专利名称：一种斯皮诺素的生产方法
技术领域：
本发明属于中药化学领域，具体涉及一种斯皮诺素的生产方法。
背景技术：
酸枣仁，别名白棘、棘针、枣仁、酸枣核，为鼠李科植物酸枣Ziziphus JujubeMi 11, var. spinosa(Bunge)Hu ex H. F. Chou的干燥成熟种子。甘、酸,平,归肝、胆、心经。具有养心补肝、宁心安神、敛汗、生津的功效，用于虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴。酸枣仁始载于《神农本草经》，主产于河北、陕西、辽宁、河南。其化学成分主要含有脂肪酸、三萜皂苷、黄酮、留体及生物碱类化合物。其中黄酮类化合物有斯皮诺素、酸枣黄素、6’”-阿魏酰斯皮诺素、6’ 阿魏酰异斯皮诺素、6’ 对香豆酰斯皮诺素、当药素、葛根素等。药理研究表明酸枣仁具有镇静催眠、抗惊厥、镇痛及降体温、抗焦虑、抗心率失常、对脑垂体后叶素引起大鼠心肌缺血有保护作用、降压及扩血管、降血脂和防治动脉硬化作用，还具有抗脂质过氧化作用，对减压耐缺氧耐力具有保护作用。斯皮诺素(spinosin)为酸枣仁中的主要黄酮类化合物之一，又名棘苷、酸枣素，
为黄色斯皮诺素(spinosin)粉末，分子式C28H32O15，分子量608. 54，溶于甲醇。2010年药典首次将其作为酸枣仁的指标性成分之一，未来对斯皮诺素的需求将会增加。目前尚未见有高纯度斯皮诺素制备的专利报道。王慧等通过硅胶柱色谱、MDS柱色谱、Sephadex LH-20、开放ODS柱色谱、制备HPLC色谱等多种色谱分离手段，从酸枣仁甲醇提取物中分离得到，该方法仅适用于实验室化学成分分离鉴定。李会军、李萍采用高效液相色谱法同时测定斯皮诺素和6’ 阿魏酰斯皮诺素的含量，通过石油醚脱脂、甲醇回流提取，硅胶柱分离，氯仿-甲醇洗脱制备供试品溶液，该方法使用大量氯仿、甲醇等有害试剂， 制备量小，不适宜于工业生产。因此，建立操作简单、对环境污染较小、生产相对安全、可大量制备高纯度的斯皮诺素生产工艺具有十分重要的社会意义和经济价值。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明旨在提供一种低成本、安全性强、纯度高的生产斯皮诺素的方法。本发明的目的是通过下述方案实现的一种斯皮诺素的生产方法，其特征在于包括以下步骤(I)提取将酸枣仁破碎，用热水提取，合并得到提取液；(2)树脂柱层析将提取液上大孔树脂柱层析，先用冷水洗脱，再用50-95%乙醇洗脱，收集50-95%乙醇洗脱液；(3)脱色将上述洗脱液加入4-6%硅藻土脱色，过滤，浓缩，得浓缩液；(4)聚酰胺柱层析将浓缩液上聚酰胺柱层析，先用20-40%低碳醇或低碳酮洗脱，再用75-90%低碳醇或低碳酮洗脱，收集75-90%部分的洗脱液，浓缩得粗晶；(5)重结晶将粗晶用丙酮回流溶解，冷却析晶，过滤，干燥，得到高纯度的成品。步骤(I)所述热水温度为60-100°C，料液比为I : 5-10 (L/kg)，提取方法为煎煮法、恒温浸提或超声提取法，提取时间O. 5-3小时，提取次数为2-3次。步骤⑵所述的大孔树脂是X-5型大孔树脂、AB-8型大孔树脂、S_8型大孔树脂中的一种。步骤(2)所述冷水洗脱体积用量为1-2倍柱体积所述50-95%乙醇洗脱体积用量为2-5倍柱体积。步骤(4)所述聚酰胺为50-100目，所述洗脱剂低碳醇为乙醇溶液，所述低碳酮为丙酮溶液，洗脱剂用量为2-5倍柱体积。本发明的有益效果是提取过程中采用热水提取，代替了原有的有机溶剂提取，提取率高，产品安全性高采用大孔树脂柱层析和聚酰胺柱层析比现有的硅胶柱层析成本低、 生产周期短；洗脱剂避免了使用氯仿等有害试剂，所用溶剂可回收利用；本方法制备量大， 可工业化生产。
具体实施例方式下面将结合具体实施例对本发明作进一步描述，但本发明的实施方式不限于此。下述实施例中斯皮诺素的检测采用HPLC法(参照解军波等发表的文献“HPLC法测定酸枣仁黄酮片中斯皮诺素”)，该文献采用的方法为色谱条件0DSC18 柱(150mmX 3. 9mm，9 μ m);流动相乙腈-水(O. 1%醋酸)，梯度洗脱，0-5min，10%乙腈，5-20min，17%乙腈， 20_30min, 23% 乙臆，30min 以后,35% 乙臆；体积流量0.8ml/min 柱温25°C;进样量20μ1;检测波长335nm。实施例I :将酸枣仁破碎成粗粉，取Ikg置于IOL提取罐中，加入6L80-10(TC热水煎煮提取，提取2次，每次2小时，过滤，合并两次提取液，将提取液上S-8大孔吸附树脂柱，先用 3000ml冷水洗脱，然后用6000ml的60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，加入200g硅藻土搅拌脱色，过滤，脱色液浓缩得浓缩液；将浓缩液上聚酰胺柱，先用1000ml30%乙醇洗脱，再用1250ml75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩得到斯皮诺素粗晶， 将粗晶用丙酮加热回流溶解，冷却至室温，静置析晶，滤出晶体，真空干燥得到高纯度斯皮诺素成品853mg。经HPLC法测定斯皮诺素成品纯度为98. 67%。实施例2 将酸枣仁破碎成粗粉，取Ikg置于IOL提取罐中，加入20L60-80°C热水恒温浸泡提取，提取3次，每次2小时，过滤，合并三次提取液，将提取液上AB-8大孔吸附树脂柱，先用4L冷水洗脱，然后用12L的80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，加入500g硅藻土搅拌脱色，过滤，脱色液浓缩得浓缩液；将浓缩液上聚酰胺柱，先用1200ml20%丙酮洗脱，再用 1500ml80%丙酮洗脱，收集80%丙酮洗脱液，减压回收丙酮，浓缩得到斯皮诺素粗晶，将粗晶用丙酮加热回流溶解，冷却至室温，静置析晶，滤出晶体，真空干燥得到高纯度斯皮诺素成品827mg。经HPLC法测定斯皮诺素成品纯度为98. 28%。实施例3 将酸枣仁破碎成粗粉，取2kg置于20L提取罐中，加入16L70_90°C热水超声提取， 提取3次，每次O. 5小时，过滤，合并三次提取液，将提取液上X-3大孔吸附树脂柱，先用IOL 冷水洗脱，然后用15L的75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，加入750g硅藻土搅拌脱色， 过滤，脱色液浓缩得浓缩液将浓缩液上聚酰胺柱，先用2L20%乙醇洗脱，再用3L90%乙醇洗脱，收集90%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩得到斯皮诺素粗晶，将粗晶用丙酮加热回流溶解，冷却至室温，静置析晶，滤出晶体，真空干燥得到高纯度斯皮诺素成品1.67g。经 HPLC法测定斯皮诺素成品纯度为98. 44%。实施例4 将酸枣仁破碎成粗粉，取5kg置于50L提取罐中，加入35L80_90°C热水恒温浸泡提取，提取2次，每次3小时，过滤，合并两次提取液，将提取液上S-8大孔吸附树脂柱，先用45L冷水洗脱，然后用60L的95 %乙醇洗脱，收集95 %乙醇洗脱液，加入3. 3kg硅藻上搅拌脱色，过滤，脱色液浓缩得浓缩液；将浓缩液上聚酰胺柱，先用5L20%乙醇洗脱，再用
6.5L55%乙醇洗脱，收集55%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩得到斯皮诺素粗晶，将粗晶用丙酮加热回流溶解，冷却至室温，静置析晶，滤出晶体，真空干燥得到高纯度斯皮诺素成品4. lg。经HPLC法测定斯皮诺素成品纯度为98. 06%。实施例5 将酸枣仁破碎成粗粉，取IOkg置于100L提取罐中，加入50L65_85°C热水超声提取，提取3次，每次I小时，过滤，合并三次提取液，将提取液上AB-8大孔吸附树脂柱，先用30L冷水洗脱，然后用45L的50 %乙醇洗脱，收集50 %乙醇洗脱液，加入2. 2kg硅藻土搅拌脱色，过滤，脱色液浓缩得浓缩液将浓缩液上聚酰胺柱，先用8L25%乙醇洗脱，再用 12L85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩得到斯皮诺素粗晶，将粗晶用丙酮加热回流溶解，冷却至室温，静置析晶，滤出晶体，真空干燥得到高纯度斯皮诺素成品 8. 3g。经HPLC法测定斯皮诺素成品纯度为98. 67%。实施例6 将酸枣仁破碎成粗粉，取25kg置于200L提取罐中，加入150L70_85°C热水煎煮提取，提取2次，每次3小时，过滤，合并两次提取液，将提取液上X-5大孔吸附树脂柱，先用60L冷水洗脱，然后用80L的60%乙醇洗脱，收集60 %乙醇洗脱液，加入3. 2kg硅藻上搅拌脱色，过滤，脱色液浓缩得浓缩液；将浓缩液上聚酰胺柱，先用20L30%乙醇洗脱，再用 30L75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩得到斯皮诺素粗晶，将粗晶用丙酮加热回流溶解，冷却至室温，静置析晶，滤出晶体，真空干燥得到高纯度斯皮诺素成品 20. 6g。经HPLC法测定斯皮诺素成品纯度为98. 71 %。
权利要求
1.一种斯皮诺素的生产方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取将酸枣仁破碎，用热水提取，合并得到提取液；(2)树脂柱层析将提取液上大孔树脂柱层析，先用冷水洗脱，再用50-95%乙醇洗脱， 收集50-95%乙醇洗脱液(3)脱色将上述洗脱液加入4-6%硅藻土脱色，过滤，浓缩，得浓缩液；(4)聚酰胺柱层析将浓缩液上聚酰胺柱层析，先用20-40%低碳醇或低碳酮洗脱，再用75-90%低碳醇或低碳酮洗脱，收集75-90%部分的洗脱液，浓缩得粗晶；(5)重结晶将粗晶用丙酮回流溶解，冷却析晶，过滤，干燥，得到高纯度的成品。
2.如权利要求I所述的一种斯皮诺素的生产方法，其特征在于步骤(I)所述热水温度为60-100°C，料液比为I : 5-10 (L/kg)，提取方法为煎煮法、恒温浸提或超声提取法，提取时间O. 5-3小时，提取次数为2-3次。
3.如权利要求I所述的一种斯皮诺素的生产方法，其特征在于步骤(2)所述的大孔树脂是X-5型大孔树脂、AB-8型大孔树脂、S-8型大孔树脂中的一种。
4.如权利要求I所述的一种斯皮诺素的生产方法，其特征在于步骤(2)所述冷水洗脱体积用量为1-2倍柱体积；所述50-95%乙醇洗脱体积用量为2-5倍柱体积。
5.如权利要求I所述的一种斯皮诺素的生产方法，其特征在于步骤(4)所述聚酰胺为50-100目，所述洗脱剂低碳醇为乙醇溶液，所述低碳酮为丙酮溶液，洗脱剂用量为2-5倍柱体积。
全文摘要
本发明公开了一种斯皮诺素的生产方法。该方法包括将酸枣仁破碎，热水提取，过滤，得到提取液，上大孔树脂柱层析，收集富集目标成分的提取液，加入4-6％硅藻土脱色，脱色液浓缩得到粗提物；将粗提物上聚酰胺柱层析，依次用不同浓度低碳醇或低碳酮溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，得到斯皮诺素粗晶将斯皮诺素粗晶用丙酮回流溶解，冷却结晶，过滤，干燥，得到成品。本发明用热水代替有机溶剂提取，大孔树脂柱层析代替硅胶柱层析，低碳醇和低碳酮代替氯仿等毒性溶剂，成本降低、生产安全性好，产品纯度高。
文档编号C07H1/08GK102603832SQ20111002620
公开日2012年7月25日 申请日期2011年1月25日 优先权日2011年1月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司