专利名称：从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法
技术领域：
本发明涉及植物果实有效成分提取、分离技术，具体属于从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法。背景技术：
大率是鼠李科(Rhamnaceae)率属植物率树(Ziziphus jujuba Mill)的果实,原产我国黄河流域，在我国已有5000年的人工栽培史，有极高的营养价值和很好的医疗保健作用。但是随着近年来栽培面积的扩大，由于栽培生态的变化和感病寄主的增加，致使大枣病害随之逐年加重。尤其残、次、裂、病果枣的问题，越来越凸显出来，严重影响了枣产业的发展。对大枣特别是残次枣进行加工利用，开发功能性新产品，是我们急需解决的首要问题。目前，从大枣中分离得到了多种有效成分，主要有多糖、芦丁、环磷酸腺苷及生物碱等，而对大枣低聚糖的研究报道还很少。低聚糖是一类分子量较低的碳水化合物，单糖通过糖苷键(2-10)连接形成支链或直链的低度聚合糖。低聚糖包括普通低聚糖和功能性低聚糖两大类。功能性低聚糖是指对人、动物、植物等具有特殊生理作用的一类寡糖，它的甜度一般只有蔗糖的30% -50%,具有低热量、抗龋齿、防治糖尿病、改善肠道菌落结构等生理作用，在功能性食品的配料中十分重要，正日益受到消费者的青睐。经检索，目前国内外对大枣低聚糖报道甚少，其中包括林勤保，蒋梅峰等采用水浸提法提取，膜分离技术分离得到大枣粗低聚糖，再用SephadeX-G15柱层析进行分离纯化，得到一种大枣低聚糖(蒋梅峰，大枣低聚糖的分离纯化与结构研究，山西大学硕士学位论文，太原，2009) ;CN101337995A公开了一种从大枣中提取低聚糖的方法。以上方法得到的大枣低聚糖产品尚属于混合产品，不利于对其进一步进行功能性研究，因而难于进一步在功能食品、医药领域开发利用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法，所制备得到的低聚糖纯度较高，可用于功能性研究，以及功能食品、药品的开发。本发明提供的一种从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法，包括如下步骤(I)取大枣分选、清洗、破碎，按大枣重量加水15 20倍，在50_90°C热水中浸提6-12小时，纱布过滤，滤液再用抽滤或者离心分离的方法将悬浮物、颗粒物质除去，得到大枣提取液；(2)将步骤(I)得到的大枣提取液，用截留分子量为I 5万的分离膜进行超滤，超滤条件压力O. 10 O. 18MPa，滤液浓度1% 9%，除去蛋白质和多糖等大分子物质，收集透过液；(3)将步骤(2)得到的透过液用截留分子量为500 800的分离膜进行纳滤，纳滤条件压力O. 50 O. 58MPa，滤液浓度O. 5% 2. 5%，除去单糖等小分子物质，收集截留液，即为大枣粗低聚糖；(4)将步骤(3)得到的大枣粗低聚糖，用强碱性阴离子交换树脂，通过静态吸附或动态吸附脱色，得到脱色后的大枣低聚糖；(5)将步骤(4)得到的脱色后的大枣低聚糖过DEAE-纤维素柱，依次用蒸馏水、
O.lmol/LNaCl,0. 3mol/L NaCl 洗脱，得到水洗脱部分、O. lmol/L NaCl 洗脱部分、O. 3mol/LNaCl洗脱部分；
水洗脱部分(有两个峰部分重叠)过S印hadeX_G25柱，用蒸馏水进行洗脱，洗脱后得到JuBOl-I和JuB01-2两部分低聚糖；O. lmol/L NaCl 洗脱部分、O. 3mol/L NaCl 洗脱部分,分别过 Sephadex_G15 柱进行脱盐，得到JuB02和JuB03两部分低聚糖；(6)将步骤(5)得到的4部分低聚糖进行冷冻干燥，即得大枣低聚糖产品。所述步骤(2)、(3)中的分离膜可以是聚砜膜、聚酰胺膜、纤维素酯类膜、高密度聚乙烯膜等有机膜或陶瓷膜等无机膜。所述的大枣是普通食用大枣，也可以是不能食用的残次枣(是指选取食用普通大枣后剩余的残、次、裂或虫蛀的大枣)。用气相色谱-质谱联用技术、高效液相色谱技术研究表明，JuBOl-I主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖构成JuB01-2主要由葡萄糖、果糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖构成；JuB02主要由阿拉伯糖、葡萄糖和果糖构成；JuB03主要由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖和果糖构成。本发明的优点和效果I.本发明从普通大枣、残次枣中分离得到四种低聚糖，既为大枣的深加工和残次枣综合利用开发提供了新的方向，又为低聚糖的开发提供了新的资源；同时为大枣低聚糖功能性研究，以及功能食品、药品的开发奠定了基础。2.本发明中的生产工艺中应用了膜分离的纯物理方法，由于没有化学变化，可以使大枣中有效成分低聚糖得到最大程度的保留，对大枣的开发利用很有应用潜力；3.本发明操作工艺简便，适于工业化生产，有很强的实用性。
四
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。图I大枣粗低聚糖JuBO的DEAE-纤维素柱洗脱曲线图2大枣低聚糖JuBOl的S印hadex-G25洗脱曲线
五具体实施例方式实施例I :将清洗后的普通大枣100克去核，加水2000克，在85°C下浸提9h，纱布过滤得提取液，提取液用真空抽滤去除悬浮、颗粒物质；滤液用截留分子量为I万的膜在
O.12MPa，滤液浓度3%进行超滤，以除去蛋白质和多糖，收集透过液；透过液再用截留分子量为500的膜在O. 54MPa，滤液浓度1%进行纳滤，以除去单糖等物质，收集截留液，得到大枣粗低聚糖(JuBO)，得率17. 9±0. 6%，纯度58. 6±0. 5% JuBO以强碱性阴离子交换树脂脱色，静态吸附脱色条件为温度40°C，树脂用量7ml/50ml，浓度2%，脱色时间3h ;脱色后的JuBO经DEAE-纤维素柱纯化，洗脱液依次为蒸馏水、O. lmol/1 NaCUO. 3mol/l NaCl，流速为lml/min,自动收集仪收集5ml/管,苯酹-硫酸法进行测定吸光值(A490nm),绘制洗脱曲线，如附图1，得到三个组分JuBOl、JuB02、JuB03，其中JuBOl含量最多，且有两个峰部分重叠，将JuBOl过Sephadex G-25凝胶层析柱进一步纯化,得JuBOl-I、JuB01_2两个单一组分，结果见附图2 ;同时将JuB02、JuB03过S^hadex G-15凝胶层析柱进行脱盐；将上述得到的4个部分产品分别进行冷冻干燥，得到最终产品。所得到的4种低聚糖产品，经气相色谱-质谱联用技术、高效液相色谱技术研究表明，JuBOl-I主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖构成JuBOl-2主要由葡萄糖、果糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖构成；JuB02由阿拉伯糖、葡萄糖、果糖构成；JuB03则主要由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖和果糖构成。具体见表I和表2。 表I气相色谱-质谱联用分析大枣低聚糖水解物保留时间(min)
权利要求
1.一种从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)取大枣分选、清洗、破碎，按大枣重量加水15 20倍，在50-90°C热水中浸提6-12小时，纱布过滤，滤液再用抽滤或者离心分离的方法将悬浮物、颗粒物质除去，得到大枣提取液； (2)将步骤(I)得到的大枣提取液，用截留分子量为I 5万的分离膜进行超滤，超滤条件压力O. 10 O. 18MPa，滤液浓度I % 9%，除去蛋白质和多糖等大分子物质，收集透过液； (3)将步骤(2)得到的透过液用截留分子量为500 800的分离膜进行纳滤，纳滤条件压力O. 50 O. 58MPa，滤液浓度O. 5% 2. 5 %，除去单糖等小分子物质，收集截留液，即为大枣粗低聚糖； (4)将步骤(3)得到的大枣粗低聚糖，用强碱性阴离子交换树脂，通过静态吸附或动态吸附脱色，得到脱色后的大枣低聚糖； (5)将步骤(4)得到的脱色后的大枣低聚糖过DEAE-纤维素柱，依次用蒸馏水、O.Imol/LNaCUO. 3mol/L NaCl 洗脱，得到水洗脱部分、O. lmol/L NaCl 洗脱部分、O. 3mol/L NaCl 洗脱部分； 水洗脱部分过SephadeX-G25柱，用蒸馏水进行洗脱，洗脱后得到两部分低聚糖主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖构成的低聚糖，和主要由葡萄糖、果糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖构成的低聚糖； O. lmol/L NaCl洗脱部分、O. 3mol/L NaCl洗脱部分，分别过Sephadex_G15柱进行脱盐，得到主要由阿拉伯糖、葡萄糖和果糖构成的低聚糖，和主要由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖和果糖构成的低聚糖； (6)将步骤(5)得到的4部分低聚糖进行冷冻干燥，即得大枣低聚糖产品。
2.如权利要求I所述的一种从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法，其特征在于，所述步骤(2)、(3)中的分离膜是聚砜膜、聚酰胺膜、纤维素酯类膜、高密度聚乙烯膜或陶瓷膜。
3.如权利要求I所述的一种从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法，其特征在于，所述的大枣是普通食用大枣或残次枣。
全文摘要
本发明提供了一种从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法，是以食用大枣或残次大枣为原料，经过水浸提法提取、膜分离技术分离、强碱性阴离子交换树脂脱色、DEAE-纤维素柱和葡聚糖凝胶柱纯化的步骤制备得到四种低聚糖。本发明既为大枣深加工产品的开发提供了新的方向，又为低聚糖的开发提供了新的资源。本发明操作工艺简便，适于工业化生产。所制备得到的低聚糖纯度较高，可用于功能性研究，以及功能食品、药品的开发。
文档编号C07H3/06GK102617746SQ20121008008
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月23日 优先权日2012年3月23日
发明者原超, 林勤保, 范三红, 赵子青 申请人:山西大学