一种木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷制备方法及用途
【专利摘要】本发明公开了一种木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷制备方法及用途，属于中药有效成分提取和应用领域。包括提取、水沉、纯化步骤，本发明的方法简单、方便，制备的木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷纯度高，对于治疗脑中风后遗症有较好的疗效。
【专利说明】-种木犀草素-7-0-P -D-葡萄糖醛酸苷制备方法及用途
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及从苦碟子中提取黄酮苷类的方法及用途。
【背景技术】
[0002] 苦碟子味辛、苦，微寒，具有清热解毒，消痈排脓，祛瘀止痛的功效。苦碟子主要成 分为黄酮类、酚酸类、倍半萜内酯类、三萜类物质，药理作用较为广泛：（1)心、脑血管保护 作用；具有增加冠脉流量，降低氧代谢，提高耐缺氧能力，对实验性心肌梗死的治疗作用，增 加脑血流量，改善微循环，收缩血管作用。（2)对血液系统的作用；具有抗血小板聚集，增强 纤维蛋白酶活性，降血脂、活血化瘀、抗动脉粥样硬化作用。（3)镇痛、镇静作用；(4)抗氧 化和清除自由基作用；（5)抗肿瘤作用；(6)抗呼吸道病毒作用；(7)肝脏保护作用；(8) 其他作用。
[0003] 为了分析苦碟子中各成分的药理作用，需要对苦碟子进行提取，进一步研 究各成分单独的药理作用，以便在临床上更精准的应用，目前，还没有发现木犀草 素-7-0-3-D-葡萄糖醛酸苷的提取方法以及在治疗脑中风后遗症方面的文献。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种简单、方便、纯度高的制备木犀草素-7-0-0 -D-葡萄糖醛 酸苷的方法以及木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷的用途。
[0005] 本发明所采用的技术方案是： 木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷制备方法，包括以下步骤： A、 提取：称取苦碟子，向苦碟子中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小时，回流提取两 次，每次2小时，合并提取液，在40-60°C条件下减压浓缩得到生药浓度为0. 8-1. 2g/ml的浓 缩液I ; B、 水沉：向浓缩液I中加入3-6倍量去离子水，4-10°C冷藏，过滤，滤液备用； C、 纯化：将B步骤中所得滤液依次经过大孔吸附树脂I纯化得到浓缩液II、聚酰胺纯 化得到浓缩液III、大孔吸附树脂II纯化得到浓缩液IV、高压制备色谱或中压制备色谱纯化 两次，然后按照色谱峰收集目标化合物，然后减压浓缩、冷冻干燥即得。
[0006] 所述大孔吸附树脂I为HZ820大孔吸附树脂；大孔吸附树脂II为XAD7HP大孔吸附 树脂。
[0007] 作为优选方式所述大孔吸附树脂I纯化步骤如下：按照树脂与生药的质量比为 1:1. 5称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3. 5-4. 0条件下，将滤液上样，上样流速 为2-4BV/h，上样后饱和1小时；再用PH3. 5-4. 0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4-6BV/ h，洗脱用量为4-6BV ;再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6-8BV/h，洗脱用量为6-8BV，收集洗脱 液，在40-60°C条件下减压浓缩得到浓度为0. 2-0. 5g/ml浓缩液II。
[0008] 作为优选方式：所述聚酰胺纯化中，聚酰胺为30-60目，聚酰胺与生药质量比为 1:6,将浓缩液II上样，上样流速为2-4BV/h，上样后饱和lh，先用14-16BV水以流速4-6BV/ h洗脱，再用10-12BV 20%乙醇以流速4-6BV/h洗脱，除去杂质，然后再用14-16BV的70%乙 醇以流速6-8BV/h洗脱，收集洗脱液，在40-60°C条件下减压浓缩得到浓度为0. 9-1. lg/ml 浓缩液III。
[0009] 作为优选方式所述大孔吸附树脂II纯化步骤如下：按照树脂与生药质量比为 2. 03:1称取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液III调PH8. 5-9. 0上样，上样流速为 l-2BV/h，上样后饱和30分钟，再用4-5BV的10%乙醇以流速6-8BV/h洗脱，收集洗脱液，在 40-60°C条件下减压浓缩得到浓度为12-15g/ml浓缩液IV。
[0010] 作为优选方式：所述高压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3,纯化两次，按 照色谱峰收集木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得木 犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷。
[0011] 作为优选方式：所述中压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:6,纯化两次，按 照色谱峰收集木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得木 犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷。
[0012] 木犀草素-7- 0-0 -D-葡萄糖醛酸苷制备方法，包括以下步骤： A、 提取：称取苦碟子，向苦碟子中加10倍量40%乙醇浸泡1-3小时，回流提取两次，每 次2小时，合并提取液，在60°C条件下减压浓缩得到生药浓度为I. 2g/ml的浓缩液I ; B、 水沉：向浓缩液I中加入6倍量去离子水，4°C冷藏，过滤，滤液备用； C、 将B步骤中所得滤液经过大孔吸附树脂I纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1. 5 称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3. 5-4. 0条件下，将滤液上样，上样流速为2BV/ h，上样后饱和1小时；再用PH3. 5的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4BV/h，洗脱用量为6BV ; 再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6BV/h，洗脱用量为8BV，收集洗脱液，在60°C条件下减压浓缩 得到浓度为〇. 2g/ml浓缩液II。
[0013] D、将步骤C中所得浓缩液II通过聚酰胺纯化，聚酰胺为30目，聚酰胺与生药质量 比为1:6,将浓缩液II上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和lh，先用16BV水以流速4BV/h 洗脱，再用12BV 20%乙醇以流速4BV/h洗脱，除去杂质，然后再用16BV的70%乙醇以流速 8BV/h洗脱，收集洗脱液，在60°C条件下减压浓缩得到浓度为0. 9g/ml浓缩液III。
[0014] E、将步骤D中所得浓缩液III通过大孔吸附树脂II，按照树脂与生药质量比为 2. 03:1称取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液III调PH8. 5上样，上样流速为lBV/h， 上样后饱和30分钟，再用4BV的10%乙醇以流速6BV/h洗脱，收集洗脱液，在60°C条件下减 压浓缩得到浓度为15g/ml浓缩液IV。
[0015] F、将步骤E中所得浓缩液IV通过高压制备色谱纯化，高压制备色谱的C18填料与 生药质量比为1:3,纯化两次，按照色谱峰收集木犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷药液，然 后减压浓缩，冷冻干燥，即得木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷。
[0016] 或木犀草素-7- 〇-P-D-葡萄糖醛酸苷制备方法，包括以下步骤:A、提取：称取苦 碟子，向苦碟子中加12倍量40-70%乙醇浸泡2小时，回流提取两次，每次2小时，合并提取 液，在50°C条件下减压浓缩得到生药浓度为I. Og/ml的浓缩液I ; B、 水沉：向浓缩液I中加入4倍量去离子水，6°C冷藏，过滤，滤液备用； C、 将B步骤中所得滤液经过大孔吸附树脂I纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1. 5 称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH4. O条件下，将滤液上样，上样流速为3BV/h，上 样后饱和1小时；再用PH4. O的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为5BV/h，洗脱用量为5BV ;再 用60%乙醇洗脱，洗脱流速7BV/h，洗脱用量为7BV，收集洗脱液，在50°C条件下减压浓缩得 到浓度为〇. 3g/ml浓缩液II。
[0017] D、将步骤C中所得浓缩液II通过聚酰胺纯化，聚酰胺为50目，聚酰胺与生药质量 比为1:6,将浓缩液II上样，上样流速为3BV/h，上样后饱和lh，先用15BV水以流速5BV/h 洗脱，再用IlBV 20%乙醇以流速5BV/h洗脱，除去杂质，然后再用15BV的70%乙醇以流速 7BV/h洗脱，收集洗脱液，在50°C条件下减压浓缩得到浓度为I. Og/ml浓缩液III。
[0018] E、将步骤D中所得浓缩液III通过大孔吸附树脂II，按照树脂与生药质量比为 2. 03:1称取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液III调PH9. 0上样，上样流速为2BV/h， 上样后饱和30分钟，再用5BV的10%乙醇以流速7BV/h洗脱，收集洗脱液，在50°C条件下减 压浓缩得到浓度为13g/ml浓缩液IV。
[0019] F、将步骤E中所得浓缩液IV通过中压制备色谱纯化，中压制备色谱的C18填料与 生药质量比为1:6,纯化两次，按照色谱峰收集木犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷药液，然 后减压浓缩，冷冻干燥，即得木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷。
[0020] 通常将树脂装于圆筒形的树脂柱中，溶液连续地通过，树脂柱内装载树脂的体积 称为床容积（bed volume)，简写为BV，这是树脂柱的基本单位，它工作时的各种物料量都以 BV为单位。例如溶液通过树脂柱的流量速度为2?4BV/h，即每小时通过溶液的体积为树 脂床容积的2?4倍，树脂的处理能力亦常以BV为单位计算。所得的各浓缩液的浓度皆是 生药的浓度。
[0021] 作为优选方式：在制备治疗脑中风后遗症药物中的应用。
[0022] 由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是： 本发明采用的制备方法，操作简单，得到的目标物纯度高在90%以上，用于治疗脑中风 后遗症，效果好。在用本发明的方法之前，目标物的纯度不到90%。
[0023] 为了证明木犀草素-7-0-0-D-葡萄糖醛酸苷对于脑中风后遗症的作用，做了如 下实验： 实验目的 采用三氯化铁制备局灶性脑缺血大鼠模型，尾静脉注射不同剂量的木犀草 素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷，测算大鼠脑梗塞范围，观察其对脑缺血的保护作用。
[0024] 实验材料 I. 1供试品 I. I. 1名称：木犀草素-7-0-0 -D-葡萄糖醛酸苷，供试品号：TN-1210。
[0025] I. 1. 2理化性质：黄色粉末。
[0026] I. 1. 3拟临床适应症：拟开发对脑中风后遗症的治疗作用。
[0027] I. 1. 4拟临床用量：暂无临床推荐用量。
[0028] I. 1. 5含量及规格：本品为苦碟子提取的单体化合物，纯度为98. 07%。
[0029] I. 1. 6来源和批号：石家庄以岭药业股份有限公司，批号：20121022。
[0030] I. 1. 7供试品保管：低温冷藏。
[0031] 阳性药及工具药 尼莫地平注射液，山东方明药业股份有限公司，批号=1202002。
[0032] 精氨酸，上海协和氨基酸有限公司，批号：09021156。
[0033] 盐酸，石家庄市华迪化工工贸有限公司，批号：20100123。
[0034] 三氯化铁，天津市永大化学试剂有限公司，批号：20100131。
[0035] 水合氯醛，天津市大茂化学试剂厂，批号：20090228。
[0036] 红四氮唑（TTC)，国药集团化学试剂有限公司，批号：20120210。
[0037] 甲醛，天津市大茂化学试剂厂，批号：20101109。
[0038] 生理盐水，石家庄四药有限公司，批号：120421405。
[0039] 实验系统 1. 3. 1动物种系：SD大鼠。
[0040] 1. 3. 2 动物级别：SPF 级。
[0041] 1. 3. 3动物性别和数量：75只，雄性。
[0042] 1. 3. 4动物年龄：约4-6周龄。
[0043] L 3. 5 动物体重：180-200g。
[0044] 1. 3. 6动物来源：购于中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所。
[0045] 1. 3. 7动物合格证号及发证单位、接收日期：合格证编号0295390,许可证号SCXK (京）2009-0017,发证单位是中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所，接收日期2012 年11月23日。
[0046] 1. 3. 8饲养条件：大鼠笼养，饲养在河北省中西医结合医药研究院新药评价中心， 光照12小时/天，温度20-25°C，相对湿度40-70%。
[0047] 1. 3. 9检疫过程：新到的动物检疫期5天，在检疫期间观察动物饮水、摄食和健康 状况，以及是否存在疾病和死亡征兆。
[0048] 1. 3. 10饲料：实验动物全价颗粒饲料，由军事医学科学院实验动物中心提供，生 产许可证：SCXK (军）2007-005。
[0049] 1. 3. 11饮水：瓶装普通饮用水，动物自由饮用。每日冲洗水瓶并换水一次。
[0050] 1. 3. 12垫料：购自河北省实验动物中心，隔日更换。
[0051] 1. 3. 13标识：动物识别采用5%苦味酸标记。
[0052] 实验方法 2. 1实验设计依据 2. I. 1采用标准：国家食品药品监督管理局颁布的《药品注册管理办法》，附件1-中 药、天然药物注册分类及申报资料要求。
[0053] 2. 1. 2实验系统选择说明：实验性脑缺血的动物模型有多种，主要分两大类，即局 灶性脑缺血和全脑缺血。但临床上局灶性脑缺血的发生率远高于全脑缺血，单支动脉阻断， 尤其是大脑中动脉阻断造成的脑梗塞与人类缺血性卒中最为类似。因此引起局灶性脑梗 塞的方法，以大脑中动脉阻断尤为常见。FeCl 3局部浸润动脉可使血管内膜剥脱，内膜下组 织暴露，通过Fe3+促发羟自由基的产生，引发脂质过氧化，损伤血管内皮，促使血小板粘附 聚集并发生释放反应，激发凝血过程，导致血管内血栓形成，阻塞血管，引起脑组织缺血、缺 氧，形成局灶性缺血性梗塞灶。本模型成功率高，栓塞位置固定，梗死范围稳定，重复性好， 适合药物的药效学评价。
[0054] 2. 1. 3委托单位提供资料：木犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷，黄色粉末，为苦碟 子提取的单体化合物，纯度为98. 07%，低温冷藏，由石家庄以岭药业股份有限公司提供，批 号：20121022。
[0055] 剂量与分组 木犀草素-7-0-3 -D-葡萄糖醛酸苷剂量设置参考其对心肌缺血的改善作用（2、10、 50mg/kg)，本次实验木犀草素-7-0-0-D-葡萄糖醛酸苷设置低、中、高三个剂量，分别为 2. 5、5、10 mg/kg，尼莫地平剂量为0. 5mg/kg，另设模型对照组，根据以上剂量设置情况，将 75只大鼠按体重随机分为下列5组，每组15只，具体分组和剂量见附表1。
[0056] 给药方法 经尾静脉注射给药。
[0057] 供试品配制和保存 根据尾静脉注射体积为lml/100g，木犀草素-7-0- 3 -D-葡萄糖醛酸苷纯度为98. 07%， 计算高、中、低剂量组的配制浓度，分别是l.〇2、0. 51、0. 225mg/ml，临用前生理盐水稀释至 所需浓度，〇. 22 y m滤膜过滤除菌，每日现用现配。
[0058] 尼莫地平注射液于尾静脉注射前用生理盐水稀释至0. 05mg/ml，每日现用现配。
[0059] 供试品的给予 用一次性注射器抽取药液进行尾静脉注射，体积为lml/lOOg体重，模型组尾静脉给予 同体积的生理盐水，均于大脑中动脉栓塞后IOmin开始给药，连续给药3天。
[0060] 模型制备 实验动物检疫期结束后开始模型制备，以10%水合氯醛腹腔麻醉，侧卧固定，在眼眦和 外耳道中线处剪一小口，暴露颞肌，用止血钳将颞肌夹开，向两侧分开，注意不要损伤面神 经。暴露鳞状骨大部分，然后在颧弓和鳞状骨前联合的前下方约2_钻孔，在手术显微下， 用小号直纹钳开约2mm直径小颅窗，显露大脑中动脉。将吸有50%三氯化铁溶液（lmol/L盐 酸溶液配制，浓盐酸百分浓度36-38%，物质的量浓度为12mol/L，取8. 3-8. 5ml盐酸，加水稀 释到100ml，即为lmol/L) 10 iU滴在小片滤纸上，敷在该段大脑中动脉处，放置30分钟后 中动脉变黑去掉滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合后回笼饲养，室温控制在25°C左 右。
[0061] 观测的指标、时间和内容 末次给药后3h，麻醉动物，断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干后，在冰箱中速冻 15min，取出后行冠状切4刀分为5片。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处，第二刀在视交 叉部位，第三刀在漏斗柄部位，第四刀在漏斗柄与叶尾极之间。迅速将脑片置于TTC染液中 (5ml染液中含4%TTC 1.5ml，IM K2HPO4O. lml，其余加蒸馏水至刻度)，37°C避光温孵20min， 取出后置于4%甲醛液中避光保存24h。正常组织经染色后呈玫瑰红色，梗塞组织呈白色。 将每个脑平面投射到密度均一的铝钼上，小心挖下白色组织并称重，以梗塞组织重量占全 脑重量及手术侧半脑重量的百分比作为梗塞范围（％)，并以手术侧半脑梗塞范围计算各药 物治疗组的抑制率（％)抑制率计算公式如下：
【权利要求】
1. 一种木犀草素-7- ο-β-D-葡萄糖醛酸苷制备方法，其特征在于包括以下步骤： A、 提取：称取苦碟子，向苦碟子中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小时，回流提取两 次，每次2小时，合并提取液，在40-60°C条件下减压浓缩得到生药浓度为0. 8-1. 2g/ml的浓 缩液I ; B、 水沉：向浓缩液I中加入3-6倍量去离子水，4-10°C冷藏，过滤，滤液备用； C、 纯化：将B步骤中所得滤液依次经过大孔吸附树脂I纯化得到浓缩液II、聚酰胺纯 化得到浓缩液III、大孔吸附树脂II纯化得到浓缩液IV、高压制备色谱或中压制备色谱纯化 两次，然后按照色谱峰收集目标化合物，然后减压浓缩、冷冻干燥即得。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述大孔吸附树脂I为HZ820大孔 吸附树脂；所述聚酰胺为30-60目；大孔吸附树脂II为XAD7HP大孔吸附树脂。
3. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂I纯化步 骤如下：按照树脂与生药的质量比为1:1. 5称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在 PH3. 5-4. 0条件下，将滤液上样，上样流速为2-4BV/h，上样后饱和1小时；再用PH3. 5-4. 0 的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4-6BV/h，洗脱用量为4-6BV ;再用60%乙醇洗脱，洗脱 流速6-8BV/h，洗脱用量为6-8BV，收集洗脱液，在40-60°C条件下减压浓缩得到浓度为 0· 2-0. 5g/ml 浓缩液 II。
4. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述聚酰胺纯化步骤如下：聚酰 胺为30-60目，聚酰胺与生药质量比为1:6,将浓缩液II上样，上样流速为2-4BV/h，上样后 饱和lh，先用14-16BV水以流速4-6BV/h洗脱，再用10-12BV 20%乙醇以流速4-6BV/h洗 脱，除去杂质，然后再用14-16BV的70%乙醇以流速6-8BV/h洗脱，收集洗脱液，在40-60°C 条件下减压浓缩得到浓度为〇. 9-1. lg/ml浓缩液III。
5. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂II纯化步骤 如下：按照树脂与生药质量比为2. 03:1称取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液III调 PH8. 5-9. 0上样，上样流速为l-2BV/h，上样后饱和30分钟，再用4-5BV的10%乙醇以流速 6-8BV/h洗脱，收集洗脱液，在40-60°C条件下减压浓缩得到浓度为12-15g/ml浓缩液IV。
6. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述高压制备色谱纯化步骤 如下：高压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3,纯化两次，按照色谱峰收集木犀草 素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得木犀草素-7-0-β -D-葡 萄糖醛酸苷。
7. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述中压制备色谱纯化步骤 如下：中压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:6,纯化两次，按照色谱峰收集木犀草 素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得木犀草素-7-0-β -D-葡 萄糖醛酸苷。
8. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤： Α、提取：称取苦碟子，向苦碟子中加10倍量40%乙醇浸泡1-3小时，回流提取两次，每 次2小时，合并提取液，在60°C条件下减压浓缩得到生药浓度为1. 2g/ml的浓缩液I ; B、 水沉：向浓缩液I中加入6倍量去离子水，4°C冷藏，过滤，滤液备用； C、 将B步骤中所得滤液经过大孔吸附树脂I纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1. 5 称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3. 5-4. 0条件下，将滤液上样，上样流速为2BV/ h，上样后饱和1小时；再用PH3. 5的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4BV/h，洗脱用量为6BV ; 再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6BV/h，洗脱用量为8BV，收集洗脱液，在60°C条件下减压浓缩 得到浓度为〇. 2g/ml浓缩液II ; D、 将步骤C中所得浓缩液II通过聚酰胺纯化，聚酰胺为30目，聚酰胺与生药质量比为 1:6,将浓缩液II上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和lh，先用16BV水以流速4BV/h洗脱， 再用12BV 20%乙醇以流速4BV/h洗脱，除去杂质，然后再用16BV的70%乙醇以流速8BV/h 洗脱，收集洗脱液，在60°C条件下减压浓缩得到浓度为0. 9g/ml浓缩液III ; E、 将步骤D中所得浓缩液III通过大孔吸附树脂II，按照树脂与生药质量比为2. 03:1称 取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液III调PH8. 5上样，上样流速为lBV/h，上样后饱和 30分钟，再用4BV的10%乙醇以流速6BV/h洗脱，收集洗脱液，在60°C条件下减压浓缩得到 浓度为15g/ml浓缩液IV ; F、 将步骤E中所得浓缩液IV通过高压制备色谱纯化，高压制备色谱的C18填料与生药 质量比为1:3,纯化两次，按照色谱峰收集木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减 压浓缩，冷冻干燥，即得木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷。
9. 根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤： Α、提取：称取苦碟子，向苦碟子中加12倍量40-70%乙醇浸泡2小时，回流提取两次，每 次2小时，合并提取液，在50°C条件下减压浓缩得到生药浓度为1. Og/ml的浓缩液I ; B、 水沉：向浓缩液I中加入4倍量去离子水，6°C冷藏，过滤，滤液备用； C、 将B步骤中所得滤液经过大孔吸附树脂I纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1. 5 称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH4. 0条件下，将滤液上样，上样流速为3BV/h，上 样后饱和1小时；再用PH4. 0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为5BV/h，洗脱用量为5BV ;再 用60%乙醇洗脱，洗脱流速7BV/h，洗脱用量为7BV，收集洗脱液，在50°C条件下减压浓缩得 到浓度为〇. 3g/ml浓缩液II ; D、 将步骤C中所得浓缩液II通过聚酰胺纯化，聚酰胺为50目，聚酰胺与生药质量比为 1:6,将浓缩液II上样，上样流速为3BV/h，上样后饱和lh，先用15BV水以流速5BV/h洗脱， 再用11BV 20%乙醇以流速5BV/h洗脱，除去杂质，然后再用15BV的70%乙醇以流速7BV/h 洗脱，收集洗脱液，在50°C条件下减压浓缩得到浓度为1. Og/ml浓缩液III ; E、 将步骤D中所得浓缩液III通过大孔吸附树脂II，按照树脂与生药质量比为2. 03:1称 取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液III调PH9. 0上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和 30分钟，再用5BV的10%乙醇以流速7BV/h洗脱，收集洗脱液，在50°C条件下减压浓缩得到 浓度为13g/ml浓缩液IV ; F、 将步骤E中所得浓缩液IV通过中压制备色谱纯化，中压制备色谱的C18填料与生药 质量比为1:6,纯化两次，按照色谱峰收集木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减 压浓缩，冷冻干燥，即得木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷。
10. 根据权利要求1或2所制备的木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的用途，其特征 在于在制备治疗脑中风后遗症药物中的应用。
【文档编号】C07H1/08GK104277083SQ201310279934
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年7月4日 优先权日:2013年7月4日
【发明者】姜新刚, 赵韶华, 张秋艳, 贾继明, 宋剑 申请人:河北以岭医药研究院有限公司