麦冬中的两个新化合物、制备方法和药物用途
【专利摘要】本发明涉及从麦冬中药的两个新化合物及其制备方法，是从麦冬的粗提取中经过反复萃取、柱层析、薄层层析的方法所得，化学名称分别为：化合物1为6β-羟基-3β,5-环-(25R)-螺甾-1β-亚硫酸；化合物2为1α,11β-双羟基-杜松烷-5-酮基-11-O-α-L-呋喃糖基-(1→6)-β-D-葡萄糖。活性实验证明上述两个新化合物对人微血管内皮细胞管腔形成具有一定的促进作用，可用于制备预防和治疗偏头痛，心肌缺血等疾病的药物。
【专利说明】麦冬中的两个新化合物、制备方法和药物用途
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明涉及中药化学及医药【技术领域】,具体涉及从麦冬iOphiopogon japonicus(Thund.) Ker-Gawl)中得到的两个新化合物、制备方法和药物用途。
【背景技术】
[0003]麦冬通过保护血管内皮细胞来完成养阴行血之功效。
[0004]麦冬为临床滋养阴液的常用之品,是养阴生津的代表药物之一。麦冬，百合科植物衰冬Ophiogon japonicus (Thumb.) Ker-Gaw1.的干燥块根。主要含多种糖式:麦门冬阜苷B、D，23，24 二羟基罗斯考皂，麦冬甙元-3-0-a-L-吡喃鼠李糖基(1_2) - β -D-吡喃葡萄糖式，甲基麦冬黄烧酮Α、B,麦冬黄烧酮Α、B, 6-醒基异麦冬黄烧酮Α、B,麦冬式兀,丙三醇以及β_谷留醇、豆留醇。另含挥发油，从中分得长叶烯、a-广藿香烯、β-广藿香烯、香附子烯、愈创奥烯、a-律草烯、樟脑、芳樟醇等成分。麦冬始载于《神农本草经》，味甘、微苦，性微寒，归肺、胃、心经。具有养阴生津、润肺清心的功效。
[0005]前期研究发现养阴代表中药“麦冬”的有效部位群、组分、成分，具有不同程度的保护血管内皮细胞的作用，其 中正丁醇部位的药效作用更为显著，以标准品麦冬皂苷D为对照进行高效液相分析发现，其中含有麦冬皂苷D成分。
【发明内容】
[0006]本发明涉及两个新化合物的结构及其在制备偏头痛症，心肌缺血以及其他心、脑血管相关疾病的药物中的运用，属于医药领域。
[0007]本发明目的在于提供两个从麦冬中得到的新化合物。
[0008]本发明的另一目的在于提供提取、分离本发明新化合物的方法。
[0009]本发明的另一目的是上述新化合物在制备偏头痛症，心肌缺血等疾病的药物方面的用途。
[0010]本发明的目的通过下列技术措施实现。
[0011]发明人从麦冬中分离得到两个新化合物I和2，其立体结构如附图1所示。
[0012]新化合物I和2从麦冬中分离得到，其方法包括以下步骤:
(I)取麦冬须根，用溶剂提取，回收提取液，得到稠浸膏。
[0013](2)将稠浸膏经过大孔树脂、正相和反相以及凝胶色谱层析分离，得到目标化合物。
[0014]提取溶剂可以是水、乙醇、甲醇、丙醇、丁醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯等溶剂以及任意比例混合的醇水溶剂，优选5% —100%的含水甲醇或乙醇。提取方法可以是煎煮、回流、冷浸、渗漉、微波提取或超声提取，优选是回流和超声提取。
[0015]提取液浓缩后可通过极性或非极性大孔吸附树脂，用水洗去杂质，用含水低于95%的甲醇或乙醇进行洗脱，将含有目标化合物I和2的洗脱液进行浓缩，得到精制液。也可以用正相和反相硅胶，优选反相硅胶，用洗脱液洗脱，收集含有目标化合物I和2的浓缩，分别得到精制液。
[0016]浓缩后的精制液分别可在硅胶、氧化铝等正相吸附材料中进行色谱分离，也可在硅烷键合硅胶、含有氰基或氨基的硅烷键合硅胶等反相材料中进行色谱分离，收集含有目标化合物的洗脱液，洗脱液重结晶或蒸干溶剂后分别得到新化合物I和2。
[0017]发明人发现化合物I和2对人微血管内皮细胞管腔形成具有一定的促进作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]附图1.化合物I和2的立体结构式 附图2.化合物I的COSY、HMBC, NOESY谱 附图3.化合物2的HMBC、NOESY谱
具体实施例
[0019]实施例1.新化合物I (6 β -羟基-3 β，5-环_(25R)_螺甾-1 β -亚硫酸)的制备。
[0020]干燥麦冬须根粉末4kg，用95%的含水乙醇提取三次，每次10升，合并提取液，提取液过滤，滤液减压回收溶剂，得稠浸膏200g。稠浸膏用DlOl柱层析进行分离，分别用水、20%和40%含水乙醇进行洗脱，40%含水乙醇洗脱液减压回收溶剂，得稠浸膏35g。该稠浸膏用正相硅胶柱层析分离、梯度洗脱，洗脱剂为氯仿-甲醇-水，根据薄层层析情况分成5个部分(fr.A-fr.E)。fr.B(2.6g)进行反复硅胶和凝胶柱层析分离得到化合物6 β -羟基-3 β，5-环-(25R)-螺留-1 β -亚硫酸，经液相检测其纯度达到99%。
[0021 ] 实施例2.新化合物I (6 β -羟基-3 β，5-环-(25R)-螺甾_1 β -亚硫酸)结构鉴定。
[0022]该化合物为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应呈阳性提示该化合物是甾体结构。
[0023]IR 显示有羟基(3496 cm-1), S-0 基团(1210 cm_1),25 (R)螺甾(985，920，900，855 cm-1 (intensity: 92CK900))。
[0024]高分辨质谱给出分子式C27H42O7S, M-1:509.2579，根据分子式计算出该分子的不饱和度为7。
[0025]1H NMR给出2个角甲基，2个甲基，3个连氧次甲基，I个连氧亚甲基，分别为(5ppm): 0.78 (3H, s)，1.62 (3H, s)，1.0 (3H, d, / = 6.8 Hz) ; 0.56 (3H, d, / =5.6 Hz), 5.12 ( 1H, d, J= 6.0), 3.37 (1H, m), 4.48 (1H, dd, /=7.2，14.8), 3.39(1H, m), 3.46 (1H, m)提示该化合物含吲哚和苯乙烯基团。13C NMR谱给出27个碳，其中有4个甲基，I个连氧亚甲基，3个连氧次甲基，I个化学位移为δ 109.0的季碳，该碳可能是螺留中的缩醛碳。上述波谱提示该化合物有25 (R)的螺留骨架，而且其碳谱和化合物sapognin 6β -methoxy-3β , 5-cyclo- (255) -spirostan-1 β -οI (nolinogenin)的碳谱较类似(两个化合物的碳谱参见表1)，进一步比对发现除25位碳的立体结构一个为R构型，一个为S构型外，A环和B环I位和6位的取代基不同，本化合物分别为亚硫酸基和甲氧基。1H-1H COSY和HMBC谱能够证实上述推测(参见图2)。通过NOESY谱(参见图2)能够推断出1-亚硫酸基、3-氢、6-羟基的相对构型是β位，综上所述该分子结构推断为6/?-羟基-3/?，5_环-(257?)-螺留-1卢-亚硫酸。
[0026]该化合物氢谱全归属为:IH-NMR (400 MHz, C5D5N): δ 5.12 (1Η, d, J=6.0,H-l), 2.37 (1H, m, Η_2 β )，2.52 (1H, d, J=14.8, H_2 α )，0.98 (1H, m, H_3)，
0.50 (1H, dd, J=4.0, 7.6，H_4 β )，1.31 (1H, d, J=4.0, H-4 a ), 3.37 (1H, m, H_6)，
1.09 (1H, m, H-7 β ), 1.92 (1H, m, H_7 a )，1.42(1? m, H_8)，0.72(1? overlap,H-9), 1.53 (1H, m, H-1l β ), 1.81 (1H, m, H-1l a ), 0.98 (1H, m, Η_12β), 1.54 (1H,m, H-12 a ), 1.09 (1H, m, H—14), 1.50 (1H, m, Η_15β), 1.57(1H, m, H-15 a ),
4.48 (1H, dd, J=7.2, 14.8, H—16), 1.74(1? dd, J=6.4, 14.8, H—17), 0.78 (3H, s,H-18), 1.62 (3H, s, H-19), 1.81 (1H, d, J=6.4, H-20)，1.0(3H, d, J=6.8, H-21),
2.0 (2H, m, H-23), 1.42(2? m, H-24)，2.38 (1H, m, H-25)，3.39 (1H, m, H-26 β )，
3.46 (1H, m, H-26 a )，0.56 (3H, d, J=5.6, H-27)。
[0027]表1.6/β-羟基-3/?，5 -环-(257?)-螺留-1卢-亚硫酸，Nolinogenin 的 13C化学位移(C5D5N, δ , ppm.0-TMS).__
【权利要求】
1.一种麦冬中具人微血管内皮细胞管腔形成促进作用的新化合物1，化学名称为6β -羟基-3 β，5-环-(25R)_螺留-1 β -亚硫。
2.一种麦冬中具人微血管内皮细胞管腔形成促进作用的新化合物2，化学名称为1α，11 β -双羟基-杜松烷-5-酮基-11-0- a -L-呋喃糖基-(1 → 6) - β -D-葡萄糖。
3.—种如权利要求1所述的麦冬中具人微血管内皮细胞管腔形成促进作用的新化合物I和新化合物2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取麦冬须根，用溶剂提取，回收提取液，得到稠浸膏； (2)将稠浸膏经过大孔树脂、正相和反相以及凝胶色谱层析分离，得到目标化合物。
4.根据如权利要求3所述的制备方法，其特征在于:提取溶剂可以是水、乙醇、甲醇、丙醇、丁醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯等溶剂以及任意比例混合的醇水溶剂。
5.根据如权利要求3所述的制备方法，其特征在于:用于色谱层析分离的材料可以是大孔树脂、硅胶、氧化铝、硅烷键合硅胶、含有氰基或氨基的硅烷键合硅胶。
6.如权利要求1所述的化合物I在制备预防和治疗偏头痛，心肌缺血等疾病的药物方面的用途。
7.如权利要求1所述的化合物I在制备预防和治疗偏头痛，心肌缺血等疾病的保健食品方面的用途。
8.如权利要求2所述的化合物2在制备预防和治疗偏头痛，心肌缺血等疾病的药物方面的用途。
9.如权利要求2所述的化合物2在制备预防和治疗偏头痛，心肌缺血等疾病的保健食品方面的用途。
【文档编号】C07H15/18GK103848881SQ201210505912
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月3日 优先权日:2012年12月3日
【发明者】郑向炜, 沈岚, 冯怡 申请人:上海张江中药现代制剂技术工程研究中心