专利名称：一种提取禾叶山麦冬皂苷a的方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，特别是涉及一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法。
背景技术：
禾叶山麦冬皂苷A属甾体皂苷类，mp. 255-256°C，分子式为C49H78O21，分子量1002， 溶于正丁醇、吡啶等，微溶于甲醇、乙醇和氯仿，不溶于丙酮、乙酸乙酯、乙醚等。禾叶山麦冬皂苷A有强心抗肿瘤作用，尤其是抑制宫颈癌细胞和肝癌细胞作用较强。禾叶山麦冬百合科，也叫禾叶土麦冬，主产于河北、山西、陕西、甘肃等地。其块根也作土麦冬药用，主要治疗阴虚肺燥、咳嗽痰粘、口燥咽干、肠燥便秘等。现有提取禾叶山麦冬阜苷A方法较少，药理研究较少。如专利(申请号 201010212790)“从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法”，该专利采用的方法是将禾叶山麦冬块状根粉碎后作为原料，采用乙醇回流浸提，正丁醇萃取，然后正丁醇相萃取物采用DlOl型大孔树脂分离，分别用水以及不同质量浓度的乙醇溶液洗脱不同极性的组分，所得的皂苷洗脱液真空浓缩、冷冻干燥，逆流色谱方法分离纯化皂苷粗提物，皂苷组分进行真空浓缩，再冷冻干燥，得禾叶山麦冬皂苷A。该专利实验证明禾叶山麦冬皂苷A对人宫颈癌细胞及人肝癌细胞均具有较好的体外增殖抑制作用。该方法采用了逆流色谱分离， 设备投资较大，制备量较小。现有留体皂苷提取分离方法较多，有萃取法、酶解法、酸水解法、柱层析法，以及多种方法联用。如文献“麦冬总皂苷不同提取方法的研究”，该文献实验结果表明酶解法比常规提取方法效率高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，为禾叶山麦冬皂苷A制备提供一种简便易行的方法。为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案来实现的一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于包括以下步骤I)取禾叶山麦冬原料粉碎，加生物酶酶解2-7天，得酶解原料；2)把上述酶解原料，加5-10倍量30-50%甲醇常温浸泡提取2_3次，提取液调酸滤过加氯仿溶液沉淀，收集氯仿层；3)把上述氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤，再用无水甲醇溶解加氧化铝拌样烘干，装柱，正丁醇-磷酸水溶剂洗脱，薄层监测，收集高浓度流分，调节中性，浓缩成浸膏，无水乙醇溶解结晶2-3次，真空干燥即得禾叶山麦冬皂苷A产品。所述步骤I)中生物酶可选果胶酶、纤维素酶或淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的 O. 1~1 %。所述步骤2)和步骤3)所用的水为纯水。
所述步骤3)中的氧化铝为中性氧化铝，粒度120-300目。所述步骤3)中正丁醇-磷酸水溶剂比例为65 : 35 (磷酸调节pH3_4)。本工艺采用生物酶解分解物质组织结构，提高了提取率，缩短了提取时间其次采用常温提取提取杂质少，能耗低；再次采用甲醇中氯仿萃取，是利用液液分配色谱，其操作比高速逆流色谱操作简单；还有采用氧化铝柱分离，正丁醇-磷酸水溶剂洗脱，操作简单易于放大生产。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例I取禾叶山麦冬原料粉碎,称量3kg,加3g的果胶酶混合均勻，酶解7天,酶解原料加24L50%甲醇常温浸泡提取2次，每次8小时，合并提取液盐酸调至pH3，滤过，滤液加液体量的5L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、 乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加300g中性氧化铝(120-300目)拌样烘干， 粉碎装柱(径高比I : 6)，正丁醇-磷酸水(比例65 35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶2次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量93.3%，收率 62. 5%。实施例2取禾叶山麦冬原料粉碎,称量3kg,加30g的淀粉酶混合均勻,酶解2天,酶解原料加30L40%甲醇常温浸泡提取6小时，滤过提取液再加15L40%甲醇浸泡12小时，合并提取液硫酸调至PH2，滤过，滤液加液体量的7L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加400g中性氧化铝(120-300目)拌样烘干，粉碎装柱(径高比I : 5)，正丁醇-磷酸水(比例65 35， 磷酸调节PH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶3次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量95.6%，收率55.2%。实施例3 取禾叶山麦冬原料粉碎，称量3kg，加IOg的纤维素酶混合均匀，酶解5天，酶解原料加30L30%甲醇常温浸泡提取12小时，滤过提取液再加15L30%甲醇浸泡5小时，合并提取液硫酸调至PH1，滤过，滤液加液体量的6L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加300g 中性氧化铝(120-300目)拌样烘干，粉碎装柱(径高比I : 6)，正丁醇-磷酸水(比例 65 35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶3次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量96. 1%，收率58.2%。实施例4 取禾叶山麦冬原料粉碎,称量IOkg,加30g的果胶酶混合均勻,酶解6天,酶解原料加60L50%甲醇常温浸泡提取2次，每次8小时，合并提取液盐酸调至pH3，滤过，滤液加液体量的12L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、 乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加I. 5kg中性氧化铝(120-300目)拌样烘干， 粉碎装柱(径高比I : 6)，正丁醇-磷酸水(比例65 35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶3次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量95.4%，收率 52. 5%。实施例5 取禾叶山麦冬原料粉碎,称量20kg,加70g的果胶酶混合均勻,酶解5天,酶解原料加140L40%甲醇常温浸泡提取2次,每次8小时,合并提取液硫酸调至pH2,滤过,滤液加液体量的25L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、 乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加3kg中性氧化铝(120-300目)拌样烘干，粉碎装柱(径高比I : 6)，正丁醇-磷酸水(比例65 35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测， 收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶3次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量95.8%，收率 53. 4%。
权利要求
1.一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于包括以下步骤1)取禾叶山麦冬原料粉碎，加生物酶酶解2-7天，得酶解原料；2)把上述酶解原料，加5-10倍量30-50%甲醇常温浸泡提取2-3次，提取液调酸滤过加氯仿溶液沉淀，收集氯仿层；3)把上述氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤，再用无水甲醇溶解加氧化铝拌样烘干，装柱，正丁醇-磷酸水溶剂洗脱，薄层监测，收集高浓度流分，调节中性， 浓缩成浸膏，无水乙醇溶解结晶2-3次，真空干燥即得禾叶山麦冬皂苷A产品。
2.根据权利要求I所述提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于所述步骤I)中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的O. 1-1%。
3.根据权利要求I所述提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于所述步骤2)和步骤3)所用的水为纯水。
4.根据权利要求I所述提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于所述步骤3)中的氧化铝为中性氧化铝，粒度120-300目。
5.根据权利要求I所述提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于所述步骤3)中正丁醇-磷酸水溶剂比例为65 35 (磷酸调节pH3-4)。
全文摘要
本发明涉及一种提取禾叶山麦冬皂苷A方法。方法是取禾叶山麦冬原料粉碎，加生物酶酶解2-7天，酶解原料加5-10倍量30-50％甲醇常温浸泡提取2-3次，提取液调酸滤过加氯仿溶液沉淀，收集氯仿层回收氯仿，浓缩物依次丙酮、乙酸乙酯洗涤，再用无水甲醇溶解加氧化铝拌样烘干，装柱，正丁醇-磷酸水溶剂洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，调节中性，浓缩成浸膏，无水乙醇溶解结晶2-3次，真空干燥即得禾叶山麦冬皂苷A产品。采用该方法制备禾叶山皂苷A，工艺方法简单，所得产品纯度高，易于放大生产。
文档编号C07J71/00GK102603859SQ20111002619
公开日2012年7月25日 申请日期2011年1月25日 优先权日2011年1月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司