一种植硫肽的类似物及制备方法
【专利摘要】一种植硫肽的类似物及制备方法，序列为Phs-Ile-Phs-Thr-Gln；其制备方法，包括：(1)树脂Gln-王树脂置于接肽瓶中，浸泡在DMF的溶液里；(2)加入Fmoc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBt进行反应后脱去Fmoc基团；(3)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt进行反应后脱去Fmoc基团；(4)加入Fmoc-Ile-OH、DIC、HOBt进行反应后脱去Fmoc基团；(5)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt进行反应后脱去Fmoc基团；(6)用三氟乙酸／二氯甲烷溶液切割树脂即可。本发明较天然的植硫肽结构更为稳定，并且具备和天然植硫肽同样的生理活性。
【专利说明】一种植硫肽的类似物及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物激素领域，具体为一种植硫肽的类似物及制备方法。
【背景技术】
[0002]在植物悬浮细胞培养中存在密度效应，即培养细胞被稀释到一定程度后很难再继续分裂。即使在补充植物激素和培养基之后也难以提高其有丝分裂的活性，说明悬浮培养体系中存在一种能够被培养细胞感受的密度因子。当把低密度的靶细胞和高密度的滋养细胞一起非接触性共培养，发现低密度的培养细胞可以感受由高密度的培养细胞释放到细胞外的某种细胞分裂的促进因子。经纯化分析后发现这种促进有丝分裂的因子是带有硫基化修饰的5个或4个氨基酸残基的多肽化合物，即硫化酪氨酸-异亮氨酸-硫化酪氨酸-苏氨酸-谷氨酰胺[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr-Gln]和硫化酪氨酸-异亮氨酸_硫化酪氨酸-苏氨酸[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr]被称为植硫肽PSK_a和PSK_b。植硫肽在纳摩尔浓度下就可以刺激细胞增殖，PSK-b的活性只有PSK-a的活性的1/ 10.[0003]植硫肽除了能够促进植物悬浮细胞的增殖以外，还可以在植物的生长发育的许多方面发挥调节作用。例如，植硫肽可以促进黄瓜黄化叶子叶细胞叶绿素的合成，能促进下胚轴形成不定根，刺激悬浮细胞的叶肉细胞向导管细胞的分化，促进密度依赖的体外花粉管的明发等。
[0004]目前植硫肽的来源主要由生物提纯得到，生物提纯得到的植硫肽不但量少，而且纯化分离成本很高，不利于大规模生产和使用。寻求化学的方法合成植硫肽曾有报道用酶法合成(美国科学院院刊，1996，93卷，页7623)，但这种酶不但难以获取，而且存在活性不稳定的缺点。
[0005]植硫肽的结构式为:
[0006]硫化酪氨酸-异亮氨酸-硫化酪氨酸-苏氨酸-谷氨酰胺
[0007][Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr-Gln]植硫肽a和硫化酪氨酸_异亮氨酸_硫化酪氨酸-苏氨酸[Tyr (S03H) -1le-Tyr (S03H) -Thr]植硫肽 b。
[0008]
【权利要求】
1.一种植硫肽的类似物，其特征是，序列为(4-甲磺酸基)苯丙氨酸-异亮氨酸-(4-甲磺酸基)苯丙氨酸-苏氨酸-谷氨酰胺，既Phs-1le-Phs-Thr-Gln,其化学结构式为:
2.根据权利要求1所述的一种植硫肽的类似物，其特征是，所述4-甲磺酸基-苯丙氨酸，其结构式为:
3.—种植硫肽的类似物的制备方法，其特征是，包括以下步骤: (1)将树脂Gln-王树脂置于接肽瓶中，浸泡在DMF的溶液里； (2)加入Fmoc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBt在20-30摄氏度下的摇床中反应35-45分钟，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脱去Fmoc基团； (3)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt在20-30摄氏度下的摇床中反应35-45分钟，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脱去Fmoc基团； (4)加入Fmoc-1le-0H、DIC、H0Bt在20-30摄氏度下的摇床中反应35-45分钟，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脱去Fmoc基团； (5)加入Fmoc-Phs-OH、DIC、HOBt在20-30摄氏度下的摇床中反应35-45分钟，用DMF洗3次,再用piperidine-DMF溶液脱去Fmoc基团；(6)用三氟乙酸/二氯甲烷溶液切割树脂，得到植硫肽类似物Phs-1le-Phs-Thr-Gln。
4.根据权利要求3所述的一种植硫肽的类似物的制备方法，其特征是，所述Gln-王树脂载量为0.4毫摩尔/克。
5.根据权利要求3所述的一种植硫肽的类似物的制备方法，其特征是，所述piperidine-DMF溶液的浓度为20%。
【文档编号】C07K7/06GK103739668SQ201310730784
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年12月18日 优先权日:2013年12月18日
【发明者】邓方坤 申请人:邓方坤