专利名称：新型ifn受体1结合蛋白质,编码它们的dna,以及调节细胞对干扰素的反应的方法
技术领域：
本发明总的来说涉及干扰素作用的细胞机制，具体地说，涉及新型干扰素受体1-结合蛋白质，编码它们的重组DNA，以及调节细胞对干扰素的反应的方法。
背景技术：
I型干扰素(IFN-α和-β亚型)对细胞产生多种效应，例如抑制病毒复制(抗病毒效应)，抑制细胞增值(抗肿瘤效应)和调节免疫细胞活性(免疫调节效应)。干扰素(IFN)的这些多种效应与细胞的形态和生化修饰相关(Revel，1984，综述)。
干扰素通过种类特异性的受体发挥它们的活性。对于I型IFN来说，已鉴定出两种跨膜受体链IFNAR1(Uze等，1990)和IFNAR2-2(或者IFNAR2-c，Domanski等，1995)。由IFN-α，β，ω产生的信号的传导涉及Janus激酶(Jak)家族的蛋白质酪氨酸激酶和Stat家族的转录因子(Darnell等，1994)。Jak-Stat途径的蛋白质通过结合到IFNAR1和IFNAR2受体链的胞质内(IC)区域上而被激活。在结合到IFNAR1 IC区域的蛋白质中有tyk2和Stat2(Abramovich等，1994)。Stat2然后与Stat1结合形成IFN-诱导的ISGF3转录复合体，它激活IFN-诱导的基因(Leung等，1995)。含有Stat3的转录复合体也由IFN-β诱导(Harroch等，1994)并且观察到Stat3与IFNAR1的IFN-依赖性结合(Yang等，1996)。蛋白质-酪氨酸磷酸酶PTP1C和D在加入IFN之后与IFNAR1可逆地结合(David等，1995a)。此外，两个丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶，48kDa的ERK2 MAP激酶(David等，1995b)和cAMP激活的蛋白质激酶A(David等，1996)结合至分离的IFNAR1-IC的膜-附近50个残基上。因而，I型IFN受体IC区域充当多个蛋白质的锚定位点，其作用是产生和调节IFN在细胞上的生物效应。
酵母中的双-杂种筛选对于鉴定与特定的多肽序列结合的新的蛋白质是一种有效的方法(Fields和Song，1989)。简而言之，双-杂种筛选是通过用(a)一种质粒DNA，其中特定的多肽(诱饵)与Gal4转录因子的DNA-结合区域融合，和(b)一种cDNA文库，它与pACT质粒中的Gal4的激活区域融合，来转化酵母细胞而进行的。用编码与多肽诱饵结合的蛋白质的cDNA转化的酵母细胞将重建Gal4活性。这种与多肽诱饵结合的蛋白质的存在通过从优选被导入酵母基因组的lacZ构建体的一种酶活性的表达被显现出来，例如β-半乳糖苷酶。从在这一测试中为阳性的酵母克隆，可能分离出pACT质粒，来确定其插入物的核苷酸序列，并鉴定它编码的蛋白质。通过这一方法已鉴定出了与细胞因子受体的IC区域相互作用的新型蛋白质(Boldin等，1995)。
本文中对文献的引述并不是承认这些文献是相关的现有技术，也不是认为对本申请中的任何一个权利要求有实质性的影响。关于对任何一个文献的内容或日期的引述均基于提交本申请时申请人可以得到的信息，并不构成对这种引述的正确性的承认。
发明概述本发明涉及两种新型的人类蛋白质，本文称作IR1B1和IR1B4，它们已被鉴定为IFN受体1(IFNAR1)结合蛋白质，并涉及编码这两种蛋白质的DNA。IR1B1和IR1B4蛋白质中的每一种与IFNAER1的胞质内(IC)区域相互作用，并介导对干扰素的细胞响应。
本发明涉及含有编码IR1B1或IR1B4蛋白质的核苷酸序列，或其片断，的重组DNA分子，以及它们编码的蛋白质。在该重组DNA分子中，编码IR1B1或IR1B4蛋白质的核苷酸序列，或其片断，是在有意方向上或反义方向上与一种启动子相连。
通过直接将含有与编码一种新型的IFNAR1结合蛋白质在有意方向上可操纵连接的启动子的重组DNA分子施用于肿瘤，可提高肿瘤的治疗中对外源干扰素疗法的响应。
而且，本发明也涉及一种在对病人进行移植前，通过在移植组织中导入含有与编码一种新型的IFNAR1结合蛋白质的核苷酸序列在反义方向上可操纵连接的启动子的重组分子，或其片断，来延长移植组织存活性的方法。
因而，本发明也涉及含有这种DNA，RNA或蛋白质的药物组合物，以及使用它们的治疗方法。
本发明也涉及特异于本发明的新型蛋白质的抗体。
附图简要说明
图1显示由酵母中的双-杂种遗传相互作用分析方法测得的IR1B1与IFNAR1-IC区域的相互作用。在该图的下部方框中，显示了与各种“诱饵”相组合的pACT中的cDNA插入物。
图2显示由酵母中的双-杂种遗传相互作用分析方法测得的IR1B4与IFNAER1-IC区域相互作用。在该图的下部方框中，显示了与各种“诱饵”相组合的pACT中的cDNA插入物。
图3显示IR1B1的核苷酸序列(SEQ ID NO1)和氨基酸序列(SEQ IDNO2)。
图4显示IR1B1的氨基酸序列(SEQ ID NO2)与两种钙结合蛋白质，钙调磷酸酶B(简称CALB；SEQ ID NO3)和钙牵蛋白(简称CATR；SEQ IDNO4)，的氨基酸序列的同源性和线性排列。在IR1B1和CALB或CALB和CATR之间相同的氨基酸由它们之间的符号“”表示。在IR1B1和CATR之间相同，但与CALB不相同时由符号“”表示。由粗体表示的区域为钙结合螺旋-环-螺旋EF-手性区域。
图5显示人骨髓瘤U226S细胞中的IR1B1 mRNA和18S rRNA(较低的一行)与IR1B1 cDNA杂交的Northern印迹以及用INF-α8或者INF-β处理细胞2至18小时后IR1B1的快速和瞬间诱导。第一行是没有INF处理2小时后的对照。
图6A和6B是SDS-PAGE电泳泳道，显示IR1B4与分离的IFNAR1-IC区域(图6A)和与人U266S细胞和U266R细胞膜(图6B)提取物的体外相互作用。在图6A中，具有或没有旗IR1B4体外转录物的[S35]甲硫氨酸-标记的翻译产物被用抗-旗M2珠(泳道1和4)免疫沉淀(10μl)，或与谷胱甘肽珠反应(50μl)，该甘谷胱甘肽珠与融合于100氨基酸的长IFNAR1区域(泳道2和5)的GST偶联，或者仅与GST(泳道3和6)偶联。在4℃过夜温浴(终体积100μl)之后，将珠洗涤，并在SDS-PAGE之前在还原条件下沸煮SDS-洗提的蛋白质。在图6B中，将U266S(泳道1)或者U266R细胞(泳道2)用Brij缓冲液和抗蛋白酶(Abramovich等，1994)抽提，并将0.35ml(107细胞)用75μl的旗-IR1B4转录物的[35S]甲硫氨酸标记的翻译产物在4℃过夜温浴。将固定在蛋白质G珠上的抗-IFNAR1单克隆抗体R3(25μl)加入2.5小时，在Brij缓冲液中洗涤，并用SDS-PAGE分析SDS-洗提的，沸煮的和还原的蛋白质。电泳一个如上所述的用抗-旗M2珠的对照(泳道3)。在一个Phosphor-Imager中观察干燥的胶。在图6A的前三个泳道中，在体外翻译反应中没有加入IR1B4 mRNA。在图6A的下面三个泳道中，编码融合于旗蛋白质的IR1B4蛋白质的mRNA在一个体外系统中被翻译。
图7显示IR1B4的核苷酸序列(SEQ ID NO7)和推测的氨基酸序列(SEQ ID NO8)。
图8显示IR1B4(SEQ ID NO8)和PRMT1(SEQ ID NO9)的氨基酸排列以及它们的差异。
图9显示IR1B4和HCP-1(SEQ ID NO10)的氨基酸排列以及它们的差异。
图10显示一个甲基转移酶测试。将U266S细胞与用蛋白质A和抗-IFNAR1抗体(泳道1)或者仅用蛋白质A(泳道2)涂覆的珠进行反应。甲基转移酶活性是通过将组蛋白用14C(甲基)-S-腺苷基甲硫氨酸标记并分析SDS-PAGE电泳中组蛋白带的放射性进行测量的。
图11显示一个在U266S细胞中蛋白质-精氨酸甲基转移酶活性的测试。在泳道1中，人U266S细胞的蛋白质-精氨酸甲基转移酶活性是通过具有SEQID NO11的序列的肽R1的甲基化测量的。在泳道2中，加入了SEQ ID NO12的反义寡核苷酸，它与IR1B4 cDNA的启始密码子附近的核苷酸12-33的序列互补。在泳道3中，加入了相应的有意寡核苷酸。可以看出，反义寡核苷酸基本上抑制了蛋白质-精氨酸甲基转移酶活性，而对照的有意寡核苷酸具有很小的效果。
图12显示人U266S细胞在图11(AS-1)中使用的反义寡核苷酸，相应的有意寡核苷酸(S-3)，和另一个指向IR1B4 cDNA(AS-2)的中间部分的反义寡核苷酸的存在或不存在下，在响应IFN-β治疗时的生长抑制。细胞密度是通过使用Alamar Blue(见实施例7)的显色测试进行定量的，细胞密度的降低是使用没有处理的对照孔的百分比计算的，并以生长抑制作图。
本发明详细描述本发明涉及两种新型人蛋白质的发现，它们与干扰素1型(IFN-α，β或ω)受体的IFNAR1链的胞质内区域(IC)相互作用，在本文中被称为IFN受体结合蛋白质1(IR1B1)和IFN受体结合蛋白质4(IR1B4)。这两种新型蛋白质与IFNAR1的相互作用用酵母中的双-杂种遗传测试被显示出来，其中，只有当IFNAR1-IC区域(与Gal4 DNA-结合区域融合)被用作诱饵时，用与Gal4激活区域融合的IR1B1或IR1B4 cDNA对酵母报告菌株SFY526(Bartel等，1993)的转化产生β-半乳糖苷酶活性。
IR1B1 cDNA序列编码一种191氨基酸的多肽。序列数据库的计算机检索显示IR1B1是一种新型蛋白质，它显示出与钙结合蛋白质，钙调磷酸酶β和钙牵蛋白具有显著的同源性，例如钙结合位点(E-F把手)。钙调磷酸酶β(Guerini等，1989)是一种丝氨酸/苏氨酸磷酸酶的19kDa亚基，它在激活转录因子NFAT到T-淋巴细胞细胞核的转位起着重要的作用，并且它被免疫抑制药物例如环孢酶素抑制。钙牵蛋白(Lee和Huang，1993)，一种21kDa蛋白质，是一种发现于中心体的细胞骨架相关的蛋白质，在有丝分裂期间参与染色体的运动，并更多地参与微管组织中心。因而，新型的IR1B1蛋白质是钙调蛋白的钙调磷酸酶和钙牵蛋白家族中的一个新的成员。
IR1B1的基因被意外地发现在人细胞中被IFN治疗快速激活。因而，这是第一个被IFN诱导的钙-结合蛋白的例子。由于钙离子调节细胞的形态，粘连和分裂，调节细胞中IR1B1的活性可影响普通和恶性细胞对IFN的响应。IR1B1在介导细胞中IFN的活性中的作用由于IR1B1与IFN受体链的IC-区域的相互作用而得到支持。
虽然IR1B4与IR1B1一样，通过序列数据库的计算机检索被确定为一种新型的蛋白质，但也发现，IR1B4与使用S-腺苷基甲硫氨酸使蛋白质中的精氨酸残基甲基化的酶具有同源性，并被称为蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT1；Kagan和Clarke，1994；Lin等，1996)。发现IR1B4在体外直接与IFNAR1的IC-区域结合，并且通过组蛋白的甲基化证实了PRMT活性与从人细胞中分离出的IFN-α，β受体的组成型联系。当将来自IR1B4的反义寡核苷酸加入人细胞培养物中时，观察到细胞培养物中PRMT活性的丧失。以这种方式处理的人骨髓瘤细胞通过生长抑制测量显示对IFN的响应极大地降低。因而，IR1B4/PRMT参与IFN受体在肿瘤细胞中造成生长抑制的途径中，并且也参与IFN受体的其它功能中。已知的PRMT底物包括一些RNA和DNA结合蛋白质，特别是异源核核糖核蛋白(hnRNP)。这种hnRNP参与mRNA从细胞核到胞质中的转运，前-mRNA的其它剪切，和转录后控制(Liu和Dreyfuss，1995)。因而，由于其与IFN受体相关联而被发现的该新型人类IR1B4/PRMT cDNA和蛋白质，可用来改变人类或动物细胞对IFN的响应。
按照本发明的重组DNA分子含有编码IR1B1和IR1B4蛋白质的核苷酸序列，或其片断，并可被用于通过提高IR1B1或IR1B4的表达提高细胞对IFN的响应，或者通过使用反义RNA分子降低IR1B1或IR1B4的表达来降低细胞对IFN的响应。
IR1B1或IR1B4 cDNA提高的体内表达可用于肿瘤治疗，其中对IFN提高的细胞响应将导致恶性细胞生长的降低并提高对外源IFN治疗的响应。为了提高IR1B1和IR1B4在体内靶位点的表达，从而提高对IFN的细胞响应，可在诸如脑肿瘤或转移肿瘤结(如黑素瘤或乳房癌)的靶位点直接注入含有IR1B1和IR1B4 cDNA的表达载体，该IR1B1和IR1B4与一种强的组成型启动子在有意方向上可操纵连接。
反过来，IR1B1和IR1B4在体内表达的降低可用于延长移植组织的存活，因为这些移植物在宿主体内的排斥是由组织相容性抗原(MHC I型)介导的，其合成依赖于IFN的刺激。当适当的载体上携带的并以反义方向与一种启动子可操纵连接的IR1B1和IR1B4的cDNA或其片断被导入待移植的组织细胞中时，反义RNA的表达导致IR1B1或IR1B4 mRNA(或IR1B1/IR1B4有义RNA)的降解，从而降低细胞中IR1B1或IR1B4蛋白质的水平。
反义RNA是从与在反义方向上定向的编码序列可操纵连接的启动子上游进行翻译的，即与DNA的正常或有义方向及其转录的有义RNA(mRNA)相反。与有义RNA互补的反义RNA的表达是一个调节RNA分子的生物学功能的强有力的方法。通过有义RNA和反义RNA之间形成的稳定的双螺旋，使正常的和有义RNA转录物失去活性并且不能被翻译。
作为本发明实施方案的重组DNA分子含有与一种启动子在有义或反义方向上可操纵连接的IR1B1或IR1B4 cDNA，或其片断。术语“启动子”包括一种可结合RNA聚合酶并启始“可操纵连接”的核酸序列转录的双链DNA或RNA序列。因而，如果启动子能够使DNA序列转录，而不管该DNA序列的定向，则该DNA序列是与该启动子可操纵连接的。
用于控制转录的启动子的类型可以是任何一种在宿主/靶细胞中具有功能的启动子。在哺乳动物细胞中具有功能的启动子的例子包括SV40早期启动子，腺病毒主要晚期启动子，单纯疱疹(HSV)胸苷激酶启动子，鲁斯氏肉瘤(RSV)LTR启动子，人细胞肥大病毒(CMV)立即早期启动子，鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)LTR启动子，干扰素β启动子，热休克蛋白70(hsp70)启动子，以及现有技术中已知的许多其它的启动子。
与IR1B1或IR1B4 cDNA在有义方向上可操纵连接用于表达IR1B1或IR1B4蛋白质的启动子最好是一种强的组成型启动子。这样可产生高水平的IR1B1或IR1B4，而不管调节IR1B1或IR1B4表达的内源性细胞机制是否存在。
同样，与IR1B1或IR1B4 cDNA在反义方向上可操纵连接的启动子最好是一种强的启动子，例如存在于Epstein-Barr病毒(EBV)调节区域中可使反义RNA高水平表达的启动子(Deiss和Kimchi，1991)。
该反义序列优选仅在宿主/靶细胞中表达，该宿主/靶细胞优选为人类细胞并且该表达的反义RNA应是稳定的(即不迅速降解)。该反义RNA应仅特异地与宿主/靶细胞中表达的有义mRNA杂交，并形成基本上不被翻译的稳定的双螺旋RNA分子。也就是说，在宿主/靶细胞中表达的反义RNA阻止表达的有义Mrna翻译成IR1B1或IR1B4蛋白质。载体携带的反义序列可以携带整个的IR1B1或IR1B4 cDNA序列或者仅仅它们的一部分，只要该反义部分能够与有义mRNA杂交，从而防止其被翻译成IR1B1或IR1B4蛋白质。因而，在本说明书和权利要求书中使用的“反义”被定义为一种能够在转化的/转染的细胞中表达，并也能够特异地与“有义”IR1B1或IR1B4 mRNA杂交形成不可翻译的双链RNA分子的整个反义序列或其一部分。
反义序列并不需要与完整长度的IR1B1或IR1B4 mRNA杂交。而是它可以与选定的区域，例如该“有义”mRNA的5’-不翻译的非编码序列，编码序列，或3’-不翻译序列，相杂交。优选该反义序列与5’-编码序列和/或5’非编码序列，例如帽和起始密码子位点，相杂交，因为已发现在很多实例中靶击起始密码子的反义寡核苷酸更为有效，而靶击编码区域中的中间序列不是同样有效(Wickstrom，1991)。一种反义序列在阻止IR1B4有义mRNA的翻译中的有效性可容易地通过实施例7中所述的U266S细胞中蛋白质-精氨酸甲基转移酶活性的测试来检测。考虑到哺乳动物基因组的大小，反义IR1B1或IR1B4序列的长度优选为至少17，更优选为至少30个碱基对。但是较短的序列也可使用，即，它们或者幸运地不与其它的哺乳动物序列杂交，或者这种“交叉杂交”不影响细胞的代谢，其方式和程度不妨碍本发明的目的的实现。
通过系统的试验可快速地确定优选的杂交靶和优选的反义序列的长度。标准的方法描述于例如Ausubel等编，当代分子生物学方法，GreenePublishing Assoc.，New York，N.Y.，1987-1996，和Sambrook等，分子克隆实验室手册，第二版，冷泉港出版社，冷泉港，NY(1989)，这些方法可用于从载体中系统地除去大部分的反义序列。除了全长的反义序列，可以产生一系列的交错缺失，优选在反义序列的5’-端。这样产生了一系列的截短的反义序列，它们仍然保留与优选的有义mRNA的5’-端的互补性，结果，仍然形成一种在有义mRNA的5’-端(与反义RNA的3’-端互补)为双链的RNA分子并保持不可翻译性。而且，反义寡核苷酸，例如寡核苷酸AS-1(SEQ IDNO12)可通过化学方法容易地合成，并被导入载体中与一种启动子可操纵地连接，以降低体内细胞对IR1B1或IR1B4蛋白质的表达。
本发明的载体可以是任何一种合适的通常用于转染哺乳动物细胞的真核或原核载体，例如，现有技术中已知的游离型，可复制，或可整合进染色体的载体。用于IR1B1或IR1B4反义RNA表达的特定的优选的载体是含有EB病毒调节区域的游离载体(Deiss和Kimchi，1991)，该调节区充当与相对于该调节区反义方向安排的IR1B1或IR1B4 cDNA可操纵连接的启动子。反义载体和寡核苷酸硫代磷酸酯的应用描述于Annals of the New Yorkof ScienceGene Therapy for Neoplastic Disease，eds.B.E.Huber和J.S.Lazo，Vol.716，1994(e.g.Milligan等，第228-241页)。
按照本发明，被移植到需要移植的病人身上的组织或器官的存活可通过降低对IFN的细胞响应来延长。移植组织的排斥是通过组织相容性抗原介导的，而这些MHC I型抗原的合成依赖于IFN的刺激。因而，对IFN刺激的细胞响应的降低将延长移植组织的存活。按照本发明的延长移植组织存活的方法包括向待对病人移植的组织或器官的细胞中导入一种重组DNA分子，该重组DNA分子含有一种以反义方向与一种启动子可操纵连接的IR1B1或IR1B4 cDNA序列或其片段，从而使这些被转染/转化的细胞中表达反义IR1B1或IR1B4 RNA。该重组DNA分子可通过现有技术中已知的任何一种适用于这一目的的方法导入组织或器官的细胞中。在该重组DNA分子被导入组织或器官的细胞中之后，该组织或器官可被移植到需要移植的病人的身上。
含有一种重组DNA分子的药物组合物可被直接注射进肿瘤中，例如脑肿瘤和转移肿瘤结，该重组DNA分子是一种表达载体并携带以有义方向与一种启动子可操纵连接的IR1B1或IR1B4 cDNA，从而使这些肿瘤中的细胞对作为癌症治疗的外源性IFN治疗的响应提高。对外源性IFN治疗的细胞响应的提高将导致恶性细胞生长的抑制。
对体内或体外的基因转移已有很多报道，例如，Annals of the New YorkAcademy of SciencesGene Therapy for Neoplastic Diseases，Vol.716，1994；参见例如，“用于理解和治疗人类疾病的直接基因转移”G.E.Plautz，第144至153页，和”p53肿瘤抑制物的作用机制和通过重建p53功能进行癌症基因治疗的前景”Roemer等，第265-282页。将重组DNA分子插入待移植的组织或器官的细胞中或肿瘤中的方法包括腺病毒，逆病毒，腺病毒相关病毒(AAV)载体，以及直接的DNA注射或者寡核苷酸-脂质体注射。将逆病毒载体注射进脑瘤或者将腺病毒用于感染囊纤维化病人的上呼吸道细胞的临床试验是众所周知的。
含有编码IR1B1或IR1B4 cDNA或其片段的重组DNA分子的药物组合物包括其中含有为达到本发明目的的有效量的该重组DNA分子的所有组合物，所说的IR1B1或IR1B4 cDNA或其片段相对于可操纵连接的启动子是在有义或反义方向上的。此外，该药物组合物可含有适当的药物可接受的载体或赋形剂，以稳定该重组DNA分子或者便于施用。
本发明的另外一个实施方案是包括特异于IFNAR1-结合蛋白质IR1B1或IR1B4或其片段的抗体的抗原结合部分的分子在诊断中的应用，例如，用于检测活组织检测中获得的肿瘤组织中IR1B1或IR1B4蛋白质的水平的免疫检测方法，或用于蛋白质纯化的亲和层析。
术语“抗体”包括多克隆抗体，单克隆抗体(mAbs)，嵌合抗体，抗特异型(anti-Id)抗体，单链抗体，和联合制备的人源化抗体，以及已通过任何一种已知的技术，例如，但不限于，酶切，肽合成或重组技术得到的它们的活性片段。
多克隆抗体是来自用一种抗原免疫的动物的血清的一群异源性抗体分子。单克隆抗体含有特异于抗原的基本上同源的抗体群，该抗体群含有基本上相似的抗原决定基结合位点。单克隆抗体可通过本领域普通技术人已知的方法获得。参见，例如，Kohler和Milstein，Nature 256495-497(1975)；美国专利第4376110号，Ausubel等编，同上文献，Harlow和Lane抗体实验室手册，冷泉港实验室(1988)；和Colligan等编，当代免疫学方法，Greene Publishing Assoc.和WileyInterscience，N.Y.，(1992，1993)，其全部内容引入本文作为参考。这些抗体可以属于任何免疫球蛋白族，包括IgG，IgM，IgE，IgA，GILD和它们的任何一个亚族。产生本发明的单克隆抗体的杂交瘤可以培养在体外，原位或体内。优选使用在体内或在原位高滴度生产单克隆抗体的方法。
嵌合抗体是不同的部分来源于不同种动物的分子，例如具有来自鼠单克隆抗体的可变区和人免疫球蛋白的恒定区的分子。嵌合抗体主要应用于降低免疫源性并提高产率的情况下，例如，当鼠单克隆抗体在杂交瘤中具有高的产率但在人中具有高的免疫源性的情况下，使用人/鼠嵌合单克隆抗体。嵌合单克隆抗体及其制备方法是现有技术已知的(Cabilly等，美国科学院院刊813273-3277(1984)；Morrison等，美国科学院院刊816851-6855(1984)；Boulianne等，Nature 312643-646(1984)；Cabilly等，欧洲专利申请125023(1985年11月14日公开)；Neuberger等，Nature314268-270(1985)；Taniguchi等，欧洲专利申请171496(1985年2月19日公开)；Morrison等，欧洲专利申请173494(1986年3月5日公开)；Neuberger等，PCT申请WO8601533，(1986年3月13日公开)；Kudo等，欧洲专利申请184187(1986年6月11日公开)；Morrison等，欧洲专利申请173494(1986年3月5日公开)；Sahagan等，免疫学杂志，1371066-1074(1986)；Robinson等，国际专利申请，WO9702671(1987年5月7日公开)；Liu等，美国科学院院刊843439-3443(1987)；Sun等，美国科学院院刊84214-218(1987)；Better等，Science 2401041-1043(1988)；和Harlow和Lane，抗体实验室手册，同上文献。
抗特异型(anti-Id)抗体是一种识别通常与抗体的抗原结合位点相关的独特的决定基的抗体。Id抗体可通过用待制备抗-Id的单克隆抗体免疫与该单克隆抗体来源的动物在种类和基因型完全相同的动物(例如小鼠品系)来制备。该被免疫的动物通过产生针对这些特异型决定基的抗体(抗-Id抗体)来识别和应答免疫抗体的特异型决定基。参见，例如，美国专利4699880。
抗-Id抗体也可以被用作免疫源在另外一个动物中诱导免疫反应，产生所谓的抗-抗-Id抗体。该抗-抗-Id抗体可能与诱导抗-Id的单克隆抗体具有相同的抗原决定基。因而，通过使用针对单克隆抗体的特异型决定基的抗体，可能鉴定其他的表达同样的特异性的抗体的克隆。
应当理解本发明的抗体可以是完整的抗体，例如单克隆抗体，但是正是抗体的抗原决定基结合位点提供了所需的功能。因而，除了完整的抗体，也可使用其蛋白质裂解片段，例如Fab或F(ab’)2片段。Fab和F(ab’)2片段缺乏完整抗体的Fc片段，可从循环系统中快速地被清除出去，并且与完整的抗体相比具有较小的非特异性组织结合(Wahl等，J.Nucl.Med.24316-325(1983))。这种片段通常通过蛋白质裂解产生，使用例如木瓜蛋白酶(产生Fab片段)或胃蛋白酶(产生F(ab’)2片段)。
而且，编码抗体的可变区的DNA可插入其他的抗体中，产生嵌合抗体(参见，例如，美国专利4816567)，或插入T-细胞受体中，产生具有同样宽的特异性的T-细胞(参见Eshhar，Z.等，Br.J.Cancer Suppl.，1027-9，1990；Gross，G.等，美国科学院院刊，8610024-8，1989)。也可产生和使用单链抗体。单链抗体可以是具有抗原结合能力并含有一对与免疫球蛋白的轻和重链的可变区同源或相似的氨基酸序列的单链复合肽(连接的VH-VL或单链FV)。VH和VL两者均可具有天然的单克隆抗体序列，或者这两种链中的一个或两个可含有一种美国专利5091513所述类型的CDR-FR构建体。这些分开的类似于轻和重链可变区的多肽通过多肽连接子连接在一起。这种单抗体的制备方法，特别是其中DNA编码VH和VL链的多肽结构是已知的，可按照例如美国专利4946778，5091513和5096815所述的方法来完成。
因而，术语“包含抗体的抗原结合部分的分子”不仅包括由任何一种动物细胞系或微生物产生的任何同种异型的完整的免疫球蛋白分子，也包括它们的反应性部分，包括，但不限于，Fab片段，Fab’片段，F(ab’)2片段，它们的重和/或轻链的可变部分，含有这种反应性部分的嵌合或单链抗体，以及任何其它类型的分子或细胞，其中这种抗体反应性部分已被物理地插入，例如嵌合T-细胞受体或具有这种受体的T-细胞，或者通过含有这种反应性部分的分子的部分的手段开发出来的用于释放治疗半分子的分子。
上文已对本发明进行了完整的描述，参照下文实施例可以理解到同样的内容，这些都是为了说明的目的，不限定本发明的范围。实施例1与IFN受体结合的两种人类蛋白质，IR1B1和IR1B4将通过使用BamH1-有义引物(5’ctgaggatccAAAGTCTTCTTGAGATGCATC(SEQ ID NO5)和EcoRI反义引物(5’tgacgaattcctaTCATACAAAGTC(SEQID NO6)的PCR扩增的编码完整IFNAR1-IC区域的cDNA片段克隆进BlueScript载体(BS-SK+，Stratagene)。将来自这一BS-IFNAR1-IC的BamHI-SalI片段导入pGBT10载体(CloneTech)中并在该Gal4 DNA结合区域(pGBT10-IFNAR1-IC)之后同相融合，用以进行双杂种筛选。双杂种筛选方法(Fields和Song，1989)是使用Durfee等(1993)的改良方法使用来自人类EB病毒(EBV)-转化的B-淋巴细胞的pACT质粒cDNA文库与pGBT10-IFNAR1-IC共转化酵母报告菌株Y153来进行的。酵母Y153菌株具有两个在GAL1上游激活序列(UAS)的控制之下的报告基因，它仅在Gal4转录因子的活性被重建的情况下才被转录。这需要有被导如该特定的酵母克隆的pACT质粒编码的融合蛋白质与来自pGBT10质粒的IFNAR1-IC区域具有亲和性。报告基因之一是GAL1 His3，它允许在缺乏组氨酸的培养基中生长；另一个报告基因是GAL-LacZ，它提供β-半乳糖苷酶活性。此外，pACT质粒具有Leu2基因并且pGBT10质粒具有TRP1基因，它们分别允许在缺乏亮氨酸和色氨酸的培养基中生长。菌落的筛选是在合成培养基SC减Trp，Leu，His，在25mM 3-氨基三唑(它进一步筛选组氨酸原养型)的存在下进行的。然后对生长的菌落使用X-gal滤膜测试(Breeden和Naysmith，1985)检测β-半乳糖苷酶活性。
通过转染进大肠杆菌HB101并选择leu+转化体得到了9个阳性酵母克隆，并回收它们的pACT质粒。对于每一种酵母DNA，分离了两个这种大肠杆菌HB101。对从这些大肠杆菌克隆中得到的pACT质粒进行部分测序的结果显示它们落入两组被称为IR1B1和IR1B4的cDNA序列。将IR1B1和IR1B4组的pACT质粒通过与携带核纤层蛋白，cdk2和p53或其它控制插入物(CloneTech)的pAS质粒共转化SFY526酵母报告菌株(Bartel等，1993)进行特异性测试。对在SC″Crp，-leu上生长的菌落检测β-半乳糖苷酶的表达。从这些特异的阳性pACT质粒用XhoI切除插入物，将其克隆进BS-KS(Stratagene)，并使用DyeDeoxy Terminator Cycle Sequencing Kit在一个373A Sequencer(Applied Biosystems)中从T7和T3启动子进行测序。
图1显示pACT克隆IR1B1与不同的pAS或pGBT10质粒诱饵共转化酵母SFY526的结果。酵母细胞生长在滤膜的条斑1至9中的选择性SC培养基-trp，-leu中。用X-gal试剂(5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷)染色仅在条斑2和4中为阳性。如图1所示，条斑4是一种具有活性lacZ基因的对照酵母。条斑2是IR1B1和IFNAR1-IC融合蛋白质的组合。仅用IR1B1(条斑9)，或者任何其它的除了IR1B1和IFNAR1-IC之外的组合不显示β-半乳糖苷酶活性。因而，IR1B1可特异地与IFNAR1 IFN受体链的IC区域结合。
同样，图2显示pACT克隆IR1B4与不同的pAS或pGBT10质粒诱饵共转化酵母SFY526的结果。酵母细胞生长在滤膜的条斑1至8中的SC培养基-trp，-leu中，并用X-gal试剂染色仅在条斑3和7中为阳性。如图2中的下部方框所示，条斑7是一种具有活性lacZ基因的对照酵母。条斑3是IR1B4和IFNAR1-IC融合蛋白质的组合。与用IR1B1得到的结果相同，仅用IR1B4(条斑1)，或者任何其它的除了IR1B4和IFNAR1-IC之外的组合不显示β-半乳糖苷酶活性。因而，IR1B4也可特异地与IFNAR1 IFN受体链的IC区域结合。实施例2IR1B1蛋白质序列显示钙-结合EF手位点将pACT-IR1B1质粒中的cDNA插入物用XhoI切除，将其克隆进Bluescript BS-KS(Stratagene)载体，并使用DyeDeoxy Terminator CycleSequencing Kit在一个373A DNA Sequencer(Applied Biosystems)中从T7和T3启动子进行测序。最长的质粒在Gal4活化区域和pACT质粒的连接序列之后具有一个830核苷酸的序列(图3)，并且其中发现一个191个氨基酸的开放阅读框(图3)。使用BlastP运算法则(Altscaul等，1990)以及Bioaccelerator Alignment(Henikoff和Henikoff，1992)进行了蛋白质数据库的联网检索。钙牵蛋白获得了最高分(CATR-HUMAN，accessionSwiss Protein SW New P41208)，从氨基酸52至173具有62.1％的相似性和32.4％的相同性，钙调磷酸酶B(CALB NAERG，accession Swiss ProteinP42322；CALB-HUMAN，accession P06705)从氨基酸50至171具有59.8％的相似性和32.5％的相同性。
图4显示IR1B1与人类钙调磷酸酶B(CALB)和钙牵蛋白(CATR)的排列。钙结合，螺旋-环-螺旋EF-手区域由黑体和下划线的字母表示。IR1B1具有两个EF-手位点，但前两个EF-手区域不是保守的。IR1B1显示出与钙调磷酸被B(由图4中的垂直线表示)和钙牵蛋白(由图4中的帽号表示)均具有同源性。但是，IR1B1明显是一种以前还没有被鉴定的新型的和不同的人类蛋白质。实施例3IR1B1是一种IFN-诱导的基因产物将人类黑素瘤U266S细胞(在5ml悬浮培养物中约3×106细胞)用重组IFN-α8(来自细菌2×108IU/mg)或者重组IFN-β(来自CHO细胞3×108IU/mg)以750IU/ml处理2小时或18小时。用IFN处理之后，收集细胞，并用一种含有硫氰酸胍盐和酚的Tri-试剂(Molecular ResearchCenter，Cincinnati，Ohio)抽提。将抽提的RNA进行醇沉淀，用甲醛变性，通过甲醛-琼脂糖电泳分析(10μg RNA/点样点)，并印迹在GeneScreenPlus(Dupont，New England Nuclear，Billerica，MA)上。将Northern印迹与106cpm的用Rediprime试剂盒(Amersham，UK)使用32P-dCTP和随机引发而标记的IR1B1 cDNA反应。
图5显示杂交在1.1kb RNA上的IR1B1 cDNA。IR1B1 mRNA的量在IFN-β对U266S细胞处理之后2小时显著提高。但是，在IFN处理之后18小时，IR1B1 mRNA从细胞中消失，表明这一诱导是快速的并且是瞬时的。许多IFN-诱导的mRNA在IFN处理之后的24小时内在细胞中继续聚积(Revel和Chebath，1986)。
已证实在每一个泳道中存在相同量的RNA。如图5的下面部分所示，相同的U266S(富含IFN受体)RNA与一种18S核糖体cDNA探针的杂交表明在每一泳道中具有相同量的18S rRNA(仅显示出了18S rRNA电泳的印迹的部分)。在另一个使用1200U/ml的IFN用于诱导的实验中，用INF-α8在2小时也观察到IR1B1 mRNA，但在30分钟没有(未示出)。
发现IR1B1 mRNA在不同的人类细胞中(U266，Daudi和THP-1细胞)具有相同的1.1kb大小。应当注意，这一大小与钙牵蛋白mRNA的大小接近，但与钙调磷酸酶B mRNA的大小不同(2.5kb)。较小的mRNA与IR1B1是一种约20kDa的小的蛋白质相一致。实施例4IR1B4蛋白质在体外与IFNAR1结合通过使用网织红细胞裂解物的体外翻译合成具有蛋白质标志(旗序列)的IR1B4蛋白质并将该蛋白质与重组IFNARI-IC融合蛋白质在大肠杆菌中反应测试IR1B4与IFNAR1的IC-区域的结合。将实施例1中的pACT-IR1B4DNA用XhoI切割，用Klenow酶补平，将其克隆进用EcoRI切割并补平的PECE-旗表达载体中(Ellis等，1986)。将含有同框旗-IR1B4融合体的NotI-BamHI片段重新克隆进用NotI-BamHI切割的BS-SK中T3启动子的下游。通过从T3启动子的序列分析证实旗融合体的序列。用T3聚合酶和1μg的BamHI-线性化的BS-旗-IR1B4 DNA进行体外转录(Promega试剂盒)。在兔网织红细胞裂解液(Promega试剂盒)中用[35S]甲硫氨酸(Amersham)和5μg RNA转录物在30℃进行体外翻译1小时。将产物在使用前用RNase处理。通过将BamHI-EcoRI，BS-IFNAR1-IC的插入物(参见上文)克隆进pGEX2(Pharmacia Biotech)的相同位点制备GST-IFNAR1-IC融合蛋白质。GST和GST-IFNAR1-IC是在大肠杆菌中表达的，并被结合在谷胱甘肽-琼脂糖珠(Sigma)而回收。
抗-旗M2琼脂糖珠得自Kodak Scientific Imaging Systems。针对IFN受体(IFNAR1)α-组分的单克隆抗体IFNaR3由Dr.O.Comlamonici(Colamonici等，1990)赠送，并在1∶100稀释后使用。制备了针对IFNAR1-IC(Ab 631)的C-末端肽的兔抗体，并被用于从2×107人黑素瘤U266S和U266R细胞的含有如前描述的抗蛋白酶(Ambrovich等，1994)的Brij提取物(0.75ml)中进行的IFNAR1的免疫沉淀，除了蛋白质G珠(Pharmacia)与单克隆抗体IFNaR3 SDS-PAGE一起使用，并且在FujixBAS1000 Phosphor-Imager进行的分析与以前相同(Harroch等，1994)。
首次证实了当翻译产物被抗-旗抗体免疫沉淀时得到了一种约32kDa的蛋白质(图6A和6B)。在图6A和6B中，当标出抗旗抗体的使用时(用符号+)，意味着IR1B4-旗融合mRNA(从相应的DNA构建体的体外转录)的放射活性翻译产物与结合在琼脂糖珠(Kodak Scientific Imaging Systems产物)上的抗-旗M2抗体反应。含有融合于旗氨基酸序列的IR1B4的翻译的蛋白质被结合在这些抗-旗抗体珠上，在将这些珠离心沉淀后，将该蛋白质用SDS缓冲液洗脱并用于SDS-PAGE。这些反应被用作表明期望的融合蛋白质存在的对照。
将谷胱甘肽的珠(Sigma)，其上结合融合于IFNAR1-IC的谷胱甘肽S-转移酶(GST)，加入网织红细胞裂解液翻译反应中。将这些珠离心并洗涤，用十二烷基硫酸钠(SDS 1％)释放结合在GST珠上的蛋白质，并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析。观察到由35S-甲硫氨酸标记的32kDa蛋白质结合在GST-IFNAR1-IC上，而不与单独的GST结合(图6A)。这表明，IR1B4直接结合在分离的IFNAR1-IC肽区域上。
为了证实IR1B4与存在于人类细胞膜上的IFNAR1蛋白质相互作用，将人骨髓瘤U266细胞的洗涤剂抽提物与来自网织红细胞裂解物的IR1B4的由35S-甲硫氨酸标记的翻译产物混合。将IFNAR1蛋白质用特异于IFNAR1的胞外结构域的单克隆抗体IFNaR3(得自Colamonici等，1990)进行免疫沉淀。通过SDS-PAGE分析，当洗涤剂抽提物来自U266S(富含IFN受体)时，显示32kDa IR1B4-旗的电泳带的存在(图6B)，但当来自U266R细胞——一种来自IFN受体缺陷型U266的突变的IFN-α，β-抗性衍生细胞系(Abramovich等，1994)——时没有这种电泳带的存在。当将U266S提取物与针对IFNAR1的C-末端肽的Ab-631反应时同样观察到32kDa的电泳带，并且当Cos-7细胞用旗-IR1B4和人类IFNAR1 cDNA转移时IFNAR1被抗-旗沉淀。这些结果证实IR1B4以特定的方式与来自人类细胞的完整的IFNAR1结合。实施例5IR1B4 cDNA和蛋白质序列IR1B4 cDNA的核苷酸序列具有一个编码361氨基酸长蛋白质的开放阅读框(图7)。该人类cDNA在各种人类细胞包括U266骨髓瘤细胞中识别一种1.5kb的组成型表达的poly-A+mRNA。使用BlastP运算法则(Altscaul等，1990)以及Bioaccelerator Alignment(Henikoff和Henikoff，1992)进行了蛋白质数据库的联网检索，发现IR1B4是蛋白质-精氨酸甲基转移酶家族中的一个独特的成员。由Lin等描述的大鼠PRMT1 cDNA(1996，Genbanksequence I.D.1390024；Accession U60882)用ALIGN计算机程序分析仅有81.4％的同源性。在氨基酸水平(图8)，人类IR1B4/PRMT在其氨基末端明显不同于PRMT1，其前19个氨基酸完全不同。仅对IR1B4 N-末端测序将不会表明IR1B4与PRMT1具有同源性。也发现另外一种已被描述的人类蛋白质，HCP-1(Nikawa等，1996；Genbank accession D66904)，与IR1B4具有同源性。但是，HCP-1在残基147-175具有不同的氨基酸序列(图9)。HCP-1起初是基于其在酵母中互补ire15突变体的能力而被鉴定的，其酶学功能以前没有被鉴定(Nikawa等，1996)。因而，IR1B4是一种新型的人类蛋白质。实施例6与IFNAR1-IC结合的IR1B4蛋白质具有甲基转移酶活性用IFNAR1受体可从人类细胞提取物中共-免疫沉淀甲基转移酶活性。将U266S细胞的Brij-洗涤剂提取物在4℃与或不与抗-IFNAR1抗体Ab 631(Abramovich等，1994)过夜反应。加入蛋白质A珠(40μl 50％的IPA-400fast flow，Repligen)1小时。将珠洗涤并在0.1ml的25mM Tris-HCl，pH7.5，1mM EDTA，1mM EGTA，50μM(0.25μCi)14C-(甲基)-S-腺苷-甲硫氨酸(Amersham)，和100μg组蛋白(来自小牛胸腺的IIA型，Sigma)中在30℃温育30分钟。在如Lin等(1996)所述的条件下进行组蛋白的体外甲基化。在SDS-PAGE(15％丙烯酰胺)和在Phospor-imager中曝光后分析组蛋白电泳带的放射活性。用抗-IFNAR1涂覆的珠观察到了组蛋白的14C-甲基的标记，但在对照反应中没有观察到(图10)。因而，蛋白质甲基-转移酶活性是与这些人类细胞的IFN受体链组成型地相联系的。当IFNAR1在将IFN-β加入U266S细胞5分钟后被免疫沉淀时发现了相似的酶活性。实施例7在IFN的作用中IR1B4/PRMT1的参与用化学方法合成与IR1B4 cDNA的起始密码子周围核苷酸12-33的序列互补的反义寡核苷酸硫代磷酸酯(AS-1，反义序列5’-GGCTACAAAATTCTCCATGATG-3’，SEQ ID NO12)(Stein等，1989)。将该寡核苷酸在第0天加入接种在96-孔微培养板上的U266S细胞中(8000细胞/孔/0.2ml RPMI，10％FCS)，使最终浓度为10μM，并在第二天以5μM重新加入。在第0天，以64或25IU/ml加入IFN-β。在培养3天后，将20μl AlamarBlue，一种基于氧化还原反应的细胞密度比色指示剂(BioSource，Camarillo，CA)，加入每一个孔中，并继续温育6-7小时。在一个微量板ELISA读数器(测试滤光片530nm，参照滤光片630nm)对双孔进行多次读数。校正活细胞数和OD值与生长曲线之间的关系。为测量甲基转移酶，将来自合并孔的细胞通过冷冻-解冻在25μl/孔的25mM Tris-HCl，pH7.4，1mMEDTA，1mM EGTA，40μg/ml亮抑蛋白酶肽和抑蛋白酶肽，20μg/ml胃蛋白酶抑制剂，1μM苯基甲基磺酰氯(PMSF)中裂解。反应是在50μl的体积中在30℃进行30分钟，其中含有25μl细胞提取物，100μM肽R1(Najbauer等，1993；得自Genosys，Cambridge，UK)，3μCi[3H](甲基)S-腺苷甲硫氨酸(Amersham，73Ci/mmol)。在SDS-聚丙烯酰胺凝胶(16％)电泳之后，在50％甲醇，10％乙酸中固定，并用Amplify(R)(Amersham)处理，进行8天的放射自显影。该AS-1反义DNA能够大幅度降低U266S细胞中的蛋白质-精氨酸甲基转移酶活性，这是通过在R1肽底物中氚化的甲基的掺入测定的(图11)，并被用于研究该酶在IFN功能中可能发挥的作用。选用IFN的生长抑制活性，这是因为它可在细胞上最直接地定量，也因为已经观察到大鼠PRMT1与生长-相关基因的相互作用(Lin等，1996)。反义-1寡核苷酸AS-1的加入，它与IR1B4/PRMT cDNA的起始密码子周围的序列互补，降低了IFN-β对人类骨髓瘤U266S细胞的生长抑制效应(图12)。这意味着，在反义AS-1的存在下，IFN处理的细胞显示出较高的生长(不包括硫代磷酸酯的毒性效应)。在IFN不存在下的生长没有受到显著影响。相应于同样的cDNA区域的有义寡核苷酸S-3与反义-1相比仅具有很小的影响(S-3，图12)。有义S-3对酶活性水平也仅有很小的抑制效应(图11)。另一个反义硫代磷酸酯寡核苷酸AS-2(SEQ ID NO13)相应于该cDNA的中间部分并与SEQ ID NO7的核苷酸572-592互补，几乎没有影响(图12)。IFN-β对骨髓瘤细胞的生长抑制效应的高达5倍的降低——反义-1寡核苷酸使其PRMT活性部分缺失——表明IR1B4/PRMT酶与IFNAR1受体的IC区域的结合对于IFN在细胞上的作用在功能上是显著的。
这些实验也证实了IR1B4蛋白质甲基化酶的PRMT类的肽底物，例如R1肽Gly-Gly-Phe-Gly-Gly-Arg-Gly-Gly-Phe-Gly(SEQ ID NO11；Najbauer等，1993)，它被用于图11所示的实验中。蛋白质在紧接甘氨酸残基的精氨酸残基上的甲基化(例如在上述的肽中)可能是一种象磷酸化那样的蛋白质修饰，其作用是向细胞传导信号。hnRNP组的蛋白质是一种PRMT酶的靶物，并且由于这些蛋白质影响mRNA的加工，剪切，运输和稳定性(Liu和Dreyfuss，1995)，它们的甲基化可能对基因表达的转录后控制起作用。由于与IFN受体的链的结合而被发现的IR1B4/PRMT蛋白质可介导在对IFN的响应中在基因表达中的变化。其它的蛋白质底物可通过IFN受体而被甲基化，包括IFN受体复合体的其它成分和转录因子。Lin等(1996)已观察到大鼠PRMT1与生长因子诱导的蛋白质的结合激活了PRMT1并改变其底物特异性，可能是通过除去一些细胞的胞质中与PRMT1相关的抑制蛋白质来进行的。可期望结合在IFN受体的IFNAR1链上的IR1B4的相似的激活。结论本文描述了一种新型蛋白质IR1B1，它与I型干扰素受体的IFNAR1链的胞质内区域相互作用。在人细胞用IFN处理后该蛋白质被快速和瞬间诱导。IR1B1的特征在于螺旋-环-螺旋EF-把手位点的存在，它是钙-结合蛋白质的标志。钙离子流参与IFN作用的机制中，特别是用于起始细胞反应和细胞形态变化以及细胞骨架的组织(Tamm等，1987)。钙离子激活的酶在响应IFN时可产生第二信号，例如二酰基-甘油。而且，钙调素类蛋白质调节一些蛋白质激酶，并且已观察到这些途径在IFN处理的细胞中具有功能(Tamm等，1987)。很有可能IFN受体结合蛋白质IR1B1参与这种钙离子依赖性的IFN对细胞的效应。
用于与IFNAR1-IC区域相互作用的蛋白质的双-杂种筛选也鉴定出另外一种蛋白质IR1B4，它被证明是一种酶的蛋白质-精氨酸甲基转移酶家族中的一个成员(PRMT1；Lin等，1996)。已知该酶使一些RNA和DNA结合蛋白质甲基化，特别是异源性核的核糖核蛋白(hnRNP)。该hnRNP参与mRNA从核到胞质的转运，前-mRNA的旁路剪接，以及转录后控制(Liu和Dreyfuss，1995)。锚定在IFNAR1-IC区域上的IR1B1和IR1B4/PRMT1蛋白质揭示了除了由Darnell等(1994)描述的已知的Jak-Stat途径外存在的IFN的新型信号机制。
现已对本发明进行了完整的描述，本领域普通技术人员将会看到在等同的参数、浓度和条件的很宽的范围内可以进行相同的发明而不脱离本发明的精神和范围，也不需要过多的实验。
当依照特定实施方案对本发明进行描述时，可以看到可以进行进一步修改。按照本发明的总的原则，这一修改应包括任一种变化、应用或调整，并包括属于本领域内已知和习惯作法的对本发明的修改，这些修改按照权利要求书所述范围可以应用于上文所述的实质性特点。
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序列表(1)总信息(i)申请人REVEL，MichaelCHEBATH，JudithABRAMOVICH，Carolina(ii)发明名称新型IFN受体1结合蛋白质，编码它们的DNA，以及调节细胞对干扰素的反应的方法(iii)序列数目13(iv)通信地址(A)收信人BROWDY AND NEIMARK(B)街道419 Seventh Street，N.W.，Suite 300(C)城市Washington(D)州D.C.
(E)国家USA(F)邮编20004(V)计算机可读形式(A)介质类型软盘(B)计算机IBM PC兼容(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软件PatentIn Release #1.0，Version #1.30(EPO)(Vi)在先申请资料(A)申请号US(B)申请日(Vi)在先申请资料(A)申请号US60/035636(B)申请日1997年1月15日(viii)律师/代理人信息(A)姓名BROWDY，Roger L.
(B)登记号25618(C)案号REVEL＝14 PCT(ix)通讯号码(A)电话202-628-5197(B)传真202-737-3528(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A)长度830碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型cDNA(ix)特点(A)名称/关键词CDS(B)位点43..615(xi)序列描述SEQ ID NO1CGTCTCGAGG CGAGTTGGCG GAGCTGTGCG CGCGGCGGGG CG ATG GGG GGC TCG 54Met Gly Gly Ser1GGC AGT CGC CTG TCC AAG GAG CTG CTG GCC GAG TAC CAG GAC TTG ACG 102Gly Ser Arg Leu Ser Lys Glu Leu Leu Ala Glu Tyr Gln Asp Leu Thr5 10 15 20TTC CTG ACG AAG CAG GAG ATC CTC CTA GCC CAC AGG CGG TTT TGT GAG 150Phe Leu Thr Lys Gln Glu Ile Leu Leu Ala His Arg Arg Phe Cys Glu25 30 35CTG CTT CCC CAG GAG CAG CGG AGC GTG GAG TCG TCA CTT CGG GCA CAA 198Leu Leu Pro Gln Glu Gln Arg Ser Val Glu Ser Ser Leu Arg Ala Gln40 45 50GTG CCC TTC GAG CAG ATT CTC AGC CTT CCA GAG CTC AAG GCC AAC CCC 246Val Pro Phe Glu Gln Ile Leu Ser Leu Pro Glu Leu Lys Ala Asn Pro55 60 65TTC AAG GAG CGA ATC TGC AGG GTC TTC TCC ACA TCC CCA GCC AAA GAC 294Phe Lys Glu Arg Ile Cys Arg Val Phe Ser Thr Ser Pro Ala Lys Asp70 75 80AGC CTT AGC TTT GAG GAC TTC CTG GAT CTC CTC AGT GTG TTC AGT GAC 342Ser Leu Ser Phe Glu Asp Phe Leu Asp Leu Leu Ser Val Phe Ser Asp85 90 95 100ACA GCC ACG CCA GAC ATC AAG TCC CAT TAT GCC TTC CGC ATC TTT GAC 390Thr Ala Thr Pro Asp Ile Lys Ser His Tyr Ala Phe Arg Ile Phe Asp105 110 115TTT GAT GAT GAC GGA ACC TTG AAC AGA GAA GAC CTG AGC CGG CTG GTG 438Phe Asp Asp Asp Gly Thr Leu Asn Arg Glu Asp Leu Ser Arg Leu Val120 125 130AAC TGC CTC ACG GGA GAG GGC GAG GAC ACA CGG CTT AGT GCG TCT GAG 486Asn Cys Leu Thr Gly Glu Gly Glu Asp Thr Arg Leu Ser Ala Ser Glu135 140 145ATG AAG CAG CTC ATC GAC TAC ATC CTG GAA GAG TCT GAC ATT GAC AGG 534Met Lys Gln Leu Ile Asp Tyr Ile Leu Glu Glu Ser Asp Ile Asp Arg150 155 160GAT GGA ACC ATC AAC CTC TCT GAG TTC CAG CAC GTC ATC TCC CGT TCT 582Asp Gly Thr Ile Asn Leu Ser Glu Phe Gln His Val Ile Ser Arg Ser165 170 175 180CCA GAC TTT GCC AGC TCC TTT AAG ATT GTC CTG TGACAGCAGC CCCAGCGTGT 635Pro Asp Phe Ala Ser Ser Phe Lys Ile Val Leu185 190GTCCTGGCAC CCTGTCCAAG AACCTTTCTA CTGCTGAGCT GTGGCCAAGG TCAAGCCTGT 695GTTGCCAGTG CGGGCCAAGC TGGCCCAGCC TGGAGCTGGC GCTGTGCAGC CTCACCCCGG 755GCAGGGGCGG CCCTCGTTGT CAGGGCCTCT CCTCACTGCT GTTGTCATTG CTCCGTTTGT 815GGGCCTTCGT GGCCA 830(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列特征(A)长度191氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型蛋白质
(xi)序列描述SEQ ID NO2Met Gly Gly Ser Gly Ser Arg Leu Ser Lys Glu Leu Leu Ala Glu Tyr1 5 10 15Gln Asp Leu Thr Phe Leu Thr Lys Gln Glu Ile Leu Leu Ala His Arg20 25 30Arg Phe Cys Glu Leu Leu Pro Gln Glu Gln Arg Ser Val Glu Ser Ser35 40 45Leu Arg Ala Gln Val Pro Phe Glu Gln Ile Leu Ser Leu Pro Glu Leu50 55 60Lys Ala Asn Pro Phe Lys Glu Arg Ile Cys Arg Val Phe Ser Thr Ser65 70 75 80Pro Ala Lys Asp Ser Leu Ser Phe Glu Asp Phe Leu Asp Leu Leu Ser85 90 95Val Phe Ser Asp Thr Ala Thr Pro Asp Ile Lys Ser His Tyr Ala Phe100 105 110Arg Ile Phe Asp Phe Asp Asp Asp Gly Thr Leu Asn Arg Glu Asp Leu115 120 125Ser Arg Leu Val Asn Cys Leu Thr Gly Glu Gly Glu Asp Thr Arg Leu130 135 140Ser Ala Ser Glu Met Lys Gln Leu Ile Asp Tyr Ile Leu Glu Glu Ser145 150 155 160Asp Ile Asp Arg Asp Gly Thr Ile Asn Leu Ser Glu Phe Gln His Val165 170 175Ile Ser Arg Ser Pro Asp Phe Ala Ser Ser Phe Lys Ile Val Leu180 185 190(2)SEQ ID NO3的信息(i)序列特征(A)长度170氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型蛋白质(xi)序列描述SEQ ID NO3Met Gly Asn Glu Ala Ser Tyr Pro Leu Glu Met Cys Ser His Phe Asp1 5 10 15Ala Asp Glu Ile Lys Arg Leu Gly Lys Arg Phe Lys Lys Leu Asp Leu20 25 30Asp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Val Glu Glu Phe Met Ser Leu Pro Glu35 40 45Leu Gln Gln Asn Pro Leu Val Gln Arg Val Ile Asp Ile Phe Asp Thr50 55 60Asp Gly Asn Gly Glu Val Asp Phe Lys Glu Phe Ile Glu Gly Val Ser65 70 75 80Gln Phe Ser Val Lys Gly Asp Lys Glu Gln Lys Leu Arg Phe Ala Phe85 90 95Arg Ile Tyr Asp Met Asp Lys Asp Gly Tyr Ile Ser Asn Gly Glu Leu100 105 110Phe Gln Val Leu Lys Met Met Val Gly Asn Asn Leu Lys Asp Thr Gln115 120 125Leu Gln Gln Ile Val Asp Lys Thr Ile Ile Asn Ala Asp Lys Asp Gly130 135 140Asp Gly Arg Ile Ser Phe Glu Glu Phe Cys Ala Val Val Gly Gly Leu145 150 155 160Asp Ile His Lys Lys Met Val Val Asp Val165 170(2)SEQ ID NO4的信息(i)序列特征(A)长度172氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型蛋白质(xi)序列描述SEQ ID NO4Met Ala Ser Asn Phe Lys Lys Ala Asn Met Ala Ser Ser Ser Gln Arg1 5 10 15Lys Arg Met Ser Pro Lys Pro Glu Leu Thr Glu Glu Gln Lys Gln Glu20 25 30Ile Arg Glu Ala Phe Asp Leu Phe Asp Ala Asp Gly Thr Gly Thr Ile35 40 45Asp Val Lys Glu Leu Lys Val Ala Met Arg Ala Leu Gly Phe Glu Pro50 55 60Lys Lys Glu Glu Ile Lys Lys Met Ile Ser Glu Ile Asp Lys Glu Gly65 70 75 80Thr Gly Lys Met Asn Phe Gly Asp Phe Leu Thr Val Met Thr Gln Lys85 90 95Met Ser Glu Lys Asp Thr Lys Glu Glu Ile Leu Lys Ala Phe Lys Leu100 105 110Phe Asp Asp Asp Glu Thr Gly Lys Ile Ser Phe Lys Asn Leu Lys Arg115 120 125Val Ala Lys Glu Leu Gly Glu Asn Leu Thr Asp Glu Glu Leu Gln Glu130 135 140Met Ile Asp Glu Ala Asp Arg Asp Gly Asp Gly Glu Val Ser Glu Gln145 150 155 160Glu Phe Leu Arg Ile Met Lys Lys Thr Ser Leu Tyr165 170(2)SEQ ID NO5的信息(i)序列特征(A)长度31碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性
(ii)分子类型cDNA(xi)序列描述SEQ ID NO5CTGAGGATCC AAAGTCTTCT TGAGATGCAT C 31(2)SEQ ID NO6的信息(i)序列特征(A)长度25碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型cDNA(xi)序列描述SEQ ID NO1TGACGAATTC CTATCATACA AAGTC25(2)SEQ ID NO7的信息(i)序列特征(A)长度1308碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型cDNA(ix)特点(A)名称/关键词CDS(B)位点16..1098(xi)序列描述SEQ ID NO7GCCGCGAACT GCATC ATG GAG AAT TTT GTA GCC ACC TTG GCT AAT GGG ATG 51Met Glu Asn Phe Val Ala Thr Leu Ala Asn Gly Met195 200AGC CTC CAG CCG CCT CTT GAA GAA GTG TCC TGT GGC CAG GCG GAA AGC99Ser Leu Gln Pro Pro Leu Glu Glu Val Ser Cys Gly Gln Ala Glu Ser205 210 215AGT GAG AAG CCC AAC GCT GAG GAC ATG ACA TCC AAA GAT TAC TAC TTT 147Ser Glu Lys Pro Asn Ala Glu Asp Met Thr Ser Lys Asp Tyr Tyr Phe220 225 230 235GAC TCC TAC GCA CAC TTT GGC ATC CAC GAG GAG ATG CTG AAG GAC GAG 195Asp Ser Tyr Ala His Phe Gly Ile His Glu Glu Met Leu Lys Asp Glu240 245 250GTG CGC ACC CTC ACT TAC CGC AAC TCC ATG TTT CAT AAC CGG CAC CTC 243Val Arg Thr Leu Thr Tyr Arg Asn Ser Met Phe His Asn Arg His Leu255 260 265TTC AAG GAC AAG GTG GTG CTG GAC GTC GGC TCG GGC ACC GGC ATC CTC 291Phe Lys Asp Lys Val Val Leu Asp Val Gly Ser Gly Thr Gly Ile Leu270 275 280TGC ATG TTT GCT GCC AAG GCC GGG GCC CGC AAG GTC ATC GGG ATC GAG 339Cys Met Phe Ala Ala Lys Ala Gly Ala Arg Lys Val Ile Gly Ile Glu285 290 295TGT TCC AGT ATC TCT GAT TAT GCG GTG AAG ATC GTC AAA GCC AAC AAG 387Cys Ser Ser Ile Ser Asp Tyr Ala Val Lys Ile Val Lys Ala Asn Lys300 305 310 315TTA GAC CAC GTG GTG ACC ATC ATC AAG GGG AAG GTG GAG GAG GTG GAG 435Leu Asp His Val Val Thr Ile Ile Lys Gly Lys Val Glu Glu Val Glu320 325 330CTC CCA GTG GAG AAG GTG GAC ATC ATC ATC AGC GAG TGG ATG GGC TAC 483Leu Pro Val Glu Lys Val Asp Ile Ile Ile Ser Glu Trp Met Gly Tyr335 340 345TGC CTC TTC TAC GAG TCC ATG CTC AAC ACC GTG CTC TAT GCC CGG GAC 531Cys Leu Phe Tyr Glu Ser Met Leu Asn Thr Val Leu Tyr Ala Arg Asp350 355 360AAG TGG CTG GCG CCC GAT GGC CTC ATC TTC CCA GAC CGG GCC ACG CTG 579Lys Trp Leu Ala Pro Asp Gly Leu Ile Phe Pro Asp Arg Ala Thr Leu365 370 375TAT GTG ACG GCC ATC GAG GAC CGC CAG TAC AAA GAC TAC AAG ATC CAC 627Tyr Val Thr Ala Ile Glu Asp Arg Gln Tyr Lys Asp Tyr Lys Ile His380 385 390 395TGG TGG GAG AAC GTG TAT GGC TTC GAC ATG TCT TGC ATC AAA GAT GTG 675Trp Trp Glu Asn Val Tyr Gly Phe Asp Met Ser Cys Ile Lys Asp Val400 405 410GCC ATT AAG GAG CCC CTA GTG GAT GTC GTG GAC CCC AAA CAG CTG GTC 723Ala Ile Lys Glu Pro Leu Val Asp Val Val Asp Pro Lys Gln Leu Val415 420 425ACC AAC GCC TGC CTC ATA AAG GAG GTG GAC ATC TAT ACC GTC AAG GTG 771Thr Asn Ala Cys Leu Ile Lys Glu Val Asp Ile Tyr Thr Val Lys Val430 435 440GAA GAC CTG ACC TTC ACC TCC CCG TTC TGC CTG CAA GTG AAG CGG AAT 819Glu Asp Leu Thr Phe Thr Ser Pro Phe Cys Leu Gln Val Lys Arg Asn445 450 455GAC TAC GTG CAC GCC CTG GTG GCC TAC TTC AAC ATC GAG TTC ACA CGC 867Asp Tyr Val His Ala Leu Val Ala Tyr Phe Asn Ile Glu Phe Thr Arg460 465 470 475TGC CAC AAG AGG ACC GGC TTC TCC ACC AGC CCC GAG TCC CCG TAC ACG 915Cys His Lys Arg Thr Gly Phe Ser Thr Ser Pro Glu Ser Pro Tyr Thr480 485 490CAC TGG AAG CAG ACG GTG TTC TAC ATG GAG GAC TAC CTG ACC GTG AAG 963His Trp Lys Gln Thr Val Phe Tyr Met Glu Asp Tyr Leu Thr Val Lys495 500 505ACG GGC GAG GAG ATC TTC GGC ACC ATC GGC ATG CGG CCC AAC GCC AAG 1011Thr Gly Glu Glu Ile Phe Gly Thr Ile Gly Met Arg Pro Asn Ala Lys510 515 520AAC AAC CGG GAC CTG GAC TTC ACC ATC GAC CTG GAC TTC AAG GGC CAG 1059Asn Asn Arg Asp Leu Asp Phe Thr Ile Asp Leu Asp Phe Lys Gly Gln525 530 535CTG TGC GAG CTG TCC TGC TCC ACC GAC TAC CGG ATG CGC TGAGGCCCGG 1108Leu Cys Glu Leu Ser Cys Ser Thr Asp Tyr Arg Met Arg540 545 550CTCTCCCGCC CTGCACGAGC CCAGGGGCTG AGCGTTCCTA GGCGGTTTCG GGGCTCCCCC1168TTCCTCTCCC TCCCTCCCGC AGAAGGGGGT TTTAGGGGCC TGGGCTGGGG GGATGGGGAG1228GGCACATTGG GACTGTGTTT TTCATAAATT ATGTTTTTAT ATGGTTGCAT TTAATGCCAA1288TAAATCCTCA GCTGGGGAAA1308(2)SEQ ID NO8的信息(i)序列特征(A)长度361氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型蛋白质(xi)序列描述SEQ ID NO8Met Glu Asn Phe Val Ala Thr Leu Ala Asn Gly Met Ser Leu Gln Pro1 5 10 15Pro Leu Glu Glu Val Ser Cys Gly Gln Ala Glu Ser Ser Glu Lys Pro20 25 30Asn Ala Glu Asp Met Thr Ser Lys Asp Tyr Tyr Phe Asp Ser Tyr Ala35 40 45His Phe Gly Ile His Glu Glu Met Leu Lys Asp Glu Val Arg Thr Leu50 55 60Thr Tyr Arg Asn Ser Met Phe His Asn Arg His Leu Phe Lys Asp Lys65 70 75 80Val Val Leu Asp Val Gly Ser Gly Thr Gly Ile Leu Cys Met Phe Ala85 90 95Ala Lys Ala Gly Ala Arg Lys Val Ile Gly Ile Glu Cys Ser Ser Ile100 105 110Ser Asp Tyr Ala Val Lys Ile Val Lys Ala Asn Lys Leu Asp His Val115 120 125Val Thr Ile Ile Lys Gly Lys Val Glu Glu Val Glu Leu Pro Val Glu130 135 140Lys Val Asp Ile Ile Ile Ser Glu Trp Met Gly Tyr Cys Leu Phe Tyr145 150 155 160Glu Ser Met Leu Asn Thr Val Leu Tyr Ala Arg Asp Lys Trp Leu Ala165 170 175Pro Asp Gly Leu Ile Phe Pro Asp Arg Ala Thr Leu Tyr Val Thr Ala180 185 190Ile Glu Asp Arg Gln Tyr Lys Asp Tyr Lys Ile His Trp Trp Glu Asn195 200 205Val Tyr Gly Phe Asp Met Ser Cys Ile Lys Asp Val Ala Ile Lys Glu210 215 220Pro Leu Val Asp Val Val Asp Pro Lys Gln Leu Val Thr Asn Ala Cys225 230 235 240Leu Ile Lys Glu Val Asp Ile Tyr Thr Val Lys Val Glu Asp Leu Thr245 250 255Phe Thr Ser Pro Phe Cys Leu Gln Val Lys Arg Asn Asp Tyr Val His260 265 270Ala Leu Val Ala Tyr Phe Asn Ile Glu Phe Thr Arg Cys His Lys Arg275 280 285Thr Gly Phe Ser Thr Ser Pro Glu Ser Pro Tyr Thr His Trp Lys Gln290 295 300Thr Val Phe Tyr Met Glu Asp Tyr Leu Thr Val Lys Thr Gly Glu Glu305 310 315 320Ile Phe Gly Thr Ile Gly Met Arg Pro Asn Ala Lys Asn Asn Arg Asp325 330 335Leu Asp Phe Thr Ile Asp Leu Asp Phe Lys Gly Gln Leu Cys Glu Leu340 345 350Ser Cys Ser Thr Asp Tyr Arg Met Arg355 360(2)SEQ ID NO9的信息(i)序列特征(A)长度353氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型蛋白质(xi)序列描述SEQ ID NO9Met Ala Ala Ala Glu Ala Ala Asn Cys Ile Met Glu Val Ser Cys Gly1 5 10 15Gln Ala Glu Ser Ser Glu Lys Pro Asn Ala Glu Asp Met Thr Ser Lys20 25 30Asp Tyr Tyr Phe Asp Ser Tyr Ala His Phe Gly Ile His Glu Glu Met35 40 45Leu Lys Asp Glu Val Arg Thr Leu Thr Tyr Arg Asn Ser Met Phe His50 55 60Asn Arg His Leu Phe Lys Asp Lys Val Val Leu Asp Val Gly Ser Gly65 70 75 80Thr Gly Ile Leu Cys Met Phe Ala Ala Lys Ala Gly Ala Arg Lys Val85 90 95Ile Gly Ile Glu Cys Ser Ser Ile Ser Asp Tyr Ala Val Lys Ile Val100 105 110Lys Ala Asn Lys Leu Asp His Val Val Thr Ile Ile Lys Gly Lys Val115 120 125Glu Glu Val Glu Leu Pro Val Glu Lys Val Asp Ile Ile Ile Ser Glu130 135 140Trp Met Gly Tyr Cys Leu Phe Tyr Glu Ser Met Leu Asn Thr Val Leu145 150 155 160His Ala Arg Asp Lys Trp Leu Ala Pro Asp Gly Leu Ile Phe Pro Asp165 170 175Arg Ala Thr Leu Tyr Val Thr Ala Ile Glu Asp Arg Gln Tyr Lys Asp180 185 190Tyr Lys Ile His Trp Trp Glu Asn Val Tyr Gly Phe Asp Met Ser Cys195 200 205Ile Lys Asp Val Ala Ile Lys Glu Pro Leu Val Asp Val Val Asp Pro210 215 220Lys Gln Leu Val Thr Asn Ala Cys Leu Ile Lys Glu Val Asp Ile Tyr225 230 235 240Thr Val Lys Val Glu Asp Leu Thr Phe Thr Ser Pro Phe Cys Leu Gln245 250 255Val Lys Arg Asn Asp Tyr Val His Ala Leu Val Ala Tyr Phe Asn Ile260 265 270Glu Phe Thr Arg Cys His Lys Arg Thr Gly Phe Ser Thr Ser Pro Glu275 280 285Ser Pro Tyr Thr His Trp Lys Gln Thr Val Phe Tyr Met Glu Asp Tyr290 295 300Leu Thr Val Lys Thr Gly Glu Glu Ile Phe Gly Thr Ile Gly Met Arg305 310 315 320Pro Asn Ala Lys Asn Asn Arg Asp Leu Asp Phe Thr Ile Asp Leu Asp325 330 335Phe Lys Gly Gln Leu Cys Glu Leu Ser Cys Ser Thr Asp Tyr Arg Met340 345 350Arg(2)SEQ ID NO10的信息(i)序列特征(A)长度360氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型蛋白质(xi)序列描述SEQ ID NO10Met Glu Asn Phe Val Ala Thr Leu Ala Asn Gly Met Ser Leu Gln Pro1 5 10 15Pro Leu Glu Glu Val Ser Cys Gly Gln Ala Glu Ser Ser Glu Lys Pro20 25 30Asn Ala Glu Asp Met Thr Ser Lys Asp Tyr Tyr Phe Asp Ser Tyr Ala35 40 45His Phe Gly Ile His Glu Glu Met Leu Lys Asp Glu Val Arg Thr Leu50 55 60Thr Tyr Arg Asn Ser Met Phe His Asn Arg His Leu Phe Lys Asp Lys65 70 75 80Val Val Leu Asp Val Gly Ser Gly Thr Gly Ile Leu Cys Met Phe Ala85 90 95Ala Lys Ala Gly Ala Arg Lys Val Ile Gly Ile Val Cys Ser Ser Ile100 105 110Ser Asp Tyr Ala Val Lys Ile Val Lys Ala Asn Lys Leu Asp His Val115 120 125Val Thr Ile Ile Lys Gly Lys Val Glu Glu Val Glu Leu Pro Val Glu130 135 140Lys Val Ala Ser Ser Ser Ala Ser Gly Trp Ala Thr Ala Ser Ser Thr145 150 155 160Ser Pro Cys Ser Thr Pro Cys Ser Met Pro Gly Thr Ser Val Ala Pro165 170 175Asp Gly Leu Ile Phe Pro Asp Arg Ala Thr Leu Tyr Val Thr Ala Ile180 185 190Glu Asp Arg Gln Tyr Lys Asp Tyr Lys Ile His Trp Trp Glu Asn Val195 200 205Tyr Gly Phe Asp Met Ser Cys Ile Lys Asp Val Ala Ile Lys Glu Pro210 215 220Leu Val Asp Val Val Asp Pro Lys Gln Leu Val Thr Asn Ala Cys Leu225 230 235 240Ile Lys Glu Val Asp Ile Tyr Thr Val Lys Val Glu Asp Leu Thr Phe245 250 255Thr Ser Pro Phe Cys Leu Gln Val Lys Arg Asn Asp Tyr Val His Ala260 265 270Leu Val Ala Tyr Phe Asn Ile Glu Phe Thr Arg Cys His Lys Arg Thr275 280 285Gly Phe Ser Thr Ser Pro Glu Ser Pro Tyr Thr His Trp Lys Gln Thr290 295 300Val Phe Tyr Met Glu Asp Tyr Leu Thr Val Lys Thr Gly Glu Glu Ile305 310 315 320Phe Gly Thr Ile Gly Met Arg Pro Asn Ala Lys Asn Asn Arg Asp Leu325 330 335Asp Phe Thr Ile Asp Leu Asp Phe Lys Gly Gln Leu Cys Glu Leu Ser340 345 350Cys Ser Thr Asp Tyr Arg Met Arg355 360(2)SEQ ID NO11的信息(i)序列特征(A)长度10氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型蛋白质(xi)序列描述SEQ ID NO11Gly Gly Phe Gly Gly Arg Gly Gly Phe Gly1 5 10(2)SEQ ID NO12的信息(i)序列特征(A)长度22碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性
(ii)分子类型cDNA(xi)序列描述SEQ ID NO7GGCTACAAAA TTCTCCATGA TG22(2)SEQ ID NO13的信息(i)序列特征(A)长度21碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓朴结构线性(ii)分子类型cDNA(xi)序列描述SEQ ID NO13TGGCCGTCAC ATACAGCGTG G 2权利要求
1.一种重组DNA分子，它含有一种核苷酸序列，该核苷酸序列编码一种能够被IFN-α或IFN-β诱导并具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO8所示氨基酸序列的IFNAR1受体结合蛋白质。
2.按照权利要求1所述的重组DNA分子，还含有一种与所述的编码IFNAR1受体结合蛋白质的序列以有义方向可操纵连接的启动子，从而当该重组DNA分子位于适当的表达宿主中时，所说的启动子能够表达所说的蛋白质。
3.按照权利要求2所述的重组DNA分子，其中，所说的启动子在人类细胞中是一种强的组成型启动子。
4.按照权利要求1所述的重组DNA分子，其中，所说的核苷酸序列是SEQ ID NO1或SEQ ID NO7。
5.一种重组DNA或RNA分子，它包括一种DNA分子，该DNA分子含有在有义或反义方向上的SEQ ID NO1或SEQ ID NO7或它们的片段，它们能够与编码可由干扰素诱导的IFNAR1受体结合蛋白质的mRNA杂交，从而阻止其表达；或者一种RNA分子，其序列与所说的DNA的序列相对应。
6.按照权利要求5所述的重组DNA或RNA分子，它含有一种RNA分子。
7.按照权利要求5所述的重组DNA或RNA分子，其中所说的序列是在有义方向上的。
8.按照权利要求5所述的重组DNA或RNA分子，其中所说的序列是在反义方向上的。
9.按照权利要求8所述的重组DNA或RNA分子，含有一种重组DNA分子，该重组DNA分子还含有一种与所说的序列以反义方向可操纵连接的启动子，从而使所说的启动子能够表达一种反义RNA，该反义RNA与编码可由干扰素诱导的IFNAR1受体结合蛋白质的有义RNA的全部或者其一部分互补。
10.按照权利要求9所述的重组DNA分子，其中所说的核苷酸序列是一种来自SEQ ID NO1或SEQ ID NO7的5’-末端的片断。
11.按照权利要求2，9和10中任何一项所述的重组DNA分子，其中所说的启动子是一种干扰素可诱导的启动子。
12.按照权利要求1-5和7-10中任何一项所述的重组DNA分子，它是一种表达载体。
13.一种宿主细胞，它能够表达与编码可干扰素诱导的IFNAR1受体结合蛋白质的有义RNA互补的反义RNA，该细胞含有一种权利要求12所述的表达载体。
14.一种延长移植组织存活性的方法，包括如下步骤将一种待向需要移植的病人中移植的组织或器官的细胞中导入含有权利要求8-10中任何一项所述的重组DNA分子的表达载体；以及将该组织或器官移植给病人。
15.一种在癌症治疗中增强对外源干扰素治疗的响应的方法，包括如下步骤将含有一种含有权利要求3或4所述的重组DNA分子的表达载体，和药物可接受载体的药物组合物直接施用在肿瘤上；以及随后施用外源干扰素治疗。
16.一种IFNAR1结合蛋白质，它具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO8的序列。
17.一种分子，它含有特异于权利要求16的IFNAR1结合蛋白质的抗体的抗原结合部分。
18.按照权利要求17所述的分子，它由一种单克隆抗体组成。
19.一种用于提供IFNAR1受体结合蛋白质的方法，包括，将按照权利要求1所述的DNA置于适当的表达宿主中，其置入方式应使在所说的宿主培养之后可得到所说蛋白质的表达，和培养所说的宿主，以得到所说蛋白质的表达。
全文摘要
分离出了新型蛋白质IR1B1和IR1B4,它们与I型IFN受体IFNAR1结合并在对IFN的细胞响应中发挥作用。可以施用在有义或反义方向上编码这种蛋白质的DNA,以增强或抑制对IFN的细胞响应。针对这些蛋白质的抗体可被用于分离这些新型蛋白质或用于免疫检测。
文档编号C07K14/715GK1243544SQ98801808
公开日2000年2月2日 申请日期1998年1月15日 优先权日1997年1月15日
发明者米歇尔·雷维尔, 卡罗莱娜·阿布拉莫维奇, 朱迪斯·E·舍巴特 申请人:耶达研究与发展有限公司