一种茶藨子木层孔菌多糖及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种茶藨子木层孔菌多糖及其制备方法和应用，属于多糖领域。本发明制备的茶藨子木层孔菌多糖，结构新颖，是首次分离得到；其结构含有可重复的单元结构，该可重复单元结构由3个(1→3)-β-D-葡萄糖构成主链，在主链的其中一个(1→3)-β-D-葡萄糖的C6位有一个分枝，分枝由3个(1→6)-β-D-葡萄糖串联而成。本发明还公开了一种茶藨子木层孔菌多糖的制备方法，该方法简单、适用，提取的多糖纯度高达93%以上，制备的多糖可用于制备治疗阿尔茨海默病等神经退行性疾病的药物。
【专利说明】一种茶薦子木层孔菌多糖及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及多糖领域，具体涉及一种茶薦子木层孔菌多糖及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 阿尔茨海默病，是一种在老年期发生的以进行性痴呆为主要特征的神经元退行性 疾病。随着世界人口日趋老龄化，阿尔茨海默病发病率越来越高，已成为继心血管疾病、癌 症和中风之后的第四大杀手，严重危害着老年人的身体健康和生活质量。目前用于治疗阿 尔茨海默病的药物大概有10余种，主要是拟胆碱药物和改善脑代谢的益智药，其中乙酰胆 碱酶抑制剂(拟胆碱药）是目前治疗阿尔茨海默病的一线药物，如他克林（Tacrine)、多奈派 齐（Donepezi 1)、利斯的明（Rivastigmine)、加兰他敏（Galanthamine)和石杉碱甲等。临床 上应用的这些药物只能缓解早期病人的认知障碍，提供适度的症状改善作用，无法阻止病 情的进展。到目前为止，仍缺乏对因治疗和控制疾病进程的有效药物。
[0003] 神经生长因子（nerve growth factor, NGF)，作为神经营养因子家族中最重要 的成员，对退化的多巴胺能神经元细胞及促进纹状体多巴胺系统神经元细胞的再生有潜在 的保护作用，有望治愈阿尔茨海默病。然而，NGF作为蛋白类物质，存在化学性质不稳定、体 内半衰期短、药代动力学特性欠佳等缺点，且不易通过血脑屏障，并且价格昂贵，限制了其 临床的应用。因此，积极寻找具有神经营养的"NGF"样的其他化合物用于阿尔茨海默病的 治疗具有重要的意义。
[0004] 茶薦子木层孔菌多糖是从药用真菌茶薦子木层孔菌（Phellinus ribis)中分离获 得的具有神经营养活性的均一多糖组分，研究表明其在10 Kg/ml-150l^g/ml范围内能够显 著促进NGF介导的PC12神经突的生长，可望开发成阿尔茨海默病等神经退行性疾病治疗的 候选药物。关于茶薦子木层孔菌多糖神经营养作用的研究在本发明完成之前没有相关报 道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种具有药用价值的茶薦子木层孔菌多糖及其制备方法 和应用。本发明的茶薦子木层孔菌多糖，结构新颖，是首次分离得到，命名为PRG ;其制备方 法简单、适用，提取的多糖纯度高达93%以上。该产品可用于制备治疗阿尔茨海默病等神经 退行性疾病的药物。
[0006] 本发明采用以下技术方案： 一种茶薦子木层孔菌多糖，其特征在于，其单糖组成为3-D-葡萄糖，其结构中有可重 复单元结构；所述可重复单元结构由3个（1 - 3)-0-D-葡萄糖构成主链，在主链的其中 一个（1 - 3) - P -D-葡萄糖的C6位有一个分枝，分枝由3个（1 - 6) - P -D-葡萄糖串联而 成，其重复单元结构式如下：
【权利要求】
1. 一种茶薦子木层孔菌多糖，其特征在于，其单糖组成为β-D-葡萄糖，其结构中有可 重复单元结构；所述可重复单元结构由3个（1 - 3)-β-D-葡萄糖构成主链，在主链的其中 一个（1 - 3) - β -D-葡萄糖的C6位有一个分枝，分枝由3个（1 - 6) - β -D-葡萄糖串联而 成，其重复单元结构式如下：
2. 根据权利要求1所述的茶薦子木层孔菌多糖，其特征在于，所述茶薦子木层孔菌多 糖中末端匍萄糖、（1 - 3) - β-D-匍萄糖、（1 - 6) - β-D-匍萄糖和（1 - 3,6) - β-D-匍 萄糖的组分摩尔比约为1:2:2:1 ;所述的茶薦子木层孔菌多糖，重均分子量为5. 16 X 103Da。
3. -种权利要求1所述的茶薦子木层孔菌多糖的制备方法，其特征在于，它包括以下 步骤： (1) 水提：取茶薦子木层孔菌子实体粗粉，加20倍-40倍重量的蒸馏水，90°C-KKTC提 取4次，每次4h-6h，滤过，合并滤液，浓缩，加乙醇至含醇量80%，静置24h，离心，得茶薦子木 层孔囷总多糖粗品； (2) 去蛋白：将步骤（1)所得的总多糖粗品溶于蒸馏水中，用蛋白酶酶解，灭活并离心 除去变性蛋白酶，离心所得上清液加入有机溶剂，振荡，离心，除去下层有机相和中间蛋白 层，重复有机溶剂处理的步骤直至无白色沉淀产生，得到去蛋白后的多糖水提液； (3 )分级醇沉：将步骤（2 )中的水提液浓缩，加乙醇至含醇量50%，离心，弃去沉淀物，上 清液继续加乙醇至含醇量80%，静置，离心，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥，得 茶薦子木层孔菌分级多糖粗品； (4)柱层析：将步骤（3)得到的茶薦子木层孔菌分级多糖粗品溶解后经DEAE-纤维素柱 层析，苯酚-硫酸法检测多糖，收集第二洗脱峰的洗脱液后将其再经凝胶柱层析，苯酚-硫 酸法检测多糖，收集主峰的洗脱液，洗脱液经浓缩、透析和冻干后得到本发明的茶薦子木层 孔菌多糖。
4. 根据权利要求3所述的茶薦子木层孔菌多糖的制备方法，其特征在于，步骤（1)中， 所述离心速度为3000rpm-4000rpm，时间为15min_30min。
5. 根据权利要求4所述的茶薦子木层孔菌多糖的制备方法，其特征在于，步骤（1)中， 加入茶薦子木层孔菌30倍重量的蒸馏水，提取温度为95°C，提取时间为每次6h，离心速度 为3000rpm，离心时间为20min。
6. 根据权利要求3所述的茶薦子木层孔菌多糖的制备方法，其特征在于，步骤（2)中， 所述蛋白酶为胰蛋白酶；所述有机溶剂为氯仿和正丁醇，所述氯仿和正丁醇的体积比为5 : 1〇
7. 根据权利要求3所述的茶薦子木层孔菌多糖的制备方法，其特征在于，步骤（3)中， 所述乙醇为无水乙醇；离心速度为3000rpm，离心时间为20min。
8. 根据权利要求3所述的茶薦子木层孔菌多糖的制备方法，其特征在于，步骤（4)中， 所述DEAE-纤维素柱层析的条件为：分步洗脱，洗脱液依次为蒸馏水、0. 05mol/L NaCl溶 液、0· lmol/L NaCl 溶液和 0· 2mol/L NaCl 溶液，流速为 2ml/min。
9. 根据权利要求3所述的茶薦子木层孔菌多糖的制备方法，其特征在于，步骤（4)中， 所述的凝胶为Superdex 30,凝胶过滤层析条件为：洗脱液为0.05mol/L NaCl溶液，流速为 0· 5ml/min〇
10. -种权利要求1所述的茶薦子木层孔菌多糖在制备治疗神经退行性疾病的药物中 的应用。
【文档编号】C08B37/00GK104292351SQ201410484913
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年9月22日 优先权日:2014年9月22日
【发明者】刘玉红, 周洪雷, 蒋海强, 徐凌川 申请人:山东中医药大学