专利名称：一种提取硫酸软骨素的方法
技术领域：
本发明涉及一种提取硫酸软骨素的方法。
背景技术：
硫酸软骨素，英文名Chondroitin Sulfate，是以健康动物(猪、牛、马、羊、鲨鱼等)软骨为原料制取的一种重要的多糖类生物医药产品，其主要成分为硫酸软骨素A、硫酸软骨素C及少量的硫酸软骨素D等异构体，由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-N-硫酸氨基半乳糖的多聚体组成。它是一种白色或微黄色粉末，吸水性强，易溶于水而成粘稠液体，不溶于乙醇、丙酮、乙醚和氯仿等有机溶剂，其盐类对热稳定。目前，提取硫酸软骨素主要采用碱-酶解提取法，该方法包括如下步骤1)碱提取、酶解原料(动物软骨)加水没过原料，用NaOH调pH9.0，升温至50-55℃，保温6小时；然后加入7％的新鲜胰脏，调pH8.0-8.5保温55-60℃6小时，搅拌升温至沸腾20分钟，过滤，得滤液；2)酒精沉淀取滤液加入1％重量NaCl降温至常温，然后按滤液∶酒精的体积比1∶2.5的比例加入95％乙醇，进行沉淀；3)氧化按沉淀∶水的重量比为1∶10的比例加入水，同时加入1％重量的NaCl，调pH10，加入2％重量双氧水搅拌2-3小时，过滤，留滤液；4)精制(酒精沉淀)、干燥取滤液按1∶2.5加入95％乙醇进行第二次沉淀，再用95％乙醇脱水两次，干燥得到硫酸软骨素成品。
采用该方法所生产的产品纯度不高，以新鲜猪喉骨为例，纯度在80-85％，而且该方法需要采用两次酒精沉淀，酒精消耗量大，成本高，收率低，约为3.5-4.0％。
发明内容
本发明的目的是提供一种提取硫酸软骨素的方法。
本发明所提供的提取硫酸软骨素的方法，包括如下步骤1)碱提取、酶解动物软骨得到滤液；2)树脂吸附、纯化用丙烯酸型强碱性离子交换树脂吸附步骤1)所得滤液，然后清洗树脂；3)洗脱将清洗后的树脂用2-6mol/L NaCl溶液洗脱树脂上吸附的硫酸软骨素得到洗脱液；4)精制、干燥洗脱液，得到硫酸软骨素成品。
其中，树脂的重量为滤液中硫酸软骨素重量的10-20倍；优选为15-18倍。清洗树脂常用的是重量百分浓度为2-5％的NaCl溶液。
本发明通常选用的丙烯酸型强碱性树脂是ROHMHAAS公司所生产的ABERLITE 98CL树脂；洗脱所用的NaCl溶液的浓度优选为3-4mol/L。
步骤4)精制、干燥通常可以采用乙醇来进行沉淀、干燥脱水。
本发明方法采用树脂吸附纯化代替了一步酒精沉淀步骤，减少了酒精的用量，并提高了产品的纯度和产量，产品纯度稳定在85％以上，产量可提高5-10％。本发明方法原料来源广泛，可以采用动物喉骨、气管、肩胛骨、大骨等硫酸软骨素含量小于5％的动物原料。
具体实施例方式
实施例1、1、碱提取、酶解称取100公斤猪喉骨，加水没过原料，用NaOH调pH9.0，升温至50-55℃，保温6小时；然后加入7％重量的新鲜胰脏，调节pH8.0-8.5，在55-60℃保温6小时后搅拌升温至沸腾20分钟，过滤，去除滤渣，获滤液200升；2、树脂吸附、纯化在200升上述滤液中加入丙烯酸型强碱性树脂ABERLITE 98CL树脂(ROHMHAAS公司)90公斤，搅拌吸附3-4小时，用5％(重量)NaCl清洗树脂，两次；3、洗脱用3.5mol/L的NaCl溶液洗脱吸附在树脂上的硫酸软骨素，搅拌洗脱2小时，得到洗脱液；4、精制、干燥按洗脱液∶乙醇为1∶2.5(重量)的比例加入95％乙醇，沉淀洗脱液；沉淀用95％的乙醇脱水两次，干燥得到硫酸软骨素的成品5.16公斤，纯度为87％，产品收率为5.1％。
实施例2、1、碱提取、酶解称取100公斤猪气管，加水没过原料，用NaOH调pH9.0，升温至50-55℃，保温6小时；然后加入7％重量的新鲜胰脏，调节pH8.0-8.5，在55-60℃保温6小时后搅拌升温至沸腾20分钟，过滤，去除滤渣，获滤液200升；2、树脂吸附、纯化在200升上述滤液中加入丙烯酸型强碱性树脂ABERLITE 98CL树脂(ROHMHAAS公司)60公斤，搅拌吸附3-4小时，用5％(重量)NaCl清洗树脂，两次；3、洗脱用5mol/L的NaCl溶液洗脱吸附在树脂上的硫酸软骨素，搅拌洗脱2小时，得到洗脱液；4、精制、干燥按洗脱液∶乙醇为1∶2.5(重量)的比例加入95％乙醇，沉淀洗脱液；沉淀用95％的乙醇脱水两次，干燥得到硫酸软骨素的成品3.72公斤，纯度为85.5％，产品收率为3.6％。
权利要求
1.一种提取硫酸软骨素的方法，包括如下步骤1)碱提取、酶解动物软骨得到滤液；2)树脂吸附、纯化用丙烯酸型强碱性离子交换树脂吸附步骤1)所得滤液，然后清洗树脂；3)洗脱将清洗后的树脂用2-6mol/L NaCl溶液洗脱树脂上吸附的硫酸软骨酸，得到洗脱液；4)精制、干燥洗脱液，得到硫酸软骨素成品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)所述树脂的重量为所述滤液中硫酸软骨素重量的10-20倍。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤2)所述树脂的重量为所述滤液中硫酸软骨素重量的15-18倍。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于步骤2)所述清洗用的是重量百分浓度为2.0-5.0％的NaCl溶液。
5.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于步骤3)所述丙烯酸型强碱性树脂为ABERLITE 98CL树脂。
6.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于步骤3)所述洗脱用NaCl溶液的浓度为3-4mol/L。
7.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于步骤4)所述精制、干燥采用乙醇进行沉淀、干燥脱水。
全文摘要
本发明公开了一种提取硫酸软骨素的方法。本发明方法，包括如下步骤1)碱提取、酶解动物软骨得到滤液；2)树脂吸附、纯化用丙烯酸型强碱性离子交换树脂吸附步骤1)所得滤液，然后清洗树脂；3)洗脱将清洗后的树脂用2－6mol/L NaCl溶液洗脱树脂上吸附的硫酸软骨酸，得到洗脱液；4)精制、干燥洗脱液，得到硫酸软骨素成品。本发明方法采用树脂吸附纯化代替了一步酒精沉淀步骤，减少了酒精的用量，并提高了产品的纯度和产量，产品纯度稳定在85％以上，产量可提高5－10％。
文档编号C08B37/00GK1903889SQ20051008556
公开日2007年1月31日 申请日期2005年7月28日 优先权日2005年7月28日
发明者宋加宾, 严东红 申请人:北京博赛斯生物技术有限公司