专利名称：一种从珠子参中提取纯化竹节参皂苷Ⅳa的方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从珠子参中提取纯化竹节参皂苷IVa的方法。
背景技术：
珠子参为五加科植物珠子参Panax japonicns C. A. Mey. var. major (Burk.) C. Y. Wu etK. M. Feng 或习习叶三七 panax japonicus C. A. Mey. var. bipinnatif idus (Seem.) C.Y.Wu et K.M. Feng的干燥根茎，俗称纽子七。性味苦、甘，微寒，归肝、肺、胃经。具有补肺养阴，祛瘀止痛，止血的功效。用于气阴两虚，烦热口渴，虚劳咳嗽，跌扑损伤，关节痹痛，咳血，吐血，衄血，崩漏，外伤出血等症。现代研究表明，珠子参主要化学成分为皂苷、多糖、氨基酸和多种微量元素，其皂苷具有扩血管、降血压、中枢抑制、抗炎、增强免疫功能、抗脑缺血、促进骨髓造血功能、抗肿瘤等活性，另外，珠子参总皂苷对四氯化碳、对乙酰氨基酚、氯化镉和丙烯醇诱导的雄性CF-I鼠实验性肝损伤有保护作用。珠子参被历年药典收入之后， 在2010年版中首次规定其指标性成分，为竹节参皂苷IVa。竹节参皂苷IVa是一种齐墩果烷型五环三萜皂苷类成分，分子式=C42H66O14，分子量794. 965。宋小妹等对不同产区珠子参药材中的主要皂苷成分竹节参皂苷IVa的含量进行了比较研究，8个不同产地的珠子参药材中竹节参皂苷IVa的质量分数在2. 17-7. 38%。
发明内容
本发明的目的是提供一种从珠子参中提取纯化竹节参皂苷IVa的方法，产品竹节参皂苷IVa含量高，经HPLC测定含量在98%以上。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案将珠子参适当粉碎，加入乙醇水溶液或甲醇水溶液提取，提取1-4次，每次
O.2-4. 5小时，抽滤，合并滤液，减压浓缩得膏状物，将膏状物分散于水中，用有机溶剂萃取， 浓缩得浓缩液，浓缩液再经水分散，先后采用大孔树脂柱和高速逆流色谱分离制备得到高纯度竹节参皂苷IVa，经HPLC测定产品竹节参皂苷IVa的含量为98%以上。所述提取溶剂乙醇水溶液或甲醇水溶液的体积百分比为30-80%，提取方法为微波辅助提取、加热回流提取或渗漉提取中的一种。所述有机溶剂萃取前分散膏状物的水用量为5-10倍膏状物量,有机溶剂为乙酸乙酯和水饱和正丁醇溶液，乙酸乙酯加入量为分散液体积的O. 5-3倍，水饱和正丁醇加入量为分散液体积的O. 5-3倍，萃取2-5次。所述大孔树脂柱分离，将浓缩液用水分散，置于树脂柱中，用水洗至水洗液无色， 洗液弃去，再用50-70%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得样品。所述高速逆流色谱分离方法，将样品溶于溶剂系统中，备用，将溶剂系统置于分液漏斗中振摇，放置，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在750-1200r/min，同时将流动相以l_5ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，紫外检测，与竹节参皂苷IVa标准图谱对应，收集流出液，旋转蒸发浓缩、干燥得产品。所述高速逆流色谱溶剂系统由三个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷，B 组分可选自乙醇、甲醇，C组分为水，优选二氯甲烷-甲醇-水体系，A、B、C的体积比为
4-9 5-10 2-5。所述高速逆流色谱溶剂系统由四个组分构成，A组分可选自庚烷、乙醚，B组分可选自氯仿、二氯甲烷、丙酮、正丁醇，C组分可选乙醇、甲醇，D组分为水，优选乙醚-正丁醇-甲醇-水、乙醚-丙酮-甲醇-水体系，A、B、C、D的体积比为4-8 3-5 5-10 2_4。本发明的有益效果(I)本发明方法操作简单，可行性强；(2)本发明采用大孔树脂柱色谱和高速逆流色谱法分离纯化，具有分离效果好，高效、快速、广品纯度闻等特点。
具体实施例方式下面将结合具体实施例对本发明作进一步的说明。实施例I :取珠子参药材1kg，适当粉碎，加入10kg55%乙醇水溶液微波提取3次，每次20分钟，抽滤，合并滤液，减压浓缩得膏状物，将膏状物分散于相当于膏状物质量8倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入量为900ml，再加入水饱和正丁醇萃取3次，每次加入量为900ml，正丁醇萃取液减压回收试剂，得到浓缩液，将浓缩液溶解于400ml水中， 上AB-8大孔吸附树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用60%乙醇洗脱，回收试剂， 减压浓缩得到样品。然后采用高速逆流色谱法分离，先将样品溶解于二氯甲烷-甲醇-水 (4:8:3)溶剂系统中，备用，室温下将系统二氯甲烷-甲醇-水(4:8:3)置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在950r/min，同时将流动相以5ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样200mg，紫外检测，与竹节参皂苷IVa标准图谱对应，收集流出液，减压蒸干得竹节参皂苷产品 IVa41. 4g，含量 98. 6%0实施例2:取珠子参药材1kg，适当粉碎，加入8kg50%甲醇水溶液渗漉提取I次，提取4小时，抽滤，合并滤液，减压浓缩得膏状物，将膏状物分散于相当于膏状物质量5倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取4次，每次加入量为600ml，再加入水饱和正丁醇萃取4次， 每次加入量为600ml，正丁醇萃取液减压回收试剂，得到浓缩液，将浓缩液溶解于300ml水中，上HZ806大孔吸附树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用70 %乙醇洗脱，回收试剂，减压浓缩得到样品。然后采用高速逆流色谱法分离，先将样品溶解于乙醚-正丁醇-甲醇-水(5 3 10 3)溶剂系统中，备用，室温下将系统乙醚-正丁醇-甲醇-水 (5 3 10 3)置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在1000r/min，同时将流动相以2. 5ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样150mg，紫外检测，与竹节参皂苷IVa标准图谱对应，收集流出液，减压蒸干得竹节参皂苷产品IVa42. 8g，含量98. 3 %。实施例3 取珠子参药材2. 5kg，适当粉碎，加入25kg60%乙醇水溶液回流提取4次，每次I 小时，抽滤，合并滤液，减压浓缩得膏状物，将膏状物分散于相当于膏状物质量7倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取4次，每次加入量为2500ml，再加入水饱和正丁醇萃取3次， 每次加入量为2500ml，正丁醇萃取液减压回收试剂，得到浓缩液，将浓缩液溶解于IOOOml 水中，上SP825大孔吸附树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用50%乙醇洗脱，回收试剂，减压浓缩得到样品。然后采用高速逆流色谱法分离，先将样品溶解于二氯甲烷-甲醇-水(8 10 4)溶剂系统中，备用，室温下将系统二氯甲烷-甲醇-水(8 10 4) 置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在850r/min，同时将流动相以4ml/ min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中， 每次进样250mg，紫外检测，与竹节参皂苷IVa标准图谱对应，收集流出液，减压蒸干得竹节参皂苷产品IVal04g，含量98. 8%。实施例4 取珠子参药材2. 5kg，适当粉碎，加入15kg80%甲醇水溶液渗漉提取3次，每次4. 5 小时，合并滤液，减压浓缩得膏状物，将膏状物分散于相当于膏状物质量8倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取2次，每次加入量为3000ml，再加入水饱和正丁醇萃取2次，每次加入量为3000ml，正丁醇萃取液减压回收试剂，得到浓缩液，将浓缩液溶解于1200ml水中，上 SP825大孔吸附树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用55%乙醇洗脱，回收试剂，减压浓缩得到样品。然后采用高速逆流色谱法分离，先将样品溶解于乙醚-丙酮-甲醇-水 (8 4 7 3)溶剂系统中，备用，室温下将系统乙醚-丙酮-甲醇-水(8 : 4 : 7 : 3) 置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在700r/min，同时将流动相以2ml/ min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中， 每次进样200mg,紫外检测,与竹节参阜苷IVa标准图谱对应,收集流出液,减压蒸干得竹节参皂苷产品IValOlg，含量99. 2%0实施例5 取珠子参药材5kg，适当粉碎，加入35kg75%乙醇水溶液加热回流提取2次，每次 3小时，抽滤，合并滤液，减压浓缩得膏状物，将膏状物分散于相当于膏状物质量6倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入量为3400ml，再加入水饱和正丁醇萃取3次， 每次加入量为3400ml，正丁醇萃取液减压回收试剂，得到浓缩液，将浓缩液溶解于2000ml 水中，上HZ806大孔吸附树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用60%乙醇洗脱，回收试剂，减压浓缩得到样品。然后采用高速逆流色谱法分离，先将样品溶解于庚烷-丙酮-甲醇-水(7 : 4 : 8 : 4)溶剂系统中，备用，室温下将系统庚烷-丙酮-甲醇-水 (7 : 4 : 8 : 4)置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在850r/min，同时将流动相以3ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样250mg，紫外检测，与竹节参皂苷IVa标准图谱对应，收集流出液，减压蒸干得竹节参皂苷产品IVa207g，含量98. 2%。实施例6 取珠子参药材5kg，适当粉碎，加入40kg30%乙醇水溶液微波提取4次，每次30分钟，抽滤，合并滤液，减压浓缩得膏状物，将膏状物分散于相当于膏状物质量5倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入量为2800ml，再加入水饱和正丁醇萃取3次， 每次加入量为2800ml，正丁醇萃取液减压回收试剂，得到浓缩液，将浓缩液溶解于2000ml 水中，上AB-8大孔吸附树脂柱，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用50 %乙醇洗脱，回收试剂，减压浓缩得到样品。然后采用高速逆流色谱法分离，先将样品溶解于庚烷-正丁醇-甲醇-水(4 : 5 : 5 : 2)溶剂系统中，备用，室温下将系统庚烷-正丁醇-甲醇-水 (4 5 5 2)置于分液漏斗中振摇，放置，平衡一段时间后，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在750r/min，同时将流动相以3. 5ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，每次进样200mg，紫外检测，与竹节参皂苷IVa标准图谱对应，收集流出液，减压蒸干得竹节参皂苷产品IVa203g，含量98. 7%。
权利要求
1.一种从珠子参中提取纯化竹节参皂苷IVa的方法，其特征在于其提取纯化步骤包括将珠子参适当粉碎，加入乙醇水溶液或甲醇水溶液提取，提取1-4次，每次O. 2-4. 5小时，抽滤，合并滤液，减压浓缩得膏状物，将膏状物分散于水中，用有机溶剂萃取，浓缩得浓缩液，浓缩液再经水分散，先后采用大孔树脂柱和高速逆流色谱分离制备得到高纯度竹节参皂苷IVa，经HPLC测定产品竹节参皂苷IVa的含量为98%以上。
2.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述提取溶剂乙醇水溶液或甲醇水溶液的体积百分比为30-80%，提取方法为微波辅助提取、加热回流提取或渗漉提取中的一种。
3.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述有机溶剂萃取前分散膏状物的水用量为 5-10倍膏状物量，有机溶剂为乙酸乙酯和水饱和正丁醇溶液，乙酸乙酯加入量为分散液体积的O. 5-3倍，水饱和正丁醇加入量为分散液体积的O. 5-3倍，萃取2-5次。
4.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述大孔树脂柱分离，将浓缩液用水分散，置于树脂柱中，用水洗至水洗液无色，洗液弃去，再用50-70 %乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥得样品。
5.根据权利要求I所述方法，其特征在于所述高速逆流色谱分离方法，将样品溶于溶剂系统中，备用，将溶剂系统置于分液漏斗中振摇，放置，取上相作为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满，再启动主机转动，转速控制在750-1200r/min，同时将流动相以l_5ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出、两相达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，紫外检测，与竹节参皂苷IVa标准图谱对应，收集流出液，旋转蒸发浓缩、干燥得产品。
6.根据权利要求5所述高速逆流色谱溶剂系统由三个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烧，B组分可选自乙醇、甲醇，C组分为水，优选二氯甲烷-甲醇-水体系，A、B、C的体积比为 4-9 5-10 2-5。
7.根据权利要求5所述高速逆流色谱溶剂系统由四个组分构成，A组分可选自庚烷、乙醚，B组分可选自氯仿、二氯甲烷、丙酮、正丁醇，C组分可选乙醇、甲醇，D组分为水，优选乙醚-正丁醇-甲醇-水、乙醚-丙酮-甲醇-水体系，A、B、C、D的体积比为 4-8 3-5 5-10 2-4。
全文摘要
一种从珠子参中提取纯化竹节参皂苷IVa的方法，采用珠子参为提取原料，经适当粉碎，用乙醇水溶液或甲醇水溶液提取，提取液抽滤，减压浓缩得膏状物，膏状物分散于水中，有机溶剂萃取，浓缩得浓缩液，再经水分散，分散液先后采用大孔树脂柱和高速逆流色谱进行分离制备高浓度竹节参皂苷IVa。本发明工艺稳定，产品竹节参皂苷IVa含量高，可达98％以上。
文档编号C07J63/00GK102603851SQ20111002617
公开日2012年7月25日 申请日期2011年1月25日 优先权日2011年1月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司