一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法
【专利摘要】本发明提供了一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，首先将采集到的植物原料叶自然晾干，粉碎、筛分得到叶粉，然后进行二氧化碳超临界萃取，萃取物用硅胶拌样，干法上硅胶柱，梯度洗脱后，通过重结晶得到纯度为99%以上的小白菊内酯单体，本发明采用“超临界萃取-硅胶柱层析-重结晶”提取小白菊内酯单体，具有萃取工艺简单、效率高、有效成分不被破坏、CO2气体可以循环使用、不需要经过复杂繁琐的提取过程等特点，能够实现资源综合利用最大化，工业化生产成本低，具有广泛的应用前景和极大的社会意义和经济价值。
【专利说明】一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物提取【技术领域】，具体涉及小白菊内酯的分步提取方法。
【背景技术】
[0002]香子含笑(学名:Michelia hedyosperma)为木兰科含笑属的一种观赏植物,分布于海南(白沙东南部霸王岭)、广西西南部、云南(西双版纳)。其种子可以作为药用和调味香料。根据中草药化学分析，该属植物中含有抗肿瘤活性成分小白菊内酯。
[0003]恶性肿瘤是严重危害人类健康和生命的重大疾病之一。世界卫生组织(WHO)公布的最新统计资料表明，2008年，全世界癌症新发病例约1270万人，死亡约760万人；我国癌症新发病例约为280万人，死亡约200万。癌症已成为发达国家人口的首要死亡原因和发展中国家人口的第二位死亡原因。根据世界卫生组织下属的国际癌症研究机构预测，到2020年，全球癌症新发病例将达到约1600万，死亡1000万，而在我国的新发病例将上升到约390万，死亡约280万。因此，抗肿瘤研究是当今生命科学研究领域极具挑战且重要的研究领域，研发作用更强、效果更好的抗癌新药已成为迫切的需求。
[0004]天然产物是活性先导化合物和适用药物的重要来源。根据文献报道，在过去20年间，已上市销售的小分子药物中，超过60%是直接来源于天然产物或天然产物的衍生物。而实践证明在上市销售的抗肿瘤药物中超过70%是天然产物或天然产物的类似物，例如:紫杉醇、喜树碱、阿加来比等。我国的中医药学源远流长，博大精深，是中国传统文化的代表，传统文化的瑰宝。因此，从中药中有可能筛选出新型的高效低毒抗癌药物，从而起到延长癌症患者生命和改善生活质量的 作用。
[0005]小白菊内酯(Parthenolide)是菊科植物野甘菊(Tanacetum parthenium)的主要活性成分。野甘菊作为一种传统的草药主要用于治疗发热、偏头痛、关节炎等。研究表明，小白菊内酯具有显著的抗炎活性与抗肿瘤活性，包括肝癌、结肠癌、乳腺癌和白血病等，在小鼠模型上，小白菊内酯还能治疗紫外线诱导的皮肤癌。此外，纽约Rochester大学的Jordan, C.T.博士及其同事发现小白菊内酯能够选择性的消除急性髓细胞白血病祖细胞和导致初期人急性髓细胞白血病细胞的凋亡，从而有望能够彻底的治疗白血病。但是由于小白菊内酯的水溶性很差，所以Jordan, C.T.博士与Kentucky大学的Crooks, P.A.博士合作制备了小白菊内酯的衍生物二甲氨基小白菊延胡索酸盐并将其用于治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)和其他血淋巴肿瘤的一期临床实验。对其作用机理研究发现，小白菊内酯的主要药效基团是拥有环外亚甲基的Y-丁内酯结构单元，该基团可以作为烷基化试剂与生物体内的亲核性物质如蛋白质中的L-半光氨酸残基和含有巯基的酶发生迈克尔反应，使调节肿瘤细胞增长的各种关键酶失去活性，从而达到抑制肿瘤细胞增长的目的。
[0006]因此，小白菊内酯有望成为新型抗肿瘤药物。而开发获取小白菊内酯单体的方法能够为其深入研究提供量的保证。
[0007]
【权利要求】
1.一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)首先将叶片晒干、粉碎、筛分后得到原料； 2)二氧化碳超临界萃取:将装有原料的料筒装入萃取缸中；然后启动二氧化碳循环系统，待萃取缸、分离缸I以及分离缸II的温度和压力达到设定值时，萃取3~5h，所述萃取缸的温度设定为35~45°C，分离缸I的温度设定为50~60°C，分离缸II的温度设定为40~50°C，萃取缸的压力设定为15~20MPa，分离缸I的压力设定为10~15MPa，分离缸II的压力设定为4~8MPa，从分离缸II放料口出料得提取物； 3)取提取物并用硅胶拌样得样品A，拌样后干法上硅胶柱，然后梯度冲洗，并收集含小白菊内酯的流份，除去所述流份中的用于梯度冲洗的洗脱剂得到样品B ； 4)对样品B进行重结晶。
2.根据权利要求1所述一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:所述叶片为香子含笑叶或广玉兰叶。
3.根据权利要求1所述一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:所述原料的粒度为10~30目。
4.根据权利要求1所述一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:每千克原料对应的二氧化碳的质流量为0.5~2kg/h。
5.根据权利要求1所述一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:二氧化碳超临界萃取中使用甲醇作为改性剂，甲醇的用量为萃取缸体积的5~20%。
6.根据权利要求1所述一 种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:原料的装入量为萃取缸体积的10~40%。
7.根据权利要求1所述一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:二氧化碳超临界萃取过程采用分次出料，根据萃取的时间确定出料的时间间隔。
8.根据权利要求1所述一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:提取物与拌样所用硅胶的重量比为1:1~3，样品A与硅胶柱所用硅胶的重量比为1: 6~8。
9.根据权利要求1所述一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:所述洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯系列洗脱剂、正己烷/乙酸乙酯系列洗脱剂或正己烷/乙醚系列洗脱剂。
10.根据权利要求1所述一种从植物原料中提取小白菊内酯的方法，其特征在于:所述重结晶的溶剂采用混合溶剂系统，混合溶剂系统为石油醚/乙酸乙酯混合溶剂系统、正己烷/乙酸乙酯混合溶剂系统或石油醚/二氯甲烷混合溶剂系统。
【文档编号】C07D493/04GK103524520SQ201310441944
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年9月25日 优先权日:2013年9月25日
【发明者】秦向阳, 李涛, 何炜, 刘建强, 李志全, 吕凌云 申请人:中国人民解放军第四军医大学