整合素配体环肽类似物及其环化方法

专利名称：整合素配体环肽类似物及其环化方法
技术领域：
本发明涉及环肽类似物及其环化方法，更具体的说，是涉及整合素配体环肽类似物及其 环化方法。
背景技术：
肿瘤生长的一个明显特点是通过刺激血管内皮细胞分泌各种生长因子，进一步促进肿瘤 血管快速生长，使细胞有足够的供血而恶性生长。肿瘤的生长和转移是一个依赖于血管的过 程，通常肿瘤直径小于2 3mm时可通过肿瘤周围血管的弥散获得所需要的营养。肿瘤增大， 则需要新生血管的形成供给其营养。早在1971年，美国科学家Folkman等提出可通过阻断 肿瘤血管的生成抑制肿瘤的生长，防止肿瘤的转移。根据这一假说，研究人员希望通过切断 血管、断绝肿瘤的血液供给使肿瘤的生长受阻，达到阻止肿瘤血管疯长的目的，并最终使癌 细胞"断奶"饥饿而死亡。
整合素(integrin)是一类由a亚基和0亚基经非共价键连接而成的异二聚体跨膜糖蛋 白粘附分子，包括较短的细胞质内羧基末端、跨膜段和较长的细胞外氨基末端。它在多种肿 瘤细胞表面和新生血管内皮细胞上有高表达，但在成熟血管内皮细胞和绝大多数正常器官系 统中，整合素不表达或者很少量的表达。目前已知至少有14种a亚基和9种e亚基，组成 的整合素已达20余种亚型。在细胞内区，P链介导整合素与细胞骨架蛋白及其他细胞质成 分的相互作用。整合素具有两种主要功能 一种是通过与相应配体结合介导细胞与基底膜、 细胞与细胞的粘附，这是其主要作用；另一种是作为细胞内外信息传递的桥梁， 一方面细胞 内的信号调节整合素与其配体的亲和力和活性状态，另一方面整合素与其配体结合后向细胞 内传递信号，发挥生物学效应。整合素受体通过与细胞外基质蛋白(如玻基结合素等)的受 体识别序列RGD (精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)特异结合，介导肿瘤细胞粘附和迁移，在肿瘤 生长、局部浸润、转移，特别是肿瘤诱导的血管生成过程中发挥重要作用。
上述研究结果为设计含有RGD序列的整合素受体小分子拮抗肽、用作选择性肿瘤靶向显 像剂或治疗制剂奠定了充分的理论基础。因此，在过去的十几年中，许多课题组(Haubiier et al. J. Am. Chem. Soc. 118: 7461 — 7472, ]996; Ha誦es et al. Nature Med. 2:529—533,1996;Wermuth et al. J. Am. Chera. Soc. 199: 1328-1335, 1997; Dechantsreiter et al. Med. Chem. 42: 3033-3040, 1999;)先后设计出一系列的含RGD序列的多肽，其中比较有代表 性的是Kessler课题组设计合成的cRGDfK， cRGDfV及其甲基化的类似物cRGDfV(Me) (Figure 1.)。以cRGDfK为例，他们采用的方法是先在Fmoc树脂上合成出线性的，侧链保护的RGDfK， 然后将线性肽从树脂上切下来环化，最后去掉侧链保护基团。由于环化时是普通的酰胺键縮 合反应，环化产率较之普通的酰胺键缩合大为降低。另外，有时还需要某些有毒的恶臭的试 剂，如二苯基磷酰基叠氮化物(diphenylphosphoryl， DPPA)，苯甲硫醚(thioanisole),乙 二硫醇(ethanedithiol),因此，需要寻找一种反应条件温和，产率较高的环化方法。
发明內容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种新型整合素配体环肽类似物，本发 明更进一步的目的是提供该整合素配体环肽类似物的环化方法。 为了解决以上问题，本发明是通过如下技术方案实现。
本发明提供了一种整合素配体环肽类似物，其结构如下
本发明还提供了前述整合素配体环肽类似物的环化方法，包括以下步骤(1)将芴甲
氧^基-炔丙酰-天冬氨酸(Fmoc-Asp-propargyl)挂在2-氯三苯甲基氯树脂(2-CTC树脂) 上，合成线性的四肽类似物
称取lg2-CTC树脂于固相反应器中，加二氯甲烷(DCM) 15ml溶胀，洗涤树脂；往溶胀 好的树脂中加Fmoc-Asp-propargyl和N,N'-二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下反应2.5小时， 用3X20 ml的乙酸乙酯(EA)和10ml的水洗涤；用20%的哌啶/二甲基酰胺(DMF)溶液脱除芴 甲氧羰基(Fmoc)，反应20分钟；用3X20 ml的EA和10ml的水洗涤，加入芴甲氧羰基-甘氨
Xaa^ly,Ala^Leu,Ile,Cys,Met，Asp，Asn, Glu,Lys,Arg,His,Phe，Tii),Pro,O,Gly國Gly.
5酸(Fmoc-Gly-OH)、苯并三氮唑-N, N, N' ， N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)和N-甲基吗啉(N腦) 至反应器中，反应2小时，用茚三酮指示剂检测反应，用3X20 ml的EA和10ml的水洗涤；用 2(W的哌卩定/DMF溶液脱除Fmoc，反应20分钟；用3X20 ml的EA和10ml的水洗涤；
采用相同的操作步骤，依次縮合芴甲氧羰基-2， 2， 4， 6， 7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基-精 氨酸[Fmoc-Arg(Pbf)-0H]、 Fmoc-Xaa-0H和叠氮甘氨酸(Azido-glycine)生成线性的四 肽类似物。
(2)环化
将线性的全保护的四肽类似物从树脂上切下来，用裂解液2:8的三氟乙酸/二氯甲烷 (TFA/DCM)及数滴乙酸(AcOH)，裂解2小时，旋干裂解液；在DCM作溶剂，溴化亚铜/1， 8 一二氮杂环环(5， 4， 0) 7 —十一烯(CuBr/DBU)作催化剂的液相条件及室温下反应4 6小时， 反应后旋去DCM，加裂解液去除侧链保护裂解2小时，旋去裂解液，加冰乙醚沉淀，离心除去 上清液得到固体，即为最终产物整合素配体环肽。
作为一种改进，为了能用ClickChemistry方法，所述Fmoc-Asp-propargyl通过以下方 式制得
将0. 93 g的芴甲氧羰基-天冬氨酸-S -叔丁酯[Fmoc-Asp(0tBu)-0H]溶于四氢呋喃(THF) 25 ml中，然后依次加入2.49 g N，N' -二环己基碳二亚胺(DCC)和1.62 g的1-羟基苯并三 氮唑(H0Bt);炔丙胺(0. 165g)以5 ml THF混匀后加入反应器中，反应2h，用茚三酮指示 剂检测反应，反应产物用3X20 ml的EA和10ml的水洗涤；用体积比为2:3的TFA/DCM去除侧链 羧基保护基团0tBu,用3X20ml的EA和10ml的水洗涤；旋转蒸发蒸出溶剂，真空干燥得到白 色固体，艮卩Fmoc-Asp-p:ropa:rgyl。
作为一种改进，为了能用Click Chemistry方法，所述叠氮甘氨酸(Azido-glycine)通 过以下方式制得
(1) 将6g叠氮钠(NaN3)溶解于150ml的圆底烧瓶中，再加入24ml的DCM，冰浴冷却至 (TC，搅拌20分钟；反应混合物用2X12ml的DCM萃取；合并有机相，用饱和碳酸钠(NaHC03) 洗涤，即得到溶解于DCM的三氟甲磺酰叠氮，无需进一步纯化直接加入下一步反应使用；
(2) 将0.675 g甘氨酸、1.783 g的碳酸钾(K2C03) 、 0.0226 g的硫酸铜(CuS04)加 入到圆底烧瓶中，再加入30ml水、60 inl甲醇和48 ml含有三氟甲磺酰叠氮的DCM，在室温下 搅拌，反应24小时；随后将反应混合物减压旋转蒸发去除有机溶剂，剩下的部分用150 ml 水稀释，然后用盐酸调pH值至6，加磷酸缓冲液稀释，再用4X60 ml的EA萃取以去除有机相 中的磺胺副产物；水相再用盐酸调pH值至2，用3X60 ml EA萃取；合并有机相，用硫酸镁(MgS0j 干燥，减压干燥，得到金黄色的油状液体，即为Azido-glycine.对最终产物整合素配体环肽的纯化可采用以下方式
高效液相制备色谱C18柱，A相HTFA/水溶液，B相乙腈，粗肽线性及环化均为 5%-35%B， 20min梯度，梯度根据分析色谱出峰时间确定。
本发明的合成路线是
首先甘氨酸在三氟甲磺酸酐、叠氮钠的作用下生成Azido-glycine, Fmoc-Asp(tBu)-OH 在溶液中与炔丙胺縮合生成Fmoc-A印-Propargyl，然后将炔丙酰天冬氨酸的侧链羧基挂在 2-CTC树脂上后依次縮合Fmoc-Gly-0H、 F陽c-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Xaa-OH和Azido-glycine 生成线性的四肽类似物，再将线性的四肽类似物从树脂上切下来，在液相的条件下(DCM作 溶剂，CuBr/DBU作催化剂)，室温下反应4-6小时合成环肽类似物环[-精氨酸-甘氨酸-天冬 氨酸-三唑环代-甘氨酸-可变氨基酸-]BPCyclo [-Arg -Gly-Asp- V (triazole) -Gly-Xaa-]。
环肽类似物cycl0[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Xaa-]的合成路线(Scheme 1.)是
Fmoc
>=NH 5
pbf HN
Xaa-Gly，AlaJxu,Ile,Cys,Met,Asp,Asn^ ;f Glu,Lys,Arg,His,Phe,Trp,Pro,O,Gly-Gly. pu'
7 6
Scheme 1. Strategy for synthesis of cyclo [-Arg-Gly-Asp-V(triazole)-Gly-Xaa-]. Reagents and conditions: (i) (1) DCC/HOBt, THF, pH=7, r丄，2h; (2)TFA/DCM= 2:3 (V:V); (ii) TBTU, N廳，20°C 40°C， 2h 4h; (iii) (1) 20% piperidine/DMF， 30 60 min; (2) EDC/H0Bt， DIPEA, r. t. ， 4h 6h; (iv) CuBr/DBU=l: 3, DCM， r. t. ， 6h; (2) TFA/H20/TIPS=95:2. 5:2. 5.
71.叠氮甘氨酸(Azido-glycine)的合成路线(Scheme 2.)是
H2N-
9\K2C。3， CuS04 义
、、-OH ^~^-^ VOH
MeOH， H20 n3-overnight， rt
Scheme 2. Synthesis of Azido-glycine.
2.炔丙酰天冬氨酸(Fmoc-Asp-Propargyl)的合成路线(Scheme 3.)是
Fmoc rt、 qhn
Fmocq ^ Fmos，2 DCC HOBt —人TFA HN
、| THF, 2h，r丄 |^ H DCM，lh,r.t. I HC。2旧u 川 C02Bu
殳J
COOH3
Scheme 3. Synthesis of Fmoc-Asp-Propargyl3.环化路线(Scheme 4.)是
NH
Hty人pbf
、NH
HO、
、0
O H。、
Oh 。
NY。
r^N3 CuB"leq.)/DBU(3，.)
—O L i DCM,r.t.,6h、N' v。。广N八0hXaa h
Scheme 4. Synthesis for a series of cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Xaa-
与现有技术相比，本发明的有益效果是(l)本发明中的整合素配体环肽类似物引入了氮杂环(三唑环)，可能会增加生物活性;
NaN3
-F3C、 ，3
DCM, H20 n々、CTC, 2h Q o1
3
Lr
c
o=s=or。
c、 o
3
F(2)本发明的整合素配体环肽类似物的环化方法更加简便、高效，条件温和。
具体实施例方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
1. 叠氮甘氨酸(Azido-glycine)的合成(根据重氮转移的原理)1.1三氟甲磺酰叠氮的制备
将叠氮钠(6g)溶解于150 ml的圆底烧瓶中，再加入24ml的DCM，冰浴冷却至0'C，搅拌20分钟。反应混合物用DCM萃取(2X12 ml).合并有机相，用饱和碳酸钠洗涤，即得到溶解于DCM的三氟甲磺酰叠氮，无需进一步纯化直接加入下一歩反应使用。
1.2叠氮甘氨酸的制备
将甘氨酸(0.675 g) ， K2C03 (1.783 g) ， CuS(X (0.0226 g)加入到圆底烧瓶中，再加入水(30 ml)，甲醇(60 ml)和含有三氟甲磺酰叠氮的DCM(48 ml)，在室温下搅拌，反应过夜。随后，将其减压旋转蒸发去除有机溶剂，剩下的部分用水(150 ml)稀释.然后用盐酸调pH值至6，加磷酸缓冲液稀释，再用EA(4X60 ml)萃取以去除有机相中的磺胺副产物。水相再用盐酸调pH值至2，用EA萃取(3X60ml).合并有机相，用MgS04干燥，减压干燥，得到金黄色的油状液体。
2. 炔丙酰天冬氨酸的制备
将Fmoc-Asp(0衡)-OH (0.93 g)溶于THF (25 ml)加入100 ml的圆底烧瓶中，然后依次加入DCC, (2.49 g)和HOBt(1.62 g).炔丙胺用THF (5 ml)混匀后加入反应器中，反应2h，用茚三酮指示剂检测反应，用EA (3X20ml)和水(10ml)洗涤。用TFA/DCM (V: V=2:3)去除侧链羧基保护基团OtBu，用EA(3X20ml)和水(10ml)洗涤。旋转蒸发蒸出溶剂，真空干燥得到白色固体，艮卩F腦-Asp-propargyl。
3. 将Fmoc-Asp-propargyl挂在2-CTC树脂上，合成线性的四肽类似物称取lg2-CTC树脂于固相反应器中，加DCM15ml溶胀，洗涤树脂。往溶胀好的树脂中
加Fmoc-Asp-propargyl和DIPEA，室温下反应2. 5小时，用EA (3X20 ml)和水(画)洗涤。用2(f/6的哌啶/DMF溶液脱除Fmoc，反应20分钟。用EA(3X20 ml)和水(10ral)洗涤，加入Fmoc-Gly-0H、 HBTU和N腿至反应器中，反应2小时，用茚三酮指示剂检测反应，用EA (3X20ml)和水(10nil)洗涤。用20X的哌啶/DMF溶液脱除Fmoc，反应20分钟。用EA (3X20ml)和水(10ml)洗涤。采用相同的操作步骤，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-OH、 Fmoc-Xaa-0H和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
4. 环化将线性的全保护的四肽类似物从树脂上切下来，用裂解液TFA/DCM (2:8),
9可加几滴AcOH，裂解2小时，旋干裂解液。在液相的条件下(DCM作溶剂，CuBr/DBU作催化剂)，室温下反应4-6小时，反应后旋去DCM，加裂解液去除侧链保护裂解2h，旋去裂解液，加冰乙醚沉淀，离心除去上清液得到固体，即环肽类似物Cyclo[-Arg-Gly-Asp-Mf (triazole)- Gly-Xaa-]，送分析纯化。5.纯化条件
分析高效液相分析色谱(RP-HPLC) ， C18柱，流动相A相l;TFA/水溶液。B相乙腈，粗肽线性及环化均为5义-35y。B，20min梯度。紫外检测波长为210nm。纯化高效液相制备色谱C18柱，A相和B相均与分析条件一样。
实施例1:
1. Cyclo[-Arg-Gly-Asp-V (triazole)-Gly-Gly-] (7a)的合成
1. 叠氮甘氨酸(Azido-glycine)的合成(根据重氮转移的原理)1.1三氟甲磺酰叠氮的制备
将叠氮钠(6g)溶解于150 ml的圆底烧瓶中，再加入24ral的DCM，冰浴冷却至0'C，搅拌20分钟。反应混合物用DCM萃取(2X12ml).合并有机相，用饱和碳酸钠洗涤，即得到溶解于二氯甲烷的三氟甲磺酰叠氮，无需进一步纯化直接加入下一步反应使用。1.2叠氮甘氨酸的制备
将甘氨酸(0.675 g) ， K2C03 (1.783 g) ， CuS04 (0. 0226 g)加入到圆底烧瓶中，再加入水(30ml)，甲醇(60 ml)和含有三氟甲磺酰叠氮的二氯甲烷(48 ml)，在室温下搅拌，反应过夜。随后，将其减压旋转蒸发去除有机溶剂，剩下的部分用水(150 ml)稀释.然后用盐酸调pH值至6，加磷酸缓冲液稀释，再用EA(4X60 ml)萃取以去除有机相中的磺胺副产物。水相再用盐酸调pH值至2，用EA萃取(3X60ml).合并有机相，用MgS04干燥，减压干燥，得到金黄色的油状液体。
2. 炔丙酰天冬氨酸的制备
将Fmoc-Asp(OtBu)-OH (0.93 g)溶于THF (25 ml)加入100 ml的圆底烧瓶中，然后依次加入DCC (2.49 g) and H0Bt(1.62 g).炔丙胺用THF (5 ml)混匀后加入反应器中，反应2 h，用茚三酮指示剂检测反应，用EA (3X20 ml)和水(10ml)洗涤。用TFA/DCM (V: V二2:3)去除侧链羧基保护基团OtBu.，用EA (3X20ml)和水(lOml)洗涤。旋转蒸发蒸出溶剂，真空干燥得到白色固体，即Fmoc-Asp-propargyl。
3. 将Fmoc-Asp-propargyl挂在2-CTC树脂上，合成线性的四肽类似物200910096516.X
称取lg 2-CTC树脂于固相反应器中，加DCM 15ml溶胀，洗涤树脂。往溶胀好的树脂中加Fmoc-Asp-propargyl和DIPEA室温下反应2.5小时，用EA (3X20 ml)和水(10ml)洗涤。用2(M的哌啶/DMF溶液脱除Fmoc，反应20分钟。用EA (3X20ml)和水(10ml)洗涤，加入Fmoc-Gly-0H、 HBTU和NMM至反应器中，反应2小时，用茚三酮指示剂检测反应，用EA(3X20ml)和水(10ml)洗涤。用2(W的哌啶/DMF溶液脱除Fmoc,反应20分钟。用EA(3X20ml)和水(10iTil)洗涤。采用相同的操作步骤，依次縮合Fraoc-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Gly-OH和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
4. 环化将线性的全保护的四肽类似物从树脂上切下来，用裂解液TFE/DCM (2:8)，可加几滴AcOH，裂解2小时，旋干裂解液。在液相的条件下(DCM作溶剂，CuBr/DBU作催化剂)，室温下反应4-6小时，反应后旋去DCM，加裂解液去除侧链保护裂解2小时，旋去裂解液，加冰乙醚沉淀，离心除去上清液得到固体，即环肽类似物Cyclo[-Arg-Gly-Asp- w (triazole)-Gly-Gly-]，送分析纯化。
5. 纯化条件
分析高效液相分析色谱(RP-HPLC) , C18柱，流动相A相HTFA/水溶液。B相乙腈，粗肽线性及环化均为5%-35%B, 20min梯度。紫外检测波长为210nm。纯化高效液相制备色谱C18柱，A相和B相均与分析条件一样。
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Gly-] (7a). White solids, mp: 162-164 。C;《=+23. 2 (c = 1. 0 in CHC13) ; NMR (500 MHz， DMS0-4) : S 1. 40 (2H， d)' 1. 50-1. 56 (1H,m), 1.71-1.79 (1H， m), 2.71-2.77 (2H， m)， 3.07-3.11 (2H, m) ， 3.48 (1H, /=5.0Hz,d), 3.69 (1H, /= 5.8 Hz, d), 3.79-3.89 (2H, m), 4.26 (2H， /= 14.2, 6.9 Hz, dd)，4.45 (2H， s), 4.54 (2H' /=6.3Hz， d)， 5.05 (1H， s), 5.29 (1H, s), 7.50 (1H, s),7.68 (2H， s)， 7.83 (1H' /=5.9Hz， d)， 8.03 (1H， /= 8. 7 Hz, t) ， 8.28 (1H, /=5.9Hz, d), 8. 42 (1H, 7. 1 Hz, t), 8. 84 (1H, 5. 8 Hz， t) ; 13C醒R (125 MHz, DMSO-oO :S 26.2， 26.6, 29.6， 35.3, 35.9, 36.5， 42.9, 43.3, 44.3， 51.5, 52.8， 124.4， 157.8,167.8， 169.7, 170.0, 171.7， 172.5, 172.8; IR (KBr, cm—1): 3393, 3073, 2932' 1667, 1538,1417， 1331， 1201, 1136, 1058, 1024; HRMS: Calcd for C19H3。Nu07 (M+H)+， 524.2341， Found524. 2369.实施例2:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-W (triazole)-Gly-Ala-] (7b)的合成本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
11第3步中，依次缩合Fmoc-Arg (Pbf) -OH、芴甲氧羰基-丙氨酸(Fmoc-Ala-0H)和
Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg—Gly—Asp—V (triazole)-Gly—Ala—] (7b). White solids, mp: 164—165 °C: ["E=+56.3 (c = 1.0 in CHC13);力NMR (500 MHz， DMS0-oQ : S 1.23 (1H, / = 6. 3 Hz， d)，1.28 (2H, /=7.0Hz， d)， 1.38-1.45 (2H， m)， 1.87-1.93 (2H， m) ， 2.67-2.75 (2H， m)，2.89 (2H' s)， 4.12-4.19 (3H， m)， 4,21 (1H' / = 5.0 Hz, d), 4.28 (IH， / = 6.3 Hz，d)， 4.39 (1H,14.3， 7.2 Hz, dd), 4.40 (IH， /= 7. 1 Hz, d), 5.07 (IH， / = 6.3Hz, d), 5.27 (1H, /= 16.6 Hz， d)， 6.92 (2H， s)， 7.36 (2H， s)， 7.63 (1H, s)， 7.88(1H, /=7.8Hz， d)， 8.26 (1H, /=8.5Hz， d)， 8.35 (1H， /=6.9Hz， t)' 8.48 (1H,/=7.5Hz， d)' 8.78 (1H， /=5.8Hz, d)， 12.38 (1H, s) ; 13C NMR (125MHz, DMS0-cQ :S 18.6, 24.5， 26.2' 27.1' 29.4, 30.0, 32.9， 36.1' 43.0， 49.1, 51.2， 54.6' 124.5，157.8, 169.9, 170.2, 171.7' 172.8, 173,0， 173.6; IR (KBr， cm—1): 3361， 3063， 2980，2936, 1673, 1538， 1426, 1384， 1326, 1202, 1133， 1058; HRMS: Calcd for C2。H32Nu07 (M+H)+，538.2481, Found, 538.2468.实施例3:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- V (triazole) -Gly-Leu-] (7c)的合成
本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -0H、芴甲氧羰基-亮氨酸(Fmoc-Leu-OH)和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[_Arg_Gly_Asp_ilf (triazole)-Gly-Leu-] (7c). White solids, mp: 167-169 °C;[《=-61.2 (c = 1.0 in CHC13); 'H醒R (500MHz,函S0-4) : S 0.86 (3H, /= 6.5 Hz, d)，0.91 (3H， /=6.5Hz, d), 1.47-1.55 (5H， m), L69-1.76 (2H' m)， 2.74-2.82 (2H, m)'3.09 (2H, /= 6.8 Hz, t), 3.94 (1H, 6.8 Hz， d) ， 4.05 (2H， s)， 4.21 (1H, s)，4.44 (IH， 14.1, 7.1 Hz， dd), 4.65 (1H, _/= 16.3 Hz, d)， 5.03 (IH， / =6.3 Hz,d), 5.28 (IH， /=6.3Hz， d)， 6.93 (2H， s), 7.37 (2H, s) ， 7.61 (IH， s)， 7.86 (1H,/= 7. 5 Hz， d), 8.09他6.0 Hz, t) ， 8.35 (IH， /= 6.6 Hz， d)， 8.47 (1H, / =7.7 Hz， d)， 8.63 (IH， 6.6 Hz， d) ， 12.22 (1H， s) ; '3C腿(125MHz， DMS0-c/《) S22.1， 23.7, 24.9， 25.7' 30.1' 35.7, 36.3' 42.6, 50.7, 52.6, 52.7' 53.8, 123.7, 147.0,157.4， 167.0, 169.4， 171.2， 172.3， 172.5, 172.8; IR (KBr， cnf1) : 3404， 3084, 2959， 2871， 1667' 1538， 1470， 1417, 1384， 1202， li38, 1057， 1019; HRMS: Calcd for (:2孔81^07 (M+H)+' 580.2939. Found, 580.2975. 实施例4:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-V (triazole)-Gly-Ile-] (7d)的合成
本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次缩合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、芴甲氧羰基_异亮氨酸(Fmoc-Ile-OH)和 Az i do-gl yci ne生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[—Arg-Gly—Asp—￥ (triazole)-Gly-Ile-] (7d). Yellow solids, mp: 167-168 °C; [a￡5 =+25.3 (c = 1. 0 in CHC13) ; 醒R (500MHz, DMS0-: S 0.82-0.91 (6H, m)' 1.40-1.47 (4H， m)， 1.62-1.74 (2H， m)， 1.80-1.87 (1H, m)， 2.74-2.81 (2H, m)， 3.09 (2H， 6. 3 Hz， d), 3.95 (IH' /= 6.4 Hz， d)， 4.02 (2H, 7.0 Hz， d)， 4.10 (1H, ./= 5.3 Hz, d)， 4.44 (1H, /= 14.2' 7. 5 Hz, dd), 4.88 (1H, s) ， 5.11 (1H, s)， 5.28 (1H, /= 16.1 Hz, d), 6.95 (2H' s)， 7,37 (2H, s)' 7.63 (1H， s), 8.11 (IH， / = 6.3 Hz， d), 8.27 (1H, /=8.4Hz， t), 8.36 (1H, /=6.9Hz， d), 8.44 (1H, /=7.9Hz, d)， 8.52 (IH， /=6.6Hz, d), 12.35 (IH， s) ; 13C纖(125MHz, DMSO-oQ : 5 12.4， 12.5, 25.9， 29.7, 30. 3' 36. 4' 42. 9， 50. 8' 51. 0， 53. 1' 53. 4， 53. 7， 59. 3, 60. 2， 124. 2, 147. 4, 157. 8, 167.1, 169.8， 171.6, 172.3' 172.9, 173.0; IR (KBr， cm—1): 3404, 3084， 2959, 2871, 1667， 1538, 1470, 1417， 1384' 1202, 1138， 1057' 1019; HRMS: Calcd for C23H38Nu07 (M+H)+， 580.2950. Found, 580.2946. 实施例5:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- v (triazole) -Gly-Cys-] (7e)的合成
本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf) -0H、芴甲氧羰基-三苯甲基-半胱氨酸[Fmoc-Cys (Trt) -OH] 和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Aspi (triazole)-Gly-Cys-] (7e). White solids, mp: 189-190 °C; [ E = -47. 5 (c = 1. 0 in CHC13) ; 'H醒R (500MHz, DMS0-: S 1. 36 (2H，6. 5 Hz,d), 1.44-1.52 (1H, m), 1.62—1.71 (1H, m) ， 2.53-2.64 (2H, m)， 2.89 (2H, /二6.2Hz' d), 3.69 (1H, /= 6. 1 Hz， d〉， 3.72 (1H, / = 6.4 Hz, d), 4.31 (H， / = 6.6 Hz， d), 4.39 (2H, /= 14.3， 7.1 Hz' dd), 4.56 (2H, /= 6.3 Hz, d), 4.61 (2H， / = 6,3 Hz, d), 6.16 (2H, ./= 7.5 Hz, d) ， 6.79 (2H, s), 7.23 (2H' s)' 7.80 (1H， s), 8.12 (1H， /= 6.7 Hz， d)， 8.29 (1H'7.1 Hz， t)， 8.47 (1H， /= 6.6 Hz, d)' 8.54 (1H， / = 6.7Hz, t), 8.75 (1H， /=6.8Hz, t), 12.36 (1H, s) ; I3C醒R (125MHz' DMS0-^) : S 24.2, 26.3' 27.4, 27.7, 29.2， 30.5， 32.3' 36.1, 43.3, 49.3， 51.7， 56.3， 124.8, 156.8， 169.3, 170.5, 171.7， 172.3, 173.2, 173.9; IR (KBr, cnf1) : 3373， 3079， 2926， 2849， 1667, 1538, 1417' 1384, 1331， 1201, 1136, 1057， 1019; HRMS: Calcd for C23H38N 07S (M+H)+, 570.2183. Found, 570.2142. 实施例6:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- ur (triazole)-Gly-Met-] (7f)的合成
本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、芴甲氧羰基-甲硫氨酸(Fmoc-Met-0H )和 Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- V(triazole)-Gly-Met-] (7f). Yellow solids， mp: 193_195°C;[《 =-85. 6 (c = 1.0 inCHCl3); , (500MHz, DMS0-: S 1.42-1.49 (2H, m), 1.60-1.67 (m， m)， 1.76-1.84 (1H' m), 1.97 (1H' s)， 2.02 (1H， s), 1.92—2.05 (3H， m), 2.34-2.42 (2H， m), 2.67 (1H, s), 3.09 (3H， 6.0 Hz, d)' 3.72-3.83 (2H， m)， 4.28 (2H， / = 15.3， 6.7Hz， dd)， 4.41 (1H, s)， 4.57 (1H, /=5.4Hz, d), 5.17 (2H' /- 14.8 Hz, d)， 7.49 (1H， s)' 7.79 (1H, /=8.9Hz, d), 8.21-8.27 (1H, m)， 8.33 (1H, s)， 8.42 (1H， s), 8.60 (m, s), 12.38 (1H, s) ; 13C醒R (125 MHz, DMS0—oQ : S 15.8, 26.2 29.4, 30.6, 33.5， 35.7， 37.5, 41.2' 41.6, 43.1， 50.7, 53.3, 53.5, 125.5， 129.6， 145.7, 157.9, 166.6， 169.8, 171.4, 171.9， 172.8, 172.9; IR (KBr， cnf1) : 3383， 3073， 2932， 2849， 1661， 1538， 1434, 1384， 1201， 1137， 1047; HRMS: Calcd for C22HseNu07S (M+H)+， 598.2435. Found, 598.2471.
实施例7:
Cyclo[-Arg-Gly—Asp- v (triazole)-Gly-Asp-] (7g)的合成
14本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -OH、芴甲氧羰基-天冬氨酸-4-叔丁酯[F咖c-Asp (0tBu) -0H]和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-V(triazole)-Gly-Asp-] (7g). White solids, mp: 193-195°C; ["K=+23. 4 (c 二 1. 0 in CHC13) ; W函R (50(MHz, DMSO-d) : S 1. 41-1. 44 (2H, m), 1. 56 (2H,/=9.4Hz， d), 2.57-2.63 (IH， m), 2.76-2.83 (1H, m) ， 3.07-3.11 (2H， m)， 3.90 (2H,/=6. 3 Hz, d), 4.13 (1H， s)， 4.25 (IH， /= 4. 7 Hz, d)， 4.40 (1H， /=14. 7, 7. 7 Hz,dd)， 4.56-4.51 (1H， m), 5.11 (1H, / =16.7 Hz, d), 5.26 (1H， /=16.6Hz， d)， 7.01(2H， s)' 7.26 (1H, s)， 7.51 (1H, s)， 7.65 (1H， s)， 7.89 (1H, /=8.0Hz， d), 7.99(1H' /=5.6Hz， t), 8.35 (IH' 6.7 Hz' d)' 8.47 (1H, /=7.4Hz, d), 8.86 (IH'/=6. 6Hz， d)' 12.38 (2H, s) ; 13C丽R (125MHz' DMSO—: S 26.0, 30.3, 36.1， 36.6，36.9, 40.2, 43.0， 51.3， 52.4, 53.0， 53,1, 124.4， 147.3， 157.8, 167.6， 169.7，171.6,172.5， 172.6， 172.9; IR (KBr， cm—1): 3375' 3216, 3073， 2936' 1667, 1538， 1416，1384， 1331, 1200， 1137， 1058， 1024; H丽S: Calcd for C21H32Nu09 (M+H)+' 582.5467. Found,582. 5423.
实施例8:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- v (triazole)-Gly-Asn-] (7h)的合成
本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf) -0H、芴甲氧羰基-三苯甲基-天冬酰胺[Fmoc-Asn(Trt) -OH]和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-￥ (triazole)-Gly-Asn-] (7h). White solids' mp: 187-190。C;[《=+42.8 (c = 1.0 in CHC13);力N腿(500腿z, DMS0-d) : S 1.43 (2H， / = 6. 8 Hz, d)，1.52-1.59 (1H' m)， 1.78-1.84 (1H， m)， 2.76-2.87 (2H， m), 3.01-3.09 (4H， m)， 3.53-3.58(2H, m), 3.89 (1H, s)， 4.13 (IH， s) ， 4.38 (IH， /= 14.. 4， 7.1 Hz, dd), 4.56 (1H,s)， 5,13 (1H,16.6 Hz, d), 5.25 (IH，16.7 Hz, d)， 7.01 (2H， s)， 7.45 (2H，
15s), 7.64 (1H' s)' 7.82 (1H, s)， 7.97 (1H， s), 8.33 (1H, /=5.6Hz, t), 8.46 (m，/=7.4Hz， d)， 8.71 (1H, /=6.8Hz, d), 12.31 (1H, s) ; 13C ,R (125MHz, DMS0-《)S 25.9， 30.2， 36.0, 36.5， 37,4' 41.5, 42.9， 51.3, 52.4, 52.9， 53.1, 124.4， 147.2，157.8， 167.5, 169.7, 171.6' 172.0, 172.2, 172.6，72.9; IR (KBr， cm1): 3350， 3210,3073， 2931， 1669， 1538， 1417， 1386' 1336， 1201, 1136， 1059, 1030; HRMS: Calcd forC21H33N,20s (M+H)+, 581.2568. Found, 581.2562.
实施例9:
CycloC-Arg-Gly-Asp-V (triazole)-Gly-Glu-] (7i)的合成本实施例中的步骤与实施例1相同，其中
第3步中，依次缩合Fmoc-Arg (Pbf) -0H、芴甲氧羰基-谷氨酸-4-叔丁酯[Fmoc-Glu (0tBu) -OH]
和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- V (triazole)-Gly-Glu-] (7i). Yellow solids' rap: 197-199 °C;[a]2D5= -108. 4 (c = 1.0 in CHC13) ; LH腿R (500隨z, DMS0-&) : S 1.42 (1H, s)' 1.54 (IH，s), 1.80 (1H, s), 2.01 (1H， s), 2.34-2.39 (IH， m), 2.79 (1H, /= 6. 4 Hz, t), 3.07-3.13(2H， m), 3.45-3.53 (1H, m), 3.95 (IH， /=6.7Hz， d)， 4.02—4.09 (1H, m) ， 4.13 (IH,/=14.3， 6.6 Hz' dd), 4.24 (1H, /=5.0Hz， d)， 4.41 (IH, /= 7. 1 Hz, d), 4.58 (IH,/=6.3 Hz, d), 5,07 (1H, s), 5.33 (IH, 16.5 Hz, d), 7.57 (2H' s)， 7.87 (IH,s), 8.01 (IH' /= 5.5 Hz' d)' 8.34 (IH' / = 5.7 Hz' t) ， 8.46 (1H, /=7.4Hz， d)，8.71 (IH, /=6.2 Hz, d)， 12.36 (2H， s) ; 13C NMR (125MHz， DMSO-oQ : S 26.1， 27.6'30.5, 31.4， 36.1, 36.6， 42.9, 51.2, 52.9， 53.1, 55.3， 124.3, 147.3, 157.9, 159.3，159.5， 167.7， 169.8, 171.6， 172.7, 172.9, 174.8; IR (KBr， cnf1) : 3419， 3073, 2948,2558, 1668， 1652， 1557, 1538, 1413, 1380, 1178， 1052， 1024; HRMS: Calcd for C22H:i4N 09(M+H)+， 596.2546. Found, 596.2544.
实施例10:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- V (triazole)-Gly-Lys-] (7j)的合成
本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次缩合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、荷甲氧羰基-N e-叔丁氧羰基-赖氨酸[Fraoc-
16Lys(Boc)-0H]和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Lys-] (7j). White solids, mp: 178-180 °C; ["E=+78.5 (c = 1.0 in CHC13) ; 画R (500 MHz,丽S0-aQ : S 1.42-1.49 (4H, m), 1.59他/=4.7Hz, d)， 2.50-2.53 (2H， m) ， 2.78-2.85 (4H' m)' 3,13 (2H, / = 6.2 Hz,d)， 4.08 (IH' /=6.2Hz， d), 4.12 (1H, s), 4.26 (1H， s)， 4.47 (2H'14.2， 7.0Hz, dd), 5.12 (2H' /= 16.3 Hz， d)， 5.21 (2H， s)， 6.96 (2H, s), 7.35 (2H, s), 7.79(1H， s)， 8.08 (1H， /=5. 4 Hz, t) ， 8.22 (1H, /= 8. 4 Hz, d), 8.32 (1H, s), 8.44 (111,7.6Hz， t)， 8.78 (1H, /=6.7Hz, t)' 12.37 (1H' s) ; 13C醒R (125MHz, DMS0-oQ :S 22.3， 24.6, 26.4， 27.3, 28.9， 29.4' 30.6, 32.5, 32.9， 36.4， 43.0， 43.8， 49.4，51.3， 54.5, 124.3， 157.3, 169.8, 170.4, 171.5' 172.3， 173.2, 173.5; IR (KBr, cm—'):3393, 3073' 2932' 1667' 1538， 1417, 1338, 1201， 1136, 1058， 1024;醒S: Calcd forC23H39N1207 (M+H) +, 595. 3056, Found' 595. 3085.
实施例11:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- W (triazole)-Gly-Arg-] (7k)的合成
本实施例中的步骤与实施例1相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[_Arg_Gly-Asp-V (triazole)-Gly-Arg-] (7k). White solids' mp: 162-164 °C;[《=+58. 9 (c 二 1. 0 in CHC13) ; 'H醒R (500 MHz， DMSO-4) : 5 1. 41-1. 50 (2H， m), 1. 55-1. 63(4H， m), 1.71-1.80 (2H' m), 2.74-2.83 (1H, m), 3.12 (4H, /=5.8 Hz, d), 3.45-3.52(1H, m)， 3.94—4.00 (2H, m), 4.14 (1H, /= 4. 7 Hz, d)， 4.23 (IH， /=5.5Hz， d)， 4.43(IH， /= 14.4, 7.0 Hz, dd), 5.06 (IH， /= 16. 5 Hz, d)， 5.31 (1H, s), 7.63 (IH， s),7.70 (2H， s)， 7.91 (1H' /=7.5Hz， d)' 8.05 (1H' /=5.6 Hz, t), 8.36 (1H， /=6.0Hz， t)， 8.49 (1H， /= 7. 5 Hz， d), 8.76 (1H, ./= 6.4 Hz, d)' 12.36 (1H' s) ; 13C醒R(125 MHz, DMSO—: S 24. 6， 27. 7， 27. 9， 29. 5， 31. 0， 32. 3， 37. 8, 43. 8, 52. 7, 52. 3,54.8, 124.8, 157.9, 169.9, 170.2, 171.2, 172.5, 173.3， 173.9; IR (KBr, cm—1): 3393，3212, 3073， 2932， 1667， 1538， 1417， 1331， 1201, 1136, 1058, 1024; HRMS: Calcd for C23H39N1407 (M+H)+, 623.3121， Found, 623.3120.
实施例12:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp—V (triazole)-Gly-His-] (71)的合成 本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次缩合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、芴甲氧羰基-三苯甲基-组氨酸[Fmoc-His(Trt)-OH] 和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-His-] (71). White solids, mp: 176-178 。C; ["E =-104. 6 (c = 1. 0 in CHC13) : 'H NMR (500 MHz, DMSO-: S 1. 41 (2H,5. 9 Hz, d), 1.51-1.58 (1H, m)， 1.79 (1H, s)， 2.76 (1H， /=5.8Hz， d) ， 3.09—3.16 (2H, m)， 3.56 (1H, /=4.9Hz, d), 3.90-3,96 (1H, m)， 4.16 (1H' /二5.3Hz, d), 4.25 (1H, /=5.3 Hz， d)，4.41 (2H， /=7.4Hz， d)， 4.53 (1H, /=14.2, 7. 0 Hz， dd) ， 5.06 (1H, /=16. 6 Hz, d), 5.29 (2H, /= 16.4 Hz， d)， 7.45 (1H, s)， 7.61 (2H, /=6.9Hz， t), 7.94 (IH' 7. 5 Hz, d)， 8.08 (IH， /= 5.8 Hz， t) ， 8.36 (1H, / = 6. 0 Hz， d), 8.47 (1H, / = 7.2 Hz, d)， 8.85 (1H, /=7.2 Hz, d), 8.99 (1H, /=6.3 Hz, d), 12.40 (1H， s) ; 13C 腿R (125 MHz， DMS0-: S 26. 0' 27. 4， 30. 4, 36. 1， 36. 7, 41. 4， 43. 0， 51. 3， 53. 0， 53.2, 54.8， 118.3， 124.3' 135.2, 147.3， 157.8, 167.6， 169.7， 171.0' 171.7' 172.5， 172.8; IR (KBr， cm-1): 3393, 3073， 2932, 1667， 1538， 1417， 1331, 1201, 1136, 1058, 1024; HRMS: Calcd for C23H34N1307 (M+H)+， 604.2653, Found, 604.2672.
实施例13:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- w (triazole)-Gly-Phe-] (7m)的合成
本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次缩合Fmoc-Arg (Pbf) -OH、芴甲氧幾基-苯丙氨酸[Fmoc-Phe-OH]和 Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v(triazole)-Gly-Phe-] (7m). Yellow solids' mp:187-89 °C:+54. 8 (c = 1. 0 in CHC13) ; !H隨R (500顧z, DMSO-《)5 1, 52-1. 61 (2H' m), 1. 88-1. 97(2H, m), 2.63-2.75 (2H， m), 2.89 (1H, s)， 3.11 (3H, /= 5. 9 Hz， d), 3.82 (1H, /=14. 3，6.3Hz， dd), 4.19 (1H, /=14.2, 6.5 Hz， dd) ， 4.23 (1H, /=5.8Hz, d), 4,30 (1H,/=7.1 Hz, d)， 4.58 (1H, s), 5.01 (1H, s), 5.04 (1H, s), 5.16 (1H， s), 7.18—7.27(5H, m), 7.61 (1H, /=7.0Hz, d), 8.15 (LH' s), 8.34 (IH， ./= 6. 0 Hz' t), 8.46 (1H,/=7.6Hz, d), 8.96 (1H, s), 12.35 (1H， s) ; 13C醒R (125 MHz, DMSO-4) : S 26.1,28. 5, 29. 4, 30. 4, 36. 1， 36. 7， 37. 8， 50. 5， 50. 6' 51. 1, 52, 6' 53. 0， 53. 2， 55. 2， 124. 2,127.6, 129.4， 129,7, 130.3, 130.4, 138.7, 167.4, 169.8, 171.6, 172.7， 173.5; IR (KBr，cm-'): 3352， 3068, 2931, 2849， 1667， 1538, 1457, 1434, 1384， 1331， 1201， 1136, 1084,1033; HRMS: Calcd for dN,A (M+H)+， 614.2794， Found, 614.2758.
实施例14:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- ￥ (triazole) -Gly-Trp-] (7n)的合成
本实施例中的步骤与实施例1相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -0H、芴甲氧羰基-叔丁氧羰基-色氨酸[Fmoc-Trp (Boc) -OH]和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp—iir (triazole)—Gly—Trp-] (7n). Yellow solids' mp: 173-175 °C; ["E=+69.7 (c = 1.0 in CHC13) ; 'H丽R (500 MHz， DMS0-: S 1.38 (1H， s) ， 1.51-1.58(2H, m), 1.77 (1H， s) ， 3.04-3.10 (2H, m), 3.16 (1H, s)， 3. 44(1H, s), 3,50—3.57 (1H,m), 3.65 (1H,5.2 Hz' d) ， 4.23 (1H, /= 5.7 Hz, d) ， 4.35 (1H， s), 4.43 (2H, /=14.2, 6.6 Hz, dd), 4.72 (IH， s) ， 5.05 (1H， s)' 5.17 (1H, s), 6.99-7.10 (2H, m)，7.33—7.37 (2H， m), 7.50—7.56 (2H， m), 7.60 (1H, s)， 7.93 (1H, s), 8.10 (1H, s)， 8.33(IH， /-9.4 Hz, d), 8.48 (1H, ,/= 7.5 Hz， t)， 8.67 (1H, s), 10.91 (1H, / = 12.6Hz' d)' 12.37 (1H， s) ; 13C NMR (125 MHz, DMS0-4): S 26.0, 28.2， 30,0, 36.7, 42.9,51.1, 53.0' 53.2, 56.7' 110.8， 112.6, 119.2, 119.6， 122.2， 124.2， 124.8， 28.2， 137.3,147.3, 157.8, 167.5， 169.8, 171.7, 172.1' 172.6， 172.7; IR (KBr， cm—1): 3393, 3073,2932， 1667, 1538， 1417， 1331， 1201， 1136, 1058, 1024; HRMS: Calcd for C28H37IV1207 (M+H)+,653.2846， Found, 653.2812.
实施例15:
Cyclo[-Arg—Gly—Asp—V (triazole)-Gly-Pro-] (7o)的合成 本实施例中的步骤与实施例1相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -0H、芴甲氧羰基-脯氨酸[Fmoc-Pro-OH]和Azido-glycine 生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[老g-Gly-Asp-w (triazole)-Gly-Pro-] (7o). White solids, mp: 162-164 °C; ["E =+86.7 (c = 1.0 in CHC13) ; 'H NMR (500 MHz, DMS0-: S 1.34-1.41 (4H, m) > 1.65-1.74 (6H， m), 2.53-2.64他m), 2.89 (2H， s)， 3.68 (1H,7.2 Hz, d)' 4.10 (IH' /=6.6Hz， d)， 4.27 (1H， s) ， 4.77 (2H， /= 14.2, 6.7 Hz, dd), 5.31 (2H， 17.3 Hz, d), 5.58 (2H, /= 17.3 Hz， d) ， 7.30 (1H， s)， 7.35 (IH， /= 7.7 Hz, t)， 7.74 (1H， s)' 8.15 (1H, /=8.7 Hz, d)' 8.38 (IH， /=4.7Hz， t)， 8.69 (1H, /=7.2Hz， d), 12.39 (1H, s); 13C醒R (125 MHz, DMSO-4): S 24.2， 25.7, 27.3， 27.9， 29.4, 30.6, 31.4' 32.7， 37.9, 43.9, 47.4, 49.3' 52.6' 64.8， 124.4, 157.3, 169.7， 170.5， 171.8, 172.9， 173.5， 173.8; IR (KBr， cm—1): 3385, 2946, 2746, 1629， 1585， 1451, 1376' 1317, 1267， 1170, 1037; HRMS: Calcd for C22H34N 07 (M+H)+, 564.2637, Found, 564.2622.
实施例16:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- ￥ (triazole)-Gly-] (7p)的合成
本实施例中的步骤与实施例l相同，其中
第3步中，依次缩合Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。 所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-] (7p). White solids, rap:153-155 。C; = +35.8 (c = 1.0 in CHC13);力丽R (500 MHz, DMS0-: S 1.51-1.63 (2H, ra), 1.73-1.85 (2H， m), 2.69-2.79 (2H' m)' 3.11 (2H， /=4.5Hz, d), 3.72 (2H, s) ， 3.87 (1H, s), 4.35 (2H, /=14.2， 6, 9 Hz， dd), 4.50 (1H, s)' 4.60 (1H' s), 5.15 (1H， s), 7.21 (1H, s), 7.54 (2H， /= 5. 1 Hz,s), 7.81 (1H， s), 8.24 (IH， / = 7.8 Hz, d)， 8.37 (IH'
20s), 8.65 (1H' /=4,9Hz， d), 12.39 (1H， s) : 13C NMR (125 MHz, DMSO-4) : S 24.8,27.6, 28.6, 29.6, 31.1， 32.4， 37.9, 49.8， 52.4， 54.7， 124.2， 157.6, 169.1, 171.3，172.4, 173.5, 173.8; IR (KBr, cm-1): 3393， 3073' 2932' 1667， 1538， 1417， 1331， 1201，1136, 1058， 1024; HRMS: Calcd for C17H27N1(A (M十H)+, 567.2039， Found, 567.2056.
实施例17:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Gly-Gly-] (7q)的合成
本实施例中的步骤与实施例1相同，其中
第3步中，依次缩合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Gly-OH 、 Fmoc-Gly-OH和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。
所得最终产物的理化分析数据如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v(triazole)-Gly-Gly-Gly-] (7q). White solids, mp:201-203°C;
= +35. 3 (c = 1. 0 in CHC13) ; W NMR (500 MHz, DMSO-oQ : S 1. 10 (2H， 9. 5 Hz，d), 1.31-1.42 (1H, ra)， 1.60-1.7丄(1H, m)， 2.56-2.62 (2H' m)' 2.76 (2H， /-4.8 Hz,d)， 3.69 (IH， 5. 1 Hz' d), 3.75 (1H, s), 3.86 (2H, 6.8 Hz， d), 4.35 (3H， /=14.2, 6. 7 Hz, dd), 4.46 (2H, /=4.9Hz, d), 5.22 (3H， /= 10. 9 Hz, d)， 6.72 (2H,s)， 7.34 (2H， /=8.4Hz, d)， 7.84 (IH， s), 8.07 (11 s—)一8,3—5 -(IH， /=7. 6 Hz, t),8.41 (IH， /=5.7Hz， t), 8,55 (1H, /=6.0Hz， t)' 9.09 (1H, /= 5.3 Hz， t)， 12.41(1H' s); UC NMR (125 MHz, DMSO-: S 25.9， 29.1， 36.1， 36.7, 41.5, 43.6, 44.2，44.9, 51.3, 52.4, 52.7， 125.1, 146.3， 157.7' 168.7， 170.2, 170.5, 171.6, 173.2; TR(KBr, cm—1): 3393, 3073' 2932， 1667， 1538， 1417, 1331, 1201， 1136' 1058， 1024; HRMS:Calcd for C21HMN1208 (M十H)+, 581.2597, Found, 581.2569.
2权利要求
1、一种整合素配体环肽类似物，其结构如下
2、 一种权利要求l所述的整合素配体环肽类似物的环化方法，包括以下步骤(1) 将Fmoc-Asp-propargyl挂在2-CTC树脂上，合成线性的四肽类似物称取lg 2-CTC树脂于固相反应器中，力nDCM15ml溶胀，洗涤树脂；往溶胀好的树脂中加Fmoc-Asp-propargyl和DIPEA，室温下反应2. 5h，用3 X 20 ml的EA和10ml的水洗涤；用20%的哌啶/DMF溶液脱除Fmoc，反应20分钟；用3X20 ni]的EA和10ml的水洗涤，加入Fmoc-Gly-0H、苯并三氮唑-N，N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N-甲基吗啉至反应器中，反应2h，用茚三酮指示剂检测反应，用3X20ml的EA和10ml的水洗涤；用20。/。的哌啶/DMF溶液脱除Fmoc，反应20分钟；用3X20 ml的EA和10ml的水洗涤；采用相同的操作步骤，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Xaa-OH和Azido-glycine生成线性的四肽类似物。(2) 环化将线性的全保护的四肽类似物从树脂上切下来，用裂解液2:8的TFE/DCM及数滴AcOH，裂解2h，旋干裂解液；在DCM作溶剂，CuBr/DBU作催化剂的液相条件及室温下反应4 6小时，反应后旋去DCM，加裂解液去除侧链保护裂解2h，旋去裂解液，加冰乙醚沉淀，离心除去上清液得到固体，即为最终产物整合素配体环肽。
3、根据权利要求2所述的整合素配体环肽类似物的环化方法，其特征在于，所述Fraoc-Asp (OtBu) -OH通过以下方式制得(1) 将6g叠氮钠溶解于150ml的圆底烧瓶中，再加入24ml的DCM，冰浴冷却至(TC，搅拌20分钟；反应混合物用2X12mlDCM萃取；合并有机相，用饱和碳酸钠洗涤，即得到溶解于DCM的三氟甲磺酰叠氮，无需进一步纯化直接加入下一步反应使用；(2) 将0.675 g甘氨酸、1.783 g的K2C03 、 0.0226 g的CuS04加入到圆底烧瓶中，再加入30ml水、60 ml甲醇和48 ml含有三氟甲磺酰叠氮的DCM，在室温下搅拌，反应24小时；随后将反应混合物减压旋转蒸发去除有机溶剂，剩下的部分用150ml水稀释，然后用盐酸调pH值至6，加磷酸缓冲液稀释，再用4X60 ml的EA萃取以去除有机相中的磺胺副产物；水相再用盐酸调pH值至2，用3X60mlEA萃取；合并有机相，用MgS04干燥，减压干燥，得到金黄色的油状液体，即为Fmoc-Asp(OtBu)-OH。
全文摘要
本发明涉及环肽类似物及其环化方法，旨在提供一种整合素配体环肽类似物及其环化方法。环化方法包括首先甘氨酸在三氟甲磺酸酐、叠氮钠的作用下生成Azido-glycine，然后在溶液中与炔丙胺缩合生成Fmoc-Asp-Propargyl，然后将炔丙酰天冬氨酸的侧链羧基挂在2-CTC树脂上后依次缩合生成线性的四肽类似物，再将线性的四肽类似物从树脂上切下来，在液相的条件下(DCM作溶剂，CuBr/DBU作催化剂)，室温下反应4-6小时合成环肽类似物。本发明的有益效果是(1)本发明中的整合素配体环肽类似物引入了氮杂环(三唑环)，可能会增加生物活性；(2)本发明的环化方法更加简便、高效，条件温和。
文档编号C07K5/00GK101492494SQ20091009651
公开日2009年7月29日 申请日期2009年3月5日 优先权日2009年3月5日
发明者刘雅琴, 徐宇虹 申请人:浙江大学