治疗特定受试者组的方法中使用的针对pcsk9的人抗体的制作方法

治疗特定受试者组的方法中使用的针对pcsk9的人抗体的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于治疗蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/KEXIN型9(PCSK9)表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，所述方法通过施用PCSK9特异性抗体或其抗原结合片段，且优选地通过额外施用3-羟基-3-甲基-戊二酰-CoA还原酶(HMG-CoA还原酶)抑制剂进行。本发明进一步涉及PCSK9特异性抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。本发明还涉及包含包装材料、PCSK9特异性抗体或其抗原结合片段、以及标签或包装插页的制品，所述标签或包装插页指示哪组患者可以用所述抗体或片段治疗，哪组患者不得用所述抗体或片段治疗，以及应当使用哪种剂量方案。本发明进一步涉及测试PCSK9特异性抗体或其抗原结合片段用于治疗某些疾病或状况以及用于治疗特定患者亚组的效力的方法。
【专利说明】治疗特定受试者组的方法中使用的针对PCSK9的人抗体
[0001]本发明涉及用于治疗蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9(proproteinconvertase subtilisin/kexin type9, PCSK9)表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，其通过施用PCSK9特异性抗体或其抗原结合片段，并且优选地，通过额外施用3-羟基-3-甲基-戊二酰-CoA还原酶(HMG-CoA还原酶)抑制剂进行。本发明进一步涉及PCSK9特异性抗体或其抗原结合片段(优选与HMG-CoA还原酶抑制剂组合)，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。
[0002]本发明还涉及包含包装材料、PCSK9特异性抗体或其抗原结合片段、和标签或包装插页的制品，所述标签或包装插页指示哪组患者可以用所述抗体或片段治疗，哪组患者不得用所述抗体或片段治疗，以及应使用哪种剂量方案。
[0003]本发明进一步涉及测试PCSK9特异性抗体或其抗原结合片段用于治疗某些疾病或状况及用于治疗特定患者亚组的方法。
[0004]发明背景
[0005]蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9 (PCSK9)是一种属于分泌性枯草杆菌酶(subtilase)家族的蛋白酶K亚家族的蛋白质原转化酶。编码的蛋白质以可溶性酶原合成，所述可溶性酶原在内质网中经历自身催化分子内加工。证据表明PCSK9通过促进LDL受体(其介导肝中的LDL胞吞，即LDL从循环中清除的主要路径)的降解来增加血浆LDL胆固醇。PCSK9蛋白的结构显示，它具有信号序列，接着是前域(prodomain)、含有保守的残基三联体(D186、H226和S386)的催化域和C端域。它以可溶性74kDa前体合成，该前体在ER中经历自身催化切割，产生14kDa的前域和60kDa的催化片段。已显示自身催化活性是分泌所需要的。在切割 后，该前域仍与催化域紧密联合。
[0006]针对PCSK9 的抗体记载于，例如 TO2008/057457、TO2008/057458、TO2008/057459、W02008/063382.W02008/125623 和 US2008/0008697。特别适用于实践本发明的抗 PCSK9 抗体披露于US2010/0166768A1中，其内容通过提述完整据此并入。
[0007]本发明的根本技术问题
[0008]他汀类(statins)是世界上最广泛使用的药物之一。尽管他汀类一般展现出卓越的安全性概况，但期望通过降低已经较低的不想要的副作用(如肌病)率来进一步优化安全性概况。
[0009]尽管降脂剂如他汀类有普遍利用度，但在1999和2006年间在美国治疗高胆固醇血症(hypercholesterolemia)的所有成人患者中的约30%未能实现其推荐的LDL-C目标。对此的原因包括对疗法的不良依从性、药物抗性/不耐受以及不利事件率和增加的剂量之间的正关系。此外，由于最有效的降脂剂仅能将LDL-C水平降低多至55%，在需要LDL-C实质性降低的患者，如那些患有家族性高胆固醇血症的患者中的目标达成率(targetattainment rate)经常显著低于可以预期的。因此，需要更有效的降脂剂和治疗方案来改进这些患者中的目标达成率。
[0010]相当令人惊讶地，本发明的发明人发现在以特定剂量方案施用和/或对特定患者组施用时，抗PCSK9抗体或其片段的施用提高他汀类的LDL-胆固醇降低活性。[0011]如此，抗PCSK9抗体或其片段的共施用增强他汀疗法的功效并允许降低他汀类的剂量，由此减少不想要的副作用。
[0012]此外，本发明的发明人发现抗PCSK9抗体和/或他汀类的特定剂量方案比其它方案更好地适用于降低LDL-胆固醇水平。发明人还发现一些患者亚组比其它亚组更加受益于用抗PCSK9抗体或其片段和/或他汀类治疗。发明人进一步发现用抗PCSK9抗体或其片段和/或他汀类治疗对一些患者亚组是禁忌的(contraindicated)。
[0013]上文概述并不必然描述了本发明解决的所有问题。
[0014]发明概述
[0015]在第I方面，本发明涉及用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，包括:
[0016]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段,其中以范围为5mg至500mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段，并
[0017]对所述受试者施用治疗量的HMG-CoA还原酶抑制剂，其中以范围为0.05mg至IOOmg的剂量量施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0018]在第2方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，
[0019]其中所述 抗体或其抗原结合片段用于以范围为5mg至500mg的剂量量施用，
[0020]其中所述抗体或其抗原结合片段进一步用于与范围为0.05mg至IOOmg的剂量量的HMG-CoA还原酶抑制剂联合施用。
[0021]在第3方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和(C)包装材料内含有的标签或包装插页，其指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病。
[0022]在第4方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和(C)包装材料内含有的标签或包装插页，其指示与他汀应用一起用所述抗体或其抗原结合片段治疗患者。
[0023]在第5方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和(C)标签或包装插页，其指示与他汀一起用所述抗体或其抗原结合片段治疗患者对于属于下列一组或多组的患者是禁忌的:(i)吸烟者；(ii) 70岁龄以上的个体；(iii)患有高血压的个体；Qv)怀孕的女性；(V)试图怀孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；(ix)饮用过量酒精的个体；(x)具有肾问题的个体；(xi)患有甲状腺机能减退(hypothyroidism)的个体；(xii)患有肌病症的个体；(xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；(xiv)其呼吸有严重问题的个体；(XV)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素(ciclosporin)或抗组胺剂(antihistamines))、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素(erythromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、酮康唑(ketoconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、利福平(rifampicin)、夫西地酸(fusidic acid))、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐(gemfibrozil)、考来替泊(colestipol))、|丐通道阻断剂(例如维拉帕米(verapamil)、地尔硫卓(diltiazem))、调节心律的药物(地高辛(digoxin)、胺碘酮(amiodarone))、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦(nelfinavir))、华法林(warfarin)、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草(St.John’ s wort);或(xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁的个体；
(xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；(xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；(XX)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或(xxi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体。
[0024]在第6方面，本发明涉及测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:高胆固醇血症、高脂血症(hyperlipidemia)、血脂障碍(dyslipidemia)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)和心血管疾病(cardiovasculardisease),所述方法包括:
[0025]用所述抗体或其抗原结合片段治疗选定的患者群体，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平；并
[0026]测定所述抗体或其抗原结合片段的功效，其通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后所述患者群体中的LDL-C水平进行，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的。
[0027]在第7方面，本发明涉及测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，所述方法包括:
[0028]通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后患者群体中的LDL-C水平测定已经用于用所述抗体或其抗原结合片段治疗选定患者群体的抗体或其抗原结合片段的功效，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的。
[0029]在第8方面，本发明涉及包含特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段(见“用于实践本发明的优选抗体”部分)和标签的包装，所述标签包含印刷的声明，其告知患者在一种或多种选自下组的适应征中指示与他汀一起的抗体治疗:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病。
[0030]在第9方面，本发明涉及包含特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段(见“用于实践本发明的优选抗体”部分)和标签的包装，所述标签包含印刷的声明，其告知患者与他汀一起的抗体治疗对于属于下列一或多组的患者是禁忌的:(i)吸烟者；(ii) 70岁龄以上的个体；(iii)患有高血压的个体；Qv)怀孕的女性；(V)试图怀孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；(ix)饮用过量酒精的个体；(X)具有肾问题的个体；(xi)患有甲状腺机能减退的个体；(xii)患有肌病症的个体；(xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；(xiv)其呼吸有严重问题的个体；(XV)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或(xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁或每天食用超过半个葡萄柚的个体；
(xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；(xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；(XX)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或(xxi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体。
[0031]在第10方面，本发明涉及调节血液中LDL水平的方法，其包括:
[0032]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段,其中以范围为5mg至500mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段，并
[0033]对所述受试者施用治疗量的HMG-CoA还原酶抑制剂，其中以范围为0.05mg至IOOmg的剂量量施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0034]在第11方面，本发明涉及预防血液中(持久)升高的LDL水平的效应的方法，其包括:
[0035]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段,其中以范围为5mg至500mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段，并
[0036]对所述受试者施用治疗量的HMG-CoA还原酶抑制剂，其中以范围为0.05mg至IOOmg的剂量量施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。
`[0037]在第12方面，本发明涉及测定药用化合物是否可用于缓解、改善、抑制或预防PCSK9活性或表达具有影响的疾病或状况的方法，包括:(a)对受试者施用特异性结合PCSK9的化合物，优选为特异性结合PCSK9的抗体或其抗原结合片段，并(b)测定血液中多少分数的PCSK9附接于来自(a)的化合物。
[0038]在第13方面，本发明涉及用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，其包括:
[0039]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，
[0040]其中所述有此需要的受试者落入下列一组或多组受试者中:(i)具有至少IOOmg/dL的血清LDL胆固醇(LDL-C)水平的受试者；(ii)具有低于40mg/dL的血清HDL-C水平的受试者；(iii)具有至少200mg/dL的血清胆固醇水平的受试者；(iv)具有至少150mg/dL的血清三酰甘油水平的受试者，其中在禁食至少8小时后测定所述三酰甘油水平；(V)至少35岁龄的受试者；(vi)比75岁年龄小的受试者；(vii)具有25或更大的BMI的受试者；(viii)男性受试者；(ix)女性受试者；(X)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少30mg/dL的受试者；或(xi)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少20%的受试者。
[0041]在第14方面，本发明涉及用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，包括:
[0042]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，
[0043]其中所述有此需要的受试者不落入下列一组或多组受试者中:(i)吸烟者；(ii) 70岁龄以上的个体；(iii)患有高血压的个体；(iv)怀孕的女性；(v)试图怀孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；(ix)饮用过量酒精的个体；(X)具有肾问题的个体；(xi)患有甲状腺机能减退的个体；(xii)患有肌病症的个体；(xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；(xiv)其呼吸有严重问题的个体；(XV)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或(xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁的个体；(xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；(xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；(XX)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或(xxi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体。
[0044]在第15方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体在对受试者(优选人或非人哺乳动物)施用后以下列一项或多项特征为特征:
[0045]1.低密度脂蛋白(LDL-C)水平相对于给药前水平降低至少约_25%至约-40%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平的至少-25%，更优选至少-30%,特别是在以约40至约60mg,优选以约45至约55mg且更优选约50mg的剂量以两周施用方案(每隔一周，E2W)施用时，
[0046]2.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-65%及在至少14天的时段里持续降低， 其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_40%，更优选至少_45%，特别是在以约IOOmg E2W的剂量施用时，
[0047]3.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_60%至至少约-75%[例如至少约_60%、至少约-65%、至少约-70%或至少约-75%]及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_55%，更优选至少-60%，特别是以约150mg E2W的剂量施用时，
[0048]4.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约40%至约75%及在至少28天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-35%，更优选至少_40%，特别是以约200mg E4W的剂量施用时，
[0049]5.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-75%及在至少28天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-40%，更优选至少_45%，特别是在以约300mg E4W的剂量施用时，
[0050]6.血清HDL胆固醇水平相对于给药前水平升高至少2%、至少2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%，特别是在以约150mg E2W的剂量施用时，
[0051]7.血清总胆固醇相对于给药前水平降低至少约25%至约35%及在至少24天的时段里持续降低，[0052]8.血清总胆固醇相对于给药前水平降低至少约65%至约80%及在至少24天的时段里持续降低，
[0053]9.血清三酰甘油水平相对于给药前水平降低至少约25%至约40%，
[0054]10.对肝功能很少或没有可测量的影响，如通过ALT和AST测量测定的，
[0055]11.对肌钙蛋白水平很少或没有可测量的影响，
[0056]12.下列一项或多项升高:总胆固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-1比率。
[0057]在第16方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，其中所述抗体或其抗原结合片段用于以约50至500mg的剂量施用。
[0058]在第17方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，其中所述抗体或其抗原结合片段用于对至少落入以下一组受试者中的受试者施用:(i)具有至少100mg/dL (即至少2.6mmol/L)或至少115mg/dL (即至少3.0mmol/L)的血清LDL胆固醇(LDL-C)水平的受试者；(ii)具有小于40mg/dL的血清HDL-C水平的受试者；(iii)具有至少200mg/dL的血清胆固醇水平的受试者；(iv)具有至少150mg/dL的血清三酰甘油水平的受试者，其中在禁食至少8小时后测定所述三酰甘油水平；(V)至少18、24或35岁龄的受试者；(vi) 75岁年龄以下的受试者；(vii)具有25或更多、或30或更大的BMI的受试者；(viii)男性受试者；(ix)女性受试者；(X)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少`30mg/dL、至少40mg/dL、至少45mg/dL或至少50mg/dL (尤其在治疗12周后)的受试者；或(xi)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%或至少70% (尤其在治疗12周后)的受试者。
[0059]在第18方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，
[0060]其中所述抗体或其抗原结合片段用于对不落入下列一组或多组受试者中的受试者施用:(i)吸烟者；(ii)70岁龄以上的个体；(iii)患有高血压的个体；(iv)怀孕的女性；(V)试图怀孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；
(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；(ix)饮用过量酒精的个体；(X)具有肾问题的个体；(xi)患有甲状腺机能减退的个体；(xii)患有肌病症的个体；(xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；(xiv)其呼吸有严重问题的个体；(xv)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或(xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁或每天食用超过半个葡萄柚的个体；(xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；
(xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；(XX)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或(XXi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体。
[0061]在第19方面，本发明涉及包含与药学可接受赋形剂或载体一起的依照本发明的抗体或其抗原结合片段的药物组合物。
[0062]在第20方面，本发明关注如本文中描述的注射溶液，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段，并且优选每Iml体积包含约40mg至约200mg或约50至约200mg,例如约40mg、约50mg、约75mg、约IOOmg^ 150mg或约200mg的抗体或其抗原结合片段。
[0063]在第21方面，本发明关注如本文中描述的干配制剂，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段，并且优选每剂包含约40mg至约500mg、50至约500mg、约50至约400、约50至约 300，例如约 40mg、约 50mg、约 75mg、约 lOOmg、约 150mg、约 200mg、约 250mg、约 300mg、约350mg、约 400mg、约 450mg 或约 500mg,并且更优选地约 50mg、约 lOOmg、约 150mg、约 200mg、约250mg、约300mg,且甚至更优选地约150mg、约200mg或约300mg的抗体或其抗原结合片段。
[0064]在第22方面，本发明关注抗体或其抗原结合片段，如在依照第19方面的药物组合物之一中包含的。
[0065]在第23方面，本发明涉及包含本发明的抗体、其抗原结合片段或药物组合物的单位剂量形式。
[0066]在第24方面，本发明关注包含本发明的药物组合物、本发明的液体配制剂或本发明的干配制剂、本发明的抗体或其抗原结合片段、或本发明的一种或多种单位剂量形式、以及容器或包装的制品。
[0067]在第25方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段 ；和(c)包装材料内含有的标签或包装插页，其指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，并进一步指示可以治疗落入如在第13方面中叙述的一组或多组受试者中的受试者。
[0068]在第26方面，本发明涉及一种制品，其包含(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和(C)在包装材料内含有的标签或包装插页，其指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，并且进一步指示用所述抗体或其抗原结合片段治疗患者对于属于如在第14方面中叙述的一组或多组受试者中的患者是禁忌的。
[0069]在第27方面，本发明关注本发明的药物组合物或抗体或其抗原结合片段(如依照本发明第15或19方面的)，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。
[0070]在第28方面，本发明关注用于制备本发明的药物组合物，例如依照第19方面的药物组合物的方法，包括将抗体或其抗原结合片段以及任选地HMG-CoA还原酶抑制剂与一种或多种药用赋形剂或载体混合。
[0071]在第29方面，本发明关注用于制备本发明的单位剂量形式的方法，其包括分配一定量的包含一剂或多剂抗体或其抗原结合片段以及任选地一剂或多剂所述HMG-CoA还原酶抑制剂的依照本发明的药物组合物、抗体或其抗原结合片段、液体配制剂或干配制剂，并将它们加工为适合作为人和/或动物受试者的单一剂量的物理离散单元。
[0072]在第30方面，本发明关注用于制备或装配本发明的制品的方法，包括在容器中包装本发明的药物组合物、抗体、液体配制剂、干配制剂或一种或多种单位剂量形式，任选地以及下列一项或多项:标签、使用说明书、应用装置。
[0073]在第31方面，本发明涉及测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，所述方法包括:
[0074]用所述抗体或其抗原结合片段治疗选定的患者群体，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平；并
[0075]通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后所述患者群体中的LDL-C水平测定所述抗体或其抗原结合片段的功效，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的；
[0076]其中每位患者落入如第13方面所叙述的一组或多组受试者中。
[0077]在第32方面，本发明涉及测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，所述方法包括:
[0078]通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后所述患者群体中的LDL-C水平测定在已经用于用所述抗体或其抗原结合片段治疗选定患者群体的抗体或其抗原结合片段的功效，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的；
[0079]其中每位患者落入如第13方面所叙述的一组或多组受试者中。
[0080]在第33方面，本发明涉及用于测试化合物在降低受试者的胆固醇水平中的功效的方法，包括以下步骤:(a)提供啮齿类动物；(b)对啮齿类动物施用特异性结合PCSK9的抗体或其抗原结合片段；(c)对所述啮齿类动物施用测试化合物；(d)测定该测试化合物在啮齿类动物中的效应，其中与对照动物的胆固醇水平相比，在啮齿类动物中胆固醇水平的降低指示该测试化合物在降低受试者的胆固醇水平中是有效的，其中对照动物来自与所述啮齿类动物相同的物种，并且其中对照动物尚未用该测试化合物攻击。
[0081]在第34方面，本发明关注增强经历他汀疗法的受试者中的LDL-C降低活性的方法，所述方法包括对受试者施用特异性结合人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9 (hPCSK9)的抗体或其抗原结合片段，其中以约5mg至约500mg范围内的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段，由此增强他汀疗法在受试者中的LCL-C降低活性。
[0082]在第35方面，本发明关注用于处理受试者中升高的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的试剂盒，所述试剂盒包含(a)药学单位剂量形式，其包含特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；以及药学可接受载体，其中所述抗体或抗原结合片段以约5mg至约500mg范围内的剂量量存在；和(b)具有使用说明书的标签或包装插页。
[0083]在第36方面，本发明关注治疗患有以升高的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平为特征的疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括:
[0084](a)选择具有大于100mg/dL的血液LDL-C水平的受试者；并
[0085](b)对所述受试者施用包含特异性结合人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9(hPCSK9)的抗体或其抗原结合片段的组合物；由此降低有此需要的受试者中的胆固醇水平。
[0086]在第26方面，本发明关注降低有此需要的受试者中的胆固醇水平的方法，包括:
[0087](a)选择具有大于100mg/dL的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的受试者；并
[0088](b)对所述受试者施用包含特异性结合人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9(hPCSK9)的抗体或其抗原结合片段的组合物；由此降低有此需要的受试者中的胆固醇水平。
[0089]此发明概述并不必然描述本发明的所有特征。通过审阅随后的详细描述，其它实施方案将变得明显的。
[0090]附图简述
[0091]图1显示在用抗PCSK9抗体316P治疗后三组患者的LDL-胆固醇(LDL-C)水平相对于基线的百分比降低。这些患者组为:(I)患有家族性高胆固醇血症(HeFH)的患者；(2)按饮食且按稳定的阿托伐他汀(atorvastatin)疗法的患有其它形式的原发性高胆固醇血症(非FH)的患者；和(3)仅按饮食的患有其它形式的原发性高胆固醇血症(非FH)的患者。在第1、29和43天皮下施用50mg剂量的抗PCSK9抗体。以实线显示来自接受抗体的患者组(50-mg-FH-否；50-mg-FH-是；50_mg-组合)的结果，而以虚线显示来自接受安慰剂的患者(PB0-FH-否；PB0-FH-是；ΡΒ0_组合)的结果。
[0092]图2显示在用抗PCSK9抗体316P治疗后三组患者的LDL-胆固醇(LDL-C)水平相对于基线的百分比降低。这些患者组为:(I)患有家族性高胆固醇血症(HeFH)的患者；(2)按饮食且按稳定的阿托伐他汀疗法的患有其它形式的原发性高胆固醇血症(非FH)的患者；和(3)仅按饮食的患 有其它形式的原发性高胆固醇血症(非FH)的患者。在第1、29和43天皮下施用IOOmg剂量的抗PCSK9抗体。以实线显示来自接受抗体的患者组(100-mg-FH-否；100-mg-FH-是；100-mg-组合)的结果，而以虚线显示来自接受安慰剂的患者(PB0-FH-否；PB0-FH-是；ΡΒ0_组合)的结果。
[0093]图3显示在用抗PCSK9抗体316P治疗后三组患者的LDL-胆固醇(LDL-C)水平相对于基线的百分比降低。这些患者组为:(I)患有家族性高胆固醇血症(HeFH)的患者；
(2)按饮食且按稳定的阿托伐他汀疗法的患有其它形式的原发性高胆固醇血症(非FH)的患者；和(3)仅按饮食的患有其它形式的原发性高胆固醇血症(非FH)的患者。在第
1、29和43天皮下施用150mg剂量的抗PCSK9抗体。以实线显示来自接受抗体的患者组(150-mg-FH-否；150-mg-FH-是；150-mg-组合)的结果，而以虚线显示来自接受安慰剂的患者(PB0-FH-否；PBO-FH-是；ΡΒ0_组合)的结果。
[0094]图4显示研究2的研究设计，用于在筛选前接受与阿托伐他汀不同或不为稳定剂量阿托伐他汀IOmg的降脂治疗至少6周的患者组或未用药的患者。
[0095]图5显示研究2的研究设计，用于在筛选前以稳定剂量接受阿托伐他汀IOmg至少6周的患者组。
[0096]图6显示在12周里稳定阿托伐他汀治疗和L0CF(末次观察结转)时接受抗体316P的研究I患者的LDL-C均值数值分布。研究设计为评估抗体316P在用稳定剂量的阿托伐他汀(10mg、20mg或40mg)治疗的、具有升高的LDL_C(≥lOOmg/dL或2.59mmol/L)的高胆固醇血症患者中的功效和安全性。在导入期(run-1n period)期间,如果患者未准备好，那么使其稳定于阿托伐他汀治疗(10mg、20mg或40mg)。再一周后，经由IVRS/IWRS以1:1:1:1:1:1比率将患者中心随机化为6个处理组(安慰剂、316P50mg E2W、316P100mgE2W、316P150mg E2W、316P200mg E4W、316P300mg E4W)之一，并以双盲方式治疗约 12 周。根据随机化前接受的阿托伐他汀剂量将随机化分层。在双盲治疗期期间，患者每2周回到地点以接受研究处理(316P或安慰剂)。然后，双盲治疗期接着是8周随访期。如可从图6得到的，除接受安慰剂的患者组外的所有处理组在整个研究期里具有显著且持久的LDL-C水平降低。
[0097]发明详述
[0098]定义
[0099]在下文详细描述本发明前，应理解本发明不限于本文中描述的特定方法学、方案和试剂，因为这些可以变化。还应理解本文中使用的术语仅为了描述具体实施方案，而并不意图限制本发明的范围，其仅会由所附权利要求书限制。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域中普通技术人员通常的理解具有相同的含义。
[0100]优选地，如“Amultilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC
Recommendations) ” , Leuenberger, H.G.ff, Nagel, B.和 Kolbl, H.编(1995), HelveticaChimica Acta, CH-4010Basel, Switzerland)中描述的那样定义本文中使用的术语。
[0101]贯穿本说明书和所附的权利要求书中，除非上下文另外需要，词语“包含/包括”应理解为暗指包括所述整数或步骤或整数或步骤组，但并不排除任何其它整数或步骤或整数或步骤组。
[0102]贯穿本说明书的文本引用数个文件(例如:专利、专利申请、科学出版物、制造商说明书、使用说明书、GenBank登录号序列提交等)。本文中的内容无一解释为承认本发明没有资格凭借在先发明而早于此类公开内容。本文中引用的一些文件表征为“通过提述并入”。在这类并入的参考文献的定义或教导与本说明书中记载的定义或教导之间发生冲突的事件中，应以本说明书的文本优先。
[0103]序列:本文中所提述的所有序列均在所附序列表中公开，序列表及其全部内容和公开为本说明书的一部分。
[0104]术语“约”在与数字数值联合使用时意为涵盖具有比指定数字数值小5%的下限和比指定数字数值大5%的上限的范围内的数字数值。
[0105]如本文中使用的，术语“人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9”或“hPCSK9”指具有SEQ ID NO: 754中所示核酸序列和SEQ ID N0:755的氨基酸序列的hPCSK9或其生物学活性片段。
[0106]术语“特异性结合”、“特异性的结合”等意指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理学条件下相对稳定的复合物。可以通过至少约1x10_6M或更小的平衡解离常数(例如Kd越小指示结合越紧密)来表征特异性结合。用于确定两种分子是否特异性结合的方法是本领域中公知的，并且包括例如，平衡透析、表面等离振子共振等。然而，特异性结合hPCSK9的分离的抗体可以展现出与其它抗原，如来自其它物种的PCSK9分子的交叉反应性。此外，如本文中使用的，结合hPCSK9和一种或多种其它抗原的多特异性抗体(例如双特异物)仍被视为“特异性结合” hPCSK9的抗体。
[0107]如本文中使用的，术语“KD”意图指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。通常以“mol/L”(缩写为“Μ”)测量平衡解离常数 。
[0108]术语“解离速率(slow off rate) ”、“K解离”或“kd”意指如通过表面等离振子共振例如BIAC0RE?测定的，以IxlO-3S-1或更小，优选lxlO、—1或更小的速率常数从hPCSK9解离的抗体。
[0109]术语“高亲和力”抗体指如通过表面等离振子共振例如BIAC0RE?或溶液亲和力ELISA测定的，对hPCSK9具有至少ΙΟ,Μ ;优选10_ηΜ ;甚至更优选10_12Μ的结合亲和力的那些单抗。
[0110]如本文中使用的，术语“表面等离振子共振”指允许例如使用BIAC0RE?系统(Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.),通过检测生物传感器基质内蛋白质浓度的变化来分析实时生物特异性相互作用的光学现象。
[0111]“表位”，亦称为抗原决定簇，是受到免疫系统，特别地受到抗体、B细胞或T细胞识别的抗原区域。如本文中使用的，“表位”是能够结合如本文中描述的抗体或其抗原结合片段的抗原部分。在此上下文中，术语“结合”优选指“特异性结合”，如本文中定义的。表位通常由分子的化学活性表面聚集如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基组成，并且可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。构象和非构象性表位的区别之处可以在于，在存在变性溶剂的情况下失去对前者，而非后者的结合。
[0112]“互补位”是抗体中特异性结合表位的部分。
[0113]如本文中使用的，术语“抗体”意图指由4条多肽链，即通过二硫键互连的两条重(H)链和两条轻(L)链构成的免疫球蛋白分子。术语“抗体”还包括抗体，特别是本文中所述抗体的所有重组形式，例如在原核生物中表达的抗体、未糖基化的抗体、以及如下文所述的任何抗原结合抗体片段和衍生物。每条重链由重链可变区(“HCVR”或“VH”)和重链恒定区(由域CH1、CH2和CH3构成)构成。每条轻链由轻链可变区(“LCVR或“VL”)和轻链恒定区(CL)构成。VH和VL区可以进一步细分成具有高可变性的区域，称作互补决定区(CDR)，其散布有更保守的、称作框架区(FR)的区域。每个VH和VL由3个CDR和4个FR构成，从氨基端向羧基端按照如下的次序排列:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白对宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)的结合。
[0114]还可以取代一个或多个⑶R残基或省略一个或多个⑶R。已在科学文献中描述了如下的抗体，其中可以省去一个或两个⑶R实现结合。Padlan等(1995FASEB J.9:133-139)基于公开的晶体结构分析了抗体与其抗原之间的接触区，并且得出的结论是仅约五分之一到三分之一的⑶R残基实际上与抗原接触。Padlan还发现许多其中的一个或两个⑶R没有氨基酸与抗原接触的抗体(亦参见Vajdos等.2002J Mol Biol320:415-428)。
[0115]可以基于先前的研究(例如CDRH2中的残基H60-H65经常是不需要的)、从位于Chothia⑶R外部的Kabat⑶R区、通过分子建模和/或凭借经验鉴定不接触抗原的⑶R残基。如果省去CDR或其残基，那么通常将其用在另一种人抗体序列或这类序列的通用序列中占据相应位置的氨基酸取代。也可以凭借经验选择CDR内用于取代的位置和取代的氨基酸。经验性取代可以是保守或非保守的取代。
[0116]如本文中使用的，术语抗体的“抗原结合片段”(或简单地“结合部分”)指抗体中保留特异性结合hPCSK9的能力的一或多种片段。已显示可以通过全长抗体的片段实施抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合片段”内涵盖的结合片段的例子包括(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，即包含通过铰链区的二硫化物桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的 VL 和 VH 域组成的 Fv 片段；(V) dAb 片段(Ward 等,(1989) Nature341:544-546)，其由VH域组成；(vi)分离的互补性决定区(CDR)，和(vii)任选地可以由合成接头连接的两个或更多个分离的⑶R的组合。此外，尽管Fv片段的两个域VL和VH由分开的基因编码，但它们可以使用重组方法连接，这通过使它们能够以单个蛋白质链生成的合成接头实现，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv);参见例如Bird等(1988)Science242:423-426 ；和 Huston 等(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883)。还意图将这类单链抗体涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”内。另一个例子是结合域免疫球蛋白融合蛋白，其包含(i)与免疫球蛋白铰链区多肽融合的结合域多肽，(ii)与铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区，和(iii)与CH2恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。所述结合域多肽可以是重链可变区或轻链可变区。另外在US2003/0118592和US2003/0133939中披露了结合域免疫球蛋白融合蛋白。这些抗体片段是使用本领域技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式筛选所述片段的效用。“抗原结合片段”的别的例子是所谓的微抗体(microantibody)，其自单一⑶R衍生。例如,Heap等描述了一种自针对HIV-1的gpl20被膜糖蛋白的抗体重链CDR3衍生的17个氨基酸残基的微抗体(Heap CJ等.(2005) J.Gen.Virol.86:1791-1800) ?其它例子包括小抗体模拟物，其包含优选通过关联的框架区彼此融合的两个或更多个CDR区。Qiu等(Qiu X-Q,等(2007)Nature biotechnology25 (8): 921-929)已描述了这类包含通过关联 VH FR2 连接的 VH CDRl和VL⑶R3的小抗体模拟物。
[0117]如此，如本文中使用的，术语“抗体或其抗原结合片段”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。
[0118]可用于本发明的抗体及其抗原结合片段可以来自任何动物起源，包括禽类和哺乳动物。优选地，所述抗体或片段来自人`、黑猩猩、啮齿类(例如小鼠、大鼠、豚鼠或家兔)、鸡、火鸡、猪、绵羊、山羊、骆驼、牛、马、驴、猫或犬起源。特别优选抗体为人或鼠起源的。本发明的抗体还包括嵌合分子，其中将自一种物种(优选人)衍生的抗体恒定区与自另一物种(例如小鼠)衍生的抗原结合位点组合。此外，本发明的抗体包括人源化分子，其中将自非人物种(例如自小鼠)衍生的抗体的抗原结合位点与具有人起源的恒定区和框架区组合。
[0119]如本文中例示的，本发明的抗体可以直接从表达抗体的杂交瘤获得，或者可以克隆并在宿主细胞(例如CHO细胞或淋巴细胞性细胞)中重组表达。宿主细胞的别的例子为微生物如大肠杆菌(E.coli)和真菌如酵母。或者，可以在转基因非人动物或植物中重组生成它们。
[0120]术语“嵌合抗体”指其中的重链和轻链的每个氨基酸序列的一部分与自特定物种衍生或属于特定类的抗体中的相应序列同源，而链的剩余区段与另一物种或类中的相应序列同源的那些抗体。通常，轻链和重链两者的可变区模拟自哺乳动物的一个物种衍生的抗体的可变区，而恒定部分与自另一物种衍生的抗体序列同源。这类嵌合形式的一个清楚的优点是可以使用容易可获得的来自非人宿主生物体的B细胞或杂交瘤从目前已知的来源方便地衍生可变区，其与自例如人细胞制备物衍生的恒定区组合。可变区具有易于制备的优点，并且特异性不受来源影响，而人的恒定区与来自非人来源的恒定区相比不太可能在注射抗体时引发来自人受试者的免疫应答。然而，定义不限于该具体例子。
[0121]术语“人源化抗体”指具有基本上自来自非人物种的免疫球蛋白衍生的抗原结合位点的分子，其中分子的剩余免疫球蛋白结构基于人免疫球蛋白的结构和/或序列。抗原结合位点可以包含融合至恒定域上的完整可变域或仅包含嫁接到可变域中合适的框架区上的互补性决定区(CDR)。抗原结合位点可以是野生型的或者是通过一处或多处氨基酸取代修饰的，例如修饰以更紧密地类似于人免疫球蛋白。一些人源化抗体形式保留所有的CDR序列(例如人源化的小鼠抗体，其含有来自小鼠抗体的所有6个CDR)。其它形式具有一个或多个相对于初始抗体改变过的CDR。
[0122]用于使抗体人源化的不同方法是技术人员已知的，如由Almagro &Fransson综述的，其内容通过提述完整并入本文(Almagro JC和Fransson J(2008)Frontiers inBiosciencel3:1619-1633)。Almagro & Fransson区分理性办法和经验办法。理性办法的特征在于生成少数工程化抗体变体并评估其结合或任何其它感兴趣的特性。如果设计的变体不产生预期的结果，那么启动新一轮的设计和结合评估。理性办法包括CDR嫁接、表面重建(Resurfacing)、超人源化(Superhumanization)和人字符串内容优化(HumanString Content Optimization)。相比之下,经验办法基于生成大的人源化变体库并使用富集技术或高通量筛选选出最佳克隆。因而，经验办法依赖于能够对大量抗体变体进行搜索的可靠的选择和/或筛选系统。体外展示技术，如噬菌体展示和核糖体展示满足这些要求并且是技术人员公知的。经验办法包括FR库、导向选择(Guided selection)、框架改组(Framework-shuffling)和 Humaneering0
[0123]如本文中使用的，术语“人抗体”意图包括具有自人种系免疫球蛋白序列衍生的可变区和恒定区的抗体。本发明的人单抗可以包含不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过随机或位点特异性的体外诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在⑶R，且尤其在⑶ R3中。然而，如本文中使用的，术语“人抗体”不意图包括其中已将自另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系衍生的CDR序列嫁接到人FR序列上的单抗。本发明的人抗体包括从人免疫球蛋白库或从针对一或多种人免疫球蛋白转基因且不表达内源免疫球蛋白的动物分离的抗体，如记载于例如Kucherlapati & Jakobovits的美国专利N0.5，939，598 中的。
[0124]如本文中使用的，术语“单克隆抗体”指具有单一分子组成的抗体分子的制备物。单克隆抗体展现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。在一个实施方案中，通过杂交瘤生成单克隆抗体，所述杂交瘤包含与永生化细胞融合的从非人动物例如小鼠获得的B细胞。
[0125]如本文中使用的，术语“重组抗体”包括通过重组手段制备、表达、创造或分离的所有抗体，如(a)从就免疫球蛋白基因而言为转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或自其制备的杂交瘤分离的抗体，(b)从经转化以表达该抗体的宿主细胞，例如从转染瘤分离的抗体，(C)从重组的组合抗体库分离的抗体，和(d)通过涉及将免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列的任何其它手段制备、表达、创造或分离的抗体。
[0126]如本文中使用的，术语“转染瘤”包括表达抗体的重组真核宿主细胞，如CHO细胞、NS/Ο细胞、HEK293细胞、HEK293T细胞、植物细胞或真菌，包括酵母细胞。
[0127]如本文中使用的，“异源抗体”就生成这类抗体的转基因生物体而言定义。该术语指如下的抗体，其具有的氨基酸序列或编码核酸序列对应于不由该转基因生物体组成的生物体中找到的并且一般自该转基因生物外的物种衍生的氨基酸序列或编码核酸序列。
[0128]如本文中使用的异源杂合(heterohybrid)抗体”指具有不同生物体起源的轻链和重链的抗体。例如，具有与鼠轻链联合的人重链的抗体是异源杂合抗体。
[0129]如此，适用于本发明的“抗体及其抗原结合片段”包括但不限于多克隆、单克隆、单价、双特异性、异缀合物、多特异性、重组、异源、异源杂合、嵌合、人源化(特别是嫁接有CDR的)、去免疫的、或人的抗体、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、由Fab表达库产生的片段、Fd、Fv、二硫化物连接的Fv(dsFv)、单链抗体(例如scFv)、双抗体或四抗体(Holliger P.等(1993) Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.90 (14), 6444-6448)、纳米抗体(nanobody)(也称为单域抗体)、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如针对本发明抗体的抗Id抗体)和上述任一种的表位结合片段。
[0130]本文中描述的抗体优选为分离的。如本文中使用的，“分离的抗体”意图指基本上没有具有不同抗原特异性的其它单抗的抗体(例如特异性结合hPCSK9的分离的抗体基本上没有特异性结合与hPCSK9不同的抗原的单抗)。然而，特异性结合hPCSK9的分离的抗体可以对其它抗原，如来自其它物种的PCSK9分子具有交叉反应性。
[0131]如本文中使用的，“PCSK9拮抗剂”指抑制PCSK9的至少一种生物学活性，优选PCSK9的蛋白酶活性的化合物。优选的PCSK9拮抗剂的特征在于，在以化学计量量使用时，它们结合血液中存在的10%至100%(优选从50%至100%)的PCSK9。本发明的优选的PCSK9拮抗剂为中和性抗体。
[0132]如本文中使用的，“中和性抗体”(或“中和PCSK9活性的抗体”)意图指其对hPCSK9的结合导致对PCSK9的至少一种 生物学活性的抑制(优选抑制PCSK9的蛋白酶活性)的抗体。可以通过本领域中已知的数种标准的体外或体内测定法中的一或多种，通过测量PCSK9生物学活性的一种或多种指示物来评估对PCSK9生物学活性的此抑制。这类测定法记载于例如US2010/0166768A1，其内容通过提述完整据此并入。
[0133]由于PCSK9通过促进LDL受体的降解来增加血浆LDL胆固醇，PCSK9的活性对数种与升高的血浆LDL胆固醇水平有关的疾病有影响。因而，PCSK9拮抗剂如中和性抗hPCSK9抗体或其抗原结合片段可用于降低升高的总胆固醇、非HDL胆固醇、LDL胆固醇、和/或载脂蛋白BlOO (Ap0BlOO)。因此，PCSK9拮抗剂可用于缓解、改善、抑制或预防数种这类疾病，包括但不限于高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病。
[0134]在具体的实施方案中，可以将本文中描述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段与治疗性模块(“免疫缀合物”)，如细胞毒素、化疗药物、免疫抑制剂或放射性同位素缀合。
[0135]“保守性氨基酸取代”是其中氨基酸残基用另一种有具有类似化学特性(例如电荷或疏水性)的侧链(R基团)的氨基酸残基取代的取代。一般地，保守性氨基酸取代不会实质性改变蛋白质的功能特性。在两种或更多种氨基酸序列因保守性取代而彼此不同的情况下，可以向上调节相似性百分比或程度以校正取代的保守性质。进行此调节的手段是本领域技术人员公知的。参见例如，Pearson(1994)Methods Mo1.Biol.24:307-331。有具有类似的化学特性的侧链的氨基酸组的例子包括:[0136]I)脂肪族侧链:甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；
[0137]2)脂肪族-羟基侧链:丝氨酸和苏氨酸；
[0138]3)含有酰胺的侧链:天冬酰胺和谷氨酰胺；
[0139]4)芳香族侧链:苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；
[0140]5)碱性侧链:赖氨酸、精氨酸和组氨酸；
[0141]6)酸性侧链:天冬氨酸和谷氨酸；以及
[0142]7)含硫侧链:半胱氨酸和甲硫氨酸。 [0143]优选的保守性氨基酸取代组为:缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸、和天冬酰胺-谷氨酰胺。或者，保守性替换是在Gonnet等(1992) Science256:1443-45公开的PAM250对数似然性矩阵中具有正值的任何变化。“中等保守性”替换是在PAM250对数似然性矩阵中具有非负值的任何变化。鉴于已知的遗传密码和重组及合成DNA技术，熟练科学家可以容易地构建编码保守的氨基酸变体的DNA。
[0144]如本文中使用的，“非保守性取代”或“非保守性氨基酸交换”定义为一种氨基酸用上文显示的7个标准氨基酸组I)至7)的不同组中所列的另一种氨基酸交换。
[0145]当指核酸或其片段时，术语“实质性同一性”或“实质上相同的”指示当在合适的核苷酸插入或缺失情况中与另一核酸(或其互补链)最佳比对时，在至少约90%，且更优选地至少约95%、96%、97%、98%或99%的核苷酸碱基中有核苷酸序列同一性，如通过任何公知的序列同一性算法，如FASTA、BLAST或GAP所测量的，如下文论述的。
[0146]当应用于多肽时，术语“实质性相似性”或“基本上相似的”意味着两条多肽序列当如通过程序GAP或BESTFIT使用缺省缺口权重进行最佳比对时，共享至少90%的序列同一性，甚至更优选地至少95%、98%或99%的序列同一性。优选地，不相同的残基位置的差异在于保守性氨基酸取代。
[0147]通常使用序列分析软件来测量多肽的序列相似性。蛋白质分析软件使用分配给各种取代、缺失和其它修饰(包括保守性氨基酸取代)的相似性量度来匹配相似的序列。例如，GCG软件含有程序如GAP和BESTFIT，其可以以缺省参数使用来测定密切相关的多肽，如来自生物体的不同物种的同源多肽间或野生型蛋白质与其突变型蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见，例如GCG版本6.1。还可以以缺省或推荐参数使用FASTA(GCG版本6.1中的一个程序)来比较多肽序列。FASTA(例如FASTA2和FASTA3)提供查询和搜索序列之间的最佳重叠区的比对和百分比序列同一性(Pearson(2000)，见上)。在将本发明的序列与含有大量来自不同生物体的序列的数据库比较时，另一种优选的算法是计算机程序BLAST，特别是使用不同参数的BLASTP或TBLASTN。参见，例如Altschul等(1990) J.Mol.Biol.215:403410 和(1997)Nucleic Acids Res.25:3389402，其各自通过提述并入本文。
[0148]当在本申请中提到序列同一性的百分比时，若未另外特别指出，这些百分比相对于较长序列的全长计算。相对于较长序列的全长计算适用于核酸序列和多肽序列两者。
[0149]如本文中使用的，“治疗”或“处理”疾病或病症意味着实现下列一项或多项:(a)降低病症的严重程度和/或持续时间；(b)限制或预防所治疗病症的特征性症状的形成；(C)抑制所治疗病症的特征性症状的恶化；(d)限制或预防先前患有该病症的患者中的病症复发；以及(e)限制或预防先前该病症症状性的患者中的症状复发。[0150]如本文中使用的，疾病或病症的“预防”、“防止”或“防范”意指预防受试者中发生病症。
[0151]如本文中使用的，表述“用于施用”和“要施用”具有与“准备好施用”相同的意义。换言之，陈述某活性化合物“用于施用”应理解为已配制好所述活性化合物并将其制成剂量，从而使所述活性化合物处于能够施加其治疗活性的状态。
[0152]术语“治疗有效量”或“治疗量”意图指会对组织、系统、动物或者人引发研究者、兽医、内科医生或者其它临床医生探寻的生物学或者医学应答的药物或药用药剂量。术语“预防有效量”意图指会预防或降低研究者、兽医、内科医生或者其它临床医生探求在组织、系统、动物或者人中预防的生物学或者医学事件的发生风险的药用药物量。具体地，可以选择患者接受的剂量，从而实现期望的LDL(低密度脂蛋白)胆固醇降低量；还可以随时间滴定患者接受的剂量以达到目标LDL水平。根据多种因素来选择利用如本文中描述的抗体或其抗原结合片段的剂量方案，所述因素包括患者的类型、人种、年龄、重量、体重指数、性别和医学状况；要治疗的状况的严重程度；选择施用的化合物的效力；施用路径；施用目的；以及患者的肾和肝功能。
[0153]如本文中使用的，“患者”意指任何可能受益于用本文中描述的抗体及其抗原结合片段治疗的人或非人的动物，如哺乳动物、爬行类或禽类。优选地，“患者”选自下组:实验室动物(例如小鼠或大鼠)、家养动物(包括例如豚鼠、家兔、鸡、火鸡、猪、绵羊、山羊、骆驼、牛、马、驴、猫或犬)、啮齿类或灵长类，包括黑猩猩、大猩猩、倭黑猩猩(bonobo)和人类。特别优选的是，“患者”是人类。
[0154]术语“受试者”或“个体”在本文中可互换使用。如本文中使用的，“受试者”指人或非人动物(例如哺乳动物、禽类、爬行类、鱼、两栖动物或无脊椎动物)；优选是可以受益于本发明的不同方面之一(例如治疗方法或由本方法鉴定的药物)或可以用作实验室动物来鉴定或表征药物或治疗方法的个体。所述个体可以是例如人、野生动物、家养动物或实验室动物；例子包括:哺乳动物，例`如人、非人灵长类(黑猩猩、倭黑猩猩、大猩猩)、犬、猫，啮齿类(例如小鼠、豚鼠、大鼠、仓鼠或家兔、马、驴、牛、绵羊、山羊、猪、骆驼；禽类，如鸭、鸽、火鸡、鹅或鸡；爬行类如海龟(turtle)、龟(tortoise)、蛇、蜥蜴；两栖动物如蛙(例如爪蟾(Xenopus Iaevis));鱼如koy或斑马鱼；无脊椎动物如螺虫(例如秀丽隐杆线虫(c.elegans))或昆虫(如苍蚬(fly),例如黑腹果蚬(drosophila melanogaster))。术语个体还包括禽类、鱼、爬行类或昆虫的不同形态学发展阶段，如卵、蛹、幼体或成虫。进一步优选的是，受试者是“患者”。
[0155]如本文中使用的，“单位剂量形式”指适合作为用于人和/或动物受试者的单一剂量的物理离散单元，每个单元含有与需要的药用稀释剂、载体或媒介物联合的计算为产生期望的治疗效果的预定量的活性材料(例如约50至约500mg PCSK5抗体和/或例如0.05mg至IOOmg HMG-CoA还原酶抑制剂)。本发明的新颖单位剂量形式的规格由下列各项规定并直接依赖于下列各项:(a)活性材料的独特特征和要实现的特定治疗效果，和(b)混合这类活性材料以在动物或人中的治疗使用的本领域中固有的限制，如本说明书中公开的，这些是本发明的特征。依照本发明的合适单位剂量形式的例子是管形瓶、片剂、胶囊剂、锭剂(troche)、栓剂、粉末包(powder packet)、速溶片(wafer)、扁囊剂(cachet)、安瓿(ampule)、前述任一项的分开的多重物(segregated multiples)以及如本文中描述的或本领域中一般已知的其它形式。本发明的制品中可以包含抗体的一种或多种这类单位剂量形式，任选地还包含HMG-CoA还原酶抑制剂的一种或多种单位剂量形式(例如包含HMG-CoA还原酶抑制剂作为活性成分的片剂的泡罩)。
[0156]术语“活性材料”指任何具有治疗活性的材料，如一种或多种活性成分。要用作治疗剂的活性成分可以通过采用自身在本领域中可用且可以通过确立的规程制备的药用材料以这类单位剂量形式容易地制备。
[0157]以下制剂例示了本发明的单位剂量形式的制剂，且不作为其限制。可以制备体现本发明的数种剂量形式。例如，每管形瓶的单位剂量可以含有0.5ml, lml, 2ml, 3ml, 4ml, 5ml, 6ml, 7ml, 8ml, 9ml, 10ml, 15ml 或 20ml PCSK5 抗体或其片段，其范围为约 40 至约 500mg的PCSK5抗体。若必要的话，可以通过向每个管形瓶添加无菌稀释剂将这些制剂调节至期望浓度。在一个实施方案中，在单位剂量形式中分开地或混合在一起地提供本发明的配制剂成分，例如以在指示活性剂量的气密密封容器如管形瓶、安瓿或药囊(sachette)中的干冻干(Iyophilized)粉末或无水浓缩物提供。在要通过输注施用组合物的情况下，可以用含有无菌药用级水或盐水的输注瓶来将其分配。在通过注射施用组合物的情况下，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿，从而在施用前可以将成分混合。
[0158]本发明的配制剂包括可用于制造药物组合物(例如，适用于对受试者或患者施用的组合物)的整装药物组合物，其可以在制备单位剂量形式中使用。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物是药物组合物。这类组合物包含预防或治疗有效量的一种或多种预防剂或治疗剂(例如本发明的抗体或其它预防剂或治疗剂)，以及药学可接受载体。优选地，将所述药物组合物配制为适用于对受试者的施用路径。
[0159]可以将活性材料或成分(例如抗体或其片段和HMG-CoA还原酶抑制剂)配制为各种剂量形式，包括用于口服施用的固体剂量形式，如胶囊齐?、片齐?、丸齐?、粉末和颗粒剂，用于口服施用的液体剂量形式，如药学可接受乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂，可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液，用于直肠或阴道施用的组合物，优选栓剂，以及用于局部或透皮施用的剂量形 式，如软膏剂、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶剂、粉末、溶液、喷雾、吸入剂或贴片。
[0160]在一个具体的实施方案中，术语“药学可接受的”意指得到美国联邦或州政府的管理机构或EMA(欧洲药品局，European Medicines Agency)批准,或在美国药典((美国药典-33/国定配方集(National Formulary)_28重新发行，由美国药典委员会(UnitedStates Pharmacopeial Convention), Inc., Rockville Md.出版，出版日期:2010年4月))或其它一般公认的药典中列出用于动物，且更特别地用于人。术语“载体”指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂(例如弗氏佐剂(完全和不完全的))、赋形剂或媒介物。这类药用载体可以是无菌液体，如水和油，包括那些具有石油、动物、植物或合成起源的，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药物组合物时，水是优选的载体。还可以将盐水溶液和水性右旋糖以及甘油溶液用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的药用赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米(rice)、面粉、白垩(chalk)、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、干燥的脱脂乳(dried skim milk)、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。对于(别的)赋形剂的使用及其用途，亦参见“Handbook of PharmaceuticalExcipients”，第五版,R.C.Rowe, P.J.Seskey 和 S.C.0wen, PharmaceuticalPress, London, Chicago。若期望的话,所述组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂,或pH缓冲剂。这些组合物可以采用溶液、悬浮液、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、粉末、持续释放配制剂等的形式。口服配制剂可以包含标准载体，如药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠(sodium saccharine)、纤维素、碳酸镁等。合适的药用载体的例子记载于E.W.Martin的“Remington’sPharmaceutical Sciences”。这类组合物将含有与合适量载体一起的预防或治疗有效量的抗体(优选为纯化的形式)，从而提供对患者适当施用的形式。配制剂应当适合施用模式。
[0161]一般地，在单位剂量形式中分开地或混合在一起地提供本发明的组合物成分，例如以在指示活性剂量的气密密封容器如安瓿或药囊中的用于溶解的干配制剂如冻干粉末、冷冻干燥粉末或无水浓缩物提供。本发明组合物的成分还可以以在气密密封容器如安瓿、药囊、预填充的注射器或自动注射器、或供可再度使用的注射器或涂药器(例如笔或自动注射器)用的药筒中混合的液体配制剂(即注射或输注溶液)提供。在要通过输注施用组合物的情况下，可以用含有无菌药用级水或盐水的输注瓶来将其分配。在通过注射施用组合物的情况下，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿，从而在施用前可以将成分混合。
[0162]本发明还提供在指示抗体量的气密密封容器，如安瓿或药囊中包装配制剂。在一个实施方案中，包含抗体的本发明配制剂以在气密密封容器中的干配制剂，如无菌冻干粉末、冷冻干燥粉末、喷雾干燥粉末或无水浓缩物供应，并且可以用例如水或盐水重建成适合于对受试者施用的浓度。在另一个实施方案中，以液体配制剂如注射或输注溶液供应抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，在气密密封容器中以干配制剂或液体配制剂，以至少40mg、至少50mg、更优选至少75mg、至少lOOmg、至少150mg、至少200mg、至少250mg、至少300mg、至少350mg、至少400mg、至少450mg或至少500mg的抗体或其抗原结合片段的单位剂量供应包含抗体的本发明配制剂。包含抗体的本发明冻干配制剂应当于介于2和8°C之间在其最初的容器中贮存，并且应当在重建后12小时内，优选6小时内、5小时内、3小时内或I小时内施用抗体。包含抗体的本发明配制剂可以配制为中性或盐形式。药学可接受盐包括那些与阴离子，如自氢氯酸、磷酸、醋酸、草酸、酒石酸等衍生的阴离子形成的盐，以及那些与阳离子，如自氢 氧化钠、钾、铵、钙、铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因(procaine)等衍生的阳离子形成的盐。
[0163]成年受试者在他们具有超过HOmmHg的收缩血压和/或超过90mmHg的舒张血压时表征为具有“高血压”。
[0164]通过本发明的治疗方法可治疗的特定群体包括患有下列一种或多种状况的受试者:指示进行LDL血透(apheresis)的受试者、具有PCSK9激活突变(功能获得突变，“GOF”)的受试者、总胆固醇水平升高的受试者、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平升高的受试者、患有原发性高胆固醇血症的受试者(如患有原发性家族性或非家族性高胆固醇血症的受试者)、患有杂合家族性高胆固醇血症(heFH)的受试者；患有高胆固醇血症特别是原发性高胆固醇血症、且他汀不耐受或不受他汀控制的受试者；以及有形成高胆固醇血症的风险、且可以可预防性处理的受试者。其它适应征包括高脂血症和血脂障碍，尤其是在与继发性原因如2型糖尿病、胆汁郁积性肝病(原发性胆汁性肝硬化)、肾病综合征、甲状腺机能减退、肥胖有关时；以及动脉粥样硬化和心血管疾病，如冠心病(CHD)的预防和治疗。如对上述群体或受试者列出的状况或病症是尤其适合用本发明的抗体治疗的状况或病症。[0165]然而，根据前述疾病和状况的严重程度，用本发明的抗体和抗原结合片段治疗受试者对于某些疾病和状况可能是禁忌的。
[0166]术语“不利效应”(或副作用)指源自药物的有害的且不期望的效应。当判断不利效应继发于主要或治疗效果时，其可以称作“副作用”。一些不利效应仅在开始、提高、或中断治疗时发生。不利效应可能导致疾病的医学并发症并且负面影响其预后。副作用的例子是过敏反应、呕吐、头疼或头晕或本文中描述的任何其它效应。
[0167]如本文中使用的，“治疗”疾病或病症意指实现下列一项或多项:(a)降低病症的严重程度和/或持续时间；(b)限制或预防所治疗病症的特征性症状的形成；(C)抑制所治疗病症的特征性症状的恶化；(d)限制或预防先前已经患有该病症的患者中的病症复发；以及(e)限制或预防先前该病症症状性的患者中的症状复发。
[0168]如本文中使用的，“预防”、“防止”或“防范”疾病、状况或病症意味着预防在受试者中发生病症、疾病或状况。
[0169]在本发明的上下文中，升高的总胆固醇水平理解为优选是总胆固醇水平为200mg/dL或更多，尤其是240mg/dL或更多。国际治疗指南推荐将LDL-C降低至〈2.0-2.6mmol/L (〈77-100mg/dL)(在患有确立的心血管疾病(CVD)的患者中)及至〈1.8-2.0mmol/L?70-77mg/dL)(在高风险组中，如那些患有CVD及糖尿病、吸烟、受控较差的高血压、代谢综合征或先前的心肌梗死的)。如此，在本发明的上下文中，升高的LDL-C水平理解为LDL-C水平为77mg/dL或更多(特别是对于具有下列一项或多项特征的患者:确立的CVD和[糖尿病、伴有吸烟、受控较差的高血压、代谢综合征或先前的心肌梗死]中的一或多种)以及100mg/dL或更多(特别是对于确立的CVD的患者)、130mg/dL或更多、或160mg/dL或190mg/dL或更多。在本发明的上下文中，较低的高密度脂蛋白水平(HDL水平)理解为优选小于约40mg/dL。
[0170]术语“不受他汀类控制”或“他汀抗性”，尤其在高脂血症、高胆固醇血症等的背景中，在本文中同义使用并且指如`高脂血症等状况，其中用他汀治疗(即对患者定期施用他汀如阿托伐他汀)不显著降低总胆固醇或LDL-C，或不足以为患者建立正常血脂水平或建立的血脂水平(例如总胆固醇或LDL-C)水平不是形成心血管疾病的重大风险因子。这意味着例如他汀治疗一般不足以建立小于130mg/dL的水平，或小于100mg/dL (例如约>77mg/dL至约100mg/dL)的水平，尤其是在患有确立的心血管疾病的患者中，或不足以建立约小于77mg/dL(例如约>70-77mg/dL)的水平，尤其是在高风险组中，如那些有CVD及糖尿病、吸烟、受控较差的高血压、代谢综合征、或先前的心肌梗死的。在本发明的上下文中，他汀抗性优选指阿托伐他汀抗性。
[0171]本发明的实施方案
[0172]现在将进一步描述本发明。在以下段落中更具体地限定本发明的不同方面。除非清楚相反指示，如此限定的每方面可以与任何其它一个或多个方面组合。具体地，除非清楚相反指示，任何指示为优选或有利的特征可以与任何其它一种或多种指示为优选或有利的特征组合。
[0173]在第I方面，本发明涉及用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，包括:
[0174]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段,其中以范围为5mg至500mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段，并
[0175]对所述受试者施用治疗量的HMG-CoA还原酶抑制剂，其中优选以范围为0.05mg至IOOmg的剂量量施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0176]在本申请的上下文中，术语“PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况”理解为包括应用PCSK-9抗体引起影响的任何疾病或状况。
[0177]在本发明的第I和其它方面的优选的实施方案中，用PCSK9拮抗剂缓解、改善、抑制或预防PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。
[0178]在本发明的第I和其它方面的别的优选的实施方案中，所述疾病或状况选自下组:升高的总胆固醇水平、升高的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、高胆固醇血症(特别是不受他汀类控制的高胆固醇血症)、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化、心血管疾病、原发性高胆固醇血症(如原发性家族性高胆固醇血症或原发性非家族性高胆固醇血症)、不受他汀类控制(特别是不受阿托伐他汀控制)的高胆固醇血症(尤其是原发性高胆固醇血症)。
[0179]在本发明的第I和其它方面的优选的实施方案中，有此需要的受试者是指示进行LDL血透的受试者、具有PCSK9激活突变的受试者、患有杂合家族性高胆固醇血症的受试者、患有原发性高胆固醇血症的受试者、患有原发性高胆固醇血症且不受他汀控制的受试者、有形成高胆固醇血症风险的受试者、患有高胆固醇血症的受试者、患有高脂血症的受试者、患有血脂障碍的受试者、患有动脉粥样硬化的受试者或患有心血管疾病的受试者。最优选地,有此需要的受试者是人受试者。
[0180]在本发明的第I和其它方面的一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂每日三次、每日两次或每日一次施用。 在本发明的第I和其它方面的一些实施方案中，每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在本发明的第I和其它方面的一些实施方案中，每周、每隔I周、每3周或每4周施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在本发明的第I和其它方面的一些实施方案中，在上午、中午或晚上施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在优选的实施方案中，每日一次，优选口服，优选在晚上施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0181]优选地，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。更优选地，所述他汀选自下组:西立伐他汀(cerivastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、匹伐他汀(Pitavastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)、氟伐他汀(f Iuvastatin)、洛伐他汀(1vastatin)和普伐他汀(provastatin)。
[0182]在本发明的第I和其它方面的更优选的实施方案中，他汀为:
[0183]-以介于0.05mg和2mg之间的每日剂量,优选以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日剂量施用的西立伐他汀；
[0184]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的阿托伐他汀；
[0185]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的辛伐他汀；
[0186]-以介于0.2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的每日剂量施用的匹伐他汀；
[0187]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg或40mg的每日剂量施用的罗苏伐他汀；
[0188]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的氟伐他汀；
[0189]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的洛伐他汀；或
[0190]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂
量施用的普伐他汀。 [0191]在本发明的第I和其它方面的优选的实施方案中，每隔I周、每4周或一月一次对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。就患者依从性而言优选每4周施用或一月一次施用(即每日历月一次，例如该月的每第一天、第二天等，或每个月的每第一、第二、第三个周一、周二等，其与每4周施用形成对比)。就非常低的血液胆固醇水平变化而言优选每隔I周施用。其它适用于施用抗体或其抗原结合片段的的时间日程表包括但不限于，每日一次、每隔一日、每3日、每4日、每5日、每6日、每周、每3周、每5周、每6周、每8周、每10周和每12周施用。
[0192]在本发明的第I和其它方面的优选的实施方案中，以范围为例如约40mg至约500mg、约50mg至约500mg、约50mg至300mg、或约IOOmg至200mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段。在更优选的实施方案中，以约50mg、约lOOmg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg或约500mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段。约50至约200mg,例如约50mg、约lOOmg、约150mg或约200mg的剂量特别适用于每两周的剂量方案(即每隔一周应用)，约150mg至约400mg,例如约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg或约400mg的剂量尤其适用于具有更长时间间隔的施用方案，例如每3周或每4周或一月一次施用。
[0193]可以用于实践本发明的第I和其它方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0194]在第2方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，
[0195]其中所述抗体或其抗原结合片段用于以范围为5mg至500mg的剂量量施用，
[0196]其中抗体或其抗原结合片段进一步用于与范围为0.05mg至IOOmg的剂量量的HMG-CoA还原酶抑制剂组合施用。
[0197]在本发明第2方面或其它方面的优选的实施方案中，用PCSK9拮抗剂缓解、改善、抑制或预防PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。
[0198]在本发明第2方面和其它方面的别的优选的实施方案中，所述疾病或状况选自下组:升高的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、高胆固醇血症(尤其是不受他汀类控制的高胆固醇血症)、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，尤其是原发性高胆固醇血症如原发性家族性高胆固醇血症或原发性非家族性高胆固醇血症。
[0199]在本发明第2方面和其它方面的优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于指示进行LDL血透的受试者、具有PCSK9激活突变的受试者、患有杂合家族性高胆固醇血症的受试者、患有原发性高胆固醇血症的受试者、患有原发性高胆固醇血症且不受他汀控制的受试者、有形成高胆固醇血症风险的受试者、患有高胆固醇血症的受试者、患有高脂血症的受试者、患有血脂障碍的受试者、患有动脉粥样硬化的受试者或患有心血管疾病的受试者施用。最优选地，所述受试者是人受试者。
[0200]在本发明第2方面和其它方面的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于与HMG-CoA还原酶抑制剂组合施用，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要每日三次、每日两次或每日一次施用。在本发明第2方面和其它方面的一些实施方案中,所述HMG-CoA还原酶抑制剂要每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用。在本发明第2方面和其它方面的一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要每周、每隔I周、每3周或每4周施用。在本发明第2方面和其它方面的一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要在上午、中午或晚上施用。在优选的实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要每日一次施用，优选为口服，优选在晚上施用。
[0201]在本发明第2方面和其它方面的优选的实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。更优选地，他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0202]在本发明第2方面和其它方面的更优选的实施方案中，他汀是:
[0203]-要以介于0.05mg和2mg之间的每日剂量,优选以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日剂量施用的西立伐他汀；
[0204]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的阿托伐他汀；
[0205]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的`每日剂量施用的辛伐他汀；
[0206]-要以介于0.2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的
每日剂量施用的匹伐他汀；
[0207]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg或40mg的每日剂量施用的罗苏伐他汀；
[0208]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的氟伐他汀；
[0209]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的洛伐他汀；或
[0210]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日
剂量施用的普伐他汀。
[0211]在本发明第2方面和其它方面的别的优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于每隔I周、每4周或一月一次地对受试者施用。就患者依从性而言优选每4周施用或一月一次施用。就非常低的血液胆固醇水平变化而言优选每隔I周施用。其它适用于施用抗体或其抗原结合片段的时间日程表包括但不限于，每日一次、每隔一日、每3日、每4日、每5日、每6日、每周、每3周、每5周、每6周、每8周、每10周和每12周施用。
[0212]在本发明第2方面和其它方面的优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于以范围为约40mg至约500mg、或约50mg至约500mg、或约50mg至约400mg、或约50mg至约300mg、或约IOOmg至约300mg、或约IOOmg至约200mg的剂量量施用。在更优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于以约50mg、约lOOmg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350或约400mg的剂量量施用。
[0213]在本发明第2方面和其它方面的优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于以范围为每隔一周(E2W)约50mg至约200mg，优选地约50mgE2W、约IOOmg E2W、约150mg E2W、约200mg E2W、约250mg E2W或约300mg E2W的剂量量(即剂量方案)施用，其中甚至更优选约50mg E2W、约IOOmg E2W、约150mg E2W、约200mg E2W的剂量量。依照本发明第2方面和其它方面的特别有利的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段用于以约50mg至约200mg、约IOOmg至约180mg、约130mg至约170mg、约140至约160mg或约90、约100、约110、约 120、约 130、约 140、约 145、约 150、约 155、约 160、约 170、约 180、约 190 或约 200mgE2W的剂量量(即剂量方案)施用，其中约145mg至约155mg E2W且尤其是约150mg E2W的剂量方案属于特别优选的实施方案。
[0214]在本发明第2方面和其它方面的其它优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于以范围为每4周(E4W)约IOOmg至约400mg，优选地约IOOmg E4W、约150mg E4W、约 200mg E4W、约 250mg E4W、约 300mg E4W、约 350mg E4W 或约 400mg E4W 的剂量量施用，其中约 190 至约 3IOmg E4W、约 200 至约 300mg E4W、约 190 至约 210E4W、约 195 至约 205E4W、约290至约310E4W、约295至约305E4W、约200mg E4W或约300mg E4W的剂量量属于特别优选的实施方案。在E4W施用方面指示的这些剂量量也适用于一月一次施用。
[0215]可用于实践本发明第2方面和其它方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0216]在第3方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片 段；和(C)在包装材料中含有的标签或包装插页，其指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病。
[0217]在第4方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和(c)在包装材料中含有的标签或包装插页，其指示与应用HMGCo A抑制剂如他汀一起用所述抗体或其抗原结合片段治疗患者。
[0218]在第5方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和(C)标签或包装插页，其指示用所述抗体或抗原结合片段以及HMG Co A抑制剂如他汀来治疗患者对于属于下列一组或多组的患者是禁忌的:(i)吸烟者；(ii) 70岁龄以上的个体；(iii)患有高血压的个体；(iv)怀孕的女性；(V)试图怀孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；(ix)饮用过量酒精的个体；(X)具有肾问题的个体；(xi)患有甲状腺机能减退的个体；(xii)患有肌病症的个体；(xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；(xiv)其呼吸有严重问题的个体；(xv)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或(xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁或每天食用超过半个葡萄柚的个体；(xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；(xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；(XX)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或(xxi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体；(xxii)具有小于1500/mm3的嗜中性粒细胞浓度的个体；(xxiii)具有小于100000/mm3的血小板浓度的个体；(xxiv)具有大于1.5倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的男性；(XXV)具有大于1.4倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的女性；(xxvi)具有大于2倍ULN的丙氨酸转氨酶(ALT)水平或天冬氨酸转氨酶(AST)水平的个体；或(xxvii)具有大于3倍ULN的CPK水平的个体。
[0219]在第3、4和5方面的优选的实施方案中，所述抗体或抗原结合片段是如在下文“用于实践本发明的优选抗体”部分规定的抗体或抗原结合片段。
[0220]依照本发明的不同方面和实施方案，尤其是关于本发明的不同制品的标签或包装插页可以是适合于在包装或容器内(松散的或附接于制品的另一组分，例如含有抗体和/或HMG-CoA还原酶抑制剂的单位剂量形式的泡罩或管形瓶)、或包装或容器外部上排列的任何种类的数据载体。优选地，所述数据载体(即标签或芯片、条形码或传单或包含条形码的标签等)包含信息如:
[0221](i)制品中含有的活性成分，即本发明的抗体或抗原片段、HMG-CoA还原酶抑制剂、药物组合物、单位剂量形式或配制剂的组成、配方、浓度和总量、 身份
[0222](ii)制品中含有的单位剂量形式的数目和组成
[0223](iii)本发明的抗体或抗原片段、药物组合物、单位剂量形式或配制剂的适应征、禁忌征
[0224](iv)在用本发明的抗体或抗原片段、药物组合物、单位剂量形式或配制剂治疗方面指示或禁忌的受试者/患者或受试者/患者群体
[0225](V)使用、剂量方案和/或施用方案的用法说明书
[0226](vi)质量信息，如关于本发明的抗体或抗原片段、药物组合物、单位剂量形式或配制剂的批/批次号、制造或装配位置、或有效期限或最迟销售日期的信息，
[0227](vii)关于正确贮存或操作本发明的制品、应用装置、或抗体或抗原片段、药物组合物、单位剂量形式或配制剂的信息，
[0228](iv)关于本发明的缓冲剂、稀释剂、试剂、赋形剂、载体、抗体或抗原片段配制剂、药物组合物、单位剂量形式或配制剂的组成的信息，
[0229](vi)关于在应用不适当的剂量或施用方案和/或在患者群体的禁忌适应征中使用时可能的后果的警告。
[0230]在第3、4和5方面的优选的实施方案中，所述标签或包装插页含有对依照第I或2方面的治疗方法或医学用途和如本文中描述的第I或第2方面的实施方案的提述。
[0231]本发明的另一个优选的实施方案组合如本文中描述的第3和第4方面的特征。
[0232]本发明的另一个优选的实施方案组合如本文中描述的第3和第5方面的特征。
[0233]本发明的另一个优选的实施方案组合如本文中描述的第4和第5方面的特征。
[0234]本发明的另一个优选的实施方案组合如本文中描述的第3、第4和第5方面的特征。[0235]在第6方面，本发明涉及测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病或依照本发明第I或第2方面的任何其它状况或疾病，所述方法包括:
[0236]用所述抗体或其抗原结合片段治疗选择的患者群体，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平；并
[0237]通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后所述患者群体中的LDL-C水平来测定所述抗体或其抗原结合片段的功效，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的。
[0238]在第7方面，本发明涉及一种测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病或依照本发明第I或第2方面的任何其它状况或疾病，所述方法包括:
[0239]通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后所述患者群体中的LDL-C水平测定已经用于用所述抗体或其抗原结合片段治疗选定患者群体的抗体或其抗原结合片段的功效，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的。
[0240]在第6和第7方面的优选的实施方案中，所述群体中的每位患者在用所述抗体或其抗原结合片段治疗前已通过施用HMG CoA抑制剂如他汀达至少6周接受降脂治疗。
[0241 ] 在第6和第7方面的优 选的实施方案中，所述抗体或抗原结合片段是如在下文“用于实践本发明的优选抗体”部分规定的抗体或抗原结合片段。
[0242]在第6和第7方面的优选的实施方案中，用依照第I方面和第I或第2方面的实施方案的治疗方法治疗所选患者群体，如本文中描述的。
[0243]在第8方面，本发明涉及包含特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段和标签的包装，所述标签包含印刷的声明，其告知患者在一种或多种选自下组的适应征中指示与HMG-CoA还原酶抑制剂如他汀一起的抗体治疗:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病或依照本发明第I或第2方面的任何其它状况或疾病。可用于实践本发明第8方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0244]在第9方面，本发明涉及包含特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段和标签的包装，所述包装包含印刷的声明，其告知患者与他汀一起的抗体治疗对于属于下列一或多组的患者是禁忌的:(i)吸烟者；(ii) 70岁龄以上的个体；(iii)患有高血压的个体；(iv)怀孕的女性；(V)试图怀孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；(ix)饮用过量酒精的个体；(X)具有肾问题的个体；(xi)患有甲状腺机能减退的个体；(xii)患有肌病症的个体；(xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；(xiv)其呼吸有严重问题的个体；(xv)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或(xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁或每天食用超过半个葡萄柚的个体；(xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；(xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；(XX)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或(xxi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体；(xxii)具有小于1500/mm3的嗜中性粒细胞浓度的个体；(xxiii)具有小于100000/mm3的血小板浓度的个体；(xxiv)具有大于1.5倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的男性；(XXV)具有大于1.4倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的女性；(xxvi)具有大于2倍ULN的丙氨酸转氨酶(ALT)水平或天冬氨酸转氨酶(AST)水平的个体；或(xxvii)具有大于3倍ULN的CPK水平的个体。可用于实践本发明第9方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0245]本发明的另一个优选的实施方案组合如本文中描述的第8和第9方面的特征。
[0246]在第10方面，本发明涉及一种调节血液中LDL水平的方法，包括:
[0247]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段,其中以范围为5mg至500mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段，并
[0248]对所述受试者施用治疗量的HMG-CoA还原酶抑制剂，其中优选地以范围为0.05mg至IOOmg的剂量量施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0249]在第11方面，本发明涉及预防血液中(持久)升高的LDL水平的效应的方法，其包括:
[0250]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段,其中以范围为5mg至500mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段`，并
[0251]对所述受试者施用治疗量的HMG-CoA还原酶抑制剂，其中优选地以范围为0.05mg至IOOmg的剂量量施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0252]在第10和第11方面的优选的实施方案中，用拮抗剂缓解、改善、抑制或预防PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。在第10和第11方面的别的优选的实施方案中，PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况选自下组:升高的LDL-C水平、高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病或任何其它依照本发明第I或第2方面的状况或疾病。
[0253]在第10和第11方面的优选的实施方案中，所述有此需要的受试者是指示进行LDL血透的受试者、具有PCSK9激活突变的受试者、患有杂合家族性高胆固醇血症的受试者、患有原发性高胆固醇血症且不受他汀控制的受试者、有形成高胆固醇血症风险的受试者、患有高胆固醇血症的受试者、患有高脂血症的受试者、患有血脂障碍的受试者、患有动脉粥样硬化的受试者或患有心血管疾病的受试者、或任何如本发明第I或第2方面描述的受试者。最优选地，所述有此需要的受试者是人受试者。
[0254]在第10和第11方面的一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂每日三次、每日两次或每日一次施用。在一些实施方案中，每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在一些实施方案中，每周、每隔I周、每3周、每4周或每月施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在一些实施方案中，在上午、中午或晚上施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在优选的实施方案中，每日一次地施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂，优选口服，优选在晚上。别的合适的施用方案记载于第I或第2方面。
[0255]优选地，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。更优选地，他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0256]在第10和第11方面的更优选的实施方案中，他汀是:
[0257]-以介于0.05mg和2mg之间的每日剂量,优选以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日剂
量施用的西立伐他汀；
[0258]-以介于2mg和100mg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的阿托伐他汀；
[0259]-以介于2mg和100mg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的辛伐他汀；
[0260]-以介于0.2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以1mg、2mg、5mg、10mg或20mg的每
日剂量施用的匹伐他汀；
[0261]-以介于2mg和100mg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg或40mg的每日剂量施用的罗苏伐他汀；
[0262]-以介于2mg和100mg之间的每日剂量,优选以20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的氟伐他汀；
[0263]-以介于2mg和100mg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的洛伐他汀；或
[0264]-以介于2mg和100mg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂
量施用的普伐他汀。
[0265]在第10和第11方面的优选的实施方案中，每隔I周、每4周或一月一次地对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。就患者依从性而言优选每4周或每月施用。就非常低的血液胆固醇水平变化而言优选每隔I周施用。其它适用于施用抗体或其抗原结合片段的时间日程表包括但不限于，每日一次、每隔一日、每3日、每4日、每5日、每6日、每周、每3周、每5周、每6周、每8周、每10周和每12周施用。
[0266]在第10和第11方面的优选的实施方案中，以范围为50mg至300mg，例如IOOmg至200mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段。在更优选的实施方案中，以约50mg、约lOOmg、约150mg、约200mg或约300mg的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段。在本说明书中第I或第2方面中描述了别的合适的且优选的剂量方案。
[0267]可用于实践本发明第10和11方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0268]在第12方面，本发明涉及一种测定药物化合物是否可用于缓解、改善、抑制或预防PCSK9活性或表达具有影响的疾病或状况的方法，包括:(a)对受试者施用特异性结合PCSK9的化合物，优选为特异性结合PCSK9的抗体或其抗原结合片段，并(b)测定血液中多少分数的PCSK9附接于来自(a)的化合物。
[0269]通常，在以化学计量量使用时特异性结合血液中存在的10%至100%(优选20%至100%，更优选30%至100%，更优选40%至100%，更优选50%至100%)的PCSK9的化合物会可用于缓解、改善、抑制或预防PCSK9活性或表达具有影响的疾病或状况。
[0270]优选地，PCSK9活性或表达具有影响的疾病或状况选自下组:升高的LDL-C水平、高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病或本文中第I或第2方面描述的任何其它疾病。
[0271]可用于实践本发明第12方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0272]在第13方面，本发明涉及用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，包括:
[0273]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，
[0274]其中所述有此需要的受试者落入下列一组或多组受试者中:(i)具有至少IOOmg/dL,优选至少130mg/dL,更优选至少160mg/dL,甚至更优选至少200mg/dL的血清LDL胆固醇(LDL-C)水平的受试者；(ii)具有小于40mg/dL的血清HDL-C水平的受试者；(iii)具有至少200mg/dL,优选至少240mg/dL的血清胆固醇水平的受试者；(iv)具有至少150mg/dL，例如至少200mg/dL或至少500mg/dL的血清三酰甘油水平的受试者，其中在禁食至少8小时后测定所述三酰甘油水平；(V)至少35岁龄，例如至少40岁龄、至少45岁龄、至少50岁龄、至少55岁龄、至少60岁龄、至少65岁龄或至少75岁龄的受试者；(vi)比75岁年纪小，例如比70岁年纪小、比65岁年纪小、比60岁年纪小、比55岁年纪小、比50岁年纪小、比45岁年纪小或比40岁年纪小的受试者；(vii)具有25或更多(例如26或更多、27或更多、28或更多、29或更多、30或更多、31或更多、32或更多、33或更多、34或更多、35或更多、36或更多、37或更多、38或更多、或39或更多)的BMI的受试者；(viii)男性受试者；
(ix)女性受试者；(X)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少30mg/dL,优选至少40mg/dL,更优选至少50mg/dL,更优选至少60mg/dL,更优选至少70mg/dL的受试者；或(xi)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少20%，优选至少30%，更优选至少40%，更优选至少50%，更优选至少60%的受试者。
[0275]在第14方面，本发明涉及用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，包括:
[0276]对有此需要的受试者施用治疗量的特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，
[0277]其中所述有此需要的受试者不落入下列一组或多组受试者中:(i)吸烟者；
(ii)70岁龄以上的个体；(iii)患有高血压的个体；(iv)怀孕的女性；(v)试图怀孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；(ix)饮用过量酒精的个体；(X)具有肾问题的个体；(xi)患有甲状腺机能减退的个体；(xii)患有肌病症的个体；(xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；(xiv)其呼吸有严重问题的个体；(xv)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或(xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁或每天食用超过半个葡萄柚的个体；(xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；(xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；(XX)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或(xxi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体；(xxii)具有小于1500/mm3的嗜中性粒细胞浓度的个体；(xxiii)具有小于100000/mm3的血小板浓度的个体；(xxiv)具有大于1.5倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的男性；(XXV)具有大于1.4倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的女性；(xxvi)具有大于2倍ULN的丙氨酸转氨酶(ALT)水平或天冬氨酸转氨酶(AST)水平的个体；或(xxvii)具有大于3倍ULN的CPK水平的个体。
[0278]在第13和第14方面的优选的实施方案中，用PCSK9拮抗剂缓解、改善、抑制或预防PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。
[0279]在第13和第14方面的优选的实施方案中，PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况选自下组:升高的LDL-C水平、高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病或本发明其它方面，如第I或第2方面中描述的任何其它疾病或状况。
[0280]在第13和第14方面的优选的实施方案中，所述有此需要的受试者是指示进行LDL血透的受试者、具有PCSK9激活突变的受试者、患有杂合家族性高胆固醇血症的受试者、患有原发性高胆固醇血症的受试者(例如患有原发性家族性或原发性非家族性高胆固醇血症的受试者)、患有高胆固醇血症如原发性高胆固醇血症且不受他汀控制的受试者、有形成高胆固醇血症风险的受试者、患有高胆固醇血症的受试者、患有高脂血症的受试者、患有血脂障碍的受试者、患有动脉粥样硬化的受试者或患有心血管疾病的受试者、或任何其它在第I或第2方面中描述的受试者。最优选地，所述有此需要的受试者是人受试者。别的优选的或合适的受试者记载于本发明的其它方面。
[0281]可用于实践本发明 第13和14方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0282]在第13和第14方面的优选的实施方案中，所述方法进一步包括:以0.05mg至IOOmg的剂量对受试者施用治疗量的HMG-CoA还原酶抑制剂。在一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂每日三次、每日两次或每日一次施用。在一些实施方案中，每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在一些实施方案中，每周、每隔I周、每3周或每4周施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在一些实施方案中，在上午、中午或晚上施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。在优选的实施方案中，每日一次地施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂，优选口服，优选在晚上。优选地，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。更优选地，所述他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。在第13和第14方面的别的优选的实施方案中，所述方法包括对受试者施用治疗量的他汀，其中所述他汀是:
[0283]-以介于0.05mg和2mg之间的每日剂量,优选以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日剂量施用的西立伐他汀；
[0284]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的阿托伐他汀；
[0285]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的辛伐他汀；
[0286]-以介于0.2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的每
日剂量施用的匹伐他汀；
[0287]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg或40mg的每日剂量施用的罗苏伐他汀；
[0288]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的氟伐他汀；
[0289]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的洛伐他汀；或
[0290]-以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂
量施用的普伐他汀。
[0291]本发明的别的优选的实施方案将如本文中描述的第13和14方面的特征组合。
[0292]在第15方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体在对受试者(优选人或非人哺乳动物)施用后以下列一项或多项特征为特征:
[0293]13.低密度脂蛋白(LDL-C)水平相对于给药前水平降低至少约_25%至约-40%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平的至少_25%，更优选至少-30%,特别是 在以约40至约60mg,优选以约45至约55mg且更优选约50mg的剂量以两周施用方案(每隔一周，E2W)施用时，
[0294]14.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-65%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_40%，更优选至少_45%，特别是在以约IOOmg E2W的剂量施用时，
[0295]15.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_60%至至少约-75%[例如至少约_60%、至少约-65%、至少约-70%或至少约-75%]及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_55%，更优选至少-60%，特别是以约150mg E2W的剂量施用时，
[0296]16.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约40%至约75%及在至少28天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-35%，更优选至少_40%，特别是以约200mg E4W的剂量施用时，
[0297]17.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-75%及在至少28天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_40%，更优选至少_45%，特别是在以约300mg E4W的剂量施用时，
[0298]18.血清HDL胆固醇水平相对于给药前水平升高至少2%、至少2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%，特别是在以约150mg E2W的剂量施用时，
[0299]19.血清总胆固醇相对于给药前水平降低至少约25%至约35%及在至少24天的时段里持续降低，
[0300]20.血清总胆固醇相对于给药前水平降低至少约65%至约80%及在至少24天的时段里持续降低，
[0301]21.血清三酰甘油水平相对于给药前水平降低至少约25%至约40%，[0302]22.对肝功能很少或没有可测量的影响，如通过ALT和AST测量测定的，
[0303]23.对肌钙蛋白水平很少或没有可测量的影响，
[0304]24.下列一项或多项升高:总胆固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-1比率。
[0305]优选地，若与HMG-CoA还原酶抑制剂治疗组合施用，则依照本发明第15方面的抗体展现出上述特性。可以贯穿本说明书找到要与本发明的抗体及其剂量和施用方案一起使用的HMG-CoA还原酶抑制剂的优选的实施方案，尤其如在第1、2或19方面中所描述的。
[0306]依照本发明抗体及其抗原结合片段，尤其是依照第15方面的抗体或抗原结合片段的一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段具有下列一或多项特征:
[0307](i)抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链⑶R。
[0308](ii)抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
[0309](iii)抗体或其抗原结合片段与包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或抗原结合片段竞争对hPCSK9的结合。
[0310]依照本发明抗体及其抗原结合片段，尤其是依照第15方面的抗体或抗原结合片段的另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段具有下列一或多项特征:
[0311](i)克服哺乳动物，`尤其是啮齿类如仓鼠中的他汀抗性
[0312](ii)哺乳动物，尤其是啮齿类如仓鼠中的LDLR表达升高
[0313](iii)啮齿类如仓鼠中的血清LDL-C降低
[0314](iv)与HMG-CoA还原酶抑制剂施用一起的LDL-C协同降低，特别是在啮齿类如仓鼠中，其中HMG-CoA还原酶抑制剂优选是阿托伐他汀。
[0315]本发明的抗体，尤其是第15方面的抗体的别的合适特征和结构特征以及可用于实践本发明第15方面和其它方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0316]优选地，本发明的抗体如依照第15方面的抗体配制为如本领域中已知的，且具体地如本文中描述的药学可应用配制剂，如用于溶解的干配制剂或液体配制剂，例如如在第21或22方面所描述的。
[0317]在第16方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，其中所述抗体或其抗原结合片段用于以约50至500mg的剂量施用。
[0318]在第15方面描述了本发明第16方面的优选的实施方案。可用于实践本发明第16方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0319]依照第16方面的另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段用于以约5O, 100，150，200，250，300，350，400，450 或 500mg 的剂量，且优选以约 150,200 或 300mg 的剂量施用。
[0320]依照第16方面的另一个优选的实施方案，所述疾病或状况选自下组:升高的总胆固醇水平、升高的低密度脂蛋白(LDL-C)水平、高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍和动脉粥样硬化，尤其是原发性高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症或不受他汀类控制的高胆固醇血症。
[0321]依照第16方面的另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段每隔一周(E2W)、每4周(E4W)或每月一次对受试者施用。
[0322]依照第16方面的另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段具有下列一项或多项特征:
[0323]⑴用于将低密度脂蛋白(LDL-C)水平相对于给药前水平降低至少约_25%至约-40%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-25%，更优选至少_30%，其中优选以约40至约60mg，约45至约55mg或约50mg的剂量E2W的剂量施用所述抗体或其抗原结合片段，
[0324](ii)用于将低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-65%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_40%，更优选至少_45%，其中优选以约IOOmg E2W的剂量施用所述抗体或其片段，
[0325](iii)用于将低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_60%至至少约_75%[例如至少约-60%、至少约-65%、至少约-70%或至少约_75%]及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_55%，更优选至少-60%，其中优选以约150mg E2W的剂量施用所述抗体或其片段，
[0326](iv)用于将低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约40%至约75%及在至少28天的时段内持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-35%，更优选至少_40%，其中优选以约200mg E4W的剂量施用所述抗体或其片段，
[0327](V)用于将低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-75%及在至少28天的时段内持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_40%，更优选至少_45%，其中优选以约300mg E4W的剂量施用所述抗体或其片段，
[0328](vi)用于将血清HDL胆固醇水平相对于给药前水平提高至少2%、至少2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%,
[0329](vii)用于将血清总胆固醇相对于给药前水平降低至少约25%至约35%及在至少24天的时段里持续降低，
[0330](viii)用于将血清总胆固醇相对于给药前水平降低至少约65%至约80%及在至少24天的时段里持续降低，
[0331]25.用于将血清三酯甘油水平相对于给药前水平降低至少约25%至约40%，
[0332]26.对肝功能(如通过ALT和AST测量测定的)或对肌钙蛋白水平具有很少或没有可测量影响，
[0333]27.用于提高下列一项或多项:总胆固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-1 比率。
[0334]依照第16方面的另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段用于与HMG-CoA还原酶抑制剂一起使用，其中优选地以范围为约0.05mg至约IOOmg的剂量量施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂并且优选为他汀，其中优选地他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀或 普伐他汀。
[0335]依照第16方面的另一个优选的实施方案,依照下列一剂或多剂或施用方案施用他汀:[0336](i)每日一次施用他汀，
[0337](ii)以约0.5至约lOOmg、约5至约90mg、约10、20、40或80mg的剂量施用他汀，并且优选阿托伐他汀。
[0338]在本发明其它方面，并且优选地在第1、2和第19方面描述了所述抗体、其抗原片段或HMG-CoA还原酶抑制剂的别的剂量和施用方案。
[0339]在第17方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，
[0340]其中所述抗体或其抗原结合片段用于对至少落入下列一组受试者中的受试者施用:(i)具有至少100mg/dL,优选至少130mg/dL、更优选至少160mg/dL、甚至更优选至少200mg/dL的血清LDL胆固醇(LDL-C)水平的受试者；(ii)具有小于40mg/dL的血清HDL-C水平的受试者；(iii)具有至少200mg/dL,优选至少240mg/dL的血清胆固醇水平的受试者；(iv)具有至少150mg/dL,例如至少200mg/dL或至少500mg/dL的血清三酰甘油水平的受试者，其中在禁食至少8小时后测定所述三酰甘油水平；(V)至少35岁龄，例如至少40岁龄、至少45岁龄、至少50岁龄、至少55岁龄、至少60岁龄、至少65岁龄或至少75岁龄的受试者；(vi)比75岁年纪小，例如比70岁年纪小、比65岁年纪小、比60岁年纪小、比55岁年纪小、比50岁年纪小、比45岁年纪小或比40岁年纪小的受试者；(vii)具有25或更多(例如26或更多、27或更多、28或更多、29或更多、30或更多、31或更多、32或更多、33或更多、34或更多、35或更多、36或更多、37或更多、38或更多、或39或更多)的BMI的受试者；(viii)男性受试者；(ix)女性受试者；(X)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少30mg/dL、优选至少40mg/dL、更优选至少50mg/dL、更优选至少60mg/dL、更优选至少70mg/dL的受试者；或(xi)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少20%、优选至少30%、更优选至少40%、更优选至少50%、更优选至少60`%的受试者。
[0341]在第18方面，本发明涉及特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，
[0342]其中所述抗体或其抗原结合片段用于对不落入下列一组或多组受试者中的受试者施用:(i)吸烟者；(ii)70岁龄以上的个体；(iii)患有高血压的个体；(iv)怀孕的女性；(V)试图怀孕的女性；(vi)哺乳的女性；(vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；(ix)饮用过量酒精的个体；(X)具有肾问题的个体；(xi)患有甲状腺机能减退的个体；(xii)患有肌病症的个体；(xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；(xiv)其呼吸有严重问题的个体；(xv)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或(xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁或每天食用超过半个葡萄柚的个体；(xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；(xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；(xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；(XX)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或(xxi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体；(xxii)具有小于1500/mm3的嗜中性粒细胞浓度的个体；(xxiii)具有小于100000/mm3的血小板浓度的个体；(xxiv)具有大于1.5倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的男性；(xxv)具有大于1.4倍ULN(正常的上限)的血清肌酸酐水平的女性；(xxvi)具有大于2倍ULN的丙氨酸转氨酶(ALT)水平或天冬氨酸转氨酶(AST)水平的个体；或(xxvii)具有大于3倍ULN的CPK水平的个体。
[0343]在第15至18方面的优选的实施方案中，用PCSK9拮抗剂缓解、改善、抑制或预防PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。
[0344]在第15至18方面的优选的实施方案中，PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况选自下组:升高的LDL-C水平、高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，或任何其它在第I或第2方面中描述的疾病和状况。
[0345]在第15至18方面的优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于对下列受试者施用:指示进行LDL血透的受试者、具有PCSK9激活突变的受试者、患有杂合家族性高胆固醇血症的受试者、患有原发性高胆固醇血症的受试者(例如患有原发性家族性或原发性非家族性高胆固醇血症的受试者)、患有高胆固醇血症如原发性高胆固醇血症且不受他汀控制的受试者、有形成高胆固醇血症风险的受试者、患有高胆固醇血症的受试者、患有高脂血症的受试者、患有血脂障碍的受试者、患有动脉粥样硬化的受试者或患有心血管疾病的受试者或任何其它如第I或第2方面中描述的受试者。最优选地，所述受试者是人受试者。
[0346]可用于实践本发明第15至18方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0347]在第15至18方面的优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于与剂量为0.05mg至IOOmg的HMG-CoA还原酶抑制剂组合施用。在一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要每日三次、每日两次或每日一次施用。在一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要每日、每隔一日、每3日、每4日、每5日或每6日施用。在一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要每周、每隔I周、每3周或每4周施用。在一些实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要在上午、中午或晚上施用。在优选的实施方案中，所述HMG-CoA还原酶抑制剂要每日一次，优选口服，优选在晚上施用。优选地，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。更优选地，所述他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。在第16至第18方面的别的优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段用于与他汀组合施用，其中所述他汀是:
[0348]-要以介于0.05mg和2mg之间的每日剂量,优选以0.2mg、0.4mg或0.8mg的每日剂量施用的西立伐他汀；
[0349]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的阿托伐他汀；
[0350]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg、40mg或80mg的
每日剂量施用的辛伐他汀；
[0351]-要以介于0.2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以lmg、2mg、5mg、IOmg或20mg的每日剂量施用的匹伐他汀；
[0352]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以5mg、10mg、20mg或40mg的每日剂量施用的罗苏伐他汀；
[0353]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的氟伐他汀；
[0354]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日剂量施用的洛伐他汀；或
[0355]-要以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量,优选以10mg、20mg、40mg或80mg的每日
剂量施用的普伐他汀。
[0356]本发明的另一个优选的实施方案将如本文中描述的第16和17、或第16和18、或第17和18、或第16和17和18方面组合。
[0357]在第19方面，本发明针对包含与药学可接受赋形剂或载体一起的依照本发明的抗体或其抗原结合片段的药物组合物。
[0358]依照第19方面的优选的实施方案，所述抗体或其片段如记载于第15、1或2方面的；抗体的别的合适特征记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0359]依照另一个优选的实施方案,所述药物组合物包含每剂约40至约500mg的抗体或抗原结合片段。
[0360]依照另一个优选的实施方案,所述药物组合物包含约50mg至约500mg、约50mg至约 300mg、约 50mg、约 lOO mg、约 150mg、约 200mg、约 250mg、约 300mg、约 350mg、约 400mg、约450mg或约500mg的抗体或其抗原结合片段。
[0361]依照另一个优选的实施方案，所述药物组合物包含约150、200或300mg的抗体或
其抗原结合片段。
[0362]依照另一个优选的实施方案，所述药物组合物包含与药学可接受赋形剂或载体一起的有效剂量的特异性结合hPCSK9 (人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)的抗体或其抗原结合片段，其中所述剂量对于在施用后至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天或至少28天的时段里低密度脂蛋白(LDL-C)水平的持续降低是足够的。依照另一个优选的实施方案，所述剂量对于在至少14天、28天或I个月的时段里LDL-C水平的持续降低是足够的。
[0363]依照另一个优选的实施方案，所述药物组合物包含有效量的HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0364]依照另一个优选的实施方案，所述药物组合物与有效量的HMG-CoA还原酶抑制剂
一起安排。
[0365]依照另一个优选的实施方案，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀，优选选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀或普伐他汀，并且优选为阿托伐他汀。
[0366]依照另一个优选的实施方案,所述药物组合物包含约0.05mg至约lOOmg、约0.5mg至约lOOmg、约5mg至约90mg、约10mg、约20mg、约40mg或约80mg的HMG-CoA还原酶抑制剂，并且优选为约10、约20、约40或约80mg。
[0367]依照另一个优选的实施方案，所述药物组合物包含有效剂量的HMG-CoA还原酶抑制剂，用于通过每日一次施用降低LDL-D水平。
[0368]要用于依照本发明的药物组合物的抗体或其抗原结合片段可以是任何如本文中描述的抗体，如在“用于实践本发明的优选抗体”部分或第15和其它方面中的。
[0369]依照一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段在对受试者如人或非人哺乳动物施用时，具有下列一项或多项特征:
[0370]a.在对受试者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)水平相对于给药前水平降低至少约-25%至约-40%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-25%，更优选至少-30%，特别在每两周施用方案(每隔一周，E2W)中以约40至约60mg,优选约45至约55mg且更优选约50mg的剂量施用时；
[0371]b.在对受试者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约-50%至约-65%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-40%，更优选至少_45%，特别是在以约IOOmg E2W的剂量施用时；
[0372]c.在对受试者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_60%至至少约_75%[例如至少约-60%、至少约-65%、至少约-70%或至少约-75%]及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-55%，更优选至少-60%，特别是在以约150mg E2W的剂量施用时，
[0373]d.低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约40%至约75%及在至少28天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-35%，更优选至少_40%，特别是在以约200mg E4W的剂量施用时；
[0374]e.在对受试者施用后低密度脂蛋白(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-75%及在至少28天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-40%，更优选至少_45%，特别是在以约300mg E4W的剂量施用时；
[0375]f.在对受试者施用后血清HDL胆固醇水平相对于给药前水平升高至少2%、至少
2.5%、至少3%、至少3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%,特别是在以约150mg E2W的剂量施用时；
[0376]g.在对受试者施用后对肌钙蛋白水平很少或没有可测量的影响；
[0377]h.在对受试者施用后下列一项或多项升高:总胆固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo-B/ApoA-1 比率。
[0378]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段在对患有他汀抗性高胆固醇血症的受试者施用时能够克服他汀抗性。
[0379]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ IDNO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对或与其具有至少98%或99%同一性的基本上相同的序列的重链和轻链CDR。
[0380]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ IDNO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对或与其具有至少98%或99%同一性的基本上相同的序列对。
[0381]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段与包含如SEQ IDNO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或抗原结合片段竞争对hPCSK9的结合。
[0382]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段结合包含hPCSK9(SEQID NO:755)的第238位氨基酸残基的表位。
[0383]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段结合包含hPCSK9(SEQID NO:755)的第238、153、159和343位氨基酸残基中一个或多个的表位。
[0384]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段结合不包含hPCSK9 (SEQID NO:755)的第192、194、197和/或237位氨基酸残基的表位。
[0385]可以依照如本领域中已知的，且具体地如本文中描述的任何药学可应用配制剂，如用于溶解的干配制剂或液体配制剂配制药物组合物。合适的抗体配制剂是本领域中已知的，并且包括干配制剂(例如冷冻干燥的、喷雾干燥的或冻干的、无水的浓缩物)以及液体配制剂(例如溶液)。合适的他汀类配制剂也是本领域中公知的并且包括干配制剂以及液体配制剂，例如悬浮液、分散液和溶液(关于参考文献，见例如“Statins therapy:a reviewon conventional and novel formulation approaches，，R.Tiwari 和 K.Pathak, Journalof Pharmacy and Pharmacology, 2011,其据此完整并入)。
[0386]依照一个优选的实施方案，所述药物组合物以用于溶解的干配制剂包含抗体或其抗原结合片段，所述干配制剂如冻干粉末、冷冻干燥的或喷雾干燥的粉末、或无水浓缩物。
[0387]依照另一个优选的实施方案，所述药物组合物以液体配制剂包含所述抗体或其抗原结合片段，所述液体配制剂如注射或输注溶液。
[0388]依照另一个优选的实施方案，所述药物组合物作为口服或经口配制剂例如胶囊剂或片剂，或作为液体配制剂例如悬浮液、分散液或溶液包含HMG-CoA还原酶抑制剂，用于例如经口施用、注射或输注。
[0389]依照另一个优选的实施方案，所述药物组合物用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况或用 于降低升高的总胆固醇或升高的LDL-C水平。抗体或其片段，或HMG-CoA还原酶抑制剂的别的优选的用途、剂量方案、施用方案，或要用药物组合物治疗的群体记载于本申请中，例如在本发明其它方面如第I或2方面。
[0390]在第20方面，本发明关注如本文中描述的注射溶液，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段，并且优选地，每Iml体积包含约40mg至约200mg或约50至约200mg,例如约40mg、约50mg、约75mg、约lOOmg、约150mg或约200mg的抗体或其抗原结合片段。
[0391]在第21方面，本发明关注如本文中描述的干配制剂，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段，且优选地每剂包含约40mg至约500mg、50至约500mg、约50至约400mg、约50至约 300mg 例如约 40mg、约 50mg、约 75mg、约 lOOmg、约 150mg、约 200mg、约 250mg、约 300mg、约 350mg、约 400mg、约 450mg 或约 500mg,更优选地约 50mg、约 lOOmg、约 150mg、约 200mg、约250mg、约300mg,甚至更优选地约150mg、约200mg或约300mg的抗体或其抗原结合片段。
[0392]本发明的配制剂可以包含别的活性成分如本文中描述的HMG-CoA还原酶抑制剂。在本申请其它部分，例如在本发明的其它方面如第15、19或20方面描述了第20或21方面的优选实施方案。
[0393]合适的抗体配制剂一般是本领域中已知的并且包含干配制剂(例如冷冻干燥的、喷雾干燥的或冻干的、无水的浓缩物)以及液体配制剂(例如溶液)。合适的他汀类剂型是本领域中公知的并且包含干配制剂以及液体配制剂，例如悬浮液、分散液和溶液(关于参考文献，见例如 “Statins therapy:a review on conventional and novel formulationapproaches，，R.Tiwari 和 K.Pathak, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2011,其据此完整并入)。
[0394]依照第22方面，本发明关注包含在依照第19方面的药物组合物之一中的抗体或其抗原结合片段。
[0395]在第23方面，本发明针对包含本发明的抗体、其抗原结合片段或药物组合物的单位剂量形式。可以从本申请的相应部分，如第1、2、19、20、21或22方面或从“用于实践本发明的优选抗体”部分得到要用于实践本发明第23方面的抗体、药物组合物或配制剂的合适的实施方案。
[0396]依照一个优选的实施方案,所述单位剂量形式包含约40mg、约50mg、约75mg、约lOOmg、约 150mg、约 200mg、约 250mg、约 300mg、约 350mg、约 400mg、约 450mg、或约 500mg 的
抗体或其抗原结合片段。
[0397]依照另一个优选的实施方案，所述单位剂量形式在气密密封容器如管形瓶、安瓿或药囊中以用于溶解的干配制剂包含抗体或其片段。
[0398]依照另一个优选的实施方案，所述单位剂量形式在气密密封容器如管形瓶、药囊、预填充的注射器、预填充的自动注射器或用于可再度使用的注射器或涂药器的药筒中以液体配制剂包含抗体或其片段。
[0399]依照另一个优选的实施方案，在所述气密密封容器上指示活性成分的量。
[0400]如在本发明的不同方面和实施方案中，尤其是在第23方面中使用的，术语“单位剂量形式”指适合作为单一剂量用于人和动物受试者的物理离散单元，每个单元含有与需要的药用稀释剂、载体或媒介物一起的计算为产生期望的治疗效果的预定量的活性材料(例如约40mg或约50mg至约500`mg的PCSK5抗体和/或例如0.05mg至IOOmg HMG-CoA还原酶抑制剂)。本发明的新颖单位剂量形式的规格由下列各项规定并直接依赖于下列各项:(a)活性材料的独特特征和要实现的特定治疗效果，和(b)混合这类活性材料以在动物或人中的治疗性使用的本领域中固有的限制，如本说明书中公开的，这些是本发明的特征。依照本发明的合适单位剂量形式的例子是管形瓶、片剂、胶囊剂、锭剂、栓剂、粉末包、速溶片、扁囊剂、安瓿、前述任一项的分开的多重物以及如本文中描述的或本领域中一般已知的其它形式。
[0401]本发明的制品中可以包含抗体的一种或多种这类单位剂量形式，任选地还包含HMG-CoA还原酶抑制剂的一种或多种单位剂量形式(例如一板片剂，其包含HMG-CoA还原酶抑制剂作为活性成分)。
[0402]术语“活性材料”指任何具有治疗活性的材料，如一种或多种活性成分。要用作治疗剂的活性成分可以通过采用自身在本领域中可用且可以通过确立的规程制备的药用材料以这类单位剂量形式容易地制备。本发明优选的活性成分是抗体或其片段或HMG-CoA还原酶抑制剂如他汀。
[0403]在一个优选的实施方案中，所述单位剂量形式包含40-约500mg的本发明的抗体或抗原结合片段。依照另一个优选的实施方案，所述单位剂量形式包含约40mg、约50mg、约75mg、约 lOOmg、约 150mg、约 200mg、约 250mg、约 300mg、约 350mg、约 400mg、约 450mg、或约500mg,更优选地约150mg、约200mg或约300mg的抗体或其抗原结合片段。其它优选的剂量和剂量方案如本申请中别处，如在第1、2或第15至19方面中所描述的。
[0404]依照另一个优选的方面，所述单位剂量形式以用于溶解的干配制剂如冻干粉末、冷冻干燥粉末或无水浓缩物包含抗体、其抗原结合片段或药物组合物。依照另一个优选的实施方案，所述干配制剂包含在气密密封的容器如管形瓶、安瓿或药囊中。
[0405]依照另一个优选的实施方案，所述单位剂量形式以液体配制剂，例如注射或输注溶液包含抗体、其抗原结合片段或药物组合物。依照另一个优选的实施方案，所述液体配制剂包含在气密密封的容器如管形瓶、药囊、预填充的注射器、预填充的自动注射器或用于可再使用的注射器或涂药器的药筒中。
[0406]还优选在单位剂量形式的气密密封容器上指示活性成分(例如抗体)的量。
[0407]以下制剂例示了本发明的单位剂量形式的制剂，且不作为其限制。可以制备体现本发明的数种剂量形式。例如，每管形瓶的单位剂量可以含有0.5ml, lml, 2ml, 3ml, 4ml, 5ml，6ml, 7ml, 8ml, 9ml, 10ml, 15ml或20ml PCSK5抗体或其片段，其范围为约40至约500mg或约50mg至约500mg的PCSK5抗体。若必要的话，可以通过向每个管形瓶添加无菌稀释剂将这些制剂调节至期望浓度。
[0408]在一个实施方案中，在单位剂量形式中分开地或混合在一起地提供本发明的组合物成分，例如以用于溶解的干配制剂或液体配制剂提供。制备蛋白质性生物分子(如抗体或其抗原结合片段)或小分子化合物(如他汀类)的药学可接受配制剂是本领域中一般已知的。另外，对于抗体的一些合适配制剂，参见“用于实践本发明的优选抗体”部分或本发明的第2或第3方面，对于小分子HMG-CoA还原酶抑制剂如他汀类，参见例如“Statinstherapy:a review on conventional and novel formulation approaches，，, r.Tiwari 和K.Pathak, Journal of Pharmacy and Pharmacology2011, p.983-998。依照一个优选的实施方案，依照本发明的活性成分、活性材料或药物组合物是用于液体溶解的干配制剂，如冻干粉末、冷冻干燥粉末或无水浓缩物，优选包含在气密密封容器如管形瓶、安瓿或药囊中，并且优选地其指示活性剂的量。在要通过输注施用组合物的情况中，可以用含有无菌药用级水或盐水的输注瓶将其分配。在通过注射施用组合物的情况下，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿，从而可以在施用前混合所述成分。
可用于制造药物组合物(例如，适用于对受试者或患者施用的组合物)的整装药物组合物，其可以在制备单位剂量形式中使用。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物是药物组合物。这类组合物包含预防或治疗有效量的一种或多种预防剂或治疗剂(例如本发明的抗体或其它预防剂或治疗剂)，以及药学可接受载体。优选地，将所述药物组合物配制为适用于对受试者的施用路径。
[0410]在一个具体的实施方案中，术语“药学可接受的”意指得到美国联邦或州政府的管理机构或EMA (欧洲药品局)批准，或在美国药典((美国药典-33/国定配方集-28重新发行，由美国药典委员会，Inc.,Rockville Md.出版，出版日期:2010年4月))或其它一般公认的药典中列出用于动物，且更特别地用于人。
[0411]术语“载体”指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂(例如弗氏佐剂(完全和不完全的))、赋形剂或媒介物。这类药用载体可以是无菌液体，如水和油，包括那些具有石油、动物、植物或合成起源的，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药物组合物时，水是优选的载体。还可以将盐水溶液和水性右旋糖以及甘油溶液用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的药用赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、干燥的脱脂乳、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。若期望的话，所述组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂，或PH缓冲剂。这些组合物可以采用溶液、悬浮液、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、粉末、持续释放配制剂等的形式。口服配制剂可以包含标准载体，如药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。合适的药用载体的例子记载于E.W.Martin的“Remington，s PharmaceuticalSciences”。这类组合物将含有与合适量载体一起的预防或治疗有效量的抗体(优选为纯化的形式)，从而提供对患者适当施用的形式。所述组合物还可以含有一或多种其它活性成分如HMG-CoA还原酶抑制剂。配制剂应当适合施用模式。
[0412]一般地，在单位剂量形式中分开地或混合在一起地提供本发明的组合物成分，例如以在指示活性剂量的气密密封容器如安瓿或药囊中的用于溶解的干配制剂如冻干粉末、冷冻干燥粉末或无水浓缩物提供。本发明组合物的成分还可以以在气密密封容器如安瓿、药囊、预填充的注射器或自动注射器、或供可再度使用的注射器或涂药器(例如笔或自动注射器)用的药筒中混合的液体配制剂(即注射或输注溶液)提供。在要通过输注施用组合物的情况下，可以用含有无菌药用级水或盐水的输注瓶来将其分配。在通过注射施用组合物的情况下，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿，从而在施用前可以将成分混合。所述组合物还可以包含两种或更多种各以不同或相同方式配制的活性成分，例如本发明的抗体以及本发明的HMG-CoA还原酶抑制剂的组合。
[0413]本发明还提供在指示抗体量的气密密封容器，如安瓿或药囊中包装配制剂。在一个实施方案中，包含抗体的本发明配制剂以在气密密封容器中的干无菌冻干粉末、冷冻干燥粉末或无水浓缩物供应，并且可以用例如水或盐水重建成适合于对受试者施用的浓度。在一个实施方案中，包含抗体的本发明配制剂以在气密密封容器中的干无菌冻干粉末以至少40mg、至少50mg,更优选至少75mg、至少lOOmg、至少150mg、至少200mg、至少250mg、至少300mg、至少350mg、至少400mg、至少450mg或至少500mg抗体或其抗原结合片段的单位剂量提供。包含抗体的本发明冻干配制剂应当于介于2和8°C之间在其最初的容器中贮存，并且应当在重建后12小时内，优选6小时内、5小时内、3小时内或I小时内施用抗体。包含抗体的本发明配制剂可以配制为中性或盐形式。药学可接受盐包括那些与阴离子，如自氢氯酸、磷酸、醋酸、草酸 、酒石酸等衍生的阴离子形成的盐，以及那些与阳离子，如自氢氧化钠、钾、铵、钙、铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等衍生的阳离子形成的盐。
[0414]在第24方面，本发明关注包含本发明的药物组合物、本发明的液体配制剂或本发明的干配制剂、本发明的抗体或其抗原结合片段、或本发明的一种或多种单位剂量形式和容器或包装的制品。
[0415]依照一个优选的实施方案，所述制品包含在E2W、E4W或一月一次施用方案情况中对于2周(14天)、4周(28天)或I个月时段足够的的抗体单位剂量形式。
[0416]所述制品可以包含一种或多种含有抗体和HMG CoA抑制剂两者的单位剂量形式，例如包含包含这两种活性成分的用于注射或输注的液体配制剂的单位剂量形式。所述制品还可以包含在两个或更多个分开的单位剂量形式中的抗体(或其抗原结合片段)和HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0417]依照一个实施方案，所述制品包含依照本发明的抗体和HMG-CoA还原酶抑制剂的一个或多个分开的单位剂量形式。
[0418]依照一个优选的实施方案，HMG-CoA还原酶抑制剂的每个单位剂量形式包含约0.05mg至约IOOmg HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0419]依照另一个优选的实施方案，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀，优选选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀或普伐他汀，并且优选阿托伐他汀。
[0420]依照另一个优选的实施方案，所述HMG-CoA还原酶抑制剂例如他汀为用于每日一次施用的有效剂量。
[0421]依照另一个优选的实施方案，HMG-CoA还原酶抑制剂的单位剂量形式包含约0.5至约lOOmg、约5至约90mg、约10、20、40或80mg的HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0422]依照另一个优选的实施方案，所述制品包含对于每日施用方案足够的HMG-CoA还原酶抑制剂的单位剂量形式。
[0423]依照另一个优选的实施方案，包含抗体的单位剂量形式是药囊、预填充的注射器、预填充的自动注射器或用于可再用注射器或涂药器的药筒，特别地其包含Iml或2ml注射溶液。
[0424]依照另一个实施方案，所述制品包含下列一种或多种组分:
[0425]1.一种或多种包含本发明抗体的单位剂量形式；
[0426]j.一种或多种包含本发明的HMG-CoA还原酶抑制剂的单位剂量形式；
[0427]k.使用说明书；
[0428]1.用于应用抗体的装置，如注射器。
[0429]依照另一个优选的实施方案，所述制品包含对于下列各项足够的抗体以及优选地还有HMG-CoA还原酶抑制剂的单位剂量形式:
[0430](a) 一次单次施用抗体和HMG-CoA还原酶抑制剂，例如包括安瓿、药囊、管形瓶、药筒或预填充的注射器，其包含约50mg、约lOOmg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg或约500mg抗体，且优选地约150mg抗体、约200mg抗体或约300mg抗体，以及例如用于口服或经口施用的片剂或胶囊剂，其包含HMG、CoA抑制剂，例如包含约10mg、约20mg、约40mg或约80mg的HMG CoA抑制剂如阿托伐他汀。
[0431](b)用抗体和HMG-CoA还原酶抑制剂的两周(即14天)治疗，例如包括安瓿、药囊、管形瓶、药筒或预填充的注射器，其包含约50mg、约lOOmg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg或约500mg抗体，且优选地约150mg抗体、约200mg抗体或约300mg抗体；以及对于14天治疗足够的包含HMG-CoA还原酶抑制剂的单元(例如片剂或胶囊剂，例如用于口服或经口施用)，例如用于HMG-CoA还原酶抑制剂一日一次施用方案的14个单元或用于一日两次施用方案的28个单元等，其中优选地，每日HMG CoA抑制剂单元包含约10mg、约20mg、约40mg或约80mg的HMGCoA抑制剂如阿托伐他汀。在要以超过200mg的剂量施用抗体的情况下，共同构成总剂量的两个抗体单位剂量形式可以是优选的(例如两个各包含Iml液体配制剂中约150mg抗体的预填充的注射器，两次射出中总共施用(例如皮下注射)约300mg抗体)，可以是优选的(或用于总共施用约200mg抗体的两个各具有约IOOmg的单元,用于总共施用约350抗体的两个具有约175mg的单元等)。
[0432](c)用抗体和HMG-CoA还原酶抑制剂的4周(即28天)治疗，例如:
[0433]1.每两周用约50至约200mg抗体的抗体E2W施用方案:包含两个各具有约50mg、约lOOmg、约150mg或约200mg抗体或其抗原结合片段的单位剂量形式(例如如上文例示的)以及用于每日一日一次施用方案的28个单位剂量形式的HMG-CoA还原酶抑制剂(如上文例示的)或以及用于每日一日两次施用方案的56个单位剂量形式的HMG-CoA还原酶抑制剂，优选28个约10mg、约20mg、约40mg或约80mg阿托伐他汀的单位剂量形式(例如胶囊剂或片剂)
[0434]2.通过每4周(28天)施用约200mg的抗体或其片段的E4W施用方案:例如包含有约200mg抗体的I个抗体单位剂量形式(例如如上文例示的)以及28个或56个,且优选28个HMG-CoA还原酶抑制剂单位剂量形式(如上文例示的)
[0435]3.通过每4周(28天)超过200mg的抗体E4W施用方案:包含两个共同构成抗体总剂量的单位剂量形式(例如两个预填充的注射器，其各包含Iml各具有150mg抗体的液体抗体配制剂)或包含一个单位剂量形式，其包含要施用的总抗体量(例如包含约300mg用于溶解的抗体的管形瓶，或包含在液体配制剂中的约300mg抗体的管形瓶、药筒或预填充的注射器(即约2ml液体配制剂，其中Iml液体配制剂包含约150mg抗体))；以及28个或56个，且优选28个HMG-CoA还原酶抑制剂单位剂量形式(例如如上文例示的)
[0436](d)用抗体和HMG-CoA还原酶抑制剂的一个月治疗:包含与(C)下的例示相同数目的抗体单位剂量形式，用于每月施用一或两次，例如对于一月一次施用在该月的每第I天或该月的每第I个星期一等，或例如对于一月两次施用方案在该月的每第I天和第14或15天；另外，制品包含31个HMG-CoA还原酶抑制剂单位剂量形式，优选在含有从月份天数1-31连续编号的泡罩中排列的片剂或胶囊剂(其中要放弃超出天数的多余片剂或胶囊剂)。
[0437]在第25方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和(c)在包装材料中含有的标签或包装插页，其指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥`样硬化和心血管疾病，并进一步指示可以治疗落入如在第13方面中叙述的一组或多组受试者中的受试者。
[0438]在第26方面，本发明涉及一种制品，其包含:(a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和(c)在包装材料内含有的标签或包装插页，其指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，并且进一步指示用所述抗体或其抗原结合片段治疗患者对于属于如在第14方面中叙述的一组或多组受试者中的患者是禁忌的。
[0439]可用于实践本发明不同制品的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分。
[0440]在第24、25或26方面的优选的实施方案中，所述标签或包装插页含有对依照第I方面的治疗方法或依照第2方面的医学用途，以及如本文中描述的第I和2方面的实施方案的提述。
[0441]第24、25或26方面中描述的制品还可以包含如在本发明的第3、4或5方面的制品中包含的一种或多种特征或组分，且反之亦然。本发明的另一个优选的实施方案将如本文中描述的第24和25、第25和26、或第24和25和26方面的一种或多种特征组合。
[0442]依照第27方面，本发明关注本发明的药物组合物或抗体或其抗原结合片段，如依照本发明第19方面的，用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况，优选地用于降低升高的LDL-C(低密度脂蛋白C)水平。
[0443]依照一个优选的实施方案，所述疾病或状况选自下组:升高的总胆固醇水平、升高的低密度脂蛋白(LDL-C)水平、高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、和动脉粥样硬化，特别是原发性高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症或不受他汀类控制的高胆固醇血症。
[0444]依照另一个优选的实施方案，其中每隔一周(E2W)、每四周(E4W)或每月一次对所述受试者施用所述组合物、所述抗体或其抗原结合片段。
[0445]依照另一个优选的实施方案，将HMG-CoA还原酶抑制剂,优选为依照本发明不同方面如依照第I或2方面的HMG-CoA还原酶抑制剂与药物组合物、抗体或其抗原结合片段共施用。
[0446]依照另一个优选的实施方案，其中一日一次地，优选每日施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0447]在第28方面，本发明关注用于本发明的药物组合物例如依照第19方面的药物组合物的方法，其包括将所述抗体或其抗原结合片段以及任选地所述HMG-CoA还原酶抑制剂与一种或多种药用赋形剂或载体混合 。
[0448]在第29方面，本发明关注用于制备本发明的单位剂量形式的方法，其包括分配一定量的包含一剂或多剂抗体或其抗原片段以及任选地一剂或多剂HMG-CoA还原酶抑制剂的依照本发明的药物组合物、抗体或其抗原结合片段、液体配制剂或干配制剂，并将它们改编为适合作为用于人和/或动物施用的单一剂量的物理离散单元。
[0449]在第30方面，本发明关注用于制备或装配本发明的制品的方法，包括在容器中包装依照本发明的药物组合物、抗体、液体配制剂、干配制剂或一种或多种单位剂量形式，任选地以及下列一项或多项:标签、使用说明书、应用装置。
[0450]在第31方面，本发明涉及一种测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:升高的LDL-C水平、高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病、或第I或第2方面所描述的任何其它疾病或状况，所述方法包括:
[0451]用所述抗体或其抗原结合片段治疗选定的患者群体，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平；并
[0452]通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后所述患者群体中的LDL-C水平测定所述抗体或其抗原结合片段的功效，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的；
[0453]其中每位患者落入如第13方面所叙述的一组或多组受试者中。
[0454]在第32方面，本发明涉及一种测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法(或如第I或第2方面所描述的任何其它方法):升高的LDL-C水平、高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，所述方法包括:
[0455]通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后所述患者群体中的LDL-C水平测定已经用于用所述抗体或其抗原结合片段治疗选定患者群体的抗体或其抗原结合片段的功效，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的；
[0456]其中每位患者落入如第13方面所叙述的一组或多组受试者中。
[0457]在第31和第32方面的优选的实施方案中，所述群体中的每位患者在用所述抗体或其抗原结合片段治疗前已经通过施用HMG CoA抑制剂如他汀达至少6周接受降脂治疗。
[0458]可用于实践本发明第19和20方面的抗体及其抗原结合片段记载于“用于实践本发明的优选抗体”部分或本申请中描述本发明抗体的其它部分，如例如第15方面中。
[0459]在第31和第32方面的优选的实施方案中，用或已经用依照如本文中描述的第I或2方面的治疗方法及其实施方案的治疗方法治疗选定的患者群体。
[0460]在第31和第32方面的别的优选的实施方案中，对所述选定的患者群体的亚组测定所述抗体或其抗原结合片段的功效，其中所述亚组已经通过至少一种选自下组的分层因子分层:患有杂合家族性高胆固醇血症(heFH)的群体；先前的心肌梗死(MI)史；先前的中风史；接受高强度他汀疗法；和患者的地理区域(例如北美、西欧、东欧和世界的剩余部分)。
[0461]在仓鼠和其它啮齿类中，他汀类对从血液清除LDL不是有效的。更具体地，单独施用他汀类(例如阿托伐他汀)对仓鼠或其它啮齿类中LDL受体(LDLR)的表达无影响，推测起来是由于内源PCSK9的活性。本申请中含有的实验(参见研究4)显示通过施用抗PCSK9抗体抑制PCSK9使得啮齿类(例如仓鼠)对他汀治疗敏感。因而，本申请提供了用于测试降低胆固醇水平的他汀类或其它药物的功效的新动物模型。
[0462]如此，在第33方面， 本发明涉及一种用于测试化合物在降低受试者的胆固醇水平中的功效的方法，包括下列步骤:
[0463](a)提供啮齿类动物；
[0464](b)对啮齿类动物施用特异性结合PCSK9的抗体或其抗原结合片段；
[0465](C)对所述啮齿类动物施用测试化合物；
[0466](d)在啮齿类动物中测定该测试化合物的效果，其中与对照动物的胆固醇水平相比啮齿类动物中胆固醇水平的降低指示该测试化合物在降低受试者的胆固醇水平中是有效的，其中对照动物来自与所述啮齿类动物相同的物种，并且其中对照动物尚未用该测试化合物攻击。
[0467]在第33方面的优选的实施方案中，所述啮齿类动物选自下组:仓鼠、小鼠、大鼠、豚鼠和家兔。
[0468]可用于实践本发明第21方面的抗体及其抗原结合片段记载于本申请其它部分如第15方面或“用于实践本发明的优选抗体”部分。优选地，以lmg/kg体重、3mg/kg体重或10mg/kg体重的浓度对啮齿类动物施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0469]在第33方面的优选的实施方案中，通过测量血清中总胆固醇的水平来测定胆固醇水平的降低。在更优选的实施方案中，通过测量血清中LDL胆固醇(LDL-C)的水平来测定胆固醇水平的降低。
[0470]在第33方面的优选的实施方案中，对照动物来自与所述啮齿类动物相同的品系。优选地，对所述啮齿类动物和对照动物施用相同的抗体或其抗原结合片段。优选地，对所述啮齿类动物和对照动物施用相同浓度(以mg/kg体重测量)的抗体或其抗原结合片段。
[0471]在第33方面的一个实施方案中，所述对照动物是与所述啮齿类动物不同的动物，即不同的个体。也可以测定两个或更多个对照动物中的胆固醇水平并计算在这两个或更多个对照动物中胆固醇水平的均值数值。类似地，有可能用抗体或其抗原结合片段攻击两个或更多个啮齿类动物，以测定在这两个或更多个啮齿类动物中的胆固醇水平并计算在这两个或更多个啮齿类动物中胆固醇水平的均值数值。
[0472]在第33方面的一个备选的实施方案中，所述对照动物与啮齿类动物是同一个动物，但是对其在不同的时间点检查。更具体地，可以将施用测试化合物后啮齿类动物中的胆固醇水平与同一动物中的给药前胆固醇水平比较。优选地，在上文叙述的步骤(b)和(C)之间测定所述给药前胆固醇水平。
[0473]依照第34方面，本发明关注增强经历他汀疗法的受试者中的LDL-C降低活性的方法，所述方法包括对受试者施用特异性结合人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9 (hPCSK9)的抗体或其抗原结合片段，其中在约5mg至约500mg范围内的剂量量施用所述抗体或其抗原结合片段，由此在受试者中增强他汀疗法的LCL-C降低活性。
[0474]依照第34方面的一个优选的实施方案，所述受试者在施用所述抗体前对他汀疗法是有抗性的。
[0475]依照另一个优选的实施方案，所述受试者患有选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍和动脉粥样硬化。
[0476]依照另一个优选的实施方案，所述疾病或状况是原发性高胆固醇血症或家族性高胆固醇血症。
[0477]依照另一个优选的实施方案,所述抗体或抗原结合片段以约50mg至约300mg范围内的剂量量施用。
[0478]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段以约150mg的剂量量施用。
[0479]依照另一个优选的实施方案，每隔一周(E2W)对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0480]依照另一个优选的实施方案，每4周(E4W)对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0481]依照另一个优选的实施方案，相对于给药前水平，所述治疗将血清总胆固醇降低至少约25%至约35%，并在至少24天的时段里持续降低。
[0482]依照另一个优选的实施方案，相对于给药前水平，所述治疗将血清总胆固醇降低至少约65%至约80%，并在至少24天的时段里持续降低。
[0483]依照另一个优选的实施方案，相对于给药前水平降低，所述治疗将血清三酰甘油水平至少约25%至约40%。
[0484]依照另一个优选的实施方案，相对于给药前水平，所述治疗将血清HDL胆固醇降低不超过5%。
[0485]依照另一个优选的实施方案，所述治疗对肝功能具有很少或没有可测量影响，如通过ALT和AST测量测定的。
[0486]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链⑶R。
[0487]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
[0488]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段与包含如SEQ IDNO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或抗原结合片段竞争对hPCSK9的结合。
[0489]依照另一个优选的实施方案，他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0490]依照另一个优选的实施方案,他汀是以10mg、20mg、40mg或80mg的剂量施用的阿托伐他汀。
[0491]在第35方面，本发明关注用于治疗受试者中升高的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的试剂盒，所述试剂盒包含(a)药用单位剂量形式，其包含特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；以及药学可接受载体，其中所述抗体或抗原结合片段以约5mg至约500mg范围内的剂量量存在；和(b)有使用说明书的标签或包装插页。
[0492]依照第35方面的一个优选的实施方案，所述标签指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况治疗:闻胆固醇血症、闻脂血症、血脂障碍和动脉粥样硬化和心血管疾病。
[0493]依照另一个优选的实施方案，所述疾病或状况是原发性高胆固醇血症或家族性高胆固醇血症。依照另一个优选的实施方案，所述疾病或状况是不受他汀类控制的高胆固醇血症。
`[0494]依照另一个优选的实施方案,所述抗体或抗原结合片段以约50mg至约300mg范围内的剂量量存在。依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段以约150mg的剂
量量存在。
[0495]依照另一个优选的实施方案，所述标签或包装插页指示每隔一周(E2W)对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0496]依照另一个优选的实施方案,所述标签或包装插页指示每4周(E4W)对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0497]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链⑶R。
[0498]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
[0499]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段与包含如SEQ IDNO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或抗原结合片段竞争对hPCSK9的结合。
[0500]依照另一个优选的实施方案，所述试剂盒进一步包含HMG-CoA还原酶抑制剂。依照另一个优选的实施方案，所述抑制剂的剂量量范围为约0.05mg至lOOmg。依照另一个优选的实施方案，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。依照另一个优选的实施方案，他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0501]依照另一个优选的实施方案，用法说明书指示他汀是以10mg、20mg、40mg或80mg的剂量施用的阿托伐他汀。[0502]依照另一个优选的实施方案，用法说明书指示用抗体或其抗原结合片段治疗对于属于下列一组或多组的患者是禁忌的:
[0503]⑴吸烟者；
[0504](ii)70岁龄以上的个体；
[0505](iii)患有高血压的个体；
[0506](iv)怀孕女性； [0507](V)试图怀孕的女性；
[0508](vi)哺乳的女性；
[0509](vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；
[0510](viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体；
[0511](ix)饮用过量酒精的个体；
[0512](X)具有肾问题的个体；
[0513](xi)患有甲状腺机能减退的个体；
[0514](xii)患有肌病症的个体；
[0515](xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌肉问题的个体；
[0516](xiv)其呼吸有严重问题的个体；
[0517](xv)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或
[0518](xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁的个体；
[0519](xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体；
[0520](xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体；
[0521](xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体；
[0522](XX)乙肝或丙肝阳性的个体；或
[0523](xxi)对单克隆抗体治疗有已知的敏感性的个体。
[0524]在第36方面，本发明关注一种治疗患有以升高的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平为特征的疾病或状况的受试者的方法，所述方法包括:
[0525](a)选择具有大于100mg/dL的血液LDL-C水平的受试者；并
[0526](b)对所述受试者施用包含特异性结合人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9(hPCSK9)的抗体或其抗原结合片段的组合物；由此降低有此需要的受试者中的胆固醇水平。
[0527]依照一个优选的实施方案，所述疾病或状况选自下组:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍和动脉粥样硬化。
[0528]依照另一个优选的实施方案，所述疾病或状况是原发性高胆固醇血症或家族性高胆固醇血症。
[0529]依照另一个优选的实施方案，所述疾病或状况是不受他汀类控制的高胆固醇血症。[0530]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于18kg/m2或大于40kg/m2的体重指数(BMI)。
[0531]依照另一个优选的实施方案，先前没有教导受试者食用胆固醇降低饮食。
[0532]依照另一个优选的实施方案，所述受试者先前尚未服用除阿托伐他汀外的胆固醇降低药物。
[0533]依照另一个优选的实施方案，以每天约IOmg施用阿托伐他汀。
[0534]依照另一个优选的实施方案，胆固醇降低药物选自下组:贝特类(fibrates)、胆汁酸树脂、烟酸(niacin)、肠胆固醇吸收(ICA)阻断剂和Ω-3脂肪酸。依照另一个优选的实施方案，以每天大于500mg施用烟酸。依照另一个优选的实施方案，以每天大于1000mg施用Ω-3脂肪酸。
[0535]依照另一个优选的实施方案，所述受试者没有患有糖尿病。依照另一个优选的实施方案，糖尿病是I型糖尿病。依照另一个优选的实施方案，糖尿病是2型糖尿病。依照另一个优选的实施方案，用胰岛素治疗2型糖尿病。
[0536]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有大于或等于8.5%的血糖化血红蛋白浓度。
[0537]依照另一个优选的实施方案，所述受试者在乙肝和丙肝表面抗原方面呈阴性的。
[0538]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有大于350mg/dL的血液三酰甘油浓度。
[0539]依照另一个优选的实 施方案，所述受试者具有每立方mm血液少于1500个嗜中性粒细胞。
[0540]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有每立方mm血液少于100，000个血小板。
[0541]依照另一个优选的实施方案，所述受试者为女性。
[0542]依照另一个优选的实施方案，所述受试者没有怀孕。
[0543]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有高于正常下限且低于正常上限的血液促甲状腺激素浓度。
[0544]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于正常上限1.4倍的血清肌酸。
[0545]依照另一个优选的实施方案，所述受试者为男性。
[0546]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于正常上限1.5倍的血清肌酸。
[0547]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于正常上限2倍的天冬氨酸转氨酶量。
[0548]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于正常上限2倍的丙氨酸转氨酶量。
[0549]依照另一个优选的实施方案,所述抗体或抗原结合片段以约5mg至约500mg范围内的剂量量施用。
[0550]依照另一个优选的实施方案,所述抗体或抗原结合片段以约50mg至约300mg范围内的剂量量施用。
[0551]依照另一个优选的实施方案，所述抗体每4周以200和300mg之间施用。
[0552]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段以约150mg的剂量量施用。
[0553]依照另一个优选的实施方案，每隔一周(E2W)对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0554]依照另一个优选的实施方案，每4周(E4W)对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0555]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链⑶R。
[0556]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
[0557]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段与包含如SEQ IDNO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或抗原结合片段竞争对hPCSK9的结合。
[0558]依照另一个优选的实施方案，皮下施用所述抗体。
[0559]依照另一个优选的实施方案，在腹部中施用所述抗体。
[0560]依照另一个优选的实施方案，对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0561]依照另一个优选的实施方案,所述HMG-CoA还原酶抑制剂以约0.05mg至IOOmg范围中的剂量量施用。
[0562]依照另一个优选的实施方案，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。
[0563]依照另一个优选的实施方案，所述他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
[0564]依照另一个优选的实施方案,他汀是以IOmg或80mg剂量施用的阿托伐他汀。
[0565]依照另一个优选的实施方案，在8周时段中以每日约IOmg和一日80mg施用阿托伐他汀。
[0566]在第37方面，本发明关注降低有此需要的受试者中的胆固醇水平的方法，包括:
[0567](a)选择具有大于100mg/dL的血液低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的受试者；并
[0568](b)对所述受试者施用包含特异性结合人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9(hPCSK9)的抗体或其抗原结合片段的组合物；由此降低有此需要的受试者中的胆固醇水平。
[0569]依照第37方面的一个优选的实施方案，所述疾病或状况选自下组:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍和动脉粥样硬化。
[0570]依照另一个优选的实施方案，所述疾病或状况是原发性高胆固醇血症或家族性高胆固醇血症。
[0571]依照另一个优选的实施方案，所述疾病或状况是不受他汀类控制的高胆固醇血症。
[0572]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于18kg/m2或大于40kg/m2的体重指数(BMI)。
[0573]依照另一个优选的实施方案，先前没有教导受试者食用胆固醇降低饮食。
[0574]依照另一个优选的实施方案，所述受试者先前尚未服用除阿托伐他汀外的胆固醇降低药物。[0575]依照另一个优选的实施方案，以每天约IOmg施用阿托伐他汀。
[0576]依照另一个优选的实施方案，胆固醇降低药物选自下组:贝特类、胆汁酸树脂、烟酸、肠胆固醇吸收(ICA)阻断剂和Ω-3脂肪酸。
[0577]依照另一个优选的实施方案，以每天大于500mg施用烟酸。
[0578]依照另一个优选的实施方案，以每天大于1000mg施用Ω -3脂肪酸。
[0579]依照另一个优选的实施方案，所述受试者没有患有糖尿病。
[0580]依照另一个优选的实施方案，所述糖尿病是I型糖尿病。
[0581]依照另一个优选的实施方案，所述糖尿病是2型糖尿病。
[0582]依照另一个优选的实施方案，用胰岛素治疗2型糖尿病。
[0583]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有大于或等于8.5%的血糖化血红蛋白浓度。
[0584]依照另一个优选的实施方案，所述受试者在乙肝和丙肝表面抗原方面呈阴性。
[0585]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有大于350mg/dL的血液三酰甘油浓度。
[0586]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有每立方mm血液少于1500个嗜中性粒细胞。
`[0587]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有每立方mm血液少于100，000个血小板。
[0588]依照另一个优选的实施方案，所述受试者为女性。
[0589]依照另一个优选的实施方案，所述受试者没有怀孕。
[0590]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有高于正常下限且低于正常上限的血液促甲状腺激素浓度。
[0591]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于正常上限1.4倍的血清肌酸。
[0592]依照另一个优选的实施方案，所述受试者为男性。
[0593]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于正常上限1.5倍的血清肌酸。
[0594]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于正常上限2倍的天冬氨酸转氨酶量。
[0595]依照另一个优选的实施方案，所述受试者具有小于正常上限2倍的丙氨酸转氨酶量。
[0596]依照另一个优选的实施方案,所述抗体或抗原结合片段以约5mg至约500mg范围内的剂量量施用。
[0597]依照另一个优选的实施方案,所述抗体或抗原结合片段以约50mg至约300mg范围内的剂量量施用。
[0598]依照另一个优选的实施方案，所述抗体每4周以200和300mg之间施用。
[0599]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段以约150mg的剂量量施用。
[0600]依照另一个优选的实施方案，每隔一周(E2W)对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0601]依照另一个优选的实施方案，每4周(E4W)对受试者施用所述抗体或其抗原结合片段。
[0602]依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链CDR。依照另一个优选的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对。依照另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段与包含如SEQ ID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或抗原结合片段竞争对hPCSK9的结合。依照另一个优选的实施方案，皮下施用所述抗体。依照另一个优选的实施方案，在腹部中施用所述抗体。
[0603]依照另一个优选的实施方案，所述方法进一步包括对受试者施用HMG-CoA还原酶抑制剂。依照另一个优选的实施方案，以约0.05mg至IOOmg范围中的剂量量施用所述HMG-CoA还原酶抑制剂。依照另一个优选的实施方案，所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。依照另一个优选的实施方案，所述他汀选自下组:西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。依照另一个优选的实施方案，所述他汀是以10mg、20mg、40mg或80mg的剂量施用的阿托伐他汀。依照另一个优选的实施方案，在8周时段中以每日约IOmg和一日80mg施用阿托伐他汀。
[0604]可以将本发明的几方面彼此组合。例如，可以组合依照第I方面的用于治疗疾病或状况的方法和依照第13方面的用于治疗疾病或状况的方法。由于此组合，本发明涉及一种用于治疗疾病或状况的方法，其特征在于通过某些剂量方案来治疗某些组的受试者。以类似的方式，可以将依照第2方面的用于治疗疾病或状况的抗体或抗原结合片段与依照第15方面的用于治疗疾病或状况的抗体或抗原结合片段组合。由于此组合，本发明涉及抗体或其抗原结合片段，用于通过某些剂量方案治疗某些组的受试者。
[0605]依照另一个例子，可以组合依照第I方面的用于治疗疾病或状况的方法和依照第14方面的用于治疗疾病或状况的方法。由于此组合，本发明涉及一种用于治疗疾病或状况的方法，其从通过某种剂量方案的治疗排除某些组的受试者。以类似的方式，可以将依照第2方面的用于治疗疾病或 状况的抗体或抗原结合片段与依照第16方面的用于治疗疾病或状况的抗体或抗原结合片段组合。由于此组合，本发明涉及抗体或其抗原结合片段，用于通过某种剂量方案的治疗，其中从治疗中排除某些组的受试者。
[0606]熟练技术人员会认可本发明不同方面和实施方案的适当组合产生的其它优选的实施方案。
[0607]如本文中描述的本发明药学用途还涉及给定的抗体或其抗原结合片段、给定的药物组合物等用于制备供治疗一或多种如本文中描述的疾病或状况的药物的用途。
[0608]用于实践本发明的优选抗体
[0609]以下部分描述了可用于实践本发明所有21个方面的抗体及其抗原结合片段的功能和结构特征。如此，表述如“在优选的实施方案中”、“在一些实施方案中”、“在另一个优选的实施方案中”和类似的表述应理解为指本发明第I方面、本发明第2方面、本发明第3方面、本发明第4方面、本发明第5方面、本发明第6方面、本发明第7方面、本发明第8方面、本发明第9方面、本发明第10方面、本发明第11方面、本发明第12方面、本发明第13方面、本发明第14方面、本发明第15方面、本发明第16方面、本发明第17方面、本发明第18方面、本发明第19方面、本发明第20方面、本发明第21方面、本发明第22方面、本发明第23方面、本发明第24方面、本发明第25方面、本发明第26方面、本发明第27方面、本发明第28方面、本发明第29方面、本发明第30方面、本发明第31方面、本发明第32方面、本发明第33方面、本发明第34方面、本发明第35方面、本发明第36方面、本发明第37方面的实施方案。
[0610]所有适合于实践本发明的抗体或其抗原结合片段均特异性结合hPCSK9。在本发明任何方面的优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是重组人抗体或其片段。在更具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是特异性结合hPCSK9并中和PCSK9活性的完全人单克隆抗体或其抗原结合片段。
[0611]可用于本发明的单抗可以是全长(例如IgGl或IgG4抗体)或可以仅包含抗原结合部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段)，并且可以修饰为影响功能性，例如消除残余效应器功能(Reddy 等(2000) J.1mmunol.164:1925-1933)。
[0612]在优选的实施方案中，本发明的抗体对受试者(优选人或非人哺乳动物且更优选为人)施用后以下列一项或多项特征为特征:
[0613]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)水平相对于给药前水平降低至少约_25%至约-40%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-25%，更优选至少-30%，特别在每两周施用方案(每隔一周，E2W)中以约40至约60mg，优选约45至约55mg且更优选约50mg的剂量施用时；
[0614]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-65%及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_40%，更优选至少_45%，特别是在以约IOOmg E2W的剂量施用时；
[0615]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_60%至至少约-75%[例如至少约_60%、至少约-65%、至少约-70%或至少约-75%]及在至少14天的时段里持续降低，其中所述持续降低优 选为相对于给药前水平至少_55%，更优选至少_60%，特别是在以约150mg E2W的剂量施用时，
[0616]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约40%至约75%及在至少28天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少-35%，更优选至少_40%，特别是在以约200mg E4W的剂量施用时；
[0617]-低密度脂蛋白-C(LDL-C)相对于给药前水平降低至少约_50%至约-75%及在至少28天的时段里持续降低，其中所述持续降低优选为相对于给药前水平至少_40%，更优选至少_45%，特别是在以约300mg E4W的剂量施用时；
[0618]-血清HDL胆固醇水平相对于给药前水平升高至少2%、至少2.5%、至少3%、至少
3.5%、至少4%、至少4.5%、至少5%或至少5.5%，特别是在以约150mgE2W的剂量施用时；
[0619]-对肌钙蛋白水平很少或没有可检测的影响；
[0620]-下列一项或多项升高:总胆固醇水平、ApoB水平、非HDL-C水平、Apo_B/ApoA_l比率。
[0621]优选地，如果与HMG-CoA还原酶抑制剂治疗组合施用，那么依照本发明的抗体展现出上述特性。可以贯穿本说明书找到要与本发明的抗体及其剂量和施用方案一起使用的HMG-CoA还原酶抑制剂的优选实施方案，特别是如在涉及医学用途和治疗方法的方面中所描述的。
[0622]依照本发明抗体及其抗原结合片段的另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段具有下列一项或多项特征:
[0623]-所述抗体或抗原结合片段包含如SEQID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链⑶R。
[0624]-所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
[0625]-所述抗体或其抗原结合片段与包含如SEQID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的抗体或抗原结合片段竞争对hPCSK9的结合。
[0626]依照本发明抗体及其抗原结合片段的另一个优选的实施方案，所述抗体或其抗原结合片段具有下列一项或多项特征:
[0627]-克服哺乳动物，尤其是啮齿类如仓鼠中的他汀抗性
[0628]-哺乳动物，尤其是啮齿类如仓鼠中的LDLR表达升高
[0629]-降低啮齿类如仓鼠中的血清LDL-C
[0630]-与HMG-CoA还原酶抑制剂施用一起的LDL-C协同降低，特别是在啮齿类如仓鼠中，其中HMG-CoA还原酶抑制剂优选是阿托伐他汀。
[0631]在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以下列一项或多项为特征:
[0632](i)能够将血清总胆固醇相对于给药前水平降低至少约25%至约35%并在至少24天的时段里持续降低，优选地血清总胆固醇的降低为至少约30%-40% ；
`[0633](ii)能够将血清LDL胆固醇相对于给药前水平降低至少约65-80%并在至少24天的时段里持续降低；
[0634](iii)能够将血清三酰甘油相对于给药前水平降低至少约25-40% ;
[0635](iv)在相对于给药前水平没有降低血清HDL胆固醇或将血清HDL胆固醇降低不超过5%的情况下实现(i)-(iii)中一项或多项；
[0636](V)在根据ALT和AST测量的测定对肝功能很少或没有可测量影响的情况下实现(i)-(iii)中一项或多项。
[0637]在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以下列一项或多项为特征:
[0638](i)能够将血清LDL胆固醇相对于给药前水平降低至少约40-70%并在至少60或90天的时段里持续降低；
[0639](ii)能够将血清三酰甘油相对于给药前水平降低至少约25-40% ;
[0640](iii)相对于给药前水平，不降低血清HDL胆固醇或将血清HDL胆固醇降低不超过5%
[0641]在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的特征在于结合包含hPCSK9(SEQID NO:755)的第238位氨基酸残基的表位。在一个更具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合包含hPCSK9(SEQ ID NO:755)的第238、153、159和343位的一个或多个氨基酸残基的表位。在一个更具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的特征在于结合不包含SEQ ID NO:755的第192、194、197和/或237位氨基酸残基的表位。
[0642]在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的特征在于结合包含hPCSK9(SEQID NO:755)的第366位氨基酸残基的表位。在一个更具体的实施方案中，所述抗体或抗原结合片段结合包含hPCSK9 (SEQ ID NO:755)的第147、366和380位的一个或多个氨基酸残基的表位。在一个更具体的实施方案中，所述抗体或抗体的抗原结合片段的特征在于结合不包含SEQ ID NO:755的第215或238位氨基酸残基的表位。
[0643]在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含选自下组的重链可变区(HCVR):SEQ ID NO:2，18，22，26，42，46，50，66，70，74，90，94，98，114，118，122，138，142，146，162，166，170，186，190，194，210，214，218，234，238，242，258，262，266，282，286，290，306，310，314，330，334，338，354，358，362，378，382，386，402，406，410，426，430，434，450，454，458，474，478，482，498，502，506，522，526，530，546，550，554，570，574，578，594，598，602，6 18，622，626，642，646，650，666，670，674，690，694，698，714，718，722，738 和 742，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。在一个实施方案中，HCVR 包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO: 50，66，70，74，90，94，122，138，142，218，234，238，242，258，262，314，330 和 334。在一个更具体的实施方案中，HCVR 包含 SEQ IDNO:90 或 218。
[0644]在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含选自下组的轻链可变区(LCVR):SEQ ID NO: 10，20，24，34，44，48，58，68，72，82，92，96，106，116，120，130，140，144，154，164，168，178，188，192，202，212，216，226，236，240，250，260，264，274，284，288，298，308，312，322，332，336，346，356，360，370，380，384，394，404，408，418，428，432，442，452，456，466，476，480，490，500，504，514，524，528，538，548，552，562，572，576，586，596，600，610，620，624，634，644，648，658，668，672，682，692，696，706，716，720，730，740 和 744，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。在一个实施方案中，LCVR包含选自下组的氨基酸序列:SEQ ID NO: 58，68，72，82，92，96，130，140，144，226，236，240，250，260，264，322，332 和 336。在一个更具体的实施方案中，LCVR 包含 SEQID NO:92 或 226。
[0645]在具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含选自下组的HCVR和LCVR(HCVR/LCVR)序列对:SEQ ID NO:2/10，18/20，22/24，26/34，42/44，46/48，50/58，66/68，70/72，74/82，90/92，94/96，98/106，114/116，118/120，122/130，138/140，142/144，146/154，162/164，166/168，170/178，186/188，190/192，194/202，210/212，214/216，218/226，234/236，238/240，242/250，258/260，262/264，266/274，282/284，286/288，290/298，306/308，310/312,314/322，330/332,334/336，338/346，354/356，358/360, 362/370, 378/380, 382/384，386/394，402/404，406/408，410/418，426/428，430/432，434/442，450/452，454/456，458/466，474/476，478/480，482/490，498/500，502/504，506/514，522/524，526/528，530/538，546/548，550/552，554/562，570/572，574/576，578/586，594/596，598/600, 602/610，618/620，622/624，626/634，642/644，646/648，650/658，666/668，670/672，674/682，690/692，694/696，698/706，714/716，718/720，722/730，738/740 和 742/744。在一个实施方案中，HCVR 和 LCVR 序列对包含 SEQ ID NO:50/58, 66/68，70/72，74/82，90/92，94/96，122/130，138/140，142/144，218/226，234/236，238/240，242/250，258/260，262/264，314/322，330/332和334/336之一。在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:90中显示的HCVR氨基酸序列和如SEQ ID NO: 92中显示的LCVR氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:218中显示的HCVR氨基酸序列和如SEQ ID NO: 226中显示的LCVR氨基酸序列。
[0646]在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含选自下组的重链CDR3 (HCDR3)域:SEQ ID NO: 8，32，56，80，104，128，152，176，200，224，248，272，296，320，344，368，392，416，440，464，488，512，536，560，584，608，632，656，680，704 和 728，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列；以及选自下组的轻链 CDR3 (LCDR3)域:SEQ ID NO: 16，40，64，88，112，136，160，184，208，232，256，280，304，328，352，376，400，424，448，472，496，520，544，568，592，616，640，664，688，712 和 736，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。在一个实施方案中，所述 HCDR3/LCDR3 序列对选自下组:SEQ ID NO:56/64, 80/88, 128/136, 224/232，248/256和320/328。在更优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQID N0:80中显示的HCDR3域和如SEQ ID NO:88中显示的IXDR3域。在另一个优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:224中显示的HCDR3域和如SEQ IDNO:232中显示的LCDR3域。
[0647]在别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含选自下组的重链CDRl (HCDRl)域:SEQ ID NO: 4，28，52，76，100，124，148，172，196，220，244，268，292，316，340，364，388，412，436，460，484，508，532，556，580，604，628，652，676，700 和 724，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列；选自下组的重链CDR2 (HCDR2)域:SEQ ID NO: 6，30，54，78，102，126，150，174，198，222，246，270，294，318，342，366，390，414，438，462，486，510，534，558，582，606，630，654，678，702 和 726，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列；选自下组的轻链CDRl (LCDRl)域:SEQ ID NO: 12，36，60，84，108，132，156，180，204，228，252，276，300，324，348，372，396，420，444，468，492，516，540，564，588，612，636，660，684，708 和 732，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列；以及选自下组的轻链CDR2(LCDR2)域:SEQ ID NO: 14，38，62，86，110，134，158，182，206，230，254，278，302，326，350，374，398，422，446，470，494，518，542，566，590，614，638，662，686，710 和 734，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列。在一个实施方案中，所述重链和轻链⑶R序列包含选自下组的序列=SEQ ID NO:52, 54，56，60，62，64 ；76，78，80，84，86，88 ; 124，126，128，132，134，136 ;220，222，224，228，230，232 ；244，246，248，252，254，256 ;和 316，318，320，324，326，328。在更具体的实施方案中，所述CDR 序列包含 SEQ ID NO: 76，78，80，84，86，88 ;或 220，222，224，228，230，232。在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:76，78，80，84，86和88中显示的重链和轻链CDR氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO: 220，222，224，228，230和232中显示的重链和轻链CDR氨基酸序列。
[0648]在一个相关的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含选自下组的重链和轻链序列对内含有的重链和轻链CDR域:SEQ ID NO:2/10, 18/20, 22/24，26/34，42/44，46/48，50/58，66/68，70/72，74/82，90/92，94/96，98/106，114/116，118/120，122/130，138/140，142/144，146/154，162/164，166/168，170/178，186/188，190/192，194/202，210/212，214/216，218/226，234/236，238/240，242/250，258/260，262/264，266/274，282/284，286/288，290/298，306/308, 310/312, 314/322，330/332, 334/336，338/346，354/356，358/360, 362/370，378/380，382/384，386/394，402/404，406/408，410/418，426/428，430/432，434/442，450/452，454/456，458/466，474/476，478/480，482/490，498/500，502/504，506/514，522/524，526/528，530/538，546/548，550/552，554/562，570/572，574/576，578/586，594/596，598/600，602/610，618/620，622/624，626/634，642/644，646/648，650/658，666/668，670/672，674/682，690/692，694/696，698/706，714/716，718/720，722/730，738/740 和 742/744。在一个实施方案中，⑶R序列包含于选自下列氨基酸序列对的HCVR和LCVR内:SEQ ID NO:50/58, 66/68，70/72，74/82，90/92，94/96，122/130，138/140，142/144，218/226，234/236，238/240，242/250, 258/260, 262/264，314/322，330/332 和 334/336。在更具体的实施方案中，CDR 序列包含在选自SEQ ID NO:90/92或218/226的HCVR/LCVR序列内。在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID N0:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链CDR。在另一个优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ IDNO: 218/226中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链CDR。
[0649]在一个具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:90或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的重链可变区(HCVR)。
[0650]在一个具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含SEQ Id N092或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的轻链可变区(LCVR)。
[0651]在具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID N0:90中显示的HCVR氨基酸序列和如SEQ ID NO: 92中显示的LCVR氨基酸序列。
[0652]在具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:80或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的重链⑶R3 (HCDR3)域；和/或SEQ ID NO: 88或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的轻链⑶R3 0XDR3)域。在一个实施方案中，所述HCDR3/IXDR3序列对是SEQ ID N0:80/88 。在更优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ IDNO:80中显示的HCDR3域和如SEQ ID NO:88中显示的LCDR3域。
[0653]在别的具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含SEQ ID NO:76或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的重链CDRl (HCDRl)域；和/或SEQ ID NO: 78或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的重链⑶R2(HCDR2)域；和/或SEQ ID N0:84或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的轻链⑶Rl (IXDRl)域；和/或SEQ ID NO: 86或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相似的序列的轻链CDR2(LCDR2)域。在一个实施方案中，所述重链和轻链CDR序列包含选自下组的序列:SEQ ID NO:76，78，80，84，86，88。在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO: 76，78，80，84，86和88中显示的重链和轻链CDR氨基酸序列。
[0654]在另一个具体的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:90/92的重链和轻链序列对内含有的重链和轻链CDR域。
[0655]一个特别优选的实施方案关注包含HCVR/LCVR序列SEQ ID NO:90/92和/或CDR序列SEQ ID N0:76，78，80和/或CDR序列SEQ ID NO: 84，86，88的抗体。另一个特别优选的实施方案关注包含HCVR/LCVR序列SEQ ID NO: 90/92和CDR序列SEQ ID NO:76, 78, 80以及 CDR 序列 SEQ ID NO:84，86，88 的抗体(“316P”)。
[0656]在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含由选自下组的核酸序列编码的HCVR:SEQ ID NO:1, 17，21，25，41，45，49，65，69，73，89，93，97，113，117，121，137，141，145，161，165，169，185，189，193，209，213，217，233，237，241，257，261，265，281，285，289，305，309，313，329，333，337，353，357，361，377，381，385，401, 405, 409, 425，429，433，449, 453，457，473，477, 481, 497, 501，505，521，525，529，545，549，553，569，573，577，593，597，601，617，621，625，641，645，649，665，669，673，689，693，697，713，717，721，737 和 741，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列。在一个实施方案中，HCVR 由选自下组的核酸序列编码:SEQ ID NO: 49，65，69，73，89，93，121，137，141, 217，233，237，241，257，261，313，329和333。在更具体的实施方案中，HCVR由选自下组的核酸序列编码:SEQ ID NO:89和217 。
[0657]在一个实施方案中，抗体或其片段进一步包含由选自下组的核酸序列编码的LCVR:SEQ ID NO:9, 19，23，33，43，47, 57，67，71，81，91，95，105，115，119，129，139，143，153，163，167，177，187，191，201，211，215，225，235，239，249，259，263，273，283，287，297，307，311，321，331，335，345，355，359，369，379，383，393，403, 407, 417，427，431，441, 451，455，465，475，479，489，499，503, 513，523，527，537，547，551，561，571，575，585，595，599，609, 619，623，633，643，647，657，667，671，681，691，695，705，715，719，729，739 和 743，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列。在一个实施方案中，LCVR 由选自下组的核酸序列编码:SEQ ID NO: 57，67，71，81，91，95，129，139，143, 225，235，239，249，259，263，321，331和335。在更具体的实施方案中，LCVR由选自下组的核酸序列编码:SEQ ID NO:91和225。
[0658]在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含由选自下组的核苷酸序列编码的 HCDR3 域:SEQ ID NO:7，31，55，79，103，127，151，175，199，223，247，271，295，319，343，367，391，415，439，463，487，511，535，559，583，607，631，655，679，703 和 727，或具有至少90%,至少95%,至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列；以及由选自下组的核苷酸序列编码的 LCDR3 域:SEQ ID NO: 15，39，63，87，111，135，159，183，207，231，255，279，303，327，351，375，399，423，447，471，495，519，543，567，591，615，639，663，687，711 和735，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列。在一个实施方案中，HCDR3 和 LCDR3 包含分别由 SEQ ID NO: 55/63，79/87，127/135, 223/231, 247/255和319/327的核酸序列编码的序列对。在更具体的实施方案中，HCDR3和IXDR3包含由SEQ ID NO:79/87和223/231的核酸序列编码的序列对。
[0659]在别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含由选自下组的核苷酸序列编码的HCDRl 域:SEQ ID NO: 3，27，51，75，99，123，147，171，195，219，243，267，291，315，339，363，387，411，435，459，483，507，531，555，579，603，627，651，675，699 和 723，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列；由选自下组的核苷酸序列编码的 HCDR2 域:SEQ ID NO:5，29，53，77，101，125，149，173，197，221，245，269，293，317，341，365，389，413，437，461，485，509, 533，557，581，605, 629，653，677，701 和725，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列；由选自下组的核苷酸序列编码的LCDRl域:SEQ ID NO: 11, 35, 59,83, 107，131，155，179,203，227，251，275，299，323，347，371，395，419，443，467，491，515，539，563，587，611，635，659，683，707和731，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列;以及由选自下组的核苷酸序列编码的LCDR2域:SEQ ID NO: 13，37，61，85，109，133，157，181，205，229，253，277，301，325，349，373，397，421，445，469，493，517，541，565，589，613，637，661，685，709和733，或具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的其基本上相同的序列。在一个实施方案中，所述重链和轻链CDR序列由下列核酸序列编码:SEQ ID NO:51, 53，55，59，61，63 ；75, 77，79，83，85，87 ；123, 125，127，131，133，135 ；219，221，223，227，229，231 ；243, 245，247，251，253，255;和 315，317，319，323，325，327。在更具体的实施方案中，所述重链和轻链CDR序列由SEQ ID NO: 75，77，79，83，85，87和219，221，223，227，229，231 的核酸序列编码。
[0660]在别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含HCDR3和IXDR3，其中HCDR3包含式 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-Xic1-Xi1-Xi2-Xi3-Xi4-X15-X16-X17-X18-X19-XW 的氨基酸序列(SEQ ID NO: 747)，其中 X1 是 Ala，X2 是 Arg 或 Lys，X3 是 Asp，X4 是 Ser 或 lie，X5 是 Asn 或Val，X6 是 Leu 或 Trp，X7 是 Gly 或 Met, X8 是 Asn 或 Val，X9 是 Phe 或 Tyr，X10 是 Asp, X11 是Leu或Met，X12是Asp或缺乏，X13是Tyr或缺乏，X14是Tyr或缺乏，X15是Tyr或缺乏，X16是Tyr或缺乏，X17是Gly或缺乏，X18是Met或缺乏，X19是Asp或缺乏，且X2ci是Val或缺乏；并且 LCDR3 包含式 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 的氨基酸序列(SEQ ID NO: 750)，其中 X1 是 Gln或 Met, X2 是 Gin, X3 是 Tyr 或 Thr, X4 是 Tyr 或 Leu, X5 是 Thr 或 Gin, X6 是 Thr, X7 是 Pro,X8 是 Tyr 或 Leu,且 X9 是 Thr0
[0661]在别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8 的 HCDRl 序列(SEQ ID NO:745)，其中 X1 是 Gly，X2 是 Phe，X3 是Thr, X4 是 Phe, X5 是 Ser 或 Asn, X6 是 Ser 或 Asn, X7 是 Tyr 或 His,且 X8 是 Ala 或 Trp ;式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8)的 HCDR2 序列(SEQ ID NO: 746，其中 X1 是 lie，X2 是 Ser 或 Asn，X3 是 Gly 或 Gln，X4 是 Asp 或 Ser，X5 是 Gly，X6 是 Ser 或 Gly，X7 是 Thr 或 Glu，且 X8 是 Thr或 Lys ;式 X1-X2-X3-X4-X5-X6`-X7-X8-X9-Xic1-X11-X12 的 LCDRl 序列(SEQ ID NO: 748)，其中 X1 是Gin, X2 是 Ser, X3 是 Val 或 Leu, X4 是 Leu, X5 是 His 或 Tyr, X6 是 Arg 或 Ser, X7 是 Ser 或Asn, X8 是 Asn 或 Gly, X9 是 Asn, X10 是 Arg 或 Asn, X11 是 Asn 或 Tyr,且 X12 是 Phe 或缺乏；以及式 X1-X2-X3 的 LCDR2 序列(SEQ ID NO: 749)，其中 X1 是 Trp 或 Leu，X2 是 Ala 或 Gly，且X3 是 Ser。
[0662]在别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是人抗PCSK9抗体或其抗原结合片段，其包含由自VinD1^P Jh种系序列衍生的核苷酸序列区段编码的重链可变区(HCVR)，和由自Vk和Jk种系序列衍生的核苷酸序列区段编码的轻链可变区(LCVR)，其中所述种系序列为(&)￥11基因区段3-23為基因区段7-27、上基因区段2^基因区段4-1和1基因区段2 ;或(13)￥11基因区段3-7、011基因区段2-8、1基因区段6、￥1?基因区段2-28和Jk基因区段4。
[0663]在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与包含如SEQ IDNO: 76，78，80，84，86 和 88 中显示的或如 SEQ ID NO: 220，222，224，228，230 和 232 中显示的重链和轻链⑶R氨基酸序列的抗体结合hPCSK9上的同一表位。
[0664]在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与包含如SEQ IDNO: 76，78，80，84，86 和 88 中显示的或如 SEQ ID NO: 220，222，224，228，230 和 232 中显示的重链和轻链⑶R氨基酸序列的抗体竞争对hPCSK9的结合。
[0665]本发明涵盖具有经修饰的糖基化模式的抗PCSK9抗体。在一些应用中，除去不想要的糖基化位点的修饰可以是有用的，或例如除去岩藻糖模块以提高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)功能(参见Shield等(2002) JBC277:26733)。在其它应用中，可以进行半乳糖苷化修饰以修饰补体依赖性细胞毒性(CDC)。
[0666]涉及用于实践本发明的优选抗体的一些优选序列:
[0667]SEQ ID NO:76:Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Ala
[0668]SEQ ID NO:78:lie Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr
[0669]SEQ ID NO:80:Ala Lys Asp Ser Asn Trp Gly Asn Phe Asp Leu
[0670]SEQ ID NO:84:Gln Ser Val Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Arg Asn Phe
[0671]SEQ ID NO:86:Trp Ala Ser
[0672]SEQ ID NO:88:Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr
[0673]SEQ ID NO:90:
[0674]
【权利要求】
1.一种用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，其包括: 对有此需要的受试者施用治疗量的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合hPCSK9 (人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/KEXIN型9)， 其中所述有此需要的受试者落入下列一组或多组受试者中: (i)具有至少100mg/dL[至少130mg/dL、至少160mg/dL、至少200mg/dL]的血清LDL胆固醇(LDL-C)水平的受试者； (?)具有小于40mg/dL的血清HDL-C水平的受试者； (iii)具有至少200mg/dL[240mg/dL]的血清胆固醇水平的受试者； (iv)具有至少150mg/dL[至少200mg/dL;至少500mg/dL]的血清三酰甘油水平的受试者，其中在禁食至少8小时后测定所述三酰甘油水平； (V)至少35岁龄[至少40/50/55/60/65/70岁龄]的受试者； (vi)比75岁[65/60/55/50/45/40岁]年纪小的受试者；(vii)具有25[26/27/28/29/30/31/32/33/34/35/36/37/38/39]或更大的 BMI 的受试者; (viii)男性受试者； (ix)女性受试者； (x)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少30mg/dL [40mg/dL ；50mg/dL ；60mg/dL ；70mg/dL]的受试者；或 (xi)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平相对于给药前水平降低至少 20%[30% ；40% ；50% ；60%]的受试者。
2.一种用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况的方法，其包括: 对有此需要的受试者施用治疗量的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合hPCSK9 (人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/KEXIN型9)， 其中所述有此需要的受试者不落入下列一组或多组受试者中: ⑴吸烟者； (ii)70岁龄以上的个体； (iii)患有高血压的个体； (iii)怀孕女性； (iv)试图怀孕的女性； (ν)哺乳的女性； (vi)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体； (vii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体； (viii)饮用过量酒精的个体； (ix)具有肾问题的个体； (x)患有甲状腺机能减退的个体； (xi)患有肌病症的个体； (χ?)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌问题的个体； (xiii)其呼吸有严重问题的个体； (Xiv)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草；或 (xv)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁的个体； (xvi)具有超过40的体重指数(BMI)的个体； (xvii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体； (xviii)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体； (xix)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或 (xx)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体。
3.一种特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/KEXIN型9)的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况， 其中所述抗体或其抗原结合片段施用于至少落入下列一组受试者中的受试者: (i)具有至少100mg/dL [至少 130mg/dL/至少 160mg/dL/至少 200mg/dL]的血清 LDL-C水平的受试者； (?)具有小于40mg/dL的血清HDL-C水平的受试者； (iii)具有至少200mg/dL[240mg`/dL]的血清胆固醇水平的受试者； (iv)具有至少150mg/dL[至少200mg/dL ;至少500mg/dL]的血清三酰甘油水平的受试者，其中在禁食至少8小时后测定所述三酰甘油水平； (ν)至少35岁龄[至少40/50/55/60/65/70岁龄]的受试者； (vi)比75岁[65/60/55/50/45/40岁]年纪小的受试者；(viii)具有25[26/27/28/29/30/31/32/33/34/35/36/37/38/39]或更大的BMI的受试者; (ix)男性受试者； (X)女性受试者； (xi)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平降低至少20mg/dL[30mg/dL ；40mg/dL ；50mg/dL ；60mg/dL ；70mg/dL]的受试者；或 (xii)施用所述抗体或其抗原结合片段导致血清LDL-C水平降低至少10%[20%；30% ；40% ；50% ；60%]的受试者。
4.一种特异性结合hPCSK9(人蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/KEXIN型9)的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况， 其中所述抗体或其抗原结合片段施用于不落入下列一组或多组受试者中的受试者: ⑴吸烟者； (ii)70岁龄以上的个体； (iii)患有高血压的个体； (iv)怀孕女性； (ν)试图怀孕的女性； (vi)哺乳的女性； (vii)患有或曾经患有影响肝的疾病的个体；(viii)在肝功能方面具有任何不明异常血液测试的个体； (ix)饮用过量酒精的个体； (x)具有肾问题的个体； (xi)患有甲状腺机能减退的个体； (xii)患有肌病症的个体； (xiii)在用降脂药物治疗期间遇到先前的肌问题的个体； (xiv)其呼吸有严重问题的个体； (xv)服用下列一种或多种药物的个体:改变免疫系统起作用方式的药物(例如环孢素或抗组胺剂)、抗生素或抗真菌药物(例如红霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、利福平、夫西地酸)、调节脂质水平的药物(例如吉非贝齐、考来替泊)、钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地尔硫卓)、调节心律的药物(地高辛、胺碘酮)、在HIV治疗中使用的蛋白酶抑制剂(例如那非那韦)、华法林、口服避孕药、抗酸药或圣约翰草； (xvi)每日饮用超过0.1L葡萄柚汁的个体； (xvii)具有超过40的体重指数(BMI)的个体； (xviii)具有小于18的体重指数(BMI)的个体； (xix)患有I型糖尿病或2型糖尿病的个体； (xx)乙肝或丙肝呈阳性的个体；或 (xxi)对单克隆抗体治疗剂具有已知敏感性的个体。
5.权利要求1或2的方法或权利要求2或3的抗体，其中用PCSK9拮抗剂缓解、改善、抑制或预防所述PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况。
6.权利要求1至5中任一项的方法或抗体，其中所述PCSK9表达或活性引起影响的疾病或状况选自下组: 高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病。
7.权利要求1至6中任一项的方法或抗体，其中所述有此需要的受试者是指示进行LDL血透的受试者、具有PCSK9激活突变的受试者、患有杂合家族性高胆固醇血症的受试者、患有原发性高胆固醇血症且不受他汀控制的受试者、有形成高胆固醇血症风险的受试者、患有高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化或心血管疾病的受试者。
8.权利要求1至7中任一项的方法或抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段是重组人抗体或其片段。
9.权利要求1至8中任一项的方法或抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段以下列一项或多项为特征: (i)能够将血清总胆固醇相对于给药前水平降低至少约25至约35%并在至少24天的时段里持续降低； (ii)能够将血清LDL胆固醇相对于给药前水平降低至少约65-80%并在至少24天的时段里持续降低； (iii)能够将血清三酰甘油相对于给药前水平降低至少约25-40%； (iv)在相对于给药前水平没有降低血清HDL胆固醇或将血清HDL胆固醇降低不超过5%的情况下实现(i)-(iii)中一项或多项； (ν)在根据ALT和AST测量的测定对肝功能很少或没有可测量影响的情况下实现(i)-(iii)中一项或多项。
10.权利要求1至9中任一项的方法或抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含: -选自下组的重链 CDR3(HCDR3)域:SEQ ID NO:8，32，56，80，104，128，152，176，200，224，248，272，296，320，344，368，392，416，440，464，488，512，536，560，584，608，632，656，680,704和728 ;以及
-选自下组的轻链 CDR3(LCDR3)域:SEQ ID NO: 16，40，64，88，112，136，160，184, 208, 232，256，280，304，328，352，376，400，424，448，472，496，520，544，568，592，616，639，664，688，712 和 736。
11.权利要求1至9中任一项的方法或抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含SEQID NO:90/92中显示的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链CDR。
12.权利要求11的方法或抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO: 76，78，80, 84，86和88中显示的重链和轻链⑶R氨基酸序列。
13.权利要求12的方法或抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含SEQID N0:90中显示的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO: 92中显示的LCVR氨基酸序列。
14.权利要求1至9中任一项的方法或抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含SEQ ID NO:76, 78，80, 84，86和88中显示的重链和轻链CDR氨基酸序列的抗体结合hPCSK9上的相同表位。
15.权利要求1至9中任一项的方法或抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含SEQ ID NO:76, 78，80, 84，86和88中显示的重链和轻链⑶R氨基酸序列的抗体竞争对hPCSK9的结合。
16.权利要求1至15中任一项的方法或抗体，其进一步包括:对所述受试者以介于0.05mg至IOOmg之间的剂量施用治疗量的HMG-CoA还原酶抑制剂。
17.权利要求16的方法或抗体，其中所述HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀。
18.权利要求17的方法或抗体,其中所述他汀选自下组:西立伐他汀(cerivastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)、氟伐他汀(f Iuvastatin)、洛伐他汀(1vastatin)和普伐他汀(pravastatin)。
19.权利要求18的方法或抗体，其中所述他汀是: -以介于0.05mg和2mg之间的每日剂量施用的西立伐他汀； -以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量施用的阿托伐他汀； -以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量施用的辛伐他汀； -以介于0.2mg和IOOmg之间的每日剂量施用的匹伐他汀； -以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量施用的罗苏伐他汀； -以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量施用的氟伐他汀； -以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量施用的洛伐他汀；或 -以介于2mg和IOOmg之间的每日剂量施用的普伐他汀。
20.一种制品，其包含: (a)包装材料；(b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和 (c)包装材料内含有的标签或包装插页，其指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，并且进一步指示可以治疗落入权利要求1中叙述的一组或多组受试者中的受试者。
21.—种制品,其包含: (a)包装材料； (b)特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段；和 (c)包装材料内含有的标签或包装插页，其指示可以对接受用所述抗体或抗原结合片段治疗的患者治疗选自下组的疾病或状况:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，并且进一步指示用所述抗体或其抗原结合片段治疗患者对于属于权利要求2中叙述的一组或多组受试者的患者是禁忌的。
22.依照权利要求20或21的制品，其中所述抗体或抗原结合片段是权利要求3至19中任一项规定的抗体或抗原结合片段。
23.依照权利要求20至22中任一项的制品，其中所述标签或包装插页含有对依照权利要求1、2或5-19中任一项的治疗方法的提述。
24.一种测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，所述方法包括: 用所述抗体或其抗原结合片段治疗`选定的患者群体，其中所述群体中的每位患者均具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平；并 通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后所述患者群体中的LDL-C水平来测定所述抗体或其抗原结合片段的功效，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的； 其中每位患者落入权利要求1中叙述的一组或多组受试者中。
25.一种测试特异性结合hPCSK9的抗体或其抗原结合片段用于治疗选自下组的疾病或状况的功效的方法:高胆固醇血症、高脂血症、血脂障碍、动脉粥样硬化和心血管疾病，所述方法包括: 通过测定施用所述抗体或其抗原结合片段之前和之后患者群体中的LDL-C水平测定已经用于用所述抗体或其抗原结合片段治疗选定患者群体的抗体或其抗原结合片段的功效，其中所述群体中的每位患者具有超过100mg/dL的LDL胆固醇(LDL-C)水平，其中在至少75%的患者群体中LDL-C水平相对于给药前水平降低至少25%指示所述抗体或其抗原结合片段对于治疗所述患者群体中的所述疾病或状况是有效的； 其中每位患者落入权利要求1中叙述的一组或多组受试者中。
26.权利要求25的方法，其中所述群体中的每位患者在用所述抗体或其抗原结合片段治疗前已经通过施用他汀至少6周接受降脂治疗。
27.权利要求24至26中任一项的方法，其中所述抗体或抗原结合片段是权利要求3至19中任一项规定的抗体或抗原结合片段。
28.权利要求24至27中任一项的方法，其中用或已经用依照权利要求1、2或5_19中任一项的治疗方法治疗选定的患者群体。
29.一种用于测试化合物在降低受试者的胆固醇水平中的功效的方法，其包括下列步骤: (a)提供啮齿类动物； (b)对所述啮齿类动物施用特异性结合PCSK9的抗体或其抗原结合片段； (c)对所述啮齿类动物施用测试化合物； (d)在所述啮齿类动物中测定该测试化合物的效果，其中与对照动物的胆固醇水平相比所述啮齿类动物中胆固醇水平的降低指示该测试化合物在降低受试者的胆固醇水平中是有效的，其中所述对照动物来自与所述啮齿类动物相同的物种，并且其中所述对照动物尚未用该测试化合 物攻击。
【文档编号】C07K16/40GK103476796SQ201280015477
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2012年1月27日 优先权日:2011年1月28日
【发明者】C.哈诺廷, L.贝萨克, U.乔哈里 申请人:赛诺菲