一种竹节参提取物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种竹节参提取物，所述的竹节参提取物为竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物,以及药学可接受的辅料或载体。其中竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的浓度比为20-28：85-95：30-40：30-45。将该竹节参提取物在制备治疗肠粘膜损伤的药物上的应用，其中，肠粘膜损伤为非甾体抗炎药所引起的肠粘膜损伤。结果表明，竹节参皂苷IVa和/或竹节参总皂苷对非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤具有治疗作用。
【专利说明】一种竹节参提取物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明提供一种竹节参提取物及其应用，具体为竹节参总皂苷，包括竹节参皂苷 IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物。
【背景技术】
[0002] 非留体抗炎药（NSAIDs)是一类临床上广泛使用的抗炎药物，如心脑血管疾病预 防及风湿性疾病、疼痛、运动损伤的治疗。近年来临床上推出的缓释剂和肠溶剂如双氯芬酸 钠肠溶片，减少胃部损伤的毒副作用，但却把损伤转移到了远端的小肠 [1_3];而随着胶囊内 镜的发展，NSAID导致的肠道损伤的诊出率明显上升，被长期忽略的NSAID肠道损伤也越来 越受到人们的关注 [3'4]，然而对这一威胁人类健康的并发症，目前在其防治上并没有统一合 理的方法。因此，积极寻求防治NSAID所导致的并发症已十分迫切。
【发明内容】
[0003] 本发明提供一种竹节参提取物，具体为一种竹节参总皂苷，所述的竹节参总皂苷 包括竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物，其中竹 节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的浓度比为20-28 :85-95 : 30-40 ：30-45〇
[0004] -种竹节参提取物的药物组合物，其特征在于，其中包含所述的竹节参总皂苷 (所述的竹节参总皂苷包括竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷 Pjs-2的混合物），以及药学可接受的辅料或载体。
[0005] 上述竹节参提取物在制备治疗肠粘膜损伤的药物上的应用。
[0006] 所述的肠粘膜损伤为非留体抗炎药所引起的肠粘膜损伤。
[0007] 经与对照组相比，模型组小肠粘膜通透性显著升高，小肠粘膜损伤评分增高，光镜 可见小肠粘膜绒毛发生变性、坏死、脱落，大量炎细胞浸润。而竹节参皂苷IVa和/或竹节 参总皂苷给药组小肠粘膜损伤及通透性改变明显变小，竹节参皂苷IVa和/或竹节参总皂 苷对非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤具有治疗作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0008] 图1伊文思蓝染色检测竹节参总皂苷对NASIDs模型小肠黏膜损伤的保护作用。
[0009] 图2 HE染色观察竹节参总皂苷对小肠黏膜组织的保护活性，其中，a正常组；b模 型组；c竹节参总皂苷IOOmg组；d竹节参总皂苷300mg组；（HE 10 X 10)。
[0010] 图3竹节参总皂苷对GRP78表达的影响。A正常组，B模型组，C低剂量组，D高剂 量组。图4竹节参总皂苷对TNFa表达的影响。A正常组，B模型组，C低剂量组，D高剂量 组。
[0011] 实施例1
[0012] 所述的竹节参提取物为竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂 苷Pjs-2的混合物，其中竹节参皂苷IVa为90. 6mg. g-1、竹节参皂苷V24. 9mg. g-1、竹节参皂 苷 38. 7IVmg. g-1 和竹节参皂苷 Pjs-239. 6mg. g-1。
[0013] 实验动物
[0014] 湖北省动物实验中心提供：健康雄性BABL/c小鼠60只，体重18-24g左右，自然光 照周期、于恒温、恒湿条件下标准配方的普通饲料喂养，自由进食进水。
[0015] 仪器和试剂
[0016] 倒置荧光显微镜：日本Nikon ECLIPSE TE2000-S ;全波长酶标仪=Thermo Electron公司；凝胶成像系统（Gel Logic-200):美国Kodak公司；高性能梯度PCR仪：德 国Whatman Biometra公司；多功能突光酶标仪：瑞士 Tecan集团公司；ECL化学发光系统： 上海欧翔科学仪器有限公司。
[0017] 双氯芬酸：石药集团欧意药业有限公司，临用前用1%羧甲基纤维素配制〇.5mg/ ml ;竹节参总阜苷：成都迪康科技制药公司，临用前用生理盐水溶解0. 5mg/ml、lmg/mll、 2mg/ml ;FD4 :美国Sigma公司产品，临用前用PBS溶解配制成20mg/ml溶液；伊文氏蓝：临 用前用生理盐水溶解配制成7. 5mg/ml溶液。
[0018] 对48只BABL/c小鼠行随机组，标记为：模型组、正常组、竹节参总皂苷100mg/kg、 300mg/kg组,连续灌胃六天。于第四天给予双氯芬酸5mg/kg(10mg/ml)灌胃。于第七天对 小鼠进行手术取材，行肉眼观察及相关的实验研究。
[0019] 小鼠小肠组织的伊文思蓝染色：
[0020] 小鼠术前禁食（12h)不禁水。劲椎脱白处死，处死前30min尾静脉注射伊文思蓝， 剖腹，分离小肠，PBS液冲洗内容物。沿肠系膜对侧切开小肠，粘膜面朝上平铺固定于玻璃 板上，滤纸吸干多余水分，数码相机拍摄。
[0021] FITC-D检测小肠粘膜通透性：给小鼠10%水合氯醛行腹腔注射（0. 2ml/只），以 四肢瘫软，呼吸心跳正常为标准，剖腹，距回盲部2cm处选4-5cm小肠，保持肠系膜血管血液 供应正常，两端结扎，肠腔注入〇. 2ml异硫氰酸荧光素标记葡聚糖（FITC-D)，并予以保温， 20min后活体取肝脏，称重、勻楽器冰上研磨，按lg/5ml加入I XPBS液，2000rpm/min、30min 离心。取上清液于多功能荧光酶标仪（激发波长480nm和发射波长530nm)测量吸光度值， 按标准曲线计算FITC-D含量，用统计学方法对实验数据进行分析。
[0022] 小鼠小肠组织病理学检测：每只小鼠取约2-3cm小肠组织，10%中性甲醛溶液固 定，常规石蜡包埋，4um切片，HE染色，倒置荧光显微镜观察组织学改变，组织学评分采用 Chiu肠粘膜损伤评分标准[参见表1]。
[0023] 表I. Chiu评分标准
[0024]
【权利要求】
1. 一种竹节参提取物，其特征在于，所述的竹节参提取物为竹节参皂苷IVa、竹节参皂 苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物，其中竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹 节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的浓度比为20-28 :85-95 :30-40 :30-45。
2. -种竹节参提取物的药物组合物，其特征在于，其中包含权利要求1所述的竹节参 提取物，以及药学可接受的辅料或载体。
3. 根据权利要求1或2所述的竹节参提取物在制备治疗肠粘膜损伤的药物上的应用。
4. 权利要求3所述的肠粘膜损伤为非留体抗炎药所引起的肠粘膜损伤。
【文档编号】A61K36/258GK104367604SQ201410657129
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年11月18日 优先权日:2014年11月18日
【发明者】袁丁, 张长城, 刘朝奇, 王婷, 周志勇, 顿耀艳, 赵海霞 申请人:三峡大学