专利名称：一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种臭灵丹中倍半萜的提取方法，具体涉及一种从臭灵丹中提取臭灵 丹酸的工艺，属于植物提取领域。
背景技术：
臭灵丹酸(pterodontic acid)是天然存在的一种倍半萜类化合物，分子式C 15^22^2。杨光忠等用滤纸扩散法对臭灵丹酸和臭灵丹二醇的抑菌活性进行检测，结果表明 这两个化合物对金黄色葡球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、草分支杆菌和环状芽孢杆菌 均呈现明显的抑菌活性。臭灵丹[Laggera pterodonta ((DC. ) Beath]系菊科(Compositae)四棱峰(亦称 六棱菊)属植物。在云南民间，臭灵丹作为抗菌消炎、清热解毒的良药，一直被用来防止感 冒、咽喉炎、支气管炎、疟疾等。同时，也作为外敷药用来治疗疥疮、肿毒、烧烫伤、毒蛇咬伤、 跌打损伤等。另据药理报道，除祛痰作用和实验性急性气管炎有效外，还具有抗肿瘤活性， 对急性淋巴细胞型白血病，急性粒细胞型白血病及急性单核细胞型白血病患者的血细胞脱 氢酶均具有较强的抑制作用。全草含挥发油、倍半萜及其苷类和黄酮类成分，叶中含挥发油 约0. 05%。现代研究表明其所含化学成分复杂，具有多方面的药理活性，尤其在抗菌消炎应 用上具有广阔的发展前景。但目前对有效部位、有效成分以及药理机制的研究较少，说明了 臭灵丹还有很大的研究开发潜力。今后应加强成分的分离鉴定和药理研究，为研制出疗效 确切、副作用小和能广泛应用于临床的中药新药提供依据。臭灵丹酸一般是从臭灵丹中提取，目前国内外大多数报道主要是关于臭灵丹有效 成分的研究，而未见有从臭灵丹中提取臭灵丹酸的相关报道。
发明内容
本发明的技术方案包括药材干燥粉碎后经碱溶酸沉、有机溶剂萃取，树脂吸附洗 脱，将洗脱液浓缩干燥制得臭灵丹酸。因此，本发明提供一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺，步骤包括将臭灵丹根干 燥并粉碎至30-60目，经碱液浸取，将浸取液酸化至pHl-4，得沉淀物；收集沉淀物，以有机 溶剂萃取1-3次，浓缩萃取液，得浓缩物；浓缩物再经大孔吸附树脂柱，先以乙酸乙酯-甲醇 洗脱，得到臭灵丹酸富集流份，再浓缩上柱，用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，回收试剂， 浓缩干燥即得产品。所述碱液为氢氧化钠溶液、碳酸氢钠溶液、饱和石灰水、氨水等碱性水溶液，用量 为药材质量的5-12倍，室温下浸提，浸提时间8-M小时。所述酸为盐酸、醋酸、硫酸，体积百分比为0. 5-10%。所述有机溶剂为氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚。所述大孔吸附树脂为苯乙烯型树脂、α -甲基苯乙烯型树脂，孔径20-200Α，比表面积 150-750cm2/g。所述乙酸乙酯-甲醇体积比为3 1-1 1 ；石油醚-乙酸乙酯体积比为 6:1-1: 1。综上所述，本发明整个提取分离过程操作简单、对设备要求不高，成本低，所得产 品纯度高。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求的保护的范围并不局 限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 将臭灵丹根烘干至含水低于13%，取Ikg粉碎至40目，得臭灵丹粉末，以5%氢氧 化钠水溶液6L室温下浸提12小时，过滤得浸取液，加入2%醋酸酸化至pH为2，得沉淀物； 收集沉淀物，将沉淀物以氯仿萃取3次，将氯仿层旋转蒸发减压浓缩至萃取体积的1/20，加 入大孔树脂成粉末状，然后上大孔吸附树脂柱进行柱层析，用体积比为3 1的乙酸乙酯和 甲醇的混合洗脱液进行洗脱；收集富集臭灵丹酸的流分，浓缩后再加入大孔树脂拌样上柱， 用体积比为6 1、3 1、1 1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱，收集流分， 旋转蒸发，浓缩得臭灵丹酸，含量为87%，进一步用少量丙酮溶解所得产物，重结晶得到纯 度98. 7%的无色晶体。实施例2:将臭灵丹根烘干至含水低于13%，取Ikg粉碎至60目，得臭灵丹粉末，以饱和石 灰水溶液5L室温下浸提M小时，过滤得浸取液，加入5%盐酸酸化至pH为1，得沉淀物；收 集沉淀物，将沉淀物以乙醚萃取2次，将乙醚层旋转蒸发减压浓缩至萃取体积的1/12，加入 大孔树脂成粉末状，然后上大孔吸附树脂柱进行柱层析，用体积比为2 1的乙酸乙酯和甲 醇的混合洗脱液进行洗脱；收集富集臭灵丹酸的流分，浓缩后再加入大孔树脂拌样上柱，用 体积比为6 1、4 1、2 1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱，收集流分，旋 转蒸发，浓缩得臭灵丹酸，含量为90 %，进一步用少量丙酮溶解所得产物，重结晶得到纯度 99. 2%的无色晶体。实施例3:将臭灵丹根烘干至含水低于13%，取2kg粉碎至80目，得臭灵丹粉末，以2%碳 酸氢钠水溶液20L室温下浸提18小时，过滤得浸取液，加入0. 5%硫酸酸化至pH为2，得 沉淀物；收集沉淀物，将沉淀物以甲醇萃取1次，将甲醇层旋转蒸发减压浓缩至萃取体积的 1/15，加入大孔树脂成粉末状，然后上大孔吸附树脂柱进行柱层析，用体积比为3 1的乙 酸乙酯和甲醇的混合洗脱液进行洗脱；收集富集臭灵丹酸的流分，浓缩后再加入大孔树脂 拌样上柱，用体积比为6 1、3 1、1 1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱， 收集流分，旋转蒸发，浓缩得臭灵丹酸，含量为82%，进一步用少量丙酮溶解所得产物，重结 晶得到纯度98. 的无色晶体。实施例4:将臭灵丹根烘干至含水低于13%，取5kg粉碎至40目，得臭灵丹粉末，以2%氨水 溶液35L室温下浸提16小时，过滤得浸取液，加入2%硫酸酸化至pH为3，得沉淀物；收集沉淀物，将沉淀物以丙酮萃2次，将丙酮层旋转蒸发减压浓缩至萃取体积的1/20，加入大孔 树脂成粉末状，然后上大孔吸附树脂柱进行柱层析，用体积比为2 1的乙酸乙酯和甲醇 的混合洗脱液进行洗脱；收集富集臭灵丹酸的流分，浓缩后再加入大孔树脂拌样上柱，用体 积比为6 1、5 1、3 1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱，收集流分，旋 转蒸发，浓缩得臭灵丹酸，含量为88 %，进一步用少量丙酮溶解所得产物，重结晶得到纯度 98. 6%的无色晶体。实施例5 将臭灵丹根烘干至含水低于13%，取IOkg粉碎至40目，得臭灵丹粉末，以2%氢 氧化钠水溶液90L室温下浸提12小时，过滤得浸取液，加入8%盐酸酸化至pH为2，得沉 淀物；收集沉淀物，将沉淀物以乙醇萃取2次，将乙醇层旋转蒸发减压浓缩至萃取体积的 1/20，加入大孔树脂成粉末状，然后上大孔吸附树脂柱进行柱层析，用体积比为1 1的乙 酸乙酯和甲醇的混合洗脱液进行洗脱；收集富集臭灵丹酸的流分，浓缩后再加入大孔树脂 拌样上柱，用体积比为6 1、3 1、1 1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱， 收集流分，旋转蒸发，浓缩得臭灵丹酸，含量为82%，进一步用少量丙酮溶解所得产物，重结 晶得到纯度98. 3%的无色晶体。实施例6 将臭灵丹根烘干至含水低于13%，取IOkg粉碎至80目，得臭灵丹粉末，以3%碳 酸氢钠水溶液80L室温下浸提14小时，过滤得浸取液，加入10%醋酸酸化至pH为2，得沉 淀物；收集沉淀物，将沉淀物以氯仿萃取2次，将氯仿层旋转蒸发减压浓缩至萃取体积的 1/20，加入大孔树脂成粉末状，然后上大孔吸附树脂柱进行柱层析，用体积比为3 1的乙 酸乙酯和甲醇的混合洗脱液进行洗脱；收集富集臭灵丹酸的流分，浓缩后再加入大孔树脂 拌样上柱，用体积比为6 1、4 1、2 1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱， 收集流分，旋转蒸发，浓缩得臭灵丹酸，含量为85%，进一步用少量丙酮溶解所得产物，重结 晶得到纯度98. 2%的无色晶体。实施例7 将臭灵丹根烘干至含水低于13%，取20kg粉碎至60目，得臭灵丹粉末，以5%氢 氧化钠水溶液120L室温下近体13小时，过滤得浸取液，加入2%硫酸酸化至pH为3，得沉 淀物；收集沉淀物，将沉淀物以内酮萃取3次，将内酮层旋转蒸发减压浓缩全萃取体积的 1/18，加入大孔树脂成粉末状，然后上大孔吸附树脂柱进行柱层析，用体积比为3 1的乙 酸乙酯和甲醇的混合洗脱液进行洗脱；收集富集臭灵丹酸的流分，浓缩后再加入大孔树脂 拌样上柱，用体积比为6 1、4 1、1 1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱， 收集流分，旋转蒸发，浓缩得臭灵丹酸，含量为87%，进一步用少量丙酮溶解所得产物，重结 晶得到纯度98. 4%的无色晶体。实施例8 将臭灵丹根烘干至含水低于13%，取50kg粉碎至40目，得臭灵丹粉末，以饱和石 灰水溶液600L室温下浸提10小时，过滤得浸取液，加入1 %醋酸酸化至pH为3，得沉淀物； 收集沉淀物，将沉淀物以乙醚萃取3次，将乙醚层旋转蒸发减压浓缩至萃取体积的1/15，加 入大孔树脂成粉末状，然后上大孔吸附树脂柱进行柱层析，用体积比为3 1的乙酸乙酯和 甲醇的混合洗脱液进行洗脱；收集富集臭灵丹酸的流分，浓缩后再加入大孔树脂拌样上柱，用体积比为6 1、3 1、1 1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱，收集流分， 旋转蒸发，浓缩得臭灵丹酸，含量为89%，进一步用少量丙酮溶解所得产物，重结晶得到纯 度98. 9%的无色晶体。
权利要求
1.一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺，其特征在于包括以下步骤将臭灵丹根干燥 并粉碎至30-60目，经碱液浸取，将浸取液酸化至PH1-4，得沉淀物；收集沉淀物，以有机溶 剂萃取1-3次，浓缩萃取液，得浓缩物；浓缩物再经大孔吸附树脂柱，先以乙酸乙酯-甲醇洗 脱，得到臭灵丹酸富集流份，再浓缩上柱，用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，回收试剂，浓 缩干燥即得产品。
2.如权利要求1所述一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺，其特征在于所述碱液为氢 氧化钠溶液、碳酸氢钠溶液、饱和石灰水、氨水等碱性水溶液，用量为药材质量的5-12倍， 室温下浸提，浸提时间8-M小时。
3.如权利要求1所述一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺，其特征在于所述酸为盐 酸、醋酸、硫酸，体积百分比为0. 5-10%。
4.如权利要求1所述一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺，其特征在于所述有机溶剂 为氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚。
5.如权利要求1所述一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺，其特征在于所述大孔吸附 树脂为苯乙烯型树脂、α -甲基苯乙烯型树脂，孔径20-200 Α，比表面积150-750cm2/g。
6.如权利要求1所述的一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺，其特征在于所述乙酸乙 酯-甲醇体积比为3 1-1 1 ；石油醚-乙酸乙酯体积比为6 1-1 1。
全文摘要
本发明公开了一种从臭灵丹中提取臭灵丹酸的工艺，是将臭灵丹根干燥粉碎，经碱液浸取，浸取液酸化后静置沉淀，得沉淀物，收集沉淀物，以有机溶剂萃取1-3次，浓缩萃取液，得浓缩物；浓缩物再经大孔吸附树脂柱，先以乙酸乙酯-甲醇洗脱，得到臭灵丹酸富集流份，再浓缩上柱层析，用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，回收试剂，浓缩干燥即得产品。本发明得到的臭灵丹酸纯度高，含量在98％以上。
文档编号C07C57/26GK102040506SQ20101029323
公开日2011年5月4日 申请日期2010年9月27日 优先权日2010年9月27日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司