极 管阵列检测器，1T色谱工作站，Lichrospher-C18柱，200X4. 6腿，5y(江苏汉邦科技 有限公司产品)，乙腈为色谱纯级，熊果酸标准品采用中国药品生物制品检定所提供， 批号0742-9706)，流动相采用乙腈-水=85: 15 (V/V)，检测波长210nm，结果熊果酸 含量93. 23%。 实施例2:称取经干燥处理并过IO目筛后的钩藤原料粗粉50kg，投入提取罐内，加入8倍重 量的95w"rt乙醇进行热回馏提取2次，每次1.5小时，趁热抽滤，合并2次的提取液， 浓缩至浸膏，加入8倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤，弃去 水洗液，沉淀再加入10倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤， 弃去水洗液，得沉淀；加入沉淀重量10倍的3wty。的氢氧化钠溶液，加热至沸腾，保持 微沸5分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去；沉淀再加其重量10倍的3wty。的氢氧化钠溶 液加热至沸腾，保持微沸5分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去，沉淀用水洗至洗液呈中 性，抽净水分，干燥；将此干燥物加入10倍重量的95wty。乙醇中，加热使分散溶解，过 滤，收集滤液，取干燥物15倍重量的酸性氧化铝，装柱，将滤液加入层析柱中，使溶 液通过层析柱，收集洗液(用后的柱吸附剂酸性氧化铝经50(TC90min处理后能再生循 环使用)；向洗液中加入2wt。/。的活性炭，加热至沸腾，保持微沸20分钟，趁热滤过，用 少量95wty。的乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液并浓縮至原体积的1/2时，置结晶罐中 室温放置析晶，滤过，母液继续浓缩至l/2体积，室温放置析晶，过滤，合并结晶得熊 果酸粗品；将熊果酸粗品溶于100倍重量的95wty。乙醇中，室温放置析晶，过滤干燥得 173.2g熊果酸成品，收率0.35%,含量测定采用Waters高效液相色谱系统Water600 泵，996 二极管阵列检测器，M"色谱工作站，Lichrospher-C18柱，200X4. 6腿，5u (江 苏汉邦科技有限公司产品)，乙腈为色谱纯级，熊果酸标准品采用中国药品生物制品检 定所提供，批号0742-9706)，流动相采用乙腈-水=85: 15 (V/V)，检测波长210nm，结 果熊果酸含量91.65%。实施例3:称取经干燥处理并过IO目筛后的钩藤原料粗粉50kg，投入提取罐内，加入6倍重量的90讨％乙醇进行热回馏提取3次，每次2小时，趁热抽滤，合并3次的提取液，浓 縮至浸膏；加入12倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤，弃去 水洗液，沉淀再加入IO倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤， 弃去水洗液，得沉淀，加入沉淀重量15倍的2wty。的氢氧化钠溶液，加热至沸腾，保持 微沸10分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去；沉淀再加其重量15倍的2wt。/。的氢氧化钠溶 液，加热至沸腾，保持微沸10分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去，沉淀用水洗至中性， 抽净水分，干燥；将此干燥物加入10倍重量的90wty。乙醇中，加热使分散溶解，过滤， 收集滤液，取干燥物15倍重量的酸性氧化铝，装柱，将滤液加入层析柱中，使溶液通 过层析柱，收集洗液(用后的柱吸附剂酸性氧化铝经50(TC90niin处理后能再生循环使 用)；向洗液中加入2wt。/。的活性炭，加热至沸腾，保持微沸40分钟，趁热滤过，用少量 90wt。/。的乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液并浓縮至原体积的1/2时，置结晶罐中室温 放置析晶，滤过，母液继续浓縮至l/2体积，室温放置析晶，过滤，合并结晶得熊果酸 粗品；将熊果酸粗品溶于100倍重量的90wt呢乙醇中，室温放置析晶，过滤干燥得182. 3g 熊果酸成品，收率0.36%，含量测定采用Waters高效液相色谱系统Water600泵，996 二极管阵列检测器，M"色谱工作站，Lichrospher-C18柱，200X4.6mm， 5 u (江苏汉邦 科技有限公司产品)，乙腈为色谱纯级，熊果酸标准品采用中国药品生物制品检定所提 供，批号0742-9706)，流动相采用乙腈_水=85: 15 (V/V)，检测波长210nm，结果熊 果酸含量92. 38%。 实施例4:称取经干燥处理并过IO目筛后的钩藤原料粗粉50kg，投入提取罐内，加入8倍重 量的95wty。乙醇进行热回馏提取2次，每次1.5小时，趁热抽滤，合并2次的提取液， 浓縮至浸膏；加入IO倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤，弃 去水洗液，沉淀再加入10倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤， 弃去水洗液，得沉淀；加入沉淀重量15倍的2wty。的氢氧化钾溶液，加热至沸腾，保持 微沸10分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去；沉淀再加其重量15倍的2wt。/。的氢氧化钾溶 液，加热至沸腾，保持微沸10分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去，沉淀用水洗至中性， 抽净水分，干燥；将此干燥物加入10倍重量的95wt。/。乙醇中，加热使分散溶解，过滤， 收集滤液；取干燥物10倍重量的酸性氧化铝，装柱，将滤液加入层析柱中，使溶液通 过层析柱，收集洗液(用后的柱吸附剂酸性氧化铝经50(TC90min处理后能再生循环使加热至沸腾，保持微沸30分钟，趁热滤过，用少量 95wty。的乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液并浓縮至原体积的1/3时，置结晶罐中室温 放置析晶，滤过，母液继续浓缩至1/3体积，室温放置析晶，过滤，合并结晶得熊果酸 粗品；将熊果酸粗品溶于80倍重量的95wt。/。乙醇中，室温放置析晶，过滤干燥得202.6g 熊果酸成品，收率0.41%，含量测定采用Waters高效液相色谱系统Water600泵，996 二极管阵列检测器，M"色谱工作站，Lichrospher-C18柱，200X4.6mm， 5 u (江苏汉邦 科技有限公司产品)，乙腈为色谱纯级，熊果酸标准品采用中国药品生物制品检定所提 供，批号0742-9706)，流动相采用乙腈-水=85: 15 (V/V)，检测波长210nm，结果熊 果酸含量90%以上。 实施例5:称取经干燥处理并过IO目筛后的钩藤原料粗粉50kg，投入提取罐内，加入8倍重 量的95wty。乙醇进行热回馏提取2次，每次1.5小时，趁热抽滤，合并2次的提取液， 浓缩至浸膏；加入10倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤，弃 去水洗液，沉淀再加入10倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤， 弃去水洗液，得沉淀；加入沉淀重量15倍的2wt。/。的氢氧化钠溶液，加热至沸腾，保持 微沸10分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去；沉淀再加其重量15倍的2wty。的氢氧化钠溶 液，加热至沸腾，保持微沸10分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去，沉淀用水洗至中性， 抽净水分，干燥；将此干燥物加入10倍重量的95wt。/。乙醇中，加热使分散溶解，过滤， 收集滤液；取干燥物15倍重量的酸性氧化铝，装柱，将滤液加入层析柱中，使溶液通 过层析柱，收集洗液(用后的柱吸附剂酸性氧化铝经50(TC90min处理后能再生循环使 用)；向洗液中加入2wty。的活性炭，加热至沸腾，保持微沸30分钟，趁热滤过，用少量 95wt。/。的乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液并浓縮至原体积的2/3时，置结晶罐中室温 放置析晶，滤过，母液继续浓缩至2/3体积，室温放置析晶，过滤，合并结晶得熊果酸 粗品；将熊果酸粗品溶于90倍重量的95wt。/。乙醇中，室温放置析晶，过滤干燥得198.4g 熊果酸成品，收率0.40%，含量测定采用Waters高效液相色谱系统Water600泵，996 二极管阵列检测器，M:i2色谱工作站，Lichrospher-C18柱，200X4. 6mm， 5 u (江苏汉邦 科技有限公司产品)，乙腈为色谱纯级，熊果酸标准品采用中国药品生物制品检定所提 供，批号0742-9706)，流动相采用乙腈-水=85: 15 (V/V)，检测波长210nm，结果熊 果酸含量90%以上。 实施例6:称取经干燥处理并过10目筛后的钩藤原料粗粉50kg，投入提取罐内，加入8倍重量的95wty。乙醇进行热回馏提取2次，每次1.5小时，趁热抽滤，合并2次的提取液， 浓縮至浸膏；加入IO倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤，弃 去水洗液，沉淀再加入10倍浸膏重量的水，搅拌均匀，使浸膏充分分散，静置，过滤， 弃去水洗液，得沉淀；加入沉淀重量15倍的2wt。/。的氢氧化钠溶液，加热至沸腾，保持 微沸10分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去；沉淀再加其重量15倍的2wty。的氢氧化钠溶 液，加热至沸腾，保持微沸10分钟，静置放冷，过滤，滤液弃去，沉淀用水洗至中性， 抽净水分，干燥；将此干燥物加入10倍重量的95wty。乙醇中，加热使分散溶解，过滤， 收集滤液；取干燥物15倍重量的酸性氧化铝，装柱，将滤液液加入层析柱中，使溶液 通过层析柱，收集洗液(用后的柱吸附剂酸性氧化铝经50(TC90min处理后能再生循环 使用)；向洗液中加入2wt。/。的活性炭，加热至沸腾，保持微沸30分钟，趁热滤过，用少 量95wt。/。的乙醇洗涤活性炭，合并滤液及洗液并浓缩至原体积的1/2时，置结晶罐中室 温放置析晶，滤过，母液继续浓縮至1/2体积，室温放置析晶，过滤，合并结晶得熊果 酸粗品；将熊果酸粗品溶于100倍重量的95"%乙醇中，室温放置析晶，过滤干燥得 216.7g熊果酸成品，收率0.43%，含量测定采用Waters高效液相色谱系统Water600 泵，996 二极管阵列检测器，M"色谱工作站，Lichrospher-Cw柱，200X4. 6mm， 5u (江 苏汉邦科技有限公司产品)，乙腈为色谱纯级，熊果酸标准品采用中国药品生物制品检 定所提供，批号0742-9706)，流动相采用乙腈-水=85: 15 (V/V)，检测波长210nm，结 果熊果酸含量90%以上。
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权利要求
1.一种从钩藤中提取制备熊果酸的方法，其特征是该方法包括下列步骤(1)提取以6～10倍重量于钩藤原料的80～95wt％乙醇进行热回馏提取2～3次，每次1～2小时，抽滤，提取液浓缩至浸膏；(2)水洗加入8～12倍于浸膏重量的水，搅拌使充分分散，静置，过滤，弃去水洗液，得沉淀，重复此步骤一次，得二次沉淀；(3)除杂向上述二次沉淀中加入纯化剂，所述的纯化剂为碱性溶液，然后加热至沸腾，保持微沸5～15分钟，静置放冷，过滤，沉淀水洗至中性，抽滤，干燥，重复此步骤一次，得干燥物；(4)纯化将上述干燥物加入10倍重量的80～95wt％乙醇中，加热溶解过滤，滤液过层析柱，收集洗液；(5)脱色向上述洗液中加入2wt％的活性炭，加热至微沸20～40分钟，热滤，得滤液并浓缩至原体积的1/3～2/3时，室温放置析晶，过滤，滤液继续浓缩至1/3～2/3体积，室温放置析晶，过滤，合并结晶得熊果酸粗品；(6)重结晶将上述熊果酸粗品溶于80～95wt％的乙醇中，室温放置析晶，过滤干燥得熊果酸。
2. 根据权利要求1所述的从钩藤中提取制备熊果酸的方法，其特征是提取之前 钩藤原料经干燥处理并过10目筛。
3. 根据权利要求1所述的从钩藤中提取制备熊果酸的方法，其特征是所述纯化 剂为1 3wt。/。的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。
4. 根据权利要求3所述的从钩藤中提取制备熊果酸的方法，其特征是所述l 3wt。/。的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液的用量为固体沉淀重量的10 20倍。
5. 根据权利要求1所述的从钩藤中提取制备熊果酸的方法，其特征是所述层析 柱的吸附剂为酸性氧化铝。
6. 根据权利要求5所述的从钩藤中提取制备熊果酸的方法，其特征是所述层析 柱的吸附剂酸性氧化铝经50(TC90min处理后能再生循环使用。
7. 根据权利要求5所述的从钩藤中提取制备熊果酸的方法，其特征是所述层析 柱的吸附剂酸性氧化铝的用量为沉淀干燥物重量的10 20倍。
8. 根据权利要求1所述的从钩藤中提取制备熊果酸的方法，其特征是所述重结 晶的80 95wt。/。乙醇用量为熊果酸粗品重量的80 100倍。
全文摘要
本发明提供一种从钩藤中提取制备熊果酸的方法。取钩藤粗粉加入乙醇回流提取，浓缩提取液至浸膏，水洗后加入纯化剂煮沸除杂，过滤，干燥沉淀，再用乙醇溶解过柱，活性炭脱色后静置析晶得熊果酸粗品，再用乙醇重结晶即得到熊果酸成品。本发明所得熊果酸成品含量达90％以上，稳定可行；所用层析柱的吸附剂经再生处理可循环使用，降低了生产成本；所用有机溶媒种类少，“三废”污染小，适宜工业生产应用。
文档编号C07J63/00GK101643492SQ200910017739
公开日2010年2月10日 申请日期2009年8月21日 优先权日2009年8月21日
发明者于宗渊, 青 刘, 朱建伟, 岩 李, 闫雪生 申请人:山东省中医药研究院