专利名称：一种用综合生物法提取肝素钠的新工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种肝素钠的提取的工艺，尤其是一种用综合生物法提取肝素钠的新工艺。
肝素钠是国内外药品市场上的一种贵重生化产品，色泽为白色，微黄或棕色，呈块状或粉末状，对热稳定，其分子趋于螺旋形的纤维分子，分子量在12000左右，易溶于水，不溶于酒精、丙酮等有机溶剂。是一种天然抗凝血物质，在人体内外均能延长凝血作用，常用于输血和防治各种血栓的形成或栓塞，也可用于澄清血浆脂质，降低胆固醇，治疗动脉硬化等病症，该产品的制取主要是以猪小肠粘膜为原料，采用盐解工艺或酶解工艺提取而成，其设备简单，投资小，见效，利润高。
盐解工艺是由以下步骤完成的(1)提取将新鲜的猪小肠粘膜放入提取锅中，按肠粘膜量的5％加入工业级粗盐，加热搅拌，用30％-40％的氢氧化钠溶液调节PH值9.0，等锅内温度升到50℃时停止加热；搅拌下保温55℃2小时，然后升温到90℃，停止搅拌，保持温度90℃15分钟，趁热用竹筛除去大的杂物，最后用100目尼龙布过滤提取液，滤液供下步吸附用。
(2)吸附等液体温度冷至50℃以下时，按原来小肠粘膜量加10％已处理好的杭州产D-204肝素专用树脂，搅拌吸附6-8小时，注意搅拌不可太快。以防弄碎树脂，后用尼龙布滤掉液体，收集树脂。
(3)清洗树脂倒入锅中，反复清洗，至水变清为止，树脂加入1.5倍量7％的盐水，浸泡1小时，滤掉盐水，然后再加2倍量8％精盐水浸泡1小时，滤干，收集树脂。
(4)洗脱用25％精盐水浸泡3小时，用量为淹没树脂面，要不时轻轻搅动，以便使洗脱液与树脂充分接触，使吸附在树脂上的肝素被解析下来，收集滤液，树脂可再用18％的盐水重复洗脱一次2小时，合并两次洗脱液。
(5)沉淀洗脱液加入等量95％的乙醇，搅拌30分钟沉淀过液(乙醇可回收)，虹吸去上清洗，滤出沉淀。沉淀加3倍量95％乙醇，搅匀静放6小时，虹吸上层乙醇清液，滤出沉淀。
(6)干燥将沉淀滤放在石灰缸中干燥得肝素钠粗品。
盐解工艺中第一步骤是非常关键的，猪小肠粘膜中肝素钠析出量的大小是由该步骤中所加盐量的大小所决定的。加盐的目的是为了破坏肠粘膜中肝素与碱性蛋白质的离子键，使肝素游离出来，以备下步吸附用。在现有工艺中，加盐量是肠粘膜量的5％且为一次加入，这样就使溶液中的盐量过大，由于透析作用就会使一部分肝素钠溶于游离状态的蛋白质中并随其流失，在滤液中形成一些杂蛋白造成提取液混浊和肝素钠收集量的减少。酶解工艺是利用生物活性酶将小肠粘膜蛋白质分解，从而使肝素钠游离出来，再经过吸附、清洗、沉淀和干燥步骤将肝素钠提取出来的一种方法。
由于生物活性酶可以很好地分解蛋白质，所可使肝素钠的析出量较大，同时也造成小肠粘膜中的一些灰尘、杂质等物质大量沉淀在滤液中而无法清除，含有杂质的滤液在吸附步骤中极易堵塞树脂中的吸附孔，从而造成树脂毒化问题，影响肝素钠的提取。
本发明的目的是提供一种成本低，可增加肝素钠提取量的新工艺。
本发明的工艺步骤是一种用综合生物法提取肝素钠的新工艺，按以下顺序制备(1)提取、过滤将制出的新鲜猪小肠粘膜移入消化锅中，在锅中加入事先准备好的0.5-1.0％绞碎的新鲜猪胰脏，该猪胰脏在使用前，先用绞肉机绞成糊状，并用澄清的石灰水调节PH值8，放置2小时后用，然后在搅拌下加热至40℃停火，再加入2.5％的盐，用烧碱溶液调节PH值8.5，加热至45℃保温2小时后，再加3％的盐，继续搅拌加热至55℃，保温30分钟，再调节PH值8.5，继续快速加热至95℃，然后趁热用竹筛过滤提取液，收集滤液暂存；(2)吸附待滤液温度降至50-55℃时按原来小肠粘膜量的10％加入已处理好的杭州产的D-204肝素专用树脂，以每分钟60转的速度搅拌吸附6-8小时，注意搅拌不可太快以防打碎树脂，然后用尼龙布袋滤去液体，收集树脂；(3)清洗树脂用清水清洗滤干后，加入树脂1.5倍量8％的盐水搅拌洗涤1小时，滤干收集树脂；(4)洗脱树脂再用1.2倍量20％左右的盐水洗脱1小时过滤树脂，收集滤液，树脂再加0.4倍量20％左右的盐水洗脱两次，每次各1小时，第一次洗脱液用于沉淀肝素钠，第二、三次洗脱液合并后用于下次的第一次洗脱；(5)去蛋白质、沉淀将第一次洗脱液用烧碱溶液调节PH值至10左右，用150目尼龙布过滤，弃去蛋白质，过滤后的滤液再用盐酸回调PH值7，密封沉淀24-36小时；(6)干燥、脱盐将收集的下部肝素钠药液用80％的3倍量的酒精脱盐，然后再用95％的酒精再脱水后滤干，装入搪瓷盆中用200W的灯泡烘烤，温度控制在55-60℃之间，烘干后得肝素钠粗品。
本发明的技术方案是将盐解工艺和酶解工艺有机地结合起来，用物理、化学综合生物法提取肝素钠将提取步骤中的一次加盐改为分二次加盐，这样就可解决现有工艺中存在的肝素钠收集率低的技术难题，从而提高肝素钠的收集量，降低生产成本。经过发明人试验，在肠粘膜中加入2.5％的盐就可足以破坏肝素与碱性蛋白的离子键，从而使肝素游离出来，这样就可避免肝素钠随蛋白质流失，通过两次小剂量的加盐就可使粘膜中的肝素钠完全游离出来，从而大大提高肝素钠的收集率，而加入猪胰脏就可通过胰脏中的活性物质较好地分解蛋白质，除去滤液中的杂蛋白，使提取液变得清澈，解决了长期困扰人们的提取液混浊，难以过滤的问题以及树脂毒化问题。
现举例说明新、老工艺之间的经济效益，利用老工艺生产1个亿的肝素粗品，需要猪小肠2200根，而利用新工艺生产1个亿的肝素粗品，只需猪小肠1600根，从而使生产成本大大降低，且利润可提高30％以上。
权利要求
1.一种用综合生物法提取肝素钠的新工艺，其特征是，按以下顺序制备(1)提取、过滤将制出的新鲜猪小肠粘膜移入消化锅中，在锅中加入事先准备好的0.5-1.0％绞碎的新鲜猪胰脏，该猪胰脏在使用前，先用绞肉机绞成糊状，并用澄清的石灰水调节PH值8，放置2小时后用，然后在搅拌下加热至40℃停火，再加入2.5％的盐，用烧碱溶液调节PH值8.5，加热至45℃保温2小时后，再加3％的盐，继续搅拌加热至55℃，保温30分钟，再调节PH值8.5，继续快速加热至95℃，然后趁热用竹筛过滤提取液，收集滤液暂存；(2)吸附待滤液温度降至50-55℃时按原来小肠粘膜量的10％加入已处理好的杭州产的D-204肝素专用树脂，以每分钟60转的速度搅拌吸附6-8小时，注意搅拌不可太快以防打碎树脂，然后用尼龙布袋滤去液体，收集树脂；(3)清洗树脂用清水清洗滤干后，加入树脂1.5倍量8％的盐水搅拌洗涤1小时，滤干收集树脂；(4)洗脱树脂再用1.2倍量20％左右的盐水洗脱1小时过滤树脂，收集滤液，树脂再加0.4倍量20％左右的盐水洗脱两次，每次各1小时，第一次洗脱液用于沉淀肝素钠，第二、三次洗脱液合并后用于下次的第一次洗脱；(5)去蛋白质、沉淀将第一次洗脱液用烧碱溶液调节PH值至10左右，用150目尼龙布过滤，弃去蛋白质，过滤后的滤液再用盐酸回调PH值7，密封沉淀24-36小时；(6)干燥、脱盐将收集的下部肝素钠药液用80％的3倍量的酒精脱盐，然后再用95％的酒精再脱水后滤干，装入搪瓷盆中用200W的灯泡烘烤，温度控制在55-60℃之间，烘干后得肝素钠粗品。
全文摘要
本发明公开了一种用综合生物法提取肝素钠的新工艺,该工艺是将现有的盐解工艺和酶解工艺有机地结合起来,用物理、化学综合生物法提取肝素钠,这样可解决现有工艺中长期困扰人们的提取液混浊,难以过滤问题和树脂毒化的问题,从而提高肝素钠的收集量,使生产成本降低30%。
文档编号C08B37/10GK1342714SQ0012447
公开日2002年4月3日 申请日期2000年9月11日 优先权日2000年9月11日
发明者董立胜 申请人:董立胜