专利名称：：高含量硫酸软骨素的生产方法
技术领域：
：本发明涉及一种高含量硫酸软骨素的生产方法。
背景技术：
：硫酸软骨素是一种广泛存在于动物软骨组织中的酸性粘多糖。硫酸软骨素作为风湿病、关节炎、肩周炎、腰痛、神经痛、偏头痛等的治疗药物具有良好的效果，同时，硫酸软骨素具有防治动脉硬化和血栓及保存角膜等多种功能。此外，硫酸软骨素作为添加剂广泛用于食品与化妆品等行业。多年来，我国该产品受到国外市场的欢迎，主要出口欧美等国家。工业生产硫酸软骨素的方法通常包括中性盐法、碱法、酶法、碱一酶法、碱盐法等。这些方法生产出的硫酸软骨素的含量一般很难超过90%,有专利直接用胰酶一步水解软骨提取硫酸软骨素的方法，虽然得率很高，但产品含量达不到95%,同时可能存在硫酸盐等检查项目不合格的问题。目前精制的方法也有很多，如乙醇分级沉淀法、季胺盐络合法、区带电泳分离法、离子交换层析法等，这些方法在实验室及小试范围内可以收到理想的效果，但在工业化大生产中，这些方法具有成本高、能耗大等缺点。
发明内容本发明涉及一种生化药物原料，特别是一种高含量硫酸软骨素的生产工艺。本发明的目的是这样实现的一种高含量硫酸软骨素的生产方法，其组成包括强碱盐煮骨、碱提取，其特征是首先用胰匀浆液酶解、然后进行乙醇沉淀把硫酸软骨素沉淀出来、然后再次进行胰酶酶解，然后进行脱色、膜浓縮、乙醇沉淀、脱水、干燥。上述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的用胰匀浆液酶解是调节溶液pH8.5-9.0，升温至48'C-55°C，加入软骨质量8%-20%的胰匀浆液，反应6-8小时，用40%三氯醋酸检查水解物，如溶液不混浊或显微混浊，证明水解完全，用盐酸调节pH4.6-6，迅速升温至70'C-80'C，停止加热，过滤。上述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的再次进行胰酶酶解是沉淀加3-10倍量水溶解，在pH8.5-9.0、48°C-55。C条件下加入O.0496-0.5%胰酶，反应5-7小时。上述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的脱色为溶液pH9-10，升温至70'C-80°C，加入O.1%-0.5%活性炭，吸附10分钟，过滤，再在滤液中加入O.5%-2.5%活性炭，脱色l-2小时，过滤。上述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的浓縮的滤液用有机膜进行超滤浓缩，其中超滤膜的截流分子量为10，000-20，OOO道尔顿，浓缩到原溶液体积的1/3-1/5，浓缩液中加入乙醇，使浓度达70%，硫酸软骨素沉淀析出。上述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是第一次酶解用胰匀浆液作为复合酶载体，所述的胰匀浆液是将新鲜或冷冻的动物胰脏用组织匀浆机破碎制成，第二次酶解用胰酶进行酶解。上述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的脱色是用活性炭处理两次，第一次脱色活性炭的浓度为0.1%-0.5%，时间为10分钟，第二次脱色活性炭的浓度为0.5%-2.5%，时间为l-2小时。这个技术方案有以下有益效果1.本发明碱的使用量少，为软骨质量的4%-6%。碱提取后用胰匀浆液酶解，胰匀浆液中含有多种活性酶，可以消化掉大部分与硫酸软骨素结合的蛋白质及其他物质。胰匀浆液用量为原料重量的8-20%，生产成本可降低20%-10%2.本发明用不同浓度的活性炭处理滤液，分别达到吸附杂质与脱色的作用。用截留分子量为10，000-20，OOO道尔顿的有机膜进行超滤浓缩，能够除去解离下来的小分子蛋白质或多肽及无机盐类杂质，同时起到富集硫酸软骨素溶液的作用。用该方法生产出的硫酸软骨素各项指标均符合出口标准，含量高达95%以上。3.本发明耗能小、成本低，生产工艺简单。实施例1:将洁净猪鼻骨500kg投入提取灌，煮骨，碱盐提取。加入盐酸(1:1)调pH8.7，升温至49'C,加入100kg胰匀浆液，保持49'C水解6小时。取少量溶液用滤纸过滤，滤液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不产生浑浊，证明水解完全。加入盐酸(l:l)测pH4.8，迅速升温至75'C，停止搅拌，静置1小时。用管道将上清液虹吸入马尾槽过滤，滤液打入沉淀灌，搅拌加入乙醇，使浓度达70%。搅拌30分钟，停止搅拌，静置分层。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不锈钢桶中，加4倍量水溶解，边搅拌边加入496氢氧化钠溶液，测pH8.8，升温到52'C，加入胰酶0.2kg，酶解7小时，调溶液pH10，升温至80'C，加入2kg活性炭，吸附10分钟，过滤，滤液中加入10kg脱色1.5小时，过滤。滤液用分离分子量为10,000-20,000道尔顿的有机膜浓縮3倍，浓縮液中加入乙醇，使浓度达70%，得沉淀。沉淀用95%乙醇脱水两次，50。C减压干燥3小时，粉碎得硫酸软骨素成品。实施例2:将洁净牛小骨500kg投入提取灌，加入纯化水至浸没软骨，煮骨，碱盐提取。加入盐酸(1:1)调pH8.8,升温至50'C,加入85kg胰匀浆液，保持50。C水解8小时。取少量溶液用滤纸过滤，滤液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不产生浑浊，证明水解完全。加入盐酸(1:1)测P服.O，迅速升温至78'C，停止搅拌，静置2小时。用管道将上清液虹吸入马尾槽过滤，滤液打入沉淀灌，搅拌加入乙醇，使浓度达66%。搅拌30分钟，停止搅拌，静置分层。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不锈钢桶中，加10倍量水溶解，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液，测pH9.O，升温到48X:,加入胰酶0.15kg，酶解6.5小时，调溶液pH9.8，升温至78'C,加入0.75kg活性炭，吸附10分钟，加入3.75kg活性炭，脱色1.5小时，过滤。滤液用分离分子量为10，000-20，000道尔顿的有机膜浓缩3.5倍，浓縮液中加入乙醇，使浓度达709t,得沉淀。沉淀用95%乙醇脱水两次，5(TC减压干燥3小时，粉碎得硫酸软骨素成品。实施例3:将洁净猪喉软骨500kg投入提取灌，加入纯化水至浸没软骨，煮骨，碱盐提取。加入盐酸(1:1)调pH9.0，升温至52。C,加入100kg胰匀浆液，保持52'C水解7.5小时。取少量溶液用滤纸过滤，滤液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不产生浑浊，证明水解完全。加入盐酸(1:1)测pH4.6，迅速升温至78°C,停止搅拌，静置2小时。用管道将上清液虹吸入马尾槽过滤，滤液打入沉淀灌，搅拌加入乙醇，使浓度达68%。搅拌30分钟，停止搅拌，静置分层。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不锈钢桶中，加4倍量水溶解，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液，测pH9.0，升温到48°C，加入胰酶0.125kg，酶解6.5小时，调溶液pH9.6，升温至78-C，加入1,25kg活性炭，吸附10分钟，加入活性炭6.25kg，脱色1.5小时，过滤。滤液用分离分子量为10,000-20，OOO道尔顿的有机膜浓縮3.5倍，浓缩液中加入乙醇，使浓度达70%，得沉淀。沉淀用95%乙醇脱水两次，5(TC减压干燥3小时，粉碎得硫酸软骨素成品。实施例4-将洁净羊鼻软骨500kg投入提取灌，加入纯化水至浸没软骨，煮骨，碱盐提取。加入盐酸(1:1)调pH8.6,升温至54-C,加入100kg胰匀浆液，保持54'C水解7.5小时。取少量溶液用滤纸过滤，滤液置于10ml比色管中，加入5滴4096三氯乙酸溶液，溶液不产生浑浊，证明水解完全。加入盐酸(1:1)测pH4.6，迅速升温至76""C，停止搅拌，静置2小时。用管道将上清液虹吸入马尾槽过滤，滤液打入沉淀灌，搅拌加入乙醇，使浓度达68%。搅拌30分钟，停止搅拌，静置分层。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不锈钢桶中，加4倍量水溶解，边搅拌边加入496氢氧化钠溶液，测pH8.7，升温到52。C，加入胰酶0.5kg，酶解7小时，调溶液pH9.5，升温至77。C，加入lkg活性炭，吸附IO分钟，加入活性炭5kg，脱色1.5小时，过滤。滤液用分离分子量为10，000-20，000道尔顿的有机膜浓縮3.5倍，浓縮液中加入乙醇，使浓度达70%，得沉淀。沉淀用95%乙醇脱水两次，5(TC减压干燥3小时，粉碎得硫酸软骨素成品。实施例5:将洁净羊小骨500kg投入提取灌，加入纯化水至浸没软骨，煮骨，碱盐提取。加入盐酸(1:1)调pH9.0，升温至53'C,加入90kg胰匀浆液，保持53'C水解7小时。取少量溶液用滤纸过滤，滤液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不产生浑浊，证明水解完全。加入盐酸(1:1)测pH4.6,迅速升温至78"C，停止搅拌，静置2小时。用管道将上清液虹吸入马尾槽过滤，滤液打入沉淀灌，搅拌加入乙醇，使浓度达66%。搅拌30分钟，停止搅拌，静置分层。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不锈钢桶中，加10倍量水溶解，边搅拌边加入496氢氧化钠溶液，测PH8.5，升温到48°C，加入胰酶0.5kg，酶解6.5小时，调溶液pH10，升温至75。C，加入0.9kg活性炭，吸附IO分钟，加入活性炭4.5kg，脱色1.5小时，过滤。滤液用分离分子量为10，000-20，000道尔顿的有机膜浓縮3.5倍，浓縮液中加入乙醇，使浓度达70%,得沉淀。沉淀用9596乙醇脱水两次，5(TC减压干燥3小时，粉碎得硫酸软骨素成品。实施例6:将洁净鸡胸骨500kg投入提取灌，加入纯化水至浸没软骨，煮骨，碱盐提取。加入盐酸(1:1)调pH8.9，升温至5(TC，加入40kg胰匀浆液，保持5(TC水解7.5小时。取少量溶液用滤纸过滤，滤液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不产生浑浊，证明水解完全。加入盐酸(1:1)测pH4.6，迅速升温至77'C，停止搅拌，静置2小时。用管道将上清液虹吸入马尾槽过滤，滤液打入沉淀灌，搅拌加入乙醇，使浓度达60%。搅拌30分钟，停止搅拌，静置分层。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不锈钢桶中，加3倍量水溶解，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液，测pH8.8，升温到55'C，加入胰酶0.5kg，酶解7小时，调溶液pH9.6，升温至70'C，加入1.5kg活性炭，吸附IO分钟，加入活性炭7.5kg,脱色1小时，过滤。滤液用分离分子量为10，000-20，000道尔顿的有机膜浓縮3.5倍，浓缩液中加入乙醇，使浓度达67%,得沉淀。沉淀用95%乙醇脱水两次，5(TC减压干燥3小时，粉碎得硫酸软骨素成品。实施例7:将洁净鸭胸骨500kg投入提取灌，加入纯化水至浸没软骨，煮骨，碱盐提取。加入盐酸(1:1)调pH8.5，升温至55'C,加入40kg胰匀浆液，保持55t:水解6.5小时。取少量溶液用滤纸过滤，滤液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不产生浑浊，证明水解完全。加入盐酸(1:1)测pH6，迅速升温至80。C，停止搅拌，静置2小时。用管道将上清液虹吸入马尾槽过滤，滤液打入沉淀灌，搅拌加入乙醇，使浓度达70%。搅拌30分钟，停止搅拌，静置分层。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不锈钢桶中，加5倍量水溶解，边搅拌边加入4%氢氧化钠溶液，测pH9.0，升温到48'C，加入胰酶0.5kg，酶解5小时，调溶液pH9,升温至70'C，加入lkg活性炭，吸附10分钟，加入活性炭5kg，脱色2小时，过滤。滤液用分离分子量为10，000-20，000道尔顿的有机膜浓缩3.5倍，浓缩液中加入乙醇，使浓度达70%，得沉淀。沉淀用9596乙醇脱水两次，5(TC减压干燥3小时，粉碎得硫酸软骨素成品。实施例8:将洁净牛鼻骨500kg投入提取灌，加入纯化水至浸没软骨，煮骨，碱盐提取。加入盐酸(1:1)调pH8.5,升温至48'C，加入100kg胰匀浆液，保持5(TC水解8小时。取少量溶液用滤纸过滤，滤液置于10ml比色管中，加入5滴40%三氯乙酸溶液，溶液不产生浑浊，证明水解完全，加入盐酸(1:1)测pH4.6，迅速升温至70'C，停止搅拌，静置2小时。用管道将上清液虹吸入马尾槽过滤，滤液打入沉淀灌，搅拌加入乙醇，使浓度达68%。搅拌30分钟，停止搅拌，静置分层。虹吸出上清醇液，沉淀物放入不锈钢桶中，加4倍量水溶解，边搅拌边加入496氢氧化钠溶液，测pH8.5,升温到5(TC,调溶液pH8.5加入胰酶0.6kg,酶解6小时，调PH值9.3，加入lkg活性炭，吸附脱色十分钟过滤。滤液调PH6.8升温至80。C,加入6kg活性炭，过滤，滤液用分离分子量为10，000-20,000道尔顿的有机膜浓縮4倍，浓縮液中加入乙醇，使浓度达65%，得沉淀。沉淀用95%乙醇脱水两次，60'C减压干燥5小时，粉碎得硫酸软骨素成品。检验结果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>权利要求1.一种高含量硫酸软骨素的生产方法，其组成包括强碱盐煮骨、碱提取，其特征是首先用胰匀浆液酶解、然后进行乙醇沉淀把硫酸软骨素沉淀出来、然后再次进行胰酶酶解，然后进行脱色、膜浓缩、乙醇沉淀、脱水、干燥。2.根据权利要求l所述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的用胰匀浆液酶解是调节溶液pH8.5-9.0，升温至48'C-55°C,加入软骨质量8%-20%的胰匀浆液，反应6-8小时，用40%三氯醋酸检査水解物，如溶液不混浊或显微混浊，证明水解完全，用盐酸调节pH4.6-6，迅速升温至70'C-80'C，停止加热，过滤。3.根据权利要求1或2所述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的再次进行胰酶酶解是沉淀加3-10倍量水溶解，在PH8.5-9.0、48。C-55'C条件下加入0.04%-0.5%胰酶,反应5-7小时。4.根据权利要求1所述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的脱色为溶液pH9-10，升温至70'C-80'C，加入0.1%-0.5%活性炭，吸附10分钟，过滤，再在滤液中加入0.5%-2.5%活性炭，脱色1-2小时，过滤。5.根据权利要求1或2所述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的浓縮的滤液用有机膜进行超滤浓縮，其中超滤膜的截流分子量为10，000-20，OOO道尔顿，浓縮到原溶液体积的1/3-1/5，浓縮液中加入乙醇，使浓度达70%，硫酸软骨素沉淀析出。6.根据权利要求1或2所述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是第一次酶解用胰匀浆液作为复合酶载体，所述的胰匀浆液是将新鲜或冷冻的动物胰脏用组织勾浆机破碎制成，第二次酶解用胰酶进行酶7.根据权利要求1或4所述的高含量硫酸软骨素的生产方法，其特征是所述的脱色是用活性炭处理两次，第一次脱色活性炭的浓度为0.l%-0.5%,时间为10分钟，第二次脱色活性炭的浓度为0.5%-2.596，时间为1-2小时。全文摘要高含量硫酸软骨素的生产方法。本发明涉及一种高含量硫酸软骨素的生产方法。目前精制硫酸软骨素的生产方法有很多，如乙醇分级沉淀法、季胺盐络合法、区带电泳分离法、离子交换层析法等，这些方法在实验室及小试范围内可以收到理想的效果，但在工业化大生产中，这些方法具有成本高、能耗大等缺点。其组成包括煮骨、碱提取，首先用胰匀浆液酶解、然后进行乙醇沉淀把硫酸软骨素沉淀出来、然后再次进行胰酶酶解，然后进行脱色、膜浓缩、乙醇沉淀、脱水、干燥。本发明用于生产高含量的硫酸软骨素。文档编号C08B37/08GK101392035SQ20071014434公开日2009年3月25日申请日期2007年9月21日优先权日2007年9月21日发明者赵世祥申请人:哈尔滨奥霖药业有限公司