一种新的甾体类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从黄芪的干燥根中分离得到的一种具有治疗 胰腺癌作用的留体类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 黄芪，又名绵芪。多年生草本，高50-100厘米。主根肥厚，木质，常分枝，灰白色。 茎直立，上部多分枝，有细棱，被白色柔毛。多年生草本，高50-100厘米。产于内蒙古、山西、 甘肃、黑龙江等地。药用黄苗为豆科植物蒙古黄苗六81：抑831118 11161116抑仙〇6118(?丨8〇11.)1^6· var. mongholicus (Bge. ) Hsiao 或膜荚黄苗 A. membranaceus (Fisch. ) Bge.的根。春秋二季 采挖，除去须根及根头，晒干，切片，生用或蜜炙用。性微温，味甘，归脾、肺经，有补气升阳、 益卫固表、托毒生肌、利水退肿之功效。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，用途广泛， 可用于脾肺气虚或中气下陷之症；卫气虚所致表虚自汗；气血不足所致痈疽不溃或溃久不 敛以及浮肿尿少和气虚血滞导致的肢体麻木、关节痹痛、气虚津亏的消渴等症。
[0003] 多年来人们对黄芪的化学成分进行了大量研究。研究表明，黄芪含有多种化学成 分：黄芪多糖、皂苷类、黄酮类和氨基酸，还含有微量元素、留醇类物质、叶酸、亚麻酸、亚油 酸、甜菜碱、胆碱、咖啡酸、香豆素、尼克酸、核黄素、维生素等。皂苷类是黄芪中重要的有效 成分。目前从黄芪及其同属近缘植物中已分离出40多种皂苷，主要有黄芪苷I、II、III、 IV、V、VI、VII、异黄芪苷I、II、IV及大豆皂苷I等。除大豆皂苷I、黄芪皂苷VllI外，其余 均以9,19-环羊毛脂烷型的四环三萜皂苷类为苷元，总称为黄芪皂苷或黄芪总皂苷。
[0004] 黄芪具有广泛的药理作用，临床上广泛用于治疗循环、神经、消化、呼吸、内分泌 和血液系统等疾病。黄芪能促进机体代谢、抗疲劳、促进血清和肝脏蛋白质的更新；有明 显的利尿作用，能消除实验性肾炎尿蛋白；能改善贫血动物现象；能升高低血糖，降低高血 糖；能兴奋呼吸；能增强和调节机体免疫功能，对干扰素系统有促进作用，可提高机体的抗 病力；对流感病毒等多种病毒所致细胞病变有轻度抑制作用，对流感病毒感染小鼠有保护 作用；有较广泛的抗菌作用；黄芪在细胞培养中，可使细胞数明显增多，细胞生长旺盛，寿 命延长；能增强心肌收缩力，保护心血管系统，抗心律失常，扩张冠状动脉和外周血管，降低 血压，能降低血小板粘附力，减少血栓形成；还有降血脂、抗衰老、抗缺氧、抗辐射、保肝等作 用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从黄芪的干燥根中分离得到的一种具有治疗胰腺癌作 用的留体类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I )，
[0008]
〇·
[0009] 所述的化合物（I )的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将黄芪的干燥根粉碎， 用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤（a) 中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用75%乙醇洗脱8 个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中75% 乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为90:1、65:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体 积比为25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤⑷中组分2 用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收 集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I )。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80 %。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I )和药学上可接受的 载体。
[0013] 所述的化合物（I )在制备治疗胰腺癌药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗胰腺癌药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I )，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物（I )结构式；
[0019] 图2为化合物（I )理论E⑶值与实验E⑶值比较； 图3为细胞增殖检测统计图
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 实施例1 :化合物（I )分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023] 经鉴定黄苗为豆科植物蒙古黄苗 Astragalus memeranaceus (Fisch. )Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao 的根。
[0024] 制备方法：（a)将黄芪的干燥根（8kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（25LX 3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱 和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（351g)和正丁醇萃 取物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱 体积，再用75 %乙醇洗脱8个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸 膏（133g) ;(c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为90:1(8个 柱体积）、65:1 (8个柱体积）、30: U6个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和1:1 (5个柱体积） 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (31g)用正相硅胶进一步 分离，依次用体积比为25:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积）和5: U6个柱体积）的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (17g)用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I ) (31mg)。
[0025] 结构确证：白色无定形粉末；HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z 419. 3312,结合核磁 特征可得分子式为C28H44O,不饱和度为7。核磁共振氢谱数据S H(ppm，DMS0-d6,500MHz): H-I (1. 87, m)，H-I (1. 98, m)，H-2 (2. 16, m)，H-2 (2. 24, m)，H-4 (1. 99, m)，H-4 (2. 18, m)， H-5(0. 71，m)，H-6(l. 17, m)，H-6(l. 54, m)，H-7(l. 58, m)，H-7(l. 66, m)，H-8(l. 39, m)， H-9(l. 52, m)，H-ll(l. 41，m)，H-ll(l. 49, m)，H-12(l. 13, m)，H-12(2. 01，m)，H-14(l. 00， m)，H-15(l. 61，m)，H-15(l. 87, m)，H-16(l. 56, m)，H-16(l. 68, m)，H-17(2. 01，m)， H-18 (0· 97, s)，H-19 (0· 85, s)，H-21 (I. 67, s)，H-22 (5. 24, m)，H-23 (2. 67, m)，H-23 (2. 52， m)，H-25 (2. 17, m)，H-26 (0. 98, d，J = 6. 9)，H-27 (0. 98, d，J = 6. 9)，H-28 (4. 58, d，J =1.3)，H-28(4.66, s);核磁共振碳谱数据 Sc(ppm，DMS0-d6，125MHz) :37.8(CH2，1-C)， 38. 2 (CH2, 2-C)，211. 7 (C，3-C)，44. 3 (CH2, 4-C)，53. 4 (CH，5-C)，29. 2 (CH2, 6-C)，31. I (CH2， 7-C)，34. 2(CH，8-C)，46. 3(CH，9-C)，35. 2(C，10-C)，21. I (CH2, 11-C)，39. 8(CH2,12-C)， 41. 9 (C，13-C)，56. I (CH，14-C)，23. 3 (CH2, 15-C)，22. 0 (CH2, 16-C)，57. 7 (CH，17-C)， 11. 3(CH3,18-C)，13. 5(CH3, 19-C)，139. 7(C，20-C)，21. 9(CH3,21-C)，121. 4(CH，22-C)， 32. 8 (CH2, 23-C)，155. 8 (C，24-C)，33. 5 (CH，25-C)，21. 6 (CH3, 26-C)，21. 6 (CH3, 27-C)， 105. 7(CH2,28-C);碳原子标记参见图1。红外光谱表明该化合物含有酮羰基（1720cm1)。 1H-NMR 谱显示五个甲基信号[δ HO. 97 (s，H3-18)，0· 85 (s，H3-19)，1. 67 (s，H3-21)， 0· 98 (d，J = 6. 9Hz，H3-26)和 0· 98 (d，J = 6. 9Hz，H3-27)]，环外亚甲基[δ Η4· 58 (d， J = 1.3Ηζ，Η-28α)和 4.66(s，Η-28β)]，以及一个烯属次甲基质子信号[δΗ5.24(πι， H-22)]。13C-NMR谱显示了 28个碳信号，包括五个甲基，十一个亚甲基[一个烯属亚甲基 δα05. 7(C-28)]，七个次甲基[一个烯属次甲基SC121.4(C-22)]，以及五个季碳[两 个烯烃季碳 SC139.7(C-20)和 155.8(024)，一个酮羰基 SC21L7(C-3)]。HMBC 谱中 Η3-21 ( δ HL 67)与 C-17 ( δ C57. 7)，C-20 ( δ C139. 7)和 C-22 ( δ C121. 4) ;H2-28 ( δ H4. 58 和 4· 66)与 C-23 ( δ C32. 8)，C-24 ( δ C155. 8)和 C-25 ( δ C33. 5);以及 H