一种用作抗肥胖剂的化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品化学领域，具体而言，本发明涉及用作抗肥胖的化合物。
【背景技术】
[0002] 肥胖是现代社会中最严重的疾病之一，其主要原因是脂肪的过量摄取。此外已知， 脂肪的过量摄取不仅会产生肥胖症状，而且还会产生起因于肥胖的糖尿病、高血脂症、高血 压、动脉硬化等症状。在内脏脂肪型肥胖的基础上再加上高血糖?高血压?脂质异常中的 任何2项以上的状态，被称为代谢综合症（内脏脂肪综合症），由于产生心脏病、脑中风症 状的危险性很高，所以近年来被视为问题。作为针对肥胖的治疗药，例如罗氏鲜（Xenical) (注册商标）作为肥胖改善药在市售，罗氏鲜（Xenical)是利用脂肪酶抑制活性而具有抑制 从肠道吸收脂肪的作用，但报道有脂肪便、排便次数增加、软便、腹泻、腹痛等副作用，难于 说一定安全。
[0003] 为了预防肥胖，通过限制饮食来减少摄取热量虽然是有效的手段，但必须接受严 格的营养指导，在日常生活中在很多情况下难于实行。因此认为，安全且健康地抑制来自饮 食的脂肪被体内吸收，从治疗肥胖及与此相关的疾病或者从增进健康的目的来看，是实际 有用的策略。
[0004] 在这种背景下，证明安全且对人体有效的特定保健用食品的开发受到关注。到目 前为止，作为抑制餐后血清中性脂肪值升高的食品原料，已将通过胰脂肪酶抑制来抑制脂 肪吸收的球蛋白分解物、与三酰基甘油具有不同的消化吸收特性的二酰基甘油、由鱼油精 制而成的二十碳五烯 酸（EPA)、二十二碳六烯酸（DHA)等作为特定保健用食品而销售。
[0005] 此外，来自植物的脂肪酶抑制活性物质最近也日渐受到关注，特别是关于具有脂 肪酶抑制活性的多酚类，已报道了配合来自植物树皮的单宁、豆科植物豆茶决明中含有的 单宁类、类黄酮类及其糖苷、绿茶中的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯及表儿茶素没 食子酸酯的脂质吸收抑制食品，由菜椒、丛生口蘑、南瓜、舞茸、羊栖菜、绿茶、乌龙茶等的水 提取物组成的脂肪酶抑制剂，以黄酮及黄酮醇类、羟基苯甲酸类（没食子酸）、三萜类化合 物及其衍生物、罗望子的原花青素为有效成分的抗肥胖剂等。并且已知葡萄种子提取物的 脂肪酶抑制作用、来自五层龙的多酚的脂肪酶抑制作用和对大鼠的抗肥胖作用、乌龙茶提 取物对小鼠的抗肥胖作用等。此外还有关于茶中含有大量儿茶素类，其成分大多被分离?鉴 定、含有来自茶的成分的脂肪酶抑制剂的报道。其中，已知作为红茶、乌龙茶的色素而已知 的茶黄素，与其分子内没食子酸酯基的数量成比例地显示强的脂肪酶抑制活性。但是，这些 茶黄素类的含量、比率因茶的种类而不同。
[0006] 此外，a-葡萄糖苷酶抑制物质，通过抑制在小肠上皮上存在的a-葡萄糖苷酶， 抑制?延缓糖质的分解?吸收，具有血糖值升高抑制作用。因此，a-葡萄糖苷酶抑制物质 对于由慢性高血糖症引起的糖尿病、肥胖症等各种疾病有用。
[0007] 自从1933年在麦芽成分中发现a _葡萄糖苷酶抑制活性以来，发现了大量来自小 麦、豆类等植物的Ct -葡萄糖苷酶抑制物质。1966年从微生物代谢物中分离出了具有Ct -葡 萄糖苷酶抑制活性的野尻霉素，并确定了其结构。已知作为其类似物的1-脱氧野尻霉素从 桑叶的提取物中得到，其具有a -葡萄糖苷酶抑制活性，公开了不使其活性降低的提取方 法。
[0008] 此外还报道，从网状五层龙（Kothala Himbutu)的根的提取物中分离的具有亚砜 的带有13员环环多醇结构的物质，具有麦芽糖酶抑制活性。此外还报道，作为从牵牛花、紫 薯的根中分离出的花色素苷化合物，被二酰化后生成的花葵素、矢车菊素、芍药素的3-槐 糖苷 -5_葡萄糖苷（3-sophoroside-5-glucoside)具有麦芽糖酶抑制活性。此外确认，在茶 叶中含有的茶双没食子儿茶素ACTheasinensin A)、具有没食子酰基的茶黄素衍生物、含有 表阿夫儿茶精没食子酸酯作为结构单元的原花色素等具有麦芽糖酶抑制活性。但是，具有 没食子酰基的茶黄素衍生物虽然具有麦芽糖酶抑制活性，但茶叶中的含量为〇. 1~〇. 2%， 非常少。
[0009] 已报道红茶的茶黄素及绿茶的儿茶素类具有a _葡萄糖苷酶抑制活性（非专利文 献8)，并且确认，在儿茶素类中3位上有没食子酰基的表没食子儿茶素-3-0-没食子酸酯 (以下称为"EGCG"）、表儿茶素-3-0-没食子酸酯具有活性，在茶黄素类中茶黄素-3-0-没 食子酸酯、茶黄素-3, 3'-二-0-没食子酸酯具有活性。关于红茶的ct-葡萄糖苷酶抑制活 性，对其分离物进行了分析，已知通过发酵而进行聚合的高分子组分也有活性。
[0010] 另一方面，已知在制造红茶、乌龙茶的发酵过程中，在茶叶的多酚氧化酶等酶的作 用下，儿茶素或没食子酸等多酚类发生缩合，形成具有苯并环庚三烯酚酮环的化合物。
[0011] 报道茶中除茶黄素之外，还存在大量的含苯并环庚三烯酚酮环化合物。例如报道， 红掊酚衍生物的细胞凋亡诱导、表茶黄掊灵类用于食品的制造方法、或者作为茶黄素的三 聚体的二苯骈卓酸酮4(!1163(1让6112〇1：1'(^〇1〇116 4)的酶促制备法和在红茶中的存在等。此 外还知道各种含苯并环庚三烯酚酮环化合物的抗炎症作用。但是，对于茶黄素类、表茶黄 掊灵类之外的含苯并环庚三烯酚酮环化合物，尚不知道其与脂肪吸收相关的脂肪酶抑制作 用、与血糖值升高抑制作用相关的a-葡萄糖苷酶抑制作用。
【发明内容】
[0012] 本发明目的在于提供一种可用于食品中的抑制肥胖的化合物，其以式I结构所 示：
[0013] 作为本发明的抗肥胖剂的抑制剂，通过含有来自茶叶的提取化合物，显示优异的 脂肪酶抑制活性。本发明的脂肪酶抑制剂可利用于包括不损坏香味、嗜好性高且以降低中 性脂肪、促进健康为目的的饮食品在内的各种用途。为了抑制饮食中的脂肪吸收，最好在 进行用餐时同时摄取，将从茶中得到的有效成分强化后的饮料意义重大。特别是通过强化 这些成分，可提供以抗肥胖作用、促进健康为目的的饮料。
[0014] 作为本发明的抗肥胖剂的抑制剂，与以往已知的来自天然物的a-葡萄糖苷酶相 t匕，使用少量即可抑制来自饮食的淀粉、多糖的糖分的分解，抑制吸收。而且因为任一种化 合物均是茶类中含有的儿茶素、多酚的氧化物，所以香味、安全性优异，可长期摄取。
[0015] 此外，本发明的抗肥胖剂，由于含有作为来自饮食经验丰富的茶的成分的化合物， 所以可用于安全性高、副作用降低的医药组合物。 实施例
[0016] 下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方 法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备 方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中用到的所有原料和溶剂均购自 Sigma Biochemical and Organic Compounds for Research and Diagnostic Clinical Reagents公司；乌龙茶为普通商购产品。
[0017] 实施例1 :式I化合的制备 (1)将乌龙茶粉碎，溶解于适量氢氧化钠水溶液中，充分搅拌后溶解完毕得溶液。再滴 加乙酸至溶液pH值约为6-8 ;然后加入占粗品重量的10-40%的活性炭和20-40%的中性氧 化铝，10-20°C搅拌脱色15-30min过滤，收集滤液； ⑵搅拌下向上述滤液中缓慢加入乙酸，控温10-20°C搅拌至溶液pH值为6. 0±0. 2,搅 拌析出沉淀并养晶30分钟；再继续滴加乙酸，至溶液pH为5. 6~5. 8。缓慢降温至5°C，用 时约30分钟；在此温度下搅拌结晶30分钟；再继续降温至0~2°C，搅拌结晶1小时。过 滤收集沉淀；并用少量的丙酮对滤饼进行淋洗。
[0018] (3)将滤饼取出后，在25~30°C，下真空干燥4h，得到黄色的式I化合物。
[0019] i-NMR (300MHz，CD30D) : S 8. 38 (s，1H)，7. 69 (s，1H)，7. 54 (s，1H)，7. 33 (s，1H)，7. 2 0 (s, 1H), 4. 21-4. 29 (m, 2H), 4. 00 (s, 3H), 3. 89 (s, 3H), 3. 38-3. 54 (m, 2H), 3. 04-3. 21 (m, 5H) ,2. 85-2. 96 (m, 2H), 2. 78-2. 85 (m, 2H), 2. 37-2. 59 (m, 5H), 2. 16-2. 20 (m, 1H). 实施例2 :生物活性测试 脂肪酶活性的测定，通过在底物中使用荧光性4-甲基伞形酮的油酸酯（4-MU0;Sigma 公司制），测定通过反应生成的4-甲基伞形酮的荧光来实施。测定时缓冲液使用含有150mM NaCl、1. 36mM CaCl2& 13mM Tris-HCl (pH8. 0)。作为底物的 4-MU0,将形成 0? 1M 的 DMS0 溶 液后用上述缓冲液稀释4000倍后供给酶测定，此外脂肪酶，同样使用上述缓冲液将猪胰脂 肪酶（Sigma公司制）制成400U/ml溶液后供给酶测定。
[0020] 酶反应是在25°C条件下，在96孔微孔板上添加并混合50 ill的4-MU0缓冲液溶 液、25 ii 1蒸馈水（或试样水溶液）后，通过添加25 ii 1脂肪酶缓冲液溶液而开始。进行30 分钟反应后，添加100 Pi的0. 1M柠檬酸缓冲液（pH4. 2)使反应中止。用荧光微孔板检测 仪（Labsystem公司制Fluoroskan Asent CF)测定通过反应生成的4-甲基伞形酮的突光 (激发波长355nm、突光波长460nm)。
[0021] 被检试样的抑制活性，作为相对于对照（蒸馏水）的活性抑制50%所需的试样量 IC5Q(uM)而求出。式I化合物的脂肪酶已知活性为0. 512。
【主权项】
1. 一种用作抗肥胖剂的化合物，其特征在于以式I所示：2. -种抗肥胖的组合物，其特征在于含有式I化合物以及食物上可接受的助剂。
【专利摘要】本发明涉及一种用作抗肥胖剂的化合物，其结构如式I所示。I。
【IPC分类】A61P3/04, C07D487/04, A61K31/55, A23F3/16
【公开号】CN105712997
【申请号】CN201410717193
【发明人】张华春
【申请人】重庆宁牧生态农业有限公司