改性的糖脂及其制备和使用方法与流程

对序列表的参考作为文本文件通过efs-web递交序列表的正式文本经由efs-web作为2014年2月17日产生的具有文件名441420seqlist.txt且具有4.12千字节的大小的ascii格式化序列表电子递交且与本说明书同时提交。在该ascii格式化文件中包含的序列表为本说明书的一部分且通过引用整体结合到本文中来。关于联邦政府资助研究的声明本研究部分地由美国国立卫生研究院(nationalinstitutesofhealth)/国立过敏反应与传染性疾病研究所(nationalinstituteofallergyandinfectiousdiseases)补助5ro1ai45889提供资金。因此，美国政府对本发明具有一定的利益和权利。发明领域本发明通常涉及免疫学领域。具体地讲，本发明包括可用于调整免疫反应的糖脂的改性。发明背景自然杀伤t(nkt)细胞代表表达t细胞受体和nk-细胞受体两者的t淋巴细胞亚组且在桥连先天免疫性与获得性免疫性中起作用。kronenbergm和gapinl，natrevimmunol2:557-568(2002)。在激活时，nkt细胞可对对于包括单核球增生李斯特菌(l.monocytogenes)、结核分枝杆菌(m.tuberculosis)和硕大利什曼原虫(leishmaniamajor)的各种病原体的早期和延迟免疫性具有显著影响。kronenberg(2002)；beharsm和porcellisa,currtopmicrobiolimmunol314:215-250(2007)；emotom等，eurjimmunol29:650-659(1999)；ishikawah等，intimmunol12:1267-1274(2000)；和ransont等，jimmunol175:1137-1144(2005)。已经报道nkt细胞激活引起增强的cd4和cd8t细胞反应并诱发树状细胞(dc)成熟。nishimurat等，intimmunol12:987-994(2000)和silkjd等，jclininvest114:1800-1811(2004)。与识别mhc结合肽的常规t细胞不同，nkt细胞对由mhci类样蛋白质cd1d递呈的脂质抗原具有特异性。迄今为止已经鉴定出可由cd1d递呈以激活nkt细胞的包括自身来源的糖脂和细菌来源的糖脂的数种糖脂抗原。tsujim,cellmollifesci63:1889-1898(2006)。具有具有不变型vα14-jα18重排的t细胞受体的nkt细胞(inkt细胞)对于在由cd1d递呈时的鞘糖脂α-半乳糖苷神经酰胺(αgalcer)具有反应性。kronenbergm和gapinl,natrevimmunol2:557-568(2002)；kronenbergm,annurevimmunol23:877-900(2005)。近来研究已经显示抵抗疟原虫属(plasmodia)、杜氏利什曼虫(leishmaniadonovanii)、单核细胞增生利斯特氏菌和hiv的疫苗可通过经由同时施用作为佐剂的αgalcer激活inkt细胞来改进。gonzalez-aseguinolazag等，jexpmed195:617-624(2002)；dondjib等，europeanjournalofimmunology38:706-719(2008)；huangyx等，vaccine26:1807-1816(2008)；和enomoton等，femsimmunolmedmicrobiol51:350-362(2007)。作为治疗剂，αgalcer已经显示降低在小鼠中的疟原虫载荷并延长受结核分枝杆菌感染的小鼠的存活。gonzalez-aseguinolazag等，procnatlacadsciusa97:8461-8466(2000)；chackeriana等，infectionandimmunity70:6302-6309(2002)。在小鼠中单一注射αgalcer诱发ifnγ、il-12和il-4在血清中的分泌。fujiis等，immunolrev220:183-198(2007)。由αgalcer刺激cd1d约束的inkt细胞也引起包括nk细胞、树状细胞、b细胞和常规t细胞的免疫和发炎细胞的激活的迅速级联。nishimurat等，intimmunol12:987-994(2000)；kitamurah等，jexpmed189:1121-1128(1999)；fujiis等，jexpmed198:267-279(2003)。inkt细胞制造大量的il-4和ifnγ且该制造需要经由cd40-cd40配体相互作用实现的在inkt细胞和dc之间的直接接触。nishimurat等，intimmunol12:987-994(2000)。已经显示由inkt细胞制造的ifnγ对在鼠科肿瘤模型中的αgalcer的抗转移作用具有关键性作用。hayakaway等，eurjimmunol31:1720-1727(2001)；smythmj等，blood99:1259-1266(2002)。因此，inkt细胞的激活可通过影响早期细胞因子环境而在调整获得性免疫反应方面起作用，由此增强对传染性和发炎性疾病的宿主抵抗性。载有例如α-半乳糖苷神经酰胺的糖脂的可溶性cd1d蛋白质正被研发为免疫治疗剂。然而，其实用性受到在糖脂和蛋白质之间的非共价相互作用的不稳定性限制，这使其快速分解或被天然竞争性抑制剂替换并丧失体内活性。webbtj等，cancerres72:3744-3752(2012)。仍然需要研发共价连接糖脂到cd1d蛋白质以产生维持有效nkt-细胞激活性质的稳定且长寿命的复合物的方法。发明概述本发明涉及包含允许与例如cd1d的蛋白质的稳定共价连接的官能团的改性脂质；包含其的复合物、细胞和疫苗；及其制造和使用方法。改性糖脂/蛋白质复合物包含与蛋白质(例如，cd1d)物理缔合的改性糖脂。在一些实施方案中，所述改性糖脂包含二苯甲酮基团。因此，在一些实施方案中，所述改性糖脂/蛋白质复合物包含经由二苯甲酮键共价结合蛋白质(例如，cd1d)的糖脂。改性糖脂在充当共价结合糖脂与例如蛋白质的其它分子的工具方面得到应用。改性的神经酰胺类糖脂/cd1d复合物在增强或引发免疫反应的方法、增强自然杀伤t细胞的活性的方法和治疗或预防疾病的方法中得到应用。本发明涵盖以下实施方案。1.一种改性糖脂，其包含光反应性基团。2.实施方案1的改性糖脂，其中所述光反应性基团与所述糖脂的亲油性部分共价结合。3.实施方案1的改性糖脂，其中所述光反应性基团与所述糖脂的亲油性酰基链共价结合。4.实施方案3的改性糖脂，其中所述光反应性基团与所述糖脂的酰基链的端点共价结合。5.实施方案4的改性糖脂，其中所述酰基链为线性酰基链。6.实施方案5的改性糖脂，其中所述线性酰基链除了氢之外具有至少11个原子。7.实施方案5的改性糖脂，其中所述线性酰基链除了氢之外具有约11-约14个原子。8.实施方案5的改性糖脂，其中所述酰基链选自：以及其中y在存在时为-o-、-ch2-、-s-、-och2-、-sch2-、-ch2ch2-或直键，且prg为光反应性基团。9.实施方案1-8中任一项的改性糖脂，其中所述光反应性基团为二苯甲酮基团。10.实施方案1-9中任一项的改性糖脂，其中所述糖脂包括神经酰胺类糖脂，且其中所述光反应性基团与所述神经酰胺类糖脂的n-酰基亲油性部分共价结合。11.实施方案10的改性糖脂，其中所述神经酰胺类糖脂包括糖基神经酰胺或其类似物。12.实施方案11的改性糖脂，其中所述糖基神经酰胺或其类似物包括式i：其中r1为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或r1为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；或r1为c6-c27烷烃或烯烃，其中(i)所述c6-c27烷烃或烯烃被c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环取代，或(ii)所述c6-c27烷烃或烯烃包括在所述c6-c27烷基或烯基链内的c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环；r2为以下(a)-(e)中的一个：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为4-17的整数；r4为α-连接或β-连接的单糖，或当r1为直链或支链的c1-c27烷烃时，r4为：且a为o或-ch2。13.实施方案12的改性糖脂，其中r1为-(ch2)22ch3或-(ch2)24ch3。14.实施方案12或13的改性糖脂，其中r2为-ch(oh)-(ch2)13ch3。15.实施方案12-14中任一项的改性糖脂，其中r4为半乳糖基、甘露糖基、岩藻糖基或葡糖基。16.实施方案10的改性糖脂，其中所述神经酰胺类糖脂包括α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物。17.实施方案16的改性糖脂，其中所述α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物包括式ii：其中r1为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或r1为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；且r2为以下(a)-(e)中的一个：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为4-17的整数；18.实施方案17的改性糖脂，其中r2为-ch(oh)(ch2)xch3，其中x为4-13的整数。19.实施方案18的改性糖脂，其中r2为-ch(oh)-(ch2)13ch3。20.实施方案17-19中的任一个的改性糖脂，其中r1选自(ch2)9ch＝ch-ch2-ch＝ch(ch2)4ch3、(ch2)8ch＝ch-ch2-ch＝ch(ch2)4ch3、(ch2)7ch＝ch-ch2-ch＝ch(ch2)4ch3、(ch2)3ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-(ch2)4ch3、(ch2)3ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2-ch＝ch-ch2ch3、(ch2)7ch＝ch-ch2-ch＝ch＝(ch2)4ch3、(ch2)7ch＝ch-ch＝ch(ch2)5ch3、(ch2)8ch＝ch-ch＝ch(ch2)4ch3、(ch2)9ch＝ch-ch＝ch(ch2)5ch3、(ch2)6ch＝ch-ch＝ch-ch＝ch(ch2)4ch3、(ch2)6ch＝ch-ch＝ch-ch＝ch(ch2)4ch3和(ch2)7ch＝ch-ch＝ch-ch＝ch(ch2)3ch3。21.实施方案20的改性糖脂，其中双键为顺式或反式的。22.实施方案16的改性糖脂，其中所述α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物包括式iii：其中r为-c(o)r1，其中r1为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或r1为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；或r1为c6-c27烷烃或烯烃，其中(i)所述c6-c27烷烃或烯烃被c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环取代，或(ii)所述c6-c27烷烃或烯烃包括在所述c6-c27烷基或烯基链内的c2-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环；或r1为任选被取代的芳族环，或芳烷基，且r2为以下(a)-(e)中的一个：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为4-17的整数。23.实施方案22的改性糖脂，其中r1被氧基；羟基；卤素；苯基；-oc(o)r6；-or6；-c(o)r6或n(r6)2取代，其中r6各自独立地为被取代的c1-c6烷基或任选被卤素；羟基；-oc(o)r7；-or7；-c(o)r7或n(r7)2取代的被取代的芳族环，且其中r7各自为被取代的c1-c6烷基。24.实施方案22的改性糖脂，其中r1选自-继续的以及其中()表示r1附接到式iii的化合物的点。25.实施方案16的改性糖脂，其中所述α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物包括(2s,3s,4r)-1-o-(α-d-吡喃半乳糖)-n-二十六酰基-2-氨基-1,3,4-十八烷三醇(krn7000)或(2s,3s)-1-o-(α-d-吡喃半乳糖)-n-二十六酰基-2-氨基-1,3-十八烷二醇)。26.实施方案16的改性糖脂，其中所述α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物包括(2s,3s,4r)-1-ch2-(α-d-吡喃半乳糖)-n-二十六酰基-2-氨基-1,3,4-十八烷三醇(α-c-galcer)。27.实施方案1的改性糖脂，其中所述改性糖脂具有结构：28.实施方案1的改性糖脂，其中所述改性糖脂具有结构：29.实施方案1的改性糖脂，其中所述改性糖脂具有结构：30.实施方案1的改性糖脂，其中所述改性糖脂具有结构：31.实施方案1的改性糖脂，其中所述改性糖脂具有结构：32.实施方案1的改性糖脂，其中所述改性糖脂具有结构：33.实施方案1的改性糖脂，其中所述改性糖脂具有结构：34.改性糖脂/蛋白质复合物，其包含：蛋白质和实施方案1-33中任一项的改性糖脂，其中所述改性糖脂与所述蛋白质物理缔合。35.实施方案34的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述改性糖脂与所述蛋白质共价连接。36.实施方案34或35的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述蛋白质为cd1d。37.实施方案36的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述cd1d具有选自以下的氨基酸序列：a)与seqidno:1的氨基酸21-295至少90％相同的氨基酸序列；b)作为seqidno:1的氨基酸21-295列出的氨基酸序列；c)除了至少一个但小于10个保守氨基酸取代之外，与seqidno:1的氨基酸21-295相同的氨基酸序列；d)作为seqidno:1的氨基酸1-295列出的氨基酸序列；e)与seqidno:1的氨基酸1-295至少90％相同的氨基酸序列；f)除了至少一个但小于10个保守氨基酸取代之外，与seqidno:1的氨基酸21-295相同的氨基酸序列；g)在seqidno:1中列出的氨基酸序列；h)与seqidno:1至少90％相同的氨基酸序列；和i)除了至少一个但小于10个保守氨基酸取代之外与seqidno:1相同的氨基酸序列。38.实施方案36或37的改性糖脂/蛋白质复合物，其还包含与所述cd1d物理缔合的β2-微球蛋白。39.实施方案38的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述β2-微球蛋白具有选自以下的氨基酸序列：a)与seqidno:2的氨基酸21-113至少90％相同的氨基酸序列；b)作为seqidno:2的氨基酸21-113列出的氨基酸序列；c)除了至少一个但小于10个保守氨基酸取代之外，与seqidno:2的氨基酸21-113相同的氨基酸序列；d)在seqidno:2中列出的氨基酸序列；e)与seqidno:2至少90％相同的氨基酸序列；和f)除了至少一个但小于10个保守氨基酸取代之外与seqidno:2相同的氨基酸序列。40.实施方案36-39中任一项的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述改性糖脂/蛋白质复合物增强自然杀伤t(nkt)细胞的活性。41.实施方案36-40中任一项的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述改性糖脂/蛋白质复合物还包含对目标抗原具有特异性的抗体或其片段且其中所述抗体或其抗原结合片段与所述cd1d连接。42.实施方案41的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述抗原结合片段选自f(ab)片段、f(ab')2片段和单链抗体。43.实施方案41或42的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述目标抗原为肿瘤细胞的细胞表面标志物。44.实施方案43的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述细胞表面标志物选自cea、her2/neu、i型或ii型egfr、cd19、cd20、cd22、muc-1、psma或steap。45.实施方案44的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述细胞表面标志物为cea。46.实施方案41-45中任一项的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述cd1d附接到所述抗体的重链或所述抗原结合抗体片段的重链片段。47.实施方案41-45中任一项的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述cd1d附接到所述抗体的轻链或所述抗原结合抗体片段的轻链片段。48.实施方案37-47中任一项的改性糖脂/蛋白质复合物，其还包含抗原。49.实施方案48的改性糖脂/蛋白质复合物，其中所述抗原为选自病毒、细菌、真菌和肿瘤细胞的病毒或细胞的免疫原性多肽。50.一种组合物，其包含实施方案36-47中任一项的改性糖脂/抗体复合物和医药载剂。51.实施方案50的组合物，其中所述医药载剂选自盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油及其组合。52.一种治疗或预防在受试者中的疾病的方法，其包括向需要所述治疗或预防的受试者施用实施方案36-49中任一项的改性糖脂/蛋白质复合物或实施方案50或51的组合物，其中所述改性糖脂/蛋白质复合物以足以改变所述疾病的进展的量施用。53.实施方案52的方法，其中免疫反应相对于由未共价连接所述糖脂的蛋白质生成的免疫反应而增强或改进。54.实施方案52的方法，其中所述疾病选自病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病、寄生虫病、增生性疾病、自身免疫性疾病和炎性疾病。55.实施方案52的方法，其中所述疾病选自结核病、与结核病相似的肺病、淋巴腺炎、皮肤病、传播疾病、腺鼠疫、肺鼠疫、兔热病、军团病(legionairre'sdisease)、炭疽、伤寒、副伤寒、食源性疾病(foodborneillness)、李斯特菌病(listeriosis)、疟疾、hiv、siv、hpv、rsv、流行性感冒、肝炎(hav、hbv和hcv)、多发性硬化、糖尿病、sjogren氏综合征和癌症。56.一种诱发在受试者中相对于抗原的免疫反应的方法，其包括向所述受试者施用实施方案36-49中任一项的改性糖脂/蛋白质复合物或实施方案50或51的组合物。57.实施方案56的方法，其中所述改性糖脂/蛋白质复合物包含所述抗原。58.实施方案57的方法，其中所述抗原与所述蛋白质共价结合。59.实施方案56-58中任一项的方法，其中所述改性糖脂/蛋白质复合物以足以增强在所述受试者中自然杀伤t(nkt)细胞的活性的量施用。60.实施方案53-59中任一项的方法，其中所述免疫反应包括抗体反应。61.一种增强在受试者中对异源抗原的免疫反应的方法，其中所述方法包括对所述受试者施用所述异源抗原和与所述异源抗原的施用同时、在其之前或在其之后施用实施方案36-49中任一项的改性糖脂/蛋白质复合物或实施方案50或51的组合物。62.实施方案52-61中任一项的方法，其中所述受试者为哺乳动物。63.实施方案62的方法，其中所述哺乳动物为人类。64.一种合成包含二苯甲酮基团的式(vi)的改性糖脂的方法，所述方法包括以下步骤：激活式(iv)的羧酸衍生物以形成激活的酰基衍生物和偶合所述激活的酰基衍生物与式(v)的神经酰胺类糖脂由此形成式(vi)的包含二苯甲酮基团的改性糖脂其中g为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或g为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；或r1为c6-c27烷烃或烯烃，其中(i)所述c6-c27烷烃或烯烃被c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环取代，或(ii)所述c6-c27烷烃或烯烃包括在所述c6-c27烷基或烯基链内的c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环；或r1为任选被取代的芳族环，或芳烷基；r4为被取代或未被取代的糖或其类似物；a在存在时为-o-、-ch2-，或为直键，y为-o-、-ch2-或-s-，且r2为被取代或未被取代的c3-c40烷基、烯基或炔基链。65.根据实施方案64的方法，其中所述式(vi)的包含二苯甲酮基团的改性糖脂的r2为以下(a)-(e)中的一种：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为0-40的整数。66.根据实施方案65的方法，其中所述式(vi)的包含二苯甲酮基团的改性糖脂的r2为：-ch(oh)(ch2)xch3，其中x为4-17的整数。67.根据实施方案66的方法，其中所述式(vi)的包含二苯甲酮基团的改性糖脂的r2为-ch(oh)(ch2)13ch3。68.实施方案64-67中任一项的方法，其中g为：-(ch2)n-，其中n为0-20的整数且y为o。69.实施方案64-68中任一项的方法，其中：g为-(ch2)n-，其中n为0-20的整数且y为o；r2为-ch(oh)(ch2)xch3，其中x为4-17的整数；a为o；y为o；r4为α-半乳糖基。70.根据实施方案68的方法，其还包括合成式(iv)的羧酸衍生物的步骤，其中y为o，所述步骤包括：使二苯甲酮衍生物(a)与烷二醇衍生物(b)反应其中l为离去基团且n为0-20的整数，由此形式羟基衍生物(c)和氧化所述羟基衍生物得到所述式(iv)的羧酸衍生物，其中y为o。71.根据实施方案68的方法，其还包括合成式(iv)的羧酸衍生物的步骤，其中y为o，所述步骤包括：将二苯甲酮衍生物(a)转化成羟基二苯甲酮衍生物(d)使所述羟基二苯甲酮衍生物(d)与羧酸衍生物(e)反应其中l为离去基团且n为0-20的整数，由此形成所述式(iv)的羧酸衍生物，其中y为o。72.一种制造改性糖脂/蛋白质复合物的方法，所述方法包括以下步骤：a)使实施方案1-33中任一项的改性糖脂或通过实施方案64-71中任一项的方法制造的改性糖脂与蛋白质接触；b)用紫外光照射所述改性糖脂和所述蛋白质以制造改性糖脂/蛋白质复合物。73.实施方案72的方法，其中所述蛋白质为cd1d。74.实施方案72或73的方法，其中所述改性糖脂和所述蛋白质在溶液中接触并照射。附图简述图1示出合成αgalcer-二苯甲酮衍生物的示意图；图2示出合成αgalcer-二苯甲酮/cd1d复合物的示意图；图3示出作为评价糖脂结合的方法的有和没有糖脂配体的小鼠cd1d的荧光光谱；各种糖脂配体的结构可见于表1中。7dw8-5为不含与cd1d形成共价键的光反应性基团的具有c10-氟-苯基酰基部分的α-galcer类似物；图4示出使用鼠科cd1d-表达抗原递呈细胞的inkt杂交瘤刺激测定(测量il-2分泌)；图5示出使用人类cd1d-表达希拉细胞的inkt杂交瘤刺激测定(测量il-2分泌)；图6a-6b示出通过elisa使用特异性检测鼠科cd1d/αgalcer复合物的mabl363检测板结合的mcd1d的配体结合亲和性。图6a示出未用uv照射的样品且图6b示出已经用uv照射的样品。nd＝未分解；d＝分解。图7a-7b示出通过elisa使用检测鼠科cd1d/αgalcer复合物的inktdn3a4-1.2杂交瘤检测板结合的mcd1d的配体结合亲和性。图7a示出未用uv照射的样品且图7b示出已经用uv照射的样品；图8a-8b示出通过elisa使用mabl363直接比较具有mcd1d的db12-8和7dw8-5复合物。图8a示出未用uv照射的样品且图8b示出已经用uv照射的样品。ndiss或nodiss＝未分解；diss＝分解；图9a-9d：图9a-9b示出通过elisa使用mabl363直接比较具有mcd1d.cea融合蛋白的db12-8和7dw8-5复合物。图9c-9d示出10倍规模扩大对db12-8:mcd1d.cea的uv交联和分解的影响。图9a和9c示出未用uv照射的样品且图9b和9d示出已经用uv照射的样品。ndiss或nodiss＝未分解；diss＝分解；图10示出在用盐水或用30μg未共价装载在scd1d-抗-cea上的αgalcer或uv交联的db12-8:scd1d-抗-cea复合物注射之后2、10和24小时在小鼠血清中干扰素γ(ifng)和干扰白细胞素-2(il-2)细胞因子的动力学和量值；图11示出在实验开始时和在第2天和第8天再次用盐水或用30μg未共价装载在scd1d-抗-cea上的αgalcer或uv交联的db12-8:scd1d-抗-cea复合物三次注射之后由inkt细胞生成的细胞内ifng。在第三次注射之后1小时将小鼠处死并在固定且用cytofix/cytoperm(bd)透化之后用抗-ifng-apc将脾inkt细胞对于细胞内ifng染色。为了确定生成ifng的inkt细胞的百分数，将细胞导通(gate)对于cd3-fitc和αgalcer-装载的cd1d四聚物-pe的阳性染色并在facscalibur上通过流式细胞术对于细胞内ifng的表达评分；图12示出通过共价连接到scd1d-抗-cea融合蛋白的α-半乳糖苷神经酰胺对癌胚抗原(cea)-表达mc38肿瘤细胞的体内生长抑制。7只小鼠在移植后7天、11天、15天和20天用pbs(盐水)、3μg游离αgalcer或摩尔当量的共价连接到scd1d-抗cea的αgalcer(scd1d-anticea/α-galcer共价物)治疗。每2或3天测量肿瘤生长且在第24天将小鼠处死。**p＝0.0079(双向anova)。发明详述本发明提供可用于增强，即引发、刺激或增加，例如一次和/或二次免疫反应的组合物、分离的细胞、疫苗和方法。本文描述包含允许与例如cd1d的蛋白质稳定共价连接的例如二苯甲酮的官能团的改性糖脂。本文还提供了包含所述改性糖脂和物理缔合的蛋白质(例如，cd1d)的复合物及其合成和使用方法。在某些实施方案中，所述改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物通过影响cd1d约束的自然杀伤t(“nkt”)细胞的活性进一步增强免疫反应。如本文所述的改性糖脂和改性糖脂/蛋白质复合物可用于刺激合乎需要的免疫反应，例如对于分枝杆菌抗原、肿瘤、异源抗原或靶向分子的免疫反应。所述免疫反应可用于预防、治疗或缓解由例如分枝杆菌如导致人类的tb的结核分枝杆菌的细菌性病原体、其它传染物或肿瘤引起的疾病。在一些实施方案中，采用如在其它地方描述的某些形式的糖脂，本发明可用以将炎症或自身免疫反应从主导的th1反应重新定向到th2反应。实例可例如在美国专利申请公告2006/0052316号和2010/0183549号中见到，其各自通过引用整体结合到本文中来。天然免疫系统冲击着在对外来病原体的高度侵蚀性、保护性免疫反应与维持对正常组织的耐受性的需要之间的复杂平衡。近年来，已经日益增加地认识到在许多不同细胞类型之中的相互作用有助于维持该平衡。所述相互作用例如可引起由th1型t细胞生成前发炎性细胞因子(例如，干扰素-γ)或由抑制th1活性的th2型t细胞生成白细胞介素-4(il-4)的极化反应。在许多不同的动物模型中，已经显示t细胞极化到th1有利于对肿瘤或传染性病原体的保护性免疫，而t细胞极化到th2可为预防细胞介导的自身免疫疾病的发展的关键因素。确定免疫刺激是否将引起侵蚀性细胞介导的免疫或这类反应的下调的条件在各组织由相互作用以有利于不同免疫反应的抗原递呈细胞(apc)和淋巴细胞系的独特组构成的意义上是高度局部化的。例如，在最优条件下，局部化在正常组织中的树状细胞(dc)可主导地代表有利于致耐受性相互作用并充当细胞介导的自身免疫的成熟的谱系和阶段，而肿瘤或感染位点将吸引刺激有效细胞介导的免疫反应的成熟骨髓树状细胞。nkt细胞具有分泌th1细胞因子和th2细胞因子两者的不寻常能力且已经记载了在炎症、自身免疫和肿瘤免疫方面的有效细胞毒素以及调节功能(bendelac等，science268:863(1995)；chen和paul,jimmunol159:2240(1997)；和exley等，jexpmed186:109(1997))。还已知它们在经由其α-βtcr刺激时迅速生成大量的il-4和ifn-γ(exley等，j.exp.med.186:109(1997)。cd1d约束的nkt细胞为独特种类的非常规t细胞，其在限定在局部环境中免疫刺激的结果方面似乎起重要作用。它们同享表达t细胞和自然杀伤(nk)细胞谱系两者的标志物的较大nkt细胞种类。因此，nkt细胞被认为是像nk细胞一样的先天免疫的一部分且在人类中，其在正常个体中的频率可占总t淋巴细胞的高达2.0％(gumperz等，jexpmed195:625(2002)；lee等，jexpmed195:637(2002))。cd1d约束的nkt细胞与其它nkt细胞的区别在于其对于脂质和由单态mhc类ib分子cd1d递呈的糖脂质抗原具有特异性(kawano等，science278:1626-1629(1997))。cd1d为与β2-微球蛋白缔合且在结构上与传统mhci类分子有关的非mhc编码的分子。cd1d具有专门用于结合脂质尾部或疏水性肽的烃链的疏水性抗原结合袋。zeng等，science277:339-345,(1997)。已知cd1d结合海绵(marinesponge)来源的α-糖基化鞘脂、α-半乳糖苷神经酰胺(α-galcer)和有关分子例如具有α-连接的半乳糖或葡萄糖而不是甘露糖的神经酰胺类糖脂质抗原。kawano等，science278:1626-1629(1997)；和zeng等，science277:339-345(1997)。如本文论述，通过用α-galcer或结合抗原递呈细胞的cd1d的有关分子刺激激活cd1d约束的nkt细胞的能力大大促进该非常规t细胞亚组的功能分析。在缺乏炎症的情况下，已经显示cd1d约束的nkt细胞优先局部化在如胸腺、肝和骨髓的某些组织中(wilson等，trendsmolmed8:225(2002))，且已经在例如小鼠肝转移中研究了nkt细胞的抗癌活性。其中，cd1d约束的nkt细胞为表达高度保守的αβt细胞受体(tcr)的亚组，在本文中称为“inkt细胞”。在人类中，该不变型tcr由与vβ11缔合的vα24jα15构成，而在小鼠中，该受体包含高度同源的vα14jα18和vβ8.2。其它cd1d约束的nkt细胞表达更可变的tcr。cd1d约束的t细胞的tcr不变种类和tcr变化种类两者可通过结合载有α-galcer的cd1d-四聚体检测(benlagha等，jexpmed191:1895-1903(2000)；matsuda等，jexpmed192:741-754(2000)；和karadimitris等，procnatlacadsciusa98:3294-3298(2001))。如在本申请中定义的cd1d约束的nkt细胞(cd1d约束的nkt)包括表达不变型或变化型tcr并结合载有α-galcer或有关神经酰胺类糖脂质抗原的cd1d或被该cd1d激活的细胞。如在本申请中定义的cd1d约束的nkt细胞(cd1d-nkt)包括表达不变型或变化型tcr且结合载有α-galcer或有关鞘脂的cd1d或被该cd1d激活的细胞，所述有关鞘脂具有包括例如och的分子的α-连接的半乳糖或葡萄糖，其与α-galcer的不同之处在于具有缩短的长链鞘氨醇碱基(c5对c14)和酰基链(c24对c26)(miyamoto等，nature413:531-4(2001))。已经显示cd1d约束的nkt对于表达cd1d的目标具有直接的细胞毒素活性。然而，很可能cd1d约束的nkt对免疫反应的作用经由其它淋巴细胞通过直接相互作用而募集或者可能甚至更重要地通过经由与dc相互作用间接募集而放大。cd1d约束的nkt具有在免疫反应初期分泌大量il-4和ifn-γ的独特能力。ifn-γ的分泌诱发dc的激活，其生成白细胞介素-12(il-12)。il-12进一步刺激由nkt细胞进行的ifn-γ分泌并且引起nk细胞激活，其分泌更多的ifn-γ。因为cd1d约束的nkt能够快速地分泌大量的il-4和ifn-γ两者，所以免疫反应的极化将取决于前发炎性ifn-γ或抗炎性il-4细胞因子的作用是否占主导。已经报道这部分地随cd1d约束的nkt的不同亚组的相对频率而变。这些亚组包括(i)不变型cd1d约束的nkt群体，其对于cd4和cd8两者为阴性的且主导性地引起包括前发炎性ifn-γ和tnf-α分泌的th1型反应；和(ii)cd1d约束的nkt的单独群体，其为cd4+并且引起包括抗炎性th2-型细胞因子il-4、il-5、il-10和il-13分泌的th1型反应和th2型反应两者。(lee等，jexpmed195:637-41(2002)；andgumperz等，jexpmed195:625-36(2002))。另外，nkt细胞活性根据与cd1d结合的特定神经酰胺类糖脂区别地调整(参见，例如美国专利第7,772,380号)。本发明的组合物包括具有cd1d与这些功能上不同的神经酰胺类糖脂和有关的α-糖基神经酰胺的选择性缔合的实施方案。影响cd1d约束的nkt亚组的激活的局部因素包括细胞因子环境，且重要地包括募集到该环境的dc。已经显示神经酰胺类糖脂家族(即，α-半乳糖苷神经酰胺(α-galcer)和有关的α-糖基神经酰胺)通过鼠科nkt细胞刺激强烈的cd1d约束的反应(kawano等，1997)。这些化合物含有α-异头己糖(半乳糖或葡萄糖对于nkt细胞识别具有活性)，它们与在哺乳动物组织中通常存在的仅含有β-异头糖的神经酰胺相区别。已知这些化合物天然地存在于海绵中，它们最初自其来源分离且当证实α-galcer在注入载肿瘤的小鼠中时由于免疫激活而诱发显著的肿瘤排斥作用时其变得对免疫学家具有意义(kobayashi等，oncol.res.7:529-534(1995))。接着，该活性与α-galcer经由cd1d依赖机制快速激活nkt细胞的能力相联。现在已经显示α-galcer与cd1d结合，因此产生对于nkt细胞的tcr具有可测量的亲和性的分子复合物(naidenko等，jexp.med.190:1069-1080(1999)；matsuda等，jexp.med.192:741(2000)；benlagha等，jexp.med.191:1895-1903(2000))。因此，α-galcer提供可在体外和体内实现大多数nkt细胞的激活的有效试剂。最广泛研究的激活nkt的α-galcer，在文献中称为krn7000，为具有类似于天然形式的α-galcer的结构的合成分子，这些天然形式的α-galcer最初基于其在啮齿动物中的抗癌活性而从海绵中分离(kawano等，science278:1626-1629(1997)；kobayashi等，1995；iijima等，bioorg.med.chem.6:1905-1910(1998)；inoue等，exp.hematol.25:935-944(1997)；kobayashi等，bioorg.med.chem.4:615-619(1996a)和biol.pharm.bull.19:350-353(1996b)；uchimura等，bioorg.med.chem.5:2245-2249(1997a)；uchimura等，bioorg.med.chem.5:1447-1452(1997b)；motoki等，biol.pharm.bull.19:952-955(1996a)；nakagawa等，oncol.res.10:561-568(1998)；yamaguchi等，oncol.res.8:399-407(1996))。具有截断的鞘氨醇碱基的krn7000的一种合成类似物在实验性变应性脑脊髓炎(eae)的小鼠模型中显示增强的抑制自身免疫的能力(miyamoyo等，nature413:531-534(2001))。在α-galcer鞘氨醇碱基方面改变的其它变体在美国专利第5,936,076号中鉴定。从1997年11月到目前的众多文献已经研究了krn7000激活哺乳动物的免疫系统的机制(kawano等，science278:1626-1629(1997)；benlagha等，jexp.med.191:1895-1903(2000)；burdin等，eur.jimmunol.29:2014-2025(1999)；crowe等，j.immunol.171:4020-4027(2003)；naidenko等，jexp.med.190:1069-1080(1999)；sidobre等，j.immunol.169:1340-1348(2002)；godfrey等，immunol.today21:573-583(2000)；smyth和godfrey,nat.immunol.1:459-460(2000))。这些研究一致地显示krn7000作用的近似机制为该化合物与cd1d蛋白质结合，该cd1d蛋白质在大多数造血细胞以及一些上皮细胞及其它细胞谱系上表达。krn7000与cd1d的结合产生由称为自然杀伤t细胞(nkt细胞)的t淋巴细胞亚组的t细胞抗原受体(tcr)以高亲和性识别的分子复合物。krn7000/cd1d复合物的识别引起nkt细胞的迅速激活，nkt细胞存在于肝、脾及其它淋巴器官中且具有运输到潜在的任何组织的潜能。激活的nkt细胞快速地分泌各种趋化因子和细胞因子，并且具有激活例如树状细胞和自然杀伤(nk)细胞的其它细胞类型的能力。已经显示在由krn7000/cd1d复合物激活nkt细胞之后的事件链对免疫系统具有许多潜在的下游作用。例如，在某些类型的感染的调整中，这可引起提高对感染的获得性免疫并促进痊愈的辅助作用。或者，在某些类型的自体免疫疾病的调整中，由krn7000激活nkt细胞可以以抑制组织破坏并缓解疾病的方式改变自身免疫反应的过程。许多间接机制促进cd1d约束的nkt细胞的保护作用。通过体内施用α-galcer激活nkt细胞引起nk细胞的伴随激活(eberl和macdonald,eur.j.immunol.30:985-992(2000)；和carnaud等，j.immunol.163:4647-4650(1999))。在缺乏nkt细胞的小鼠中，α-galcer不能通过nk细胞诱发细胞毒素活性。nkt细胞还增强传统mhci类约束的细胞毒性t细胞的诱发(nishimura等，intimmunol12:987-94(2000)；和stober等，jimmunol170:2540-8(2003))。如下文更详细地论述，本发明包括一种磷脂。本文使用的“磷脂”是指由通用结构g-l表示的包含与亲油性部分结合的碳水化合物部分的化合物，其中l为脂质且g为碳水化合物。本文使用的“脂质”是指可溶于脂肪、油和例如有机溶剂的非极性溶剂的有机化合物。术语“亲油性”是指有机化合物溶解于脂肪、油、脂质和例如有机溶剂的非极性溶剂的性质。亲油性化合物微溶于水或不溶于水。在一些实施方案中，g为糖，其可为己糖或戊糖，且可为单糖、二糖、三糖、寡糖或多糖或其衍生物。所关注的糖包括阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔罗糖、果糖、麦芽糖、乳糖和蔗糖。在糖和脂质之间的键可在任一o原子处，通常在1、2、3或4位，更通常在1位。该键可以α或β构型。在一些具体实施方案中，所述键可以α构型。在一些实施方案中，所述糖脂可具有结构：其中l为脂质，且r选自h、戊糖、己糖、寡糖或多糖；或烷基、芳基或烯基，例如c1-c6低碳数烷基，所述烷基为任选被取代的，所述取代基可包括而不限于烷基、芳基、烯基、芳烷基、芳烯基、环烷基、环烷基烷基或环烷基烯基；且可含有一个或多个n、s或o杂原子。o原子各自可以α或β定向，例如葡萄糖、半乳糖、甘露糖等。许多脂质用作l，包括c8-c30脂肪酸、长链仲醇、长链氨基醇、脂肪酸与长链二或三羟基碱基的酰胺等。例如，糖基部分(一个或几个单元)可与脂肪醇或羟基脂肪醇的一个羟基或脂肪酸的羰基连接。合适脂质的非限制性实例包括神经酰胺、鞘磷脂、脑苷脂等，包括神经鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇、c20-二氢神经鞘氨醇、植物鞘氨醇、c20-植物鞘氨醇、脱氢植物鞘氨醇和鞘氨二烯醇(sphingadienine)。在一些实施方案中，所述糖脂为神经酰胺类糖脂，例如α-半乳糖苷神经酰胺，在本文中也称作α-galcer；或其类似物，例如α-c-galcer，其含有c-糖苷键，而不是在糖和鞘氨醇类碱基之间的o-糖苷键。神经酰胺为长链碱基或鞘氨醇类的n-酰基亲油性衍生物，在动物中最常见的是鞘氨醇且在植物中最常见的是植物鞘氨醇。通常，所述n-酰基亲油性部分为脂肪酸，在一些实施方案中，其包含c3-c27长碳链。这些脂肪酸碳链可为被取代、未被取代、饱和、不饱和、支链、未分支的烷基、烯基或炔基链。本文使用的术语“神经酰胺”将包括合成或天然的神经酰胺类似物中的任一种。本文使用的术语“神经酰胺类糖脂”和“糖脂神经酰胺”可互换使用。神经酰胺类糖脂为包含n-酰基亲油性部分和鞘氨醇部分的糖脂或其类似物(例如，神经酰胺)，且由通式(vii)表示，其中式(vii)的r2可为直链或支链、被取代或未被取代的烷基、烯基或炔基链，或被取代或未被取代、饱和或不饱和的环状环或被取代或未被取代的芳环：在该式(vii)中，r4为碳水化合物且该分子的其余部分为神经酰胺或其类似物。在一些实施方案中，r4可为糖化物。其中r4为糖化物的神经酰胺类糖脂在本文中称为糖基神经酰胺。在一些实施方案中，所述糖化物可为己糖或戊糖或其类似物。在其它实施方案中，所述己糖或戊糖或其类似物可为单-、二-、三-、寡或多糖或其衍生物。其中r4的糖化物为半乳糖苷(α-或β-连接)的神经酰胺类糖脂在本文中称为半乳糖苷神经酰胺。在一些实施方案中，r4为α-半乳糖苷。在一些实施方案中，a在存在时可为-o-、-ch2-或-s；或为直键。在一些特定的实施方案中，a为o。r1和r2可相同或不同。在一些实施方案中，r1、r2或两者可为被取代或未被取代的烷烃、烯烃、环烷基；被杂原子取代的烷烃或系统；或被取代或未被取代的芳基或杂芳基。在一些特定的实施方案中，r1、r2或两者可为具有合并在链内的杂原子、环状环或芳基环的被取代或未被取代的烷基或烯基链。在一些实施方案中，r1、r2或两者含有邻接或不邻接的双键。这些双键可具有e/z构型。在一些实施方案中，r2为具有至少一个附接在其中的羟基的饱和或不饱和的长链c3-c27烷基或烯烃。在特定的实施方案中，r1为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或r1为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；或r1为c6-c27烷烃或烯烃，其中(i)所述c6-c27烷烃或烯烃被c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环取代，或(ii)所述c6-c27烷烃或烯烃包括在所述c6-c27烷基或烯基链内的c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环；或r1为任选被取代的芳族环，或芳烷基。在一些上述实施方案中，r2为被取代或未被取代的、支链或未分支的烷基、烯基或炔基链。在一些特定的实施方案中，r2为以下(a)-(e)中的至少一个：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为0-40的整数。在其它的实施方案中，r2为-ch(oh)(ch2)xch3，其中x为4-17的整数。在一些特定的实施方案中，r2为-ch(oh)(ch2)13ch3。神经酰胺类糖脂的非限定性实例在本文中描述并且可在例如以下文献中见到：porcelli，美国专利申请公告2006/0052316号；tsuji，美国专利申请公告2006/0211856号；jiang，美国专利申请公告2006/0116331号；hirokazu等，美国专利申请公告2006/0074235号；tsuji等，美国专利申请公告2005/0192248号；tsuji，美国专利申请2004/0127429号；和tsuji等，美国专利申请2003/0157135号，其全部都通过引用整体结合到本文中。在某些实施方案中，改性的神经酰胺类糖脂包括糖基神经酰胺或其类似物或者α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物。在一些实施方案中，所述糖基神经酰胺或其类似物包括式i：r1为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或r1为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；或r1为c6-c27烷烃或烯烃，其中(i)所述c6-c27烷烃或烯烃被c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环取代，或(ii)所述c6-c27烷烃或烯烃包括在所述c6-c27烷基或烯基链内的c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环；r2为以下(a)-(e)中的一个：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为4-17的整数；r4为α-连接或β-连接的单糖，或当r1为直链或支链的c1-c27烷烃时，r4为：且a为o或-ch2。在另一实施方案中，所述α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物包括式ii：其中：r1为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或r1为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；且r2为以下(a)-(e)中的一个：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为4-17的整数。在另一实施方案中，所述改性的神经酰胺类糖脂包括包括式iii的α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物：其中r为-c(o)r1，其中r1为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或r1为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；或r1为c6-c27烷烃或烯烃，其中(i)所述c6-c27烷烃或烯烃被c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环取代，或(ii)所述c6-c27烷烃或烯烃包括在所述c6-c27烷基或烯基链内的c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环；或r1为任选被取代的芳族环，或芳烷基，且r2为以下(a)-(e)中的一个：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为4-17的整数。在另一实施方案中，r1选自-继续的以及其中()表示r1与式iii化合物的附接点。在一些实施方案中，r1被光反应性基团取代。所述光反应性基团在r1基团的任何适当位置附接到r1基团。例如，在一些实施方案中，所述光反应性基团附接到r1基团的苯环。在其它的实施方案中，所述光反应性基团附接到苯环的侧位取代基。在另一实施方案中，所述α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物包括(2s,3s,4r)-1-o-(α-d-吡喃半乳糖)-n-二十六酰基-2-氨基-1,3,4-十八烷三醇(krn7000)或(2s,3s)-1-o-(α-d-吡喃半乳糖)-n-二十六酰基-2-氨基-1,3-十八烷二醇)。在另一实施方案中，所述α-半乳糖苷神经酰胺或其类似物包括(2s,3s,4r)-1-ch2-(α-吡喃半乳糖)-n-二十六酰基-2-氨基-1,3,4-十八烷三醇(α-c-galcer)。神经酰胺类糖脂的其它非限制性实例描述在美国专利7,273,852号、美国专利6,531,453号和美国专利5,936,076号、美国专利7,772,380号中，其全部都通过引用整体结合到本文中来。本文提到的“改性糖脂”包括包含允许与蛋白质(例如，cd1d)稳定共价连接的官能团的糖脂。该术语涵盖天然存在的糖脂，这些糖脂已经经由人类干预改性以包含这一官能团并且被称为合成糖脂。本发明的改性糖脂可包含允许在糖脂的酰基链内或酰基链端点处与蛋白质(例如，cd1d)稳定共价连接的官能团。在所述改性糖脂为神经酰胺类糖脂的那些实施方案中的一些中，所述神经酰胺类糖脂在例如酰基链的n-酰基亲油性部分内或其端点处改性。在一些实施方案中，与例如cd1d的蛋白质形成稳定共价键的官能团为可光化学或热激活的基团。在一些实施方案中，这一官能团可光化学激活。本文使用的术语“光反应性基团”或“光反应性官能团”是指化学惰性但在暴露于来自光源的能量时变得具有反应性的官能团。所述光反应性基团在用可见光照射时，或在一些实施方案中在用紫外光照射时可变得具有反应性。在特定的实施方案中，选择可使用紫外光激活的光反应性基团，因为可将具有这一基团的化合物(例如，具有光反应性基团的糖脂)加到蛋白质(例如，cd1d)中且共价键形成的时程可在任何给定的时间点通过紫外光照射控制。在本发明中可使用任何光反应性官能团。在一些实施方案中，可用以在糖脂和cd1d蛋白之间形成共价键的光反应性基团包括芳基叠氮化物、叠氮基甲基香豆素、二苯甲酮、蒽醌、某些重氮化合物、偶氮杂环丙烷和补骨脂素衍生物中的任一种。通常，在具有光反应性官能团的化合物和cd1d蛋白质之间的光反应性反应可在方案1中说明如下。在一些实施方案中，芳基叠氮化物和偶氮杂环丙烷可作为光反应性官能团使用。在一些具体实施方案中，可使用以下光反应性官能团(方案2)波形键表示这些光反应性官能团附接到糖脂的位置，例如在糖脂的酰基侧链内或其端点处。在一些实施方案中，可用长紫外线照射(例如，300-460nm)激活的光反应性官能团用于本发明公开的方法和组合物中。在本发明的一些实施方案中，糖脂的亲油性基团经由酰基键连接到碳水化合物基团。该酰基键可经由o或n等。在这方面，“酰基侧链”显示如下：该酰基侧链为线性或分支的。在酰基侧链为线性的那些实施方案中，在提到线性酰基侧链的长度(不包括允许与蛋白质稳定共价连接的官能团)时，包括羰基碳。在一些实施方案中，所述线性酰基侧链具有约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或更多个原子(除氢之外)，其可包括一个或多个杂原子。在这些实施方案中的一些中，所述线性酰基侧链具有至少11个原子(除氢之外)，其可包括一个或多个杂原子。在某些实施方案中，所述酰基侧链包含约11-约14个原子(除氢之外)。在某些实施方案中，所述线性酰基侧链具有以下结构中的一种：以及其中y在存在时为-o-、-ch2-、-s-、-och2-、-sch2-、-ch2ch2-；或直键，且prg为光反应性基团。在一些实施方案中，所述糖脂为神经酰胺类糖脂。在其中糖脂为神经酰胺类糖脂的上述实施方案中的一些中，所述光反应性官能团附接到神经酰胺类糖脂的n-酰基亲油性部分。在特定的实施方案中，所述光反应性官能团附接在脂肪酸酰基侧链内或在脂肪酸酰基侧链的端点处。在特定的实施方案中，所述神经酰胺类糖脂为糖基神经酰胺或其类似物。在其它实施方案中，所述神经酰胺类糖脂为α-或β-连接的半乳糖苷神经酰胺或其类似物。在特定的实施方案中，加成到糖脂上的所述光反应性官能团为二苯甲酮基团。术语“二苯甲酮”被本领域的技术人员熟知。通常，二苯甲酮由如下所示的通式c6h5-co-c6h5表示：本文使用的二苯甲酮或其类似物可在本发明的某些实施方案中使用。例如，在一些实施方案中，苯基的等排体(即，噻吩等)可代替苯基使用。在其它的实施方案中，所述苯基或其类似物可被其它官能团取代。在其它的实施方案中，所述苯基及其类似物未被取代。因此，本发明的改性糖脂可包含二苯甲酮基团。在这些实施方案中的一些中，所述糖脂包含在糖脂的酰基链上的二苯甲酮基团。在特定的实施方案中，所述二苯甲酮基团与神经酰胺类糖脂的n-酰基亲油性部分共价结合。在这些实施方案中的一些中，所述二苯甲酮基团在神经酰胺类糖脂的酰基链的端点处见到。所述改性糖脂的非限制性实例提供在表1中。表1.二苯甲酮改性的神经酰胺类糖脂的非限制性实例。因此，在一些实施方案中，式(vii)的r1被二苯甲酮部分取代。在特定的实施方案中，所述二苯甲酮部分在端点处被取代。在其它的实施方案中，式(vii)的r1由下式(viii)表示：其中y为-o-、-ch2-或-s-，且g为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或g为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；或r1为c6-c27烷烃或烯烃，其中(i)所述c6-c27烷烃或烯烃被c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环取代，或(ii)所述c6-c27烷烃或烯烃包括在所述c6-c27烷基或烯基链内的c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环；或r1为任选被取代的芳族环，或芳烷基。在一些实施方案中，式(vii)的r1由下式(ix)表示：其中y为-o-、-ch2-或-s-，且n为0-30的整数。在一些实施方案中，n为3-17的整数。本文公开的改性糖脂和改性糖脂/蛋白质复合物可使用包括本文公开的那些方法的本领域已知的任何方法合成。根据本发明的一个实施方案，二苯甲酮改性糖脂的通用合成示于方案3中。因此，式(iv)改性糖脂二苯甲酮甲酸衍生物用合适的激活剂激活并经由与式(v)的神经酰胺类糖脂偶合的肽而反应，以提供所要的二苯甲酮改性糖脂。可将本领域技术人员已知适合在胺和羧酸之间的肽偶合的任何激活剂、试剂和溶剂用于二苯甲酮甲酸衍生物(iv)和神经酰胺类糖脂(v)的偶合反应。在一些实施方案中，y为-o-、-ch2-或-s-；g为直链或支链的c1-c27烷烃或c2-c27烯烃；或g为-c(oh)-r3，其中r3为直链或支链的c1-c26烷烃或c2-c26烯烃；或r1为c6-c27烷烃或烯烃，其中(i)所述c6-c27烷烃或烯烃被c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环取代，或(ii)所述c6-c27烷烃或烯烃包括在所述c6-c27烷基或烯基链内的c5-c15环烷烃、c5-c15环烯烃、杂环或芳族环；r4为被取代或未被取代的糖或其类似物；a在存在时为-o-、-ch2-；或为直键；且r2为被取代或未被取代的c3-c40烷基、烯基或炔基链。在一些实施方案中，g为-(ch2)n-，其中n为0-20的整数且y为o。在其它的实施方案中，式(vi)的包含二苯甲酮基团的改性糖脂的r2为以下(a)-(e)中的一个：(a)-ch2(ch2)xch3，(b)-ch(oh)(ch2)xch3，(c)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)2，(d)-ch＝ch(ch2)xch3，(e)-ch(oh)(ch2)xch(ch3)ch2ch3，其中x为0-40的整数。在一些其它实施方案中，式(vi)的包含二苯甲酮基团的改性糖脂的r2为-ch(oh)(ch2)xch3，其中x为4-17的整数。在一些特定的实施方案中，式(vi)的包含二苯甲酮基团的改性糖脂的r2为-ch(oh)(ch2)13ch3。在其它的实施方案中，r4为α-半乳糖基。根据本发明的一些实施方案，式(iv)的二苯甲酮甲酸衍生物可根据方案4和5合成，其中g为-(ch2)n-，其中n为0-20的整数且y为o。因此，使包含合适离去基团的二苯甲酮衍生物(a)与二醇衍生物(b)反应以形成羟基衍生物(c)。可将本领域的技术人员已知的任何合适的离去基团l用于该反应。在一些实施方案中，离去基团l可为br、cl、i、甲苯磺酰基、甲磺酰基等。在一些特定的实施方案中，离去基团l为溴。随后使用适合将醇氧化成酸的氧化剂将羟基衍生物氧化成羧酸衍生物(iv)，其中y为o。特定地讲，在本领域中熟知将伯醇氧化成酸的氧化剂。在一些实施方案中，所述氧化剂为吡啶鎓重铬酸盐(pdc)。在一些实施方案中，式(v)的二苯甲酮甲酸衍生物可如在方案3中所说明来合成，其中g为-(ch2)n-，其中n为0-20的整数且y为o。因此，使二苯甲酮衍生物(a)与thf/h2o在caco3存在下反应以形成相应的乙醇衍生物(d)。随后使乙醇衍生物d与包含离去基团l的羧酸衍生物在碱性条件下反应以产生二苯甲酮甲酸衍生物(iv)，其中y为o。可将本领域的技术人员已知的任何合适的离去基团l用于该反应。在一些实施方案中，离去基团l可为br、cl、i、甲苯磺酰基、甲磺酰基等。在一些特定的实施方案中，离去基团l为溴。在本发明的改性糖脂/蛋白质复合物中，改性糖脂与例如cd1d蛋白质的蛋白质“物理缔合”以生成“改性糖脂/cd1d复合物”。在某些实施方案中，所述改性糖脂/cd1d复合物还包含异源抗原或目标分子。“物理缔合”意指与cd1d蛋白质的直接相互作用。在某些实施方案中，所述神经酰胺类糖脂经由共价方式与cd1d蛋白质物理缔合。在一些实施方案中，所述异源抗原或目标分子或两者与cd1d物理缔合(例如，经由共价方式)。包含光反应性基团的改性糖脂可通过使所述改性糖脂与蛋白质接触并用光(例如，可见光或紫外光)照射所述改性糖脂而与所述蛋白质(例如，cd1d)共价结合。在其中光反应性基团为二苯甲酮基团的一些实施方案中，包含二苯甲酮基团的改性糖脂可通过使所述改性糖脂与蛋白质接触并用紫外光(即，具有约10nm-约400nm的波长的光)照射二苯甲酮-改性糖脂和所述蛋白质而与所述蛋白质(例如，cd1d)共价结合。在特定的实施方案中，所述改性糖脂与所述蛋白质通过在溶液中培育这两种分子而接触。在这些实施方案中的一些中，所述溶液包括缓冲盐水溶液。在某些实施方案中，将所述改性糖脂和所述蛋白质用具有长波长(即，约300nm-约460nm，包括(但不限于)约300、305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、415、420、425、430、435、440、445、450、455和460nm)的紫外光照射。在某些实施方案中，将所述改性糖脂和所述蛋白质用具有约365nm的波长的uv照射。在一些实施方案中，所述改性糖脂和所述蛋白质使用放置在样品上方约1英寸处的紫外灯照射。在一些实施方案中，将所述改性糖脂和所述蛋白质照射约5分钟、约10分钟、约15分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约1小时、约2小时或更久。在特定的实施方案中，将所述改性糖脂和所述蛋白质照射约1小时。与所述蛋白质物理缔合的所述改性糖脂的检测可通过本领域的技术人员已知的方法完成。通过使改性糖脂稳定地结合到例如cd1d蛋白质的蛋白质，可制得改性糖脂/cd1d复合物。在某些实施方案中，本发明的组合物允许同时施用糖脂和例如cd1d蛋白质的蛋白质到抗原递呈细胞。本发明的改性糖脂/蛋白质复合物可包含单一糖脂，或者可包含糖脂的非均质混合物。也就是说，一种或多种蛋白质可与单一糖脂物理缔合或者可与糖脂的混合物物理缔合。本文使用的术语“任选被取代”意指未被取代或被包括卤素(f、cl、br、i)、烷基、被取代的烷基、芳基、被取代的芳基或烷氧基的一个或多个取代基取代。单独地或作为另一基团的一部分的本文使用的术语“烷基”是指通常具有1-18个碳或所指定碳数的直链或支链的饱和脂族烃。在一个这样的实施方案中，所述烷基为甲基。非限制性例示性烷基包括乙基、正丙基、异丙基等。本文使用的术语“被取代的烷基”是指具有一个或多个卤素(f、cl、br、i)取代基的如上定义的烷基。本文使用的术语“杂环”意指3-至10-元单环或二环杂环，其为含有至多达4个杂原子的饱和、不饱和非芳族或芳族环。各个杂原子独立地选自氮，其可为季铵化的；氧；和硫，包括亚砜和砜。所述杂环可经由氮、硫或碳原子附接。代表性杂环包括吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、噻二唑基、异噁唑基、吡唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吗啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、内酰脲基、戊内酰胺基、氧杂环丙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基(tetrahydropyrindinyl)、四氢嘧啶基、四氢苯硫基、四氢噻吡喃基、喹啉基、-异喹啉基、-色酮基、-香豆素基、-吲哚基、-吲嗪基、-苯并[b]呋喃基、-苯并[b]噻吩基、-吲唑基、-嘌呤基、-4h-喹嗪基、-异喹啉基、-喹啉基、-酞嗪基、-萘啶基、-咔唑基等。术语杂环还包括杂芳基。单独地或作为另一基团的一部分的本文使用的术语“芳基”是指通常具有6-14个碳原子的单环和二环芳族环体系(即，c6-c14芳基)，例如苯基、1-萘基等。本文使用的术语“被取代的芳基”是指具有一个或多个包括卤素(f、cl、br、i)或烷氧基的取代基的如上定义的芳基。单独地或作为另一基团的本文使用的术语“芳烷基”是指具有一个或多个芳基取代基的如上定义的烷基。非限制性例示性芳烷基包括苄基、苯乙基、二苯甲基等。单独地或作为另一基团的本文使用的术语“烷氧基”是指附接到末端氧原子的烷基。非限制性例示性烷氧基包括甲氧基、乙氧基等。本文使用的术语“烷烃”意指直链或支链的非环状饱和烃。代表性直链烷烃包括-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基、-正辛基、-正壬基和-正癸基。代表性支链烷烃包括-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基、-新戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、3-乙基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、3,3-甲基丁基、1-甲基己基、2-2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、1,2-二甲基戊基、1,3-二甲基戊基、1,2-二甲基己基、1,3-二甲基己基、3,3-二甲基己基、1,2-二甲基庚基、1,3-二甲基庚基和3,3-二甲基庚基。本文使用的术语“烯烃”意指具有至少一个碳-碳双键的直链或支链的非环烃。代表性直链和支链烯烃包括-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、-1-己烯基、-2-己烯基、-3-己烯基、-1-庚烯基、-2-庚烯基、-3-庚烯基、-1-辛烯基、-2-辛烯基、-3-辛烯基、-1-壬烯基、-2-壬烯基、-3-壬烯基、-1-癸烯基、-2-癸烯基、-3-癸烯基等。本文使用的术语“环烷烃”意指具有3-15个碳原子的饱和环烃。代表性环烷烃为环丙基、环戊基等。单独地或作为另一基团的本文使用的术语“烷基环烯烃”是指附接到如上定义的环烯烃的如上定义的烷基。本文使用的术语“环烯烃”意指具有在环体系中的至少一个碳碳双键和5-15碳原子的单环非芳族烃。代表性环烯烃包括-环戊烯基、-环戊二烯基、-环己烯基、-环己二烯基、-环庚烯基、-环庚二烯基、-环戊三烯基、-环辛烯基、-环辛二烯基、-环辛三烯基、-环辛四烯基、-环壬烯基、-环壬二烯基、-环癸烯基、-环癸二烯基等。术语“环烯烃”还包括双环烯烃和三环烯烃。本文使用的术语“二环烯烃”意指具有在一个环中的至少一个碳碳双键和8-15个碳原子的二环烃环体系。代表性二环烯烃包括但不限于-茚基、-戊烯基、-萘基、-薁基、-庚烯基、-1,2,7,8-四氢萘基等。本文使用的术语“三环烯烃”意指具有在一个环中的至少一个碳碳双键和8-15个碳原子的三环烃环体系。代表性三环烯烃包括但不限于-蒽基、-菲基、-丙烯合萘基等。本文使用的术语“芳族环”意指5-14元芳族碳环，包括单环体系、二环体系和三环体系。代表性芳族环为苯基、萘基、蒽基和菲基。本文使用的术语“氧基”意指结合氧的双键，即c＝o。本文使用的术语“单糖”意指充当碳水化合物的构建嵌段的单糖中的任一种。单糖的实例包括葡萄糖、岩藻糖、半乳糖和甘露糖。本文使用的术语“羟基”是指由与一个氢结合的一个氧组成的官能团，其中该氧与例如碳的另一原子共价结合。本发明的“羟基保护的糖脂”包括具有偶合到保护基团的羟基的糖脂，例如合成糖脂。本发明的改性糖脂已经被改性以包含可与蛋白质(例如，cd1d)形成稳定的共价键的官能团。在其中蛋白质为cd1d且改性糖脂为神经酰胺类糖脂的那些实施方案中，“稳定的改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物”为如下复合物，其中改性的神经酰胺类糖脂与cd1d共价结合且所述复合物能够保持显著的自然杀伤t(nkt)细胞刺激活性或所述神经酰胺类糖脂与cd1d保持以由例如l363的抗体检测的构象缔合，该抗体对在体外培育之后的生物学功能复合物具有特异性(yu等，(2007),jimmunolmethods323:11-23，其通过引用整体结合到本文中来)。在一些实施方案中，稳定的改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物在体外培育约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约1周或更久之后保持至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约95％或更多的由例如l363的抗体检测的nkt细胞刺激活性或功能复合物。在这些实施方案中的一些中，体外培育在室温下进行。在特定的实施方案中，体外培育在缓冲盐水溶液(例如，pbs+0.05％tritonx-100)中进行。在某些实施方案中，稳定的改性神经酰胺类糖脂与cd1d共价结合且所述复合物在室温下体外培育约2天或约3天之后能够保持至少约75％的nkt细胞刺激活性。所述改性糖脂能够经由共价相互作用与例如cd1d的蛋白质物理缔合。本文提到的“改性糖脂复合物”或“改性糖脂/蛋白质复合物”包括与例如cd1d的蛋白质物理缔合的改性糖脂。本文使用的术语“物理缔合”是指在两个分子之间的相互作用，其中这两个分子经由共价或非共价相互作用(例如，氢键、离子键、范德华力、疏水性相互作用)直接或间接地(例如，经由插入分子)彼此结合。在一些实施方案中，所述改性糖脂/蛋白质复合物包含经由允许共价相互作用的改性糖蛋白的官能团(例如，二苯甲酮基团)与蛋白质共价结合的改性糖蛋白。本发明的改性糖脂与任何蛋白质物理缔合(例如，共价结合)。在一些实施方案中，所述改性糖脂(例如，改性的神经酰胺类糖脂)与cd1d物理缔合(例如，共价结合)。改性糖脂/蛋白质复合物在本文中称为“改性糖脂/cd1d复合物”，其中所述蛋白质为cd1d。本文使用的术语“cd1d蛋白质”涵盖能够与糖脂和β2-微球蛋白或其片段或变体结合的全长cd1d蛋白质、片段或其变体。所述cd1d分子为主要组织相容性复合物抗原类糖蛋白家族的成员，其与β2-微球蛋白缔合且在皮肤和胃肠上皮细胞中的皮层胸腺细胞、b细胞、树状细胞、郎格罕氏细胞(langerhanscell)的表面上表达。cd1d主要在胃肠道的树状细胞或上皮细胞上表达。cd1家族成员在糖脂的递呈中作为抗原而包括。特定地讲，cd1d经由不同亚组的t-淋巴细胞，即分泌il-4和inf-γ的nk1t细胞激活来调节细胞因子状况(cytokinetone)。所有cd1糖蛋白都已经被克隆并分析。对于cd1糖蛋白、且特定地讲，cd1d的详细论述，参见，例如balk等，proc.natl.acad.sci.usa86:252-256(1989)；kojo等，biochem.biophy.res.comm.276:107-111(2000)；kojo等，j.rheumatology30:2524-2528(2003)；kang和cresswell,natureimmunology5:175-181(2004)；im等，j.biol.chem.279:299-310(2004)；dutronc和porcelli,tissueantigens60:337-353(2002)，其通过引用整体结合到本文中。全长cd1d由信号序列、细胞外域、跨膜域和细胞质域构成。全长cd1d多肽的长度为335个氨基酸。人类cd1d序列在本领域中已知且在genbank中具有登录号np_001757，其在seqidno:1中列出。人类cd1d的变体包括但不限于具有以下突变：t64s的多肽。小鼠cd1d的序列可在genbank上以如下登录号：np_031665见到。大鼠cd1d的序列可在genbank上以如下登录号：np_058775见到。绵羊cd1d的序列可在genbank上以如下登录号：o62848和q29422见到。黑猩猩cd1d的序列可在genbank上以如下登录号：np_001065272见到。兔cd1d的序列可在genbank上以如下登录号：p23043见到。cd1d的细胞外域由三个域：α1域、α2域和α3域构成。α1域和α2域包含抗原结合位点。α3域包含β2-微球蛋白缔合位点。本文使用的cd1d域名称如在表2中定义。表2.cd1d域域cd1d(人类)信号序列1-19细胞外20-301α1域20-108α2域109-201α3域202-295跨膜302-322细胞质323-335如本领域的技术人员应当了解，上列域的开始残基和结束残基可根据所使用的计算机建模程序和用于确定域的方法来变化。本发明的一些实施方案提供改性糖脂/cd1d复合物，其包含可溶性cd1d多肽。上表1描述cd1d多肽的各种域。可溶性cd1d多肽通常包含所述多肽的细胞外域的一部分或全部，包括α1、α2和α3域。可溶性cd1d多肽通常缺乏跨膜域和细胞质域中的一些或全部。如本领域的技术人员应当了解，cd1d的全部细胞外域可包含在所述细胞外域多肽的c-末端或n-末端上的额外或较少的氨基酸。在本发明的方法和组合物中使用的cd1d多肽包括但不限于包含除了至多达20个氨基酸取代之外与参考氨基酸序列相同的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的cd1d多肽。在一些实施方案中，所述参考氨基酸序列选自seqidno:1的氨基酸a-295、seqidno:1的氨基酸21-b和seqidno:1的a-b，其中a为1-100的任何整数，且b为201-301的任何整数，且其中所述cd1d多肽与β2-微球蛋白缔合并结合神经酰胺类糖脂。在一个实施方案中，所述可溶性cd1d多肽包含seqidno:1的氨基酸21-295。在另一实施方案中，所述可溶性cd1d多肽包含seqidno:1的氨基酸20-295、20-296、20-297、20-298、20-299、20-300和20-301。对于本文公开的方法和组合物的目的，在其中改性糖脂/蛋白质复合物包含cd1d蛋白质的那些实施方案中，所述复合物还包含与cd1d蛋白质物理缔合(例如，共价结合)的β2-微球蛋白。在这些实施方案中的一些中，所述β2-微球蛋白与cd1d的氨基端点共价连接。在某些实施方案中，本发明的cd1d复合物包含β2-微球蛋白多肽，其与可溶性cd1d多肽或多肽片段缔合。β2-微球蛋白作为主要组织相容性复合物(mhc)i类分子的小细胞外亚单元存在于所有有核细胞的表面上且主动参与免疫反应。对于β2-微球蛋白的详细论述，参见，例如peterson等，adv.cancerres.24:115-163(1977)；sege等，biochemistry20:4523-4530(1981)，其通过引用整体结合到本文中。全长β2-微球蛋白为包含信号序列和ig-样域的分泌蛋白质。全长cd1d多肽的长度为119个氨基酸。人类β2-微球蛋白序列在本领域中已知且在genbank中具有登录号np_004039，其在本文中列为seqidno:2。人类β2-微球蛋白的变体包括但不限于具有以下突变：a20g、p52q、s55v和y86ys中的一个或多个的多肽。小鼠β2-微球蛋白的序列可在genbank上以如下登录号：np_033865见到。猪β2-微球蛋白的序列可在genbank上以如下登录号：np_999143见到。大鼠β2-微球蛋白的序列可在genbank上以如下登录号：np_036644见到。黑猩猩β2-微球蛋白的序列可在genbank上以如下登录号：np_001009066见到。兔β2-微球蛋白的序列可在genbank上以如下登录号：p01885见到。绵羊β2-微球蛋白的序列可在genbank上以如下登录号：np_001009284见到。所有上述genbank登录号都通过引用结合到本文中来。本文使用的β2-微球蛋白域名称如在表3中定义。表3.β2-微球蛋白域域β2-微球蛋白(人类)信号序列1-20β2-微球蛋白21-119ig域25-11322-116如本领域的技术人员应当了解，上列域的开始残基和结束残基可根据所使用的计算机建模程序和用于确定域的方法来变化。本发明的改性糖脂/cd1d复合物可包含β2-微球蛋白多肽的片段、变体或其衍生物。上述表3描述β2-微球蛋白多肽的各种域。本发明的β2-微球蛋白多肽通常包含所述多肽的分泌部分的一部分或全部。在本发明的方法中使用的人类β2-微球蛋白多肽包括但不限于包含除了至多达20个氨基酸取代之外与参考氨基酸序列(例如，seqidno:2)相同的氨基酸序列或基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的β2-微球蛋白多肽。在一些实施方案中，所述参考氨基酸序列选自seqidno:2的氨基酸a-119、seqidno:2的氨基酸21-b和seqidno:2的a-b，其中a为15-25的任何整数，且b为100-119的任何整数，其中所述β2-微球蛋白多肽与cd1d缔合且支持神经酰胺类糖脂的结合。在一个实施方案中，所述β2-微球蛋白多肽包含seqidno:2的氨基酸21-113。在一个实施方案中，所述β2-微球蛋白多肽包含seqidno:2的氨基酸21-119。“参考氨基酸序列”意指没有引入任何氨基酸取代的指定序列。如本领域的技术人员应当理解，如果不存在取代，本发明的“分离多肽”则包含与参考氨基酸序列相同的氨基酸序列。本文所述的cd1d或β2-微球蛋白多肽可具有例如取代、插入或缺失的各种改变。可在所述多肽中取代的例示性氨基酸包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。还预期与本文所述的多肽或参考多肽至少70％、75％、80％、85％、90％或95％相同的cd1d或β2-微球蛋白多肽的相应片段。如本领域中已知，在两种多肽之间的“序列同一性”通过比较一种多肽的氨基酸序列与第二多肽的序列来确定。在本文中论述时，与另一多肽至少约70％、75％、80％、85％、90％或95％相同的任何特定多肽可使用例如但不限于bestfit程序(wisconsinsequenceanalysispackage,version8forunix,geneticscomputergroup,universityresearchpark,575sciencedrive,madison,wi53711)的本领域已知的任何方法和计算机程序/软件确定。bestfit使用smith和waterman，advancesinappliedmathematics2:482-489(1981)的局部同源性算法来发现在两个序列之间同源的最佳片段。当使用bestfit或任何其它序列比对程序来确定特定的序列是否与根据本发明的参考序列例如95％相同时，设定参数，毫无疑问地对于参考多肽序列的全长计算同一性百分数且允许在参考序列中总氨基酸数的至多5％的同源性的间隙。可溶性cd1d多肽可含有来自跨膜域的氨基酸中的一些或全部，条件是所述多肽仍然能够保持溶解于例如生理溶液的水溶液中。优选将包括跨膜域的不超过约20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸且优选没有氨基酸。额外地，β2-微球蛋白的片段可用于本发明中。为了在本发明中使用，β2-微球蛋白的片段将具有保持与cd1d分子缔合的能力。优选将缺失β2-微球蛋白的不超过约20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸且优选不缺失氨基酸。可能希望在可溶性cd1d多肽或2-微球蛋白多肽的多肽端点处引入少量氨基酸，通常不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸。氨基酸的缺失或插入将通常是由于构建的需要，提供适宜的限制位点、增加加工信号、简易控制、改善表达水平等。另外，可能希望出于类似的原因用不同的氨基酸取代一个或多个氨基酸，通常取代在任一域中的不超过约10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸。cd1d和β2-微球蛋白可与例如灵长类动物(特别是人类)、啮齿动物、兔、马、牛、犬、猫等的任何哺乳动物或鸟类物种自体同源。β2-微球蛋白在体内通常不是炎症性的。然而，优选采用得自与施用的改性糖脂/cd1d复合物同一物种的β2-微球蛋白，从而降低异种免疫反应的危险。所述可溶性cd1d多肽和β2-微球蛋白多肽可单独地生成并允许缔合以形成稳定的异源双链复合物，或两者的亚单元可在单一细胞中表达。在本发明的方法和组合物中使用的可溶性cd1d多肽和2-微球蛋白多肽可从多种细胞，例如转化细胞系jy、bm92、win、moc和mg及cho中使用本领域的技术人员已知的多种技术分离。还可以构建功能融合分子，其中β2-微球蛋白或其片段的羧基端点经由连接子与cd1d或其片段的氨基端点连接。额外地，来自多种物种的cd1d及β2-微球蛋白的氨基酸序列是已知的，且编码这些多肽的多核苷酸已经克隆，因此所述多肽可使用重组方法制得。cd1d和β2-微球蛋白链或其融合产物的编码区插入表达载体中，单独地表达在例如大肠杆菌、酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞或其它合适细胞的适当宿主中。术语“疫苗”是指如下组合物，在向哺乳动物施用时可用于刺激例如相对于例如异源抗原的抗原的免疫反应。本文使用的“异源”抗原为来源于外来物种的抗原，或者如果来源于同一物种，则其通过故意人工干预在组成方面自其天然形式明显改性。在某些实施方案中，改性糖脂复合物可与异源抗原或目标分子一起施用。在其它实施方案中，本发明的改性糖脂/蛋白质复合物可用作用于递送例如免疫原性多肽的异源抗原或目标分子的“抗原载体”。例如，可将改性糖脂/蛋白质复合物用作用于递送来自另一病原体的抗原(例如，细菌(例如，沙门氏菌属、李斯特菌属、炭疽杆菌和志贺氏菌属抗原)、真菌抗原、寄生虫抗原(例如，来自疟原虫属的疟疾抗原)、或病毒抗原(例如，来自hiv、siv、hpv、rsv、流行性感冒或肝炎(hav、hbv和hcv)的病毒抗原)或肿瘤特异性抗原的抗原载体。本发明的组合物包括与改性糖脂物理缔合的细胞(例如，病毒、真菌、细菌细胞)。如在通过引用整体结合到本文中来的美国申请公告2010/0183549号中所述，例如神经酰胺类糖脂的糖脂可通过用糖脂培养细菌细胞而与细菌细胞物理缔合。因此，在一些实施方案中，所述改性糖脂可通过用包含光反应性基团的改性糖脂首先培养细菌细胞而允许所述改性糖脂与所述细菌细胞的细胞壁缔合，接着用光源(例如，紫外光)照射以允许所述改性糖脂与所述细菌细胞的表面的共价连接而与所述细菌细胞物理缔合。在一些实施方案中，本发明的改性糖脂/蛋白质复合物包含目标分子(例如，抗体，包括但不限于单株抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、双官能抗体或其抗原结合片段，例如fab和f(ab')2部分和fv片段，及单链抗体)，所述目标分子用以将复合物靶向受试者身体的特定细胞、组织、器官或区域。在这些实施方案中的一些中，所述目标分子为特异性结合例如细胞表面标志物的目标抗原的抗体或抗原结合片段，如在通过引用整体结合到本文中来的美国申请公告2006/0269540号中所指出。所述蛋白质(例如，cd1d)可直接地或经由连接子序列或分子与目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)直接连接或融合。在某些实施方案中，所述蛋白质(例如，cd1d)可经由多价化合物与目标分子(例如，抗体或其片段)连接。在其中所述蛋白质为cd1d的那些实施方案中，所述目标分子可与cd1d分子或β2-微球蛋白连接。在其中所述目标分子为抗体的那些实施方案中，所述蛋白质(例如，cd1d或β2-微球蛋白)可与所述抗体的轻链或重链连接。如由国际申请公告wo9964597号所指出并通过引用整体结合到本文中，可以将突变引入β2-微球蛋白，从而增加对于i类重链的亲和性，以促进装配并增加融合蛋白的稳定性。所述蛋白质(例如，cd1d或β2-微球蛋白)可与抗体的羧基或氨基端点连接，或者其可在除羧基或氨基端点外的位点处与抗体连接。在其中cd1d为在改性糖脂/蛋白质复合物内的蛋白质的一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与cd1d的羧基端点连接。在这些实施方案中的一些中，单链fv片段(scfv)的氨基端点与cd1d的羧基端点连接。在一个实施方案中，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对肿瘤细胞的细胞表面标志物具有特异性。在本发明的一些实施方案中，所述癌症为头颈部癌、胃癌、食道癌、胃癌、结肠直肠癌、结肠癌、肝脏和肝内胆液导管的癌症、胰腺癌、肺癌、小细胞肺癌、喉头癌、乳癌、恶性黑色素瘤、多发性骨髓瘤、肉瘤、横纹肌肉瘤、淋巴瘤、卵泡非霍奇金氏淋巴瘤、白血病、t-和b-细胞白血病、霍奇金氏淋巴瘤、b-细胞淋巴瘤、卵巢癌、子宫癌、子宫颈癌、前列腺癌、生殖器癌、肾癌、睾丸癌、甲状腺癌、膀胱癌、浆细胞瘤或脑癌。肿瘤相关抗原包括泛癌抗原如cea(sundbladhum.pathol.27,(1996)297-301,llantzislab.invest.76(1997),703-16)、i型egfr(nouri,int.j.mol.med.6(2000),495-500)和epcam(17-1a/ksa/ga733-2,balzarj.mol.med.77(1999),699-712)。i型egfr特别地在胶质瘤中过度表达且epcam在结肠癌中过度表达。ii型egfr(her-2/neu，erbb2suganoint.j.cancer89(2000),329-36)和tag-72糖蛋白(stn抗原，kathanarch.pathol.lab.med.124(2000),234-9)在乳癌中上调。egfr缺失新表位也可起到肿瘤相关抗原的作用(sampsonproc.natl.acad.sci.usa97(2000),7503-8)。抗原a33(ritterbiochem.biophys.res.commun.236(1997),682-6)、lewis-y(dicarlooncol.rep.8(2001),387-92)、cora抗原(cea-有关的细胞粘附分子ceacam6、cd66c、nca-90，kinugasalnt.j.cancer76(1998),148-53)和muc-1(mucin)与结肠癌相关(lidaoncol.res.10(1998),407-14)。thomsen-friedenreich抗原(tf,gal1b-3gainaca1-0-thr/ser)不仅在结肠癌中见到(balduscancer82(1998),1019-27)，而且在乳癌中见到(glinskycancer.res.60(2000),2584-8)。已经描述了ly-6(eshelj.biol.chem.275(2000),12833-40)和桥粒芯糖蛋白4在头颈部癌中的过度表达以及e-钙粘附蛋白新表位在胃癌中的过度表达(fukudomeint.j.cancer88(2000),579-83)。前列腺特异性膜抗原(psma,lapidusprostate45(2000),350-4)、前列腺干细胞抗原(psca,guoncogene191(2000)288-96)和steap(hubert,procnatlacadsciusa96(1999),14523-8)与前列腺癌相关。胎儿型乙酰胆碱受体(achr)的α和γ亚单元是横纹肌肉瘤的特异性免疫组织化学标志物(rms,gattenlohnerdiagn.mol.pathol.3(1998),129-34)。已经描述了cd20与卵泡非霍奇金淋巴瘤的相关性(yatabeblood95(2000),2253-61,voseoncology(huntingt)2(2001)141-7)、cd19与b-细胞淋巴瘤的相关性(kroftam.j.clin.pathol.115(2001),385-95)、wue-1浆细胞抗原与多发性骨髓瘤的相关性(greinervirchowsarch437(2000),372-9)、cd22与b-细胞白血病的相关性(darenaam.j.hematol.64(2000),275-81)、cd7与t-细胞白血病的相关性(porwit-macdonaldleukemia14(2000),816-25)和cd25与某些t和b-细胞白血病的相关性(wuarch.pathol.lab.med.124(2000),1710-3)。cd30与霍奇金氏淋巴瘤相关(mirblood96(2000),4307-12)。黑素瘤硫酸软骨素蛋白多糖(mcsp,eisenmannnat.cell.biol.8(1999),507-13)和神经节糖苷gd3的表达在黑素瘤中观察到(welteexpdermatol2(1997),64-9)，而gd3还在小细胞肺癌中见到(sclc,brezickalungcancer1(2000),29-36)。神经节糖苷gd2的表达还在sclc和神经母细胞瘤中上调(cheresh等，cancerres.10(1986),5112-8)。卵巢癌与muellerian抑制物质(mis)受体ii型相关(masiakosclin.cancerres.11(1999),3488-99)且肾癌以及宫颈癌与碳酸酐酶(carboanhydrase)9的表达相关(mn/caix,grabmaierlnt.j.cancer85(2000)865-70)。ca19-9的升高的表达水平在胰腺癌中见到(nazlihepatogastroenterology47(2000),1750-2)。肿瘤细胞表面抗原的其它实例有her2/neu，在乳癌和卵巢癌中表达(zhang,h.等，experimental&molecularpathology67:15-25(1999))；cm-1，在乳癌中表达(chen,l.等，actaacademiaemedicinaesinicae19(2):150-3)；28k2，在肺腺癌和大细胞癌中表达(yoshinari,k.等，lungcancer25:95-103(1999))；e48和u36，在头颈部癌和鳞状细胞癌中表达(vandongen,g.a.m.s.等，anticancerres.16:2409-14(1996))；ny-eso-1，在食道癌和黑素瘤中表达(jager,e.等，j.exp.med.187:265-70(1998)；jager,e.等，internationalj.cancer84:506-10(1999))；ku-bl1-5，在膀胱癌中表达(ito,k.等，aua2000annualmeeting,abstract3291(2000))；nyco1-48，在结肠癌中表达(scanlan,m.j.等，internationalj.cancer76:652-8(1998))；hommel40，在黑素瘤中表达(tureci,o.等，cancerres.56:4766-72(1996))；ov569，在卵巢癌中表达(scholler,n.等，proc.natl.acad.sci.usa96:11531-6(1999))；chce7，在神经母细胞瘤和肾细胞癌中表达(meli,m.l.等，internationalj.cancer83:401-8(1999))；ca19-9，在结肠癌中表达(han,j.s.等，cancer76:195-200(1995))；ca125，在卵巢癌中表达(o'brien,t.j.等，internationalj.biologicalmarkers13:188-95(1998))；和神经节糖苷(gm2、gd2、9-o-乙酰基-gd3、gd3)，在黑素瘤和神经母细胞瘤中表达(zhang,s.等，cancerimmunol.immunotherapy40:88-94(1995))。在本发明公开的方法的特定实施方案中，所述肿瘤相关的抗原选自：lewisy、cea、muc-1、erbb-2、-3和-4、ep-cam、e-钙粘附蛋白新表位、egf-受体(例如i型egfr或ii型egfr)、egfr缺失新表位、ca19-9、muc-1、ley、tf-、tn-和stn-抗原、tag-72、psma、steap、cora抗原、cd7、cd19和cd20、cd22、cd25、ig-a和ig-b、a33和g250、cd30、mcsp和gp100、cd44-v6、mt-mmps、(mis)ii型受体、碳酸酐酶9、f19-抗原、ly6、桥粒糖粘蛋白4、psca、wue-1、tm4sf-抗原(cd63、l6、co-29、sas)、胎儿型乙酰胆碱受体(achr)的α和γ亚单元、cm-1、28k2、e48、u36、ny-eso-1、ku-bl1-5、nyco1-48、hommel40、ov569、chce7、ca19-9、ca125、gm2、gd2、9-邻乙酰基-gd3和gd3。在另一实施方案中，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对cd1d约束的nkt细胞的细胞表面标志物具有特异性。靶向特异性抗体的合适nkt细胞标志物的非限制性实例为cd161、cd56或(对于nkt亚组)在cd4+cd1d约束的nkt上的ccr4或在双阴性(cd4和cd8阴性)cd1d约束的nkt上的ccr1或ccr6。这特定地可用于治疗作为低nkt活性的结果的疾病或症状，例如癌症或感染。另外，因为nkt细胞活性根据与cd1d结合的特定神经酰胺类糖脂而有区别地调整(参见，例如美国专利7,772,380号，其通过引用整体结合到本文中来)，所以本发明的组合物包括如下实施方案，其中cd1d与这些功能上不同的神经酰胺类糖脂和可调整作为高或有害nkt活性(例如，过度th1活性)的结果的疾病有关的α-糖基神经酰胺选择性缔合，所述疾病例如为重症肌无力(reinhardt等，neurology52:1485-87,1999)、牛皮癣(bonish,j.immunol.165:4076-85,2000)、溃疡性结肠炎(saubermann等，gastroenterology119:119-128,2000)和原发性胆汁性肝硬化(kita等，gastroenterology123:1031-43,2002)。在另一实施方案中，所述目标分子对自身免疫疾病或炎症反应的目标组织的细胞表面标志物具有特异性。在一个优选的实施方案中，所述改性糖脂/cd1d复合物通过使所述复合物与对局部组织抗原具有特异性的目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)偶合而靶向这类位点。聚集在局部组织细胞上的改性糖脂/cd1d复合物随后将引起cd1d约束的nkt细胞的募集和激活并触发调节自体免疫和炎症反应的事件级联。有关的特异性组织抗原可与不同自体免疫和发炎疾病不同。在包括最特别为多发性硬化症的脱髓鞘疾病的情况下，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对mbp(髓鞘碱性蛋白)、plp(髓鞘质蛋白脂质蛋白质)或mog(髓鞘质少突胶质细胞糖蛋白)具有特异性。在特定的实施方案中，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对于mog具有特异性。在产胰岛素的郎格罕氏岛β-细胞受破坏之后的青少年发作的i型糖尿病的情况下，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对于岛β-细胞的目标抗原如gt3神经节糖苷、igrp具有特异性(岛特异性-葡萄糖-6-磷酸酯酶有关蛋白)或sur1具有特异性(proksp等，diabetes:51suppl3:s368-76,2002)。近来，环岛施万细胞已经被描述为在该疾病中的自体免疫破坏的早期目标(winers等：naturemedicine9:198-205,2003)。因此，在本发明的另一优选的实施方案中，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对于施万细胞特异性抗原神经胶质纤丝酸性蛋白(gfap)和s100β具有特异性，以便治疗或诊断青少年发作的i型糖尿病。在本发明公开的用于治疗自体免疫和发炎疾病的方法的其它实施方案中，将包含改性糖脂/cd1d复合物和对ii型胶原蛋白具有特异性的目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)的结合物注射到受侵袭的关节中以便治疗类风湿性关节炎；将对甲状球蛋白或tsh受体具有特异性的目标分子靶向甲状腺以便治疗桥本氏甲状腺炎(hashimoto'sthyroiditis)和graves病；和采用对于k+/h+atp酶具有特异性的目标分子以便治疗恶性贫血或萎缩性胃炎(靶向胃泌酸细胞)。在其它实施方案中，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对受感染的细胞或组织的细胞表面标志物具有特异性。在一个优选的实施方案中，改性糖脂/cd1d复合物通过使所述复合物与对由传染物编码的抗原具有特异性的目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)偶合靶向感染的位点。有关的抗原在不同传染物的情况下不同。在本发明公开的方法的特定实施方案中，受感染细胞的表面标志物选自例如人类反转录病毒(htlvi和ii、hiv1和2)或人类疱疹病毒(hsv1和2、cmv、ebv)的病毒覆膜抗原；例如流感病毒(流行性感冒a、b或c)的血细胞凝集素；来自风疹病毒的糖蛋白e1和e2或狂犬病病毒的rgp。在其它实施方案中，所述目标分子对于由其它传染性病毒、细菌、真菌、原生动物或蠕绿泥石(helminthes)编码的抗原具有特异性。在一个实施方案中，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对专门的抗原递呈细胞的细胞表面标志物具有特异性。在这些实施方案中的一些中，所述目标分子对于树状细胞的细胞表面标志物具有特异性，例如cd83、dec205、cmrf-44(fearnleydb等，blood89:3708-16,1997)、cmrf-56(hockbd等，tissueantigens53:320-34,1999)、bdca-1、bdca-2、bdca-3和bdca-4(dzioneka等，j.immunol.165:6037-6046,2000)。在其它实施方案中，所述目标分子对于以下各物具有特异性：包括toll样受体(tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr7、tlr9)甘露糖受体和甘露聚糖结合的凝集素(mbl)的抗原递呈细胞的标志物；以及树状细胞特异性的额外标志物，包括dc-sign(在dc上的c-型凝集素、非整合素、icam-3受体)、alcam、dc-lamp；和包括磷脂酰丝氨酸受体的凋亡细胞的许多其它受体中的任一种。所述目标分子可对于例如b细胞或巨噬细胞的另一专门抗原递呈细胞的细胞表面标志物具有特异性。cd19、cd20和cd22在b细胞上表达，且已经对于其它抗原递呈细胞描述了其它标志物。在其它实施方案中，所述目标分子(例如，抗体或其抗原结合片段)对树状细胞亚组的细胞表面标志物具有特异性。在本发明的一个特定的实施方案中，改性糖脂/cd1d复合物通过使所述复合物与对dc的表面抗原标志物具有特异性的目标分子偶合而靶向dc，所述表面抗原标志物例如为cd83、dec205、cmrf-44、cmrf-56、dc-sign、包括tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr7、tlr9的toll样受体(tlr)、甘露糖受体、甘露聚糖结合凝集素(mbl)、alcam、dc-lamp、磷脂酰丝氨酸受体、bdca-1、bdca-2、bdca-3或bdca-4(神经纤毛蛋白(neuropilin)，tordjmanr等，natureimmunol.3:477-82,2002)。本文使用的术语“抗原”和有关术语“抗原性”是指特异性结合抗体或t-细胞受体的物质。本文使用的术语“免疫原”和有关术语“免疫原性”是指诱发包括在例如哺乳动物的动物中的抗体和/或细胞免疫反应的免疫反应的能力。很可能免疫原也将是抗原性的，但“抗原”由于其大小或构象可能未必为“免疫原”。“免疫原性组合物”诱发在受试者中的免疫反应，例如特异性识别在“免疫原性组合物”内所含的一种或多种抗原的抗体。在某些实施方案中，本发明的免疫原性组合物包含改性糖脂/cd1d复合物和异源抗原或目标分子。术语“免疫反应”意欲包括响应抗原或免疫原的免疫系统的细胞的活性。这类活性包括但不限于产生抗体、细胞毒性、淋巴细胞增殖、释放细胞因子、发炎、吞噬、抗原递呈等。对给定抗原或免疫原具有高度特异性的免疫反应，例如产生特异性抗体或产生特异性t淋巴细胞，在本文中称为“获得性免疫反应”。例如通过nk和nkt细胞释放细胞因子的对给定抗原没有特异性的免疫反应在本文中称为“先天性免疫反应”。免疫反应的实例包括抗体反应或例如细胞毒素t-细胞或nkt细胞的细胞反应。术语“保护性免疫反应”或“治疗性免疫反应”是指对于免疫原的免疫反应，其以某些方式预防或至少部分地中止疾病症状、副作用或进展。“保护性”意指在没有染上疾病的受试动物中诱发免疫反应，其中，如果动物随后染上疾病或对该疾病敏感，例如暴露于结核分枝杆菌，则该免疫反应缓解、降低或缓和且在一些情况下完全预防疾病症状。“治疗性”意指在具有疾病的受试动物如具有结核病的人类中诱发免疫反应，其中该免疫反应缓解、降低、缓和或在一些情况下完全消除疾病症状。在某些实施方案中，本发明公开的组合物用以诱发在具有传染性疾病或癌症或自体免疫或炎性疾病的例如人类的动物中的治疗性免疫反应。术语“调整免疫反应”意指相对于没有组合物或治疗的免疫反应而言通过该组合物或治疗使给定免疫反应增加、减小或改变的任何方式。例如，使用例如本发明的包含异源抗原或目标分子的改性糖脂/cd1d复合物的佐剂来增加对例如异源抗原的抗原的免疫反应被视为对该免疫反应的调整。减小免疫反应，例如防止自身免疫，也是调整。另外，使免疫发应例如从一次th2反应变到一次th1反应或者反过来为免疫反应的调整。本发明提供通过向动物施用包含改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性糖脂/cd1d复合物)和异源抗原或目标分子的组合物来调整免疫反应的方法。本发明提供可用于增强一次免疫反应和二次免疫反应的组合物和方法。一方面，所述一次免疫反应和/或所述二次免疫反应对抗与本发明的改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性糖脂/cd1d复合物)一起、在其之前或在其之后不久施用的异源抗原或目标分子。一方面，将所述改性糖脂/蛋白质复合物用作用于递送例如增强相对于传染物或肿瘤的免疫反应的异源抗原或目标分子的抗原的抗原载体。术语“佐剂”是指具有(1)改变或增加对特定抗原的免疫反应或(2)增加或有助于药理学剂的作用的能力的物质。在某些实施方案中，神经酰胺类糖脂在与cd1d蛋白质同时施用时充当佐剂。在某些实施方案中，例如αgalcer或其类似物的神经酰胺类糖脂在与cd1d蛋白质和异源抗原或目标分子一起施用时充当佐剂。在另一实施方案中，包括第二佐剂。其它合适的佐剂包括但不限于lps衍生物(例如，单磷酸脂质a(mpl))、tlr9激动剂(例如，cpgodns)、tlr7/8激动剂(例如，咪喹莫特)、细胞因子和生长因子；细菌组分(例如，内毒素，特定地讲，超级抗原，外毒素和细胞壁组分)；基于铝的盐；基于钙的盐；氧化硅；多核苷酸；类毒素；血清蛋白、病毒和源于病毒的物质、毒素、毒液、咪唑并喹啉化合物、泊洛沙姆和阳离子脂质。已经显示多种物质经由多种机制而具有佐剂活性。可增加免疫原的表达、抗原性或免疫原性的任何化合物都是潜在的佐剂。本发明的其它潜在性佐剂包括但不限于：糖脂；趋化因子；诱发细胞因子和趋化因子产生的化合物；干扰素；惰性载体，例如明矾、斑脱土、胶乳和丙烯酸类颗粒；普卢兰尼克嵌段聚合物，例如(嵌段共聚物crl-8941、角鲨烯(可代谢的油)和微粒氧化硅稳定剂)；储备形成物(depotformers)，例如弗氏佐剂(freundsadjuvant)；表面活性物质，例如皂苷、溶血卵磷脂、视黄素、quila、脂质体和普卢兰尼克聚合物制剂；巨噬细胞刺激剂，例如细菌脂多糖；交替途径补充激活剂，例如胰岛素、酵母多糖、内毒素和左旋咪唑；非离子表面活性剂；聚(氧化乙烯)-聚(氧化丙烯)三-嵌段共聚物；mlt；mf59tm；saf；ribitm佐剂体系；海藻糖二霉菌酸酯(tdm)；细胞壁骨架(cws)；detoxtm；qs21；stimulontm；完全弗氏佐剂；弗氏不完全佐剂；巨噬细胞集落刺激因子(m-csf)；肿瘤坏死因子(tnf)；3-邻脱酰基化mpl；cpg寡聚核苷酸；聚氧乙烯醚、聚氧乙烯酯及多于一种佐剂的组合。在某些实施方案中，所述佐剂为细胞因子。本发明的组合物可包含一种或多种细胞因子、趋化因子或诱发细胞因子和趋化因子产生的化合物。实例包括但不限于颗粒球巨噬细胞群落刺激因子(gm-csf)、粒细胞集落刺激因子(g-csf)、巨噬细胞集落刺激因子(m-csf)、集落刺激因子(csf)、红细胞生成素(epoepo)、白细胞介素2(il-2)、白细胞介素-3(il-3)、白细胞介素4(il-4)、白细胞介素5(il-5)、白细胞介素6(il-6)、白细胞介素7(il-7)、白细胞介素8(il-8)、白细胞介素10(il-10)、白细胞介素12(il-12)、白细胞介素15(il-15)、白细胞介素18(il-18)、干扰素α(ifnα)、干扰素β(ifnβ)、干扰素γ(ifnγ)、干扰素ω(ifnω)、干扰素τ(ifnτ)、干扰素γ诱发因子i(igif)、转化生长因子β(tgf-β)、rantes(在激活时调节，正常t-细胞表达和推测起来分泌)、巨噬细胞炎症性蛋白质(例如，mip-1α和mip-1β)、利什曼虫伸长引发因子(leif)和flt-3配体。在某些实施方案中，本发明的组合物还包含另一组分，例如具有免疫活性的多肽。例如，具有免疫活性的蛋白质为共刺激分子，例如toll样受体(“tlr”)、b7.1或b7.2。“b7”在本文中用以通指b7.1或b7.2。例如在t-和nk-细胞上与cd28相互作用的b7-1(cd80)或b7-2(cd86)的细胞外域的共刺激分子可作为氨基末端融合体施用到并入在本发明中使用的可溶性cd1d复合物的结构中的β2-微球蛋白。参见，例如wo9964597，1999年12月16日公开。在某些实施方案中，将例如b7信号分子的共刺激分子并入本发明的组合物允许通过本发明的改性糖脂/cd1d复合物更有效并长时间地激活nkt细胞。在其它实施方案中，本发明的组合物还包含额外的佐剂组分，例如上述佐剂中的任一种，例如lps衍生物(例如，mpl)、tlr9激动剂(例如，cpgodns)、tlr7/8激动剂(例如，咪喹莫特)、细胞因子和生长因子；细菌组分(例如，内毒素，特定地讲，超级抗原，外毒素和细胞壁组分)；基于铝的盐；基于钙的盐；氧化硅；多核苷酸；类毒素；血清蛋白、病毒和源于病毒的物质、毒素、毒液、咪唑并喹啉化合物、泊洛沙姆、阳离子脂质和toll样受体(tlr)激动剂。可有效的tlr激动剂佐剂的实例包括但不限于：n-乙酰基胞壁酰基-l-丙氨酸-d-异谷氨酰胺(mdp)、脂多糖(lps)、遗传改性和/或降解的lps、明矾、葡聚糖、集落刺激因子(例如，epo、gm-csf、g-csf、m-csf、聚乙二醇化g-csf、scf、il-3、il6、pixy321)、干扰素(例如，γ-干扰素、α-干扰素)、白细胞介素(例如，il-1、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-10、il-12、il-15、il-18)、皂苷(例如，qs21)、单磷酸脂质a(mpl)、3-脱邻酰基化单磷酸脂质a(3d-mpl)、未甲基化的cpg序列、1-甲基色氨酸、精氨酸酶抑制剂、环磷酰胺、阻断免疫抑制功能的抗体(例如，抗-ctla4抗体)、脂质(例如，棕榈酸残基)、三棕榈酰基-s-甘油基半胱氨酰基丝氨酰基-丝氨酸p3css)和弗氏佐剂。供选或额外地，本发明的组合物还可包含调整免疫细胞激活的淋巴因子或细胞因子，例如转化生长因子(tgf，例如tgfα和tgfβ)；α干扰素(例如ifnα)；β干扰素(例如ifnβ)；γ干扰素(例如ifnγ)；或淋巴细胞功能相关蛋白质，例如lfa-1或lfa-3；或细胞间粘附分子，例如icam-1或icam-2。其它佐剂实例包括化合物，例如沙托立宾(isatoribin)及其衍生物(anadyspharmaceuticals)或咪唑并喹啉胺，例如咪喹莫特和雷西莫特(resiquimod)(dockrell和kinghom,j.antimicrob.chemother.,48:751-755(2001)和hemmi等，nat.immunol.,3:196-200(2002)；鸟嘌啉核糖核苷，例如c8-取代的或n7,c-8-二取代的鸟嘌啉核糖核苷(lee等，proc.natl.acad.sci.usa,100:6646-6651(2003)；和在专利公告jp-2005-089,334号、wo99/32122、wo98/01448；wo05/092893和wo05/092892中公开的化合物；及在lee等，procnatlacadsciusa,103(6):1828-1833(2006)中公开的tlr-7激动剂sm360320(9-苄基-8-羟基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌啉)。除了沙托立宾之外，其它tlr激动剂佐剂包括9-苄基-8-羟基-2-(2-甲氧基乙氧基)腺嘌啉(sm360320)和actilontm(coleypharmaceuticalgroup,inc.)。可结合本发明的组合物使用的其它佐剂公开在pct公告wo2005/000348号、美国专利公告2007/0292418号和美国专利公告2007/0287664号中。本发明的组合物还可包含免疫原性多肽。在某些实施方案中，本发明的改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性糖脂/cd1d复合物)可作为用于递送异源抗原、目标分子或免疫原的抗原载体使用。异源抗原、目标分子或免疫原可包括但不限于免疫原性多肽。“免疫原性多肽”意欲涵盖抗原多肽或免疫原性多肽，例如具有表位或表位的组合的聚-氨基酸物质。本文使用的免疫原性多肽为在引入脊椎动物中时与脊椎动物的免疫系统分子反应的多肽，即为抗原性的；和/或诱发脊椎动物中的免疫反应，即，为免疫原性的。很可能免疫原性多肽也将是抗原性的，但抗原性多肽由于其大小或构象而未必可为免疫原性的。抗原性和免疫原性多肽的实例包括但不限于来自例如细菌、病毒、寄生虫或真菌的传染物的多肽；过敏原，例如来自宠物皮屑、植物、粉尘及其它环境来源的那些；以及例如肿瘤相关抗原的某些自多肽。包含抗原性或免疫原性多肽的本发明的改性糖脂复合物可用于预防或治疗，例如治愈、缓解、减轻病毒、细菌、真菌和寄生虫传染性疾病的严重性，或预防或降低病毒、细菌、真菌和寄生虫传染性疾病的触染，以及治疗过敏症或例如癌症的增生性疾病。另外，包含抗原性和免疫原性多肽的本发明的改性糖脂/蛋白质复合物可用于预防或治疗，例如治愈、缓解或减轻以下疾病的严重性：包括但不限于以下器官和组织的癌症：口腔和咽(例如，舌、口、咽)、消化系统(例如，食管、胃、小肠、结肠、直肠、肛门、肛管、直肠肛门、肝、胆囊、胰腺)、呼吸系统(例如，喉头、肺)、骨骼、关节、软组织(包括心脏)、皮肤、黑素瘤、乳腺、生殖器官(例如，宫颈、子宫内膜、卵巢、女阴、阴道、前列腺、睾丸、阴茎)、泌尿系统(例如，膀胱、肾、输尿管及其它泌尿器)、眼睛、脑、内分泌系统(例如，甲状腺及其它内分泌)；淋巴瘤(例如，霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤)；多发性骨髓瘤；白血病(例如，急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓白血病)。包含抗原性和免疫原性多肽的本发明的改性糖脂/蛋白质复合物可用于预防或处置，例如治愈、缓解或减轻由例如病毒、细菌、真菌和寄生虫剂的传染物引起的疾病的严重性。病毒抗原性和免疫原性多肽的实例包括但不限于腺病毒多肽；甲病毒属多肽；嵌杯样病毒多肽，例如嵌杯样病毒衣壳抗原；冠状病毒多肽；瘟热病毒多肽；埃博拉病毒多肽；肠道病毒多肽；黄病毒多肽；肝炎病毒(ae)多肽，例如b型肝炎核或表面抗原；疱疹病毒多肽，例如单纯性疱疹病毒或水痘带状疱疹病毒糖蛋白；免疫缺陷病毒多肽，例如艾滋病毒包裹体或蛋白酶；感染性腹膜炎病毒多肽；流感病毒多肽，例如流行性感冒a血球凝集素、神经氨糖酸苷酶或核蛋白；白血病毒多肽；马尔堡病毒多肽；正粘病毒多肽；乳头状瘤病毒多肽；副流感病毒多肽，例如血球凝集素/神经氨糖酸苷酶；副粘病毒多肽；细小病毒多肽；瘟病毒属多肽；细小核糖核酸病毒多肽，例如脊髓灰质炎病毒衣壳多肽；痘病毒多肽，例如水痘病毒多肽；狂犬病病毒多肽，例如狂犬病病毒糖蛋白g；呼肠孤病毒多肽；反转录病毒多肽；和轮状病毒多肽。细菌抗原性和免疫原性多肽的实例包括但不限于放线菌属(actinomyces)多肽；芽胞杆菌属(bacillus)多肽，例如来自炭疽杆菌(bacillusanthracis)的免疫原性多肽；畸形菌体(bacteroides)多肽；博代杆菌属(bordetella)多肽；巴尔通氏体属(bartonella)多肽；包柔氏螺旋体属多肽，例如伯氏包柔螺旋体(b.burgdorferi)ospa；布鲁氏菌属(brucella)多肽、弯曲杆菌属(campylobacter)多肽、(capnocytophaga)多肽、衣原体属(chlamydia)多肽；梭状芽孢杆菌(clostridium)多肽、棒状杆菌属(corynebacterium)多肽、考克斯氏体属(coxiella)多肽、潜蚤属(dermatophilus)多肽；肠球菌(enterococcus)多肽；埃里希氏体属(ehrlichia)多肽；埃希氏菌属(escherichia)多肽；弗朗西斯氏菌属(francisella)多肽；梭菌属(fusobacterium)多肽；血巴尔通氏体属(haemobartonella)多肽；嗜血杆菌属(haemophilus)多肽，例如流感型嗜血杆菌属b外膜蛋白；螺杆菌属(helicobacter)多肽；克雷伯氏菌属(klebsiella)多肽；l型细菌(lformbacteria)多肽；钩端螺旋体属(leptospira)多肽；李斯特菌属(listeria)多肽；分枝杆菌(mycobacteria)多肽；支原体多肽；奈瑟氏菌属(neisseria)多肽；新立克次氏体属(neorickettsia)多肽；诺卡氏菌属(nocardia)多肽；巴斯德氏菌属(pasteurella)多肽；消化球菌属(peptococcus)多肽；消化链球菌属(peptostreptococcus)多肽；肺炎球菌(pneumococcus)多肽；变形杆菌属(proteus)多肽；假单胞菌属(pseudomonas)多肽；立克次氏体(rickettsia)多肽；巴尔通氏体(rochalimaea)多肽；沙门氏菌属(salmonella)多肽；志贺氏菌属(shigella)多肽；葡萄球菌多肽；链球菌多肽，例如产脓链球菌(s.pyogenes)m蛋白质；密螺旋体属(treponema)多肽；和耶尔森氏菌属(yersinia)多肽，例如y.鼠疫f1和v抗原。寄生虫抗原性和免疫原性多肽的实例包括但不限于结肠小袋虫(balantidiumcoli)多肽、痢疾内变形虫(entamoebahistolytica)多肽、肝片吸虫(fasciolahepatica)多肽、肠兰伯式鞭毛虫(giardialamblia)多肽、利什曼虫(leishmania)多肽和疟原虫属(plasmodium)多肽(例如，恶性疟原虫(plasmodiumfalciparum)多肽)。真菌抗原性和免疫原性多肽的实例包括但不限于曲霉属(aspergillus)多肽、念珠菌属(candida)多肽、粗球孢子菌(coccidiodesimmitis)或c.posadasii多肽、隐球菌属(cryptococcus)多肽、组织孢浆菌属(histoplasma)多肽、肺孢子虫属(pneumocystis)多肽和副孢子菌属(paracoccidiodes)多肽。肿瘤相关抗原性和免疫原性多肽的实例包括但不限于肿瘤特异性免疫球蛋白可变区、gm2、tn、stn、thompson-friedenreich抗原(tf)、globoh、le(y)、muc1、muc2、muc3、muc4、muc5ac、muc5b、muc7、癌胚抗原、β链的人绒毛膜促性腺素(hcgβ)、c35、her2/neu、cd20、psma、egfrviii、ksa、psa、psca、gp100、mage1、mage2、trp1、trp2、酪氨酸酶、mart-1、pap、cea、bage、mage、rage及有关蛋白质。本发明的组合物还可包含其它治疗剂。治疗剂的实例包括但不限于抗代谢物、烷基化剂、蒽环霉素、抗生素和抗有丝分裂剂。抗代谢物包括甲氨喋呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪(decarbazine)。烷基化剂包括氮芥(mechlorethamine)、噻替哌(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(bsnu)和洛莫司汀(lomustine)(ccnu)、环磷酰胺(cyclothosphamide)、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、链脲佐菌素(streptozotocin)、丝裂霉素c(mitomycinc)和顺-二氯二胺铂(ii)(ddp)顺铂。蒽环霉素包括柔红霉素(daunorubicin)(先前，柔红霉素(daunomycin))和多柔比星(多柔比星)(在本文中也称作阿霉素(adriamycin))。额外的实例包括米托蒽醌(mitozantrone)和比生群(bisantrene)。抗生素包括放线菌素(dactinomycin)(先前，放线菌素(actinomycin))、博莱霉素(bleomycin)、普卡霉素(mithramycin)和安曲霉素(anthramycin)(amc)。抗有丝分裂剂包括长春新碱(vincristine)和长春花碱(vinblastine)(其通常称为长春花碱(vincaalkaloids)。其它细胞毒素剂包括丙卡巴肼(procarbazine)、羟基脲、天门酰胺酶、皮质类固醇、米托坦(mitotane)(o,p'-(ddd))、干扰素。细胞毒素剂的其它实例包括但不限于篦麻毒素(ricin)、多柔比星、紫杉醇、细胞分裂抑素b、短杆菌肽d、溴化乙锭、依托泊苷(etoposide)、鬼臼噻吩苷(tenoposide)、秋水仙碱、二羟基炭疽菌素二酮、1-2-去氢睾酮和糖皮质激素。本发明涵盖这类治疗剂的类似物和同系物。本发明的改性糖脂/蛋白质复合物，例如二苯甲酮改性糖脂/cd1d复合物，或包含其的组合物或疫苗组合物可被标记，从而可直接检测，或者可结合例如用于检测或诊断目的的特异性结合所述化合物的第二标记的免疫试剂使用。所关注的标记物可包括染料、酶、化学荧光剂、颗粒、放射性同位素或其它可直接或间接检测的试剂。供选地，可使用第二阶段标记物，例如针对本发明的化合物的成分之一的标记的抗体。合适酶标记物的实例包括但不限于苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、δ-5-类固醇异构酶、酵母菌-乙醇脱氢酶、α-磷酸甘油脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、尿素酶、催化酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡糖淀粉酶和乙酰化胆碱脂酶。合适的放射性同位素标记物的实例包括3h、111in、125i、131i、32p、35s、14c、51cr、57to、58co、59fe、75se、152eu、90y、67cu、217ci、211at、212pb、47sc、109pd等。合适的非放射性同位素标记物的实例包括157gd、55mn、162dy、52tr和56fe。合适荧光标记物的实例包括152eu标记物、荧光素标记物、异硫氰酸酯标记物、罗丹明标记物、藻红蛋白标记物、藻青蛋白标记物、别藻蓝蛋白标记物、邻苯二醛标记物和荧光胺标记物。化学发光标记物的实例包括鲁米那标记物、异鲁米那标记物、芳族吖啶酯标记物、咪唑标记物、吖啶盐标记物、草酸酯标记物、荧光素标记物、荧光素酶标记物和水母蛋白标记物。核磁共振造影剂的实例包括重金属核，例如gd、mn和fe。结合上述标记物到本发明的糖脂或多肽的典型技术由kennedy等，clin.chim.acta70:1-31(1976)和schurs等，clin.chim.acta81:1-40(1977)提供。稍后提到的偶合技术为戊二醛法、高碘酸法、二马来酰亚胺法、间马来酰亚胺苄基-n-羟基-丁二酰亚胺酯法，所有方法都通过引用的方式结合到本文中。本发明的组合物调整免疫反应的能力可通过体外测定容易地确定。在所述测定中使用的nkt细胞包括转化nkt细胞系或从哺乳动物中、例如从人类或例如小鼠的啮齿类动物中分离的nkt细胞。nkt细胞可通过拣选结合cd1d:α-galcer四聚体的细胞而从哺乳动物中分离。参见，例如benlagha等，jexpmed191:1895-1903(2000)；matsuda等，jexpmed192:741-754(2000)；和karadimitris等，procnatlacadsciusa98:3294-3298(2001)。确定本发明的化合物或组合物是否能够调整nkt细胞的活性的合适测定通过共同培养nkt细胞和抗原递呈细胞，将所关注的特定化合物或组合物加到直接靶向抗原递呈细胞或nkt细胞的培养基中并测量il-4或ifn-γ产生来进行。相对于在缺乏本发明的化合物或组合物的情况下同样共同培养的细胞而言，il-4或ifn-γ产生的显著增加或减少指示nkt细胞的刺激或抑制。将在所述测定中采用的nkt细胞在适合增殖的条件下培育。例如，nkt细胞杂交瘤合适地在约37℃和5％co2下在完全培养基(补充有10％fbs、青霉素/链霉素、l-谷氨酰胺和5x10-5m2-巯基乙醇的rpmi1640)中培育。可将连续稀释的化合物加到nkt细胞培养基中。加到nkt细胞中的化合物的合适浓度通常将在10-12-106m范围内。可使用给出略微次极大nkt细胞激活的抗原剂量和apc数来检测由本发明的化合物产生nkt细胞反应的刺激或抑制。供选地，不是测量例如il-4或ifn-γ的表达的蛋白质，nkt细胞激活的调整可通过如通过如在本领域中认可的放射性标记技术所测量在抗原依赖性t细胞增殖方面的改变来确定。例如，可将标记的(例如，氚化的)核苷酸引入测定培养基中。所述标签核苷酸并入dna中充当t细胞增殖的度量。该测定不适合不需要抗原提呈来生长的nkt细胞，例如nkt细胞杂交瘤。在与本发明的化合物或组合物接触之后t细胞增殖水平的差异指示复合物调整t细胞活性。例如，nkt细胞增殖减少指示该化合物或组合物可抑制免疫反应。nkt细胞增殖增加指示该化合物或组合物可刺激免疫反应。额外地，可使用51cr释放测定来确定细胞毒素活性。这些体外测定卡用以选择并鉴定能够适当地调整免疫反应的改性糖脂和改性糖脂/蛋白质复合物及包含其的组合物。如上所述的测定，例如测量il-4或ifn-γ产生或nkt细胞增殖，用以确定与该化合物接触是否调整t细胞激活。额外或供选地，可使用在例如小鼠、兔、非人类灵长类动物的动物中的免疫激发实验来鉴定能够适当地调整免疫反应且可有效治疗和/或预防在人类中的例如结核病的细菌疾病的改性糖脂和改性糖脂/蛋白质复合物及包含其的组合物。本发明的改性糖脂及改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物可用于预防疾病并且治疗性治疗疾病，所述疾病例如为病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病、寄生虫病、过敏性疾病或例如癌症的增生性疾病或自体免疫或炎性疾病。在已经遭受疾病的个体中，本发明还用于进一步刺激或调整动物的免疫系统，因此降低或消除与所述疾病或病症相关的症状。本文定义的“治疗”是指使用本发明的一种或多种改性细菌、组合物或疫苗来预防、治愈、延迟或降低在动物中给定疾病症状的严重性，和/或引起在已经染上所述疾病且因此需要治疗的动物中经过指定的时间疾病不会恶化。术语“预防”是指使用本发明的一种或多种改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗以在尚未染上疾病的动物中产生免疫性，由此如果所述动物随后倾向于发展所述疾病，则预防或降低疾病症状。本发明的方法因此可称为治疗方法或预防或预防处理方法。并不要求本发明的任何改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物提供对于致病原的总体免疫性或完全治愈或消除所有疾病症状。本文使用的“需要治疗或预防免疫性的受试者”是指如下个体，希望对其治疗，即预防、治愈、延迟或降低某些疾病症状的严重性和/或引起经过指定的时间疾病不会恶化。“有效量”为以单剂量或作为一系列的一部分施用到个体有效治疗和/或预防的量。例如，如在用传染性结核分枝杆菌激发之后约两周测定，当其施用引起相对于未治疗的个体而言与结核分枝杆菌相关的疾病症状的发病率或严重性降低时，该量为有效的。该量根据待治疗的个体的健康和身体状况、待治疗的个体的分类群(例如，人类、非人类灵长类动物、灵长类动物等)、个体的免疫系统的反应能力、所要的保护程度、疫苗的制剂、医疗情形的专业评价及其它有关因素而变化。可以预期有效量将在可经由常规试验确定的相对广泛的范围内。术语“脊椎动物”旨在涵盖单一“脊椎动物”以及多种“脊椎动物”且包括哺乳动物和鸟类，以及鱼、爬行动物及两栖动物。术语“哺乳动物”旨在涵盖单一“哺乳动物”和多种“哺乳动物”且包括但不限于人类；灵长类动物，例如猿、猴(例如，猫头鹰、松鼠、卷尾猴(cebus)、猕猴、非洲绿猴(africangreen)、赤猴(patas)、食蟹猴(cynomolgus)和长尾猴)、猩猩、狒狒、长臂猿和黑猩猩；犬类，例如狗和狼；猫科动物，例如猫、狮子和老虎；马属动物，例如马、驴和斑马；食用动物，例如奶牛、猪和绵羊；有蹄类动物，例如鹿和长颈鹿；熊科动物，例如熊；及其它动物，例如兔、小鼠、白鼬、海豹、鲸。特定地讲，所述哺乳动物可为人类受试者、食用动物或伴侣动物。术语“鸟类”旨在涵盖单一“鸟”和多种“鸟”，且包括但不限于野生水鸟，例如鸭、鹅、燕鸥、剪嘴鸥和鸥；以及家养鸟类物种，例如火鸡、鸡、鹑、雉鸡、鹅和鸭。术语“鸟”还涵盖雀形目鸟，例如八哥和虎皮鹦鹉。本发明提供预防或治疗在需要所述治疗或预防的受试者中的疾病的方法，所述方法包括向具有所述疾病或倾向于染上所述疾病的所述受试者施用包含改性糖脂或例如如本文所述的改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物的改性糖脂/蛋白质复合物的组合物。在其它实施方案中，所述改性糖脂/蛋白质复合物的蛋白质可用作递送病原体或肿瘤特异抗原的异源抗原或目标分子的抗原载体。本发明还包括调整(即，刺激或抑制)免疫反应的方法，其包括向动物施用有效量的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物，例如如本文所述的改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物。在其它实施方案中，所述组合物还包含来自另一病原体或肿瘤特异抗原的异源抗原或目标分子，且所述免疫反应为相对于所述异源抗原或目标分子的引发免疫反应。在某些实施方案中，本发明的方法包括通过向具有例如传染性或增生性疾病的疾病的受试者施用以足以改变所述疾病的进展的量的本发明的组合物，例如本发明的改性糖脂/cd1d复合物来治疗在具有所述疾病的受试者中的所述疾病。在其它实施方案中，本发明的方法包括通过向需要预防例如传染性疾病或增生性疾病的疾病的受试者施用以足以相对于施用未改性的糖脂/cd1d复合物(例如，缺乏光反应性基团的糖脂/cd1d复合物)相比增强抵抗抗原的免疫反应的量的本发明的组合物，例如本发明的改性糖脂/cd1d复合物来预防在需要预防所述疾病的受试者中的所述疾病。在其它实施方案中，治疗或预防的疾病可为而不限于病毒、细菌、真菌或寄生虫传染性疾病、过敏症或例如癌症的增生性疾病或例如多发性硬化、糖尿病或干燥综合征(sjogren’ssyndrome)的自体免疫或炎性疾病。更具体地讲，所述疾病可为例如结核病、汉森病(hansen'sdisease)、与结核病相似的肺病、淋巴腺炎、皮肤病、传播疾病、腺鼠疫、肺鼠疫、兔热病、军团病(legionairre'sdisease)、炭疽、伤寒、副伤寒、食源性疾病(foodborneillness)、李斯特菌病(listeriosis)、疟疾、hiv、siv、hpv、rsv、流行性感冒、肝炎(hav、hbv和hcv)。在另一实施方案中，本发明的方法包括增强在受试者中的免疫反应，其包括向所述受试者施用本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)；且其中所述改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物以足以增强抵抗抗原的抗原特异性cd8t-细胞反应且增强在所述动物中自然杀伤t(nkt)细胞的活性的量施用。本文使用的“有此需要的受试者”是指如下个体，希望对其治疗，即预防、治愈、延迟或降低例如细菌感染的疾病的症状的严重性和/或引起经过指定的时间疾病不会恶化。根据这些方法，本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)、组合物或疫苗组合物可以足以改变疾病的进展的量施用。“免疫”(施用疫苗)为最常见且普遍的方法，且本发明使用的疫苗基本上可为旨在活性免疫预防的任何制剂，包括而不限于有毒菌株的杀死微生物和减毒菌株的活微生物的制剂。stedman'sillustratedmedicaldictionary(第24版),williams&wilkins,baltimore,1526页(1982)。在一些情况下，疫苗必须不止一次施用，从而诱发有效保护；例如，已知抗-毒素疫苗必须以多剂量给予。本文使用的术语“初免”或“一次”和“加强”分别指初始免疫和后续免疫，即，根据定义，这些术语通常属于免疫学。然而，在例如其中初免组分和加强组分以单一制剂的某些实施方案中，初始免疫和后续免疫不必作为“初免”组合物和“加强”组合物同时施用。还参见mcshaneh,curropinmolther4(1):13-4(2002)；和xingz和charterstj,expertrevvaccines6(4):539-46(2007)，这两者通过引用结合到本文中来。在某些实施方案中，本发明的一种或多种组合物以“初免-加强”方案使用。在某些实施方案中，将本发明的一种或多种疫苗组合物递送到脊椎动物，由此引发所述脊椎动物对于例如分枝杆菌抗原的细菌抗原或肿瘤抗原的免疫反应，且随后利用第二免疫原性组合物作为加强接种。在某些实施方案中，将本发明的一种或多种疫苗组合物递送到脊椎动物，由此引发所述脊椎动物对于例如由改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物运载的异源抗原或目标分子的异源抗原或目标分子的免疫反应，且随后利用第二免疫原性组合物作为加强接种。在另一实施方案中，使用本发明的一种或多种疫苗组合物来引发免疫性，且随后使用例如重组细菌或肿瘤疫苗的第二免疫原性组合物加强抗细菌或抗肿瘤免疫反应。所述疫苗组合物可包含一种或多种表达编码如本文所述的免疫原性多肽的一种或多种基因的载体。本发明还提供在脊椎动物中产生、增强或调整对于例如细菌、真菌、病毒或寄生虫病原体的病原体或肿瘤抗原的保护性和/或治疗性免疫反应的方法，其包括向需要治疗性和/或预防性免疫性的脊椎动物施用如本文所述的改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物中的一种或多种。在这些实施方案中的一些中，所述组合物包含改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物。在某些实施方案中，所述改性糖脂/cd1d复合物还包含异源抗原或目标分子。在某些实施方案中，本发明的改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物可用于降低获得对疫苗的有利反应所需要的剂量。这将具有降低局部或全身性毒性的潜在益处，因此增加疫苗的安全性概况。另外，这可具有允许生产成本降低的益处。本发明的某些实施方案包括降低或消除nkt细胞对多次施用单独施用的神经酰胺类糖脂抗原(例如在细菌细胞壁的情况下递呈到nkt细胞的那些)的无反应性反应。已经显示多次施用单独施用的α-galcer导致nkt细胞变得长时间无反应。其中例如α-galcer的改性糖脂作为改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物的一部分施用的本发明可防止nkt细胞对抗原无反应，并且允许在多次施用时长时间反应。因此，nkt细胞响应用本发明的载有改性神经酰胺类糖脂的改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物的刺激而被激活，且此外，nkt细胞可响应通过本发明的载有改性神经酰胺类糖脂的改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物的再次刺激而被再次激活。根据本发明的方法，施用如本文所述的包含改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，神经酰胺类糖脂抗原/cd1d复合物)的组合物以调整在例如脊椎动物如哺乳动物如人类的动物中的免疫反应。在某些实施方案中，本发明的方法引起例如对于在改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)之前、之后或同时递送的免疫原的免疫反应增强。例如具有免疫原的本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物的施用通常可引起细胞因子从例如nkt细胞或nk细胞的免疫细胞中释放。响应本发明的组合物或疫苗组合物的施用而释放的细胞因子可为与th1-型免疫反应相关的那些细胞因子，例如干扰素γ和tnf-α。供选地或额外地，施用本发明的改性糖脂、组合物或疫苗组合物可引起例如il-4、il-5、il-10或il-13的与th2-型免疫反应相关的细胞因子的释放。供选地或额外地，施用本发明的改性糖脂、组合物或疫苗组合物可引起例如il-2、il-1β、il-12、il-17、il-23、tnf-β/lt、mcp-2制瘤素-m和rantes的其它细胞因子的释放。调整所释放的细胞因子的类型的方法包括改变所述神经酰胺类糖脂/cd1d蛋白质复合物的神经酰胺类糖脂抗原。对于其对于从nkt或其它免疫细胞中释放细胞因子的影响选择和试验各种神经酰胺类糖脂抗原可使用在本文其它地方及在porcelli，美国专利申请公告2006/0052316号中描述的体外测定以及通过本领域的普通技术人员熟知的额外方法进行。本发明的改性糖脂和改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)和包含其的疫苗组合物的施用可通过诱发nkt细胞增殖以及通过诱发包括但不限于nk细胞、ctl、例如cd8+或cd4+t淋巴细胞的其它t淋巴细胞、树状细胞、b淋巴细胞及其它细胞的其它免疫和发炎细胞的募集和/或激活来进一步调整免疫反应。在某些实施方案中，本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物和包含其的组合物的施用影响一种或多种nkt细胞活性，所述nkt细胞活性例如但不限于细胞增殖、一种或多种细胞因子的产生或包括但不限于nk细胞、ctl、例如cd8+或cd4+t淋巴细胞的其它t淋巴细胞、树状细胞、b淋巴细胞及其它细胞的非nkt免疫系统细胞的募集和/或激活。在一些实施方案中，所述改性糖脂为在具有钝化1型细胞因子(例如，ifnγ)诱发的inkt细胞中显示朝诱发2型细胞因子，即具有消炎作用的细胞因子(例如，il-4)的偏移的改性神经酰胺类糖脂。这类神经酰胺类糖脂的非限制性实例描述在美国专利7,772,380号和8,022,043号中，其各自通过引用整体结合到本文中来。在这些实施方案中的一些中，所述神经酰胺类糖脂具有以下两种结构中的一种。本发明的某些实施方案包括本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)作为重组疫苗用于调整对于与所述改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)一起或刚好之前或之后不久施用的例如病原体抗原或肿瘤抗原的免疫原的免疫反应的用途。因此，本发明提供在动物中诱发对于免疫原的免疫反应的方法，其中所述方法包括向有此需要的动物施用包含免疫原的组合物，其存在于改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)中。根据该实施方案，所述改性糖脂/cd1d复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)以相对于在没有改性糖脂/cd1d复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)的情况下施用例如细菌性病原体或由重组性细菌表达的免疫原的免疫原而言足以诱发相对于所述免疫原的免疫反应的量施用。作为疫苗使用的改性糖脂或改性糖脂/cd1d复合物在某些实施方案中可靶向如例如在通过引用整体结合到本文中来的美国专利申请公告2006/0269540号中描述的特定器官、组织、细胞或细胞表面标志物。在某些实施方案中，本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)或包含其的组合物作为治疗性疫苗施用到已经遭受疾病的动物中。根据这些方法，由本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物引起的免疫反应通过降低症状或减轻疾病的严重性而有效治疗，例如影响所述疾病的结果，且所述改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物以相对于在缺乏所述改性糖脂/蛋白质复合物的情况下施用免疫原而言足以调整相对于所述免疫原的免疫反应的量施用。供选地，本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)和包含其的组合物作为预防处理疫苗施用，即预防或降低例如动物在将来可染上的传染性疾病的疾病的症状。根据这些方法，由所述改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)引起的免疫反应通过降低症状或减轻疾病的严重性而有效预防，例如影响所述疾病的结果，且所述改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物以相对于在缺乏所述改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)的情况下施用免疫原而言足以调整相对于所述免疫原的免疫反应的量施用。如本文所述的方法、改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物还可用于提高对于例如改性糖脂/蛋白质复合物的传染物的免疫反应，其中所述复合物包含异源抗原或目标分子，例如病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原或寄生虫抗原。可导致可通过本发明的方法、改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物治疗的疾病或症状的传染物包括但不限于病毒、细菌、真菌和寄生虫。病毒的实例包括但不限于以下dna和rna病毒家族：虫媒病毒(arbovirus)、腺病毒科(adenoviridae)、砂粒病毒科(arenaviridae)、动脉炎病毒属(arterivirus)、双rna病毒科(birnaviridae)、布尼亚病毒科(bunyaviridae)、嵌杯病毒科(caliciviridae)、圆环病毒科(circoviridae)、冠状病毒科(coronaviridae)、黄病毒科(flaviviridae)、嗜肝病毒科(hepadnaviridae)(肝炎)、疱疹病毒科(herpesviridae)(例如，巨细胞病毒、单纯性疱疹、带状疱疹)、单股负链病毒目(mononegavirus)(例如，副粘病毒科、麻疹病毒属、弹状病毒科)、正粘病毒科(orthomyxoviridae)(例如，流行性感冒)、乳多泡病毒科(papovaviridae)、细小病毒科(parvoviridae)、小核粮核酸病毒(picornaviridae)、痘病毒科(poxviridae)(例如，天花或牛痘)、呼肠孤病毒科(reoviridae)(例如，轮状病毒)、反录病毒科(retroviridae)(htlv-i、htlv-ii、慢病毒(lentivirus))和披膜病毒科(togaviridae)(例如，风疹病毒属(rubivirus))。在这些家族内的病毒科导致包括但不限于以下的多种疾病或症状：关节炎、细支气管炎、脑炎、眼睛感染(例如，结膜炎、角膜炎)、慢性疲劳综合征、肝炎(a、b、c、e、慢性活性、δ)、脑膜炎、机会致病菌感染(例如，aids)、肺炎、伯基特氏淋巴瘤(burkitt'slymphoma)、水痘、出血热、囊虫病、腮腺炎、副流行性感冒、狂犬病、普通感冒、脊髓灰质炎、白血病、风疹、性传播疾病、皮肤疾病(例如，卡波西肉瘤(kaposi'swarts))和病毒败血症。类似地，可导致疾病或症状的细菌或真菌物可通过本发明的方法、改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物治疗或预防。这些包括但不限于以下革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌家族和真菌：放线菌目(actinomycetales)(例如，棒状杆菌属、分枝杆菌、诺卡氏菌属(norcardia))、曲霉菌、芽胞杆菌科(例如，炭疽、梭状芽孢杆菌)、拟杆菌科(bacteroidaceae)、芽生菌、博代杆菌属、包柔氏螺旋体属、布鲁氏杆菌、念珠菌、弯曲杆菌属、球孢子菌、隐球菌、dermatocycoses、肠内菌科(克雷伯氏菌属、沙门氏菌属、沙雷氏菌属、耶尔森氏菌属)、丹毒丝菌属、螺杆菌属、军团杆菌(legionellosis)、钩端螺旋体病、李斯特菌属、霉质体目、奈瑟氏球菌科(例如，不动杆菌属、淋病、脑膜炎球菌(menigococcal))、巴斯德菌(pasteurellacea)感染例如，放线杆菌属、嗜血杆菌属(heamophilus)、巴斯德氏菌属)、假单胞菌属、立克次氏体科、衣原体科、梅毒和葡萄球菌。这些细菌或真菌家族可导致以下疾病或症状，包括但不限于：菌血症、心内膜炎、眼睛感染(结膜炎、结核病、葡萄膜炎)、牙龈炎、机会致病菌感染(例如，aids有关的感染)、甲沟炎、修复体有关的感染、莱特尔氏病、呼吸道感染，例如百日咳或积脓症、脓毒症、莱姆病、猫抓热、痢疾、副伤寒、食物中毒、伤寒、肺炎、淋病、脑膜炎、衣原体属病、梅毒、白喉炎、麻疯病、副结核病、结核病、汉森病、类似结核病的肺病、淋巴腺炎、皮肤病、传播性疾病、狼疮、波特淋菌中毒(botulism)、坏疽、破伤风、脓疱病、风湿热、猩红热、性传播疾病、皮肤疾病(例如，蜂窝织炎、球菌性皮肤病(dermatocycoses))、毒血症、尿路感染、创伤感染。此外，本发明的方法、改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物可用于治疗或预防由寄生虫物引起的疾病。可通过本发明的化合物治疗的那些包括但不限于以下家族：阿米巴病(amebiasis)、巴贝虫病(babesiosis)、球虫病(coccidiosis)、隐孢子虫病(cryptosporidiosis)、双核阿米巴病(dientamoebiasis)、马性病(dourine)、外寄生物、贾第鞭毛虫病(giardiasis)、蠕虫病(helminthiasis)、利什曼病(leishmaniasis)、泰勒虫病(theileriasis)、弓形虫病(toxoplasmosis)、锥虫病(trypanosomiasis)和毛滴虫病(trichomonas)。根据所公开的方法，在本发明方法中使用的改性糖脂、改性糖脂/蛋白质复合物、组合物或疫苗组合物可例如通过肌肉内(i.m.)、静脉内(i.v.)、皮下(s.c.)或肺内路径施用。其它合适的施用路径包括但不限于气管内、透皮、眼内、鼻内、吸入、腔内、管内(例如，施用到胰腺中)和脑内(即，施用到任何组织)施用。透皮递送包括但不限于皮内(例如，递送到真皮或表皮中)、透皮(例如，经皮)和经粘膜施用(即，施用到或穿过皮肤或粘膜组织)。腔内施用包括但不限于施用到口腔、阴道、直肠、鼻、腹膜肠空腔以及鞘内(即，施用到脊椎管)、心室内(即，施用到脑心室或心脏心室)、心房内(即，施用到心脏心房内)和蛛网膜下(即，施用到脑蛛网膜下池下)施用。本发明的组合物还包含合适的载剂。所述组合物包含治疗有效量的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物和医药学上可接受的载剂或赋形剂。所述载剂包括但不限于盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇及其组合。所述制剂将适合施用模式。术语“医药学上可接受的”是指在正确医学判断范围内适合与人类和动物的组织接触而没有过度毒性或其它并发症与合适利益/风险比相称的组合物。在一些实施方案中，本发明的组合物和疫苗为医药学上可接受的。本发明的改性糖脂或改性糖脂/蛋白质复合物(例如，改性神经酰胺类糖脂/cd1d复合物)可在例如疫苗组合物的医药组合物中与一种或多种医药学上可接受的赋形剂、载剂或稀释剂组合施用。在某些实施方案中，本发明的例如疫苗组合物的医药组合物还包含异源抗原或目标分子。应当理解，在对人类患者施用时，本发明的医药组合物的总单次或每日使用将由主治医师在正确医学判断的范围内决定。对于任何特定患者的具体治疗有效剂量水平将取决于包括以下的多种因素：待实现的反应的类型和程度；另一试剂(如果采用的话)的具体组成；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；组合物的施用次数、施用路径和排泄速率；治疗的持续时间；与具体组合物组合或一致使用的药物(例如，化疗剂)；和在医学领域中熟知的类似因素。在本领域中已知的合适制剂可在remington’spharmaceuticalsciences(最新版本),mackpublishingcompany,easton,pa中见到。将在给定的预防性或治疗性治疗中使用的组合物将以符合良好医疗实践的方式，考虑个别患者的临床状况(特别是用化合物单独预防或治疗的副作用)、化合物的递送位点、施用方法、施用进度及专业人员已知的其它因素来配制或给药。对于本文的目的而言，本发明的化合物的“有效量”因此通过这些考虑因素来确定。将对患者施用的本发明的例如疫苗组合物的组合物的适当剂量将由临床医师确定。然而，作为指导，本发明的组合物的合适量可为约101-1012cfu/剂量，例如101、102、103、104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012cfu，其悬浮在0.05-0.1ml的例如医药载剂的免疫惰性载剂中。在一个实施方案中，诱发足以预防或治疗，即治愈、缓解、减轻本文所述的疾病的严重性或预防或降低本文所述的疾病的免疫性的本发明的疫苗的有效量为约103-约107集落形成单位(cfu)/千克体重。本发明的组合物可作为单一剂量或多剂量施用。本发明的疫苗制剂可以例如适合口服施用的胶囊、液体溶液、悬浮剂或酏剂；或适合例如肠胃外、鼻内或局部施用的用于例如溶液或悬浮剂的制剂的无菌液体。本发明的组合物可经口、静脉内、直肠、肠胃外、脑池内、皮内、阴道内、腹腔内、局部(作为粉剂、软膏剂、凝胶剂、霜剂、滴剂或透皮贴片)、颊内或作为口腔或鼻喷雾施用。本文使用的术语“肠胃外”是指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节腔内注射和输注的施用模式。本发明的例如疫苗组合物的组合物可根据已知方法配制。合适的制备方法描述在例如remington’spharmaceuticalsciences，第16版，a.osol编著，mackpublishingco.,easton,pa(1980)，和remington’spharmaceuticalsciences，第19版，a.r.gennaro编著，mackpublishingco.,easton,pa(1995)中，这两者都通过引用整体结合到本文中来。尽管所述组合物可作为水溶液施用，但其也可配制为乳剂、凝胶剂、溶液剂、悬浮剂、冻干形式或在此项技术中已知的任何其它形式。另外，所述组合物可含有医药学上可接受的添加剂，例如包括稀释剂、粘合剂、稳定剂和防腐剂。一旦配制，本发明的组合物则可直接施用到受试者。待治疗的受试者可为动物，特定地讲，可治疗人类受试者。本发明的组合物通常将作为水溶液或作为用于重构的冻干制剂储存在单位或多剂量容器中，例如密封的安瓿或小瓶中。可将具有直接并入的糖脂佐剂的分枝杆菌组合物冻干并在组合物再水合并悬浮以便注射时佐剂活性将完好地复原。作为冻干制剂的实例，将10-ml小瓶用5ml无菌过滤的1％(w/v)水溶液填充，且将所得混合物冻干。输注溶液通过使用例如用于注射的抑菌水的水重构冻干的组合物来制备。本发明还提供包含一个或多个用本发明的医药组合物中的一种或多种成分填充的容器的医药包或试剂盒。与所述容器相关的可为以由管制医药或生物制品的制造、使用或销售的政府机构指定的形式的告示，该告示反映了被制造、使用或销售的机构批准用于人类施用。另外，本发明的组合物可结合其它治疗组合物使用。所述组合物的合适制剂包括但不限于作为液体溶液剂或悬浮剂的可注射剂；还可制备适合在注射之前在液体中溶解或悬浮的固体形式。所述制剂也可为乳化的或者封装在脂质体中的多肽。所述活性成分经常与医药学上可接受且与活性成分相容的赋形剂混合。合适的赋形剂例如为水、盐水、葡萄糖、甘油等及其组合。另外，如果需要，所述制剂还可包含少量的辅助物质，例如润湿或乳化剂、ph缓冲剂和/或增强活性成分的功效的佐剂。如果需要，所述组合物还可含有少量的润湿或乳化剂或者ph缓冲剂。所述组合物可为液体溶液剂、悬浮剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、持续释放制剂或粉剂。口服制剂可包括标准载剂，例如医药级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。除非另外指出，否则本发明的实施将采用细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组dna和免疫学的常规方法，其在本领域的技能之内。这类技术在文献中充分解释。参见，例如molecularcloningalaboratorymanual，第2版，sambrook等编著，coldspringharborlaboratorypress:(1989)；molecularcloning:alaboratorymanual,sambrook等编著，coldspringsharborlaboratory,newyork(1992),dnacloning,d.n.glover编，第i卷和第ii卷(1985)；oligonucleotidesynthesis,m.j.gait编(1984)；mullis等，美国专利4,683,195号；nucleicacidhybridization,b.d.hames和s.j.higgins编(1984)；transcriptionandtranslation,b.d.hames和s.j.higgins编(1984)；cultureofanimalcells,r.i.freshney,alanr.liss,inc.,(1987)；immobilizedcellsandenzymes,irlpress,(1986)；b.perbal,apracticalguidetomolecularcloning(1984)；thetreatise,methodsinenzymology,academicpress,inc.,n.y.；genetransfervectorsformammaliancells,j.h.miller和m.p.calos编，coldspringharborlaboratory(1987)；methodsinenzymology，第154卷和第155卷(wu等编著)；immunochemicalmethodsincellandmolecularbiology,mayer和walker编著，academicpress,london(1987)；handbookofexperimentalimmunology,volumesi-iv,d.m.weir和c.c.blackwell编著(1986)；manipulatingthemouseembryo,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.,(1986)；和ausubel等，currentprotocolsinmolecularbiology,johnwileyandsons,baltimore,maryland(1989)。抗体工程化的一般原理在antibodyengineering，第2版，c.a.k.borrebaeck编著，oxforduniv.press(1995)中阐述。蛋白质工程化的一般原理在proteinengineering,apracticalapproach,rickwood,d.等编著，irlpressatoxforduniv.press,oxford,eng.(1995)中阐述。抗体和抗体-半抗原结合的一般原理在nisonoff,a.,molecularimmunology，第2版，sinauerassociates,sunderland,ma(1984)；和steward,m.w.,antibodies,theirstructureandfunction,chapmanandhall,newyork,ny(1984)中阐述。额外地，通常遵循本领域已知且未特别描述的在免疫学中的标准方法，如在以下文献中：currentprotocolsinimmunology,johnwiley&sons,newyork；stites等(编著)，basicandclinical-immunology(第8版),appleton&lange,norwalk,ct(1994)和mishell和shiigi(编著),selectedmethodsincellularimmunology,w.h.freemanandco.,newyork(1980)。阐述免疫学的一般原理的标准参考资料包括currentprotocolsinimmunology,johnwiley&sons,newyork；klein,j.,immunology:thescienceofself-nonselfdiscrimination,johnwiley&sons,newyork(1982)；kennett,r.等编著，monoclonalantibodies,hybridoma:anewdimensioninbiologicalanalyses,plenumpress,newyork(1980)；campbell,a.,“monoclonalantibodytechnology”burden,r.等编著，laboratorytechniquesinbiochemistryandmolecularbiology,第13卷，elsevere,amsterdam(1984),kubyimmunnology第4版，编者richarda.goldsby,thomasj.kindt和barbaraa.osborne,h.freemand&co.(2000)；roitt,i.,brostoff,j.和maled.,immunology第6版，london:mosby(2001)；abbasa.,abul,a.和lichtman,a.,cellularandmolecularimmunology第5版，elsevierhealthsciencesdivision(2005)；kontermann和dubel,antibodyengineering,springerverlan(2001)；sambrook和russell,molecularcloning:alaboratorymanual.coldspringharborpress(2001)；lewin,genesviii,prenticehall(2003)；harlow和lane,antibodies:alaboratorymanual,coldspringharborpress(1988)；dieffenbach和dveksler,pcrprimercoldspringharborpress(2003)。上文提到的所有参考文献以及本文提到的所有参考文献都通过引用整体结合到本文中来。本文使用的所有技术和科学术语都具有相同含义。已经进行尝试以确保关于所使用的数值(例如，量、温度等)的准确性，但应该说明一些实验误差和偏差。应当注意术语“一个/种”实体是指一种或多种实体，例如“一种蛋白质”应理解为表示一种或多种蛋白质。因而，术语“一个/种”、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”在本文中可互换使用。贯穿本说明书和权利要求书，除非上下文需要，否则词语“包含”以非排他性意义使用。在提到数值时，本文使用的术语“约”意欲涵盖在一些实施方案中自所规定的量±50％、在一些实施方案中±20％、在一些实施方案中±10％、在一些实施方案中±5％、在一些实施方案中±1％、在一些实施方案中±0.5％且在一些实施方案中±0.1％的变化，因为这样的变化对于进行所公开方法或采用所公开组合物是适当的。在提供数值的范围的情况下，应当理解，本发明涵盖该范围的上限和下限之间的每一个居间数值(除非上下文另外清楚地指出，否则达到该下限单位的十分之一)以及在所指出范围内的任何其它指出的或居间的数值。可以独立地被包括在该小范围内的这些小范围的上限和下限也被涵盖在本发明内，受制于在所指出范围内任何具体排除的极限点。在所指出的范围包括一个或两个极限点的情况下，排除任何一个或两个那些所包括的极限点的范围也被包括在本发明中。实验实施例1αgalcer-二苯甲酮衍生物的合成合成α-galcer二苯甲酮衍生物的基本方案示于图1中。步骤a：单烷基化程序的通用方法在0℃下向二醇(10mmol，4.0当量)在无水dmf(40ml)中的冷溶液中分小批加入氢化钠(10mmol，4.0当量)并允许混合物搅拌30分钟。随后逐滴加入3-溴甲基-苯基-甲酮1(2.5mmol，1.0当量)在dmf(20ml)中的溶液。允许反应混合物在室温下搅拌过夜且随后吸收在水(100ml)中。随后将所得混合物用ch2cl2(3x30ml)提取。将组合的有机层用盐水(30ml)洗涤，经无水na2so4干燥并真空浓缩。残留物随后通过快速色谱法使用己烷:etoac(5:1)作为洗脱剂来纯化。步骤b：将单烷基化的二苯甲酮醇衍生物氧化成相应羧酸的通用方法。将来自上文的单烷基化的二苯甲酮衍生物(1mmol)溶解于thf(20ml)中并加入吡啶鎓重铬酸盐(pdc)(3mmol，3当量)。允许反应混合物在室温下搅拌48小时且随后吸收在水(20ml)中。随后将所得混合物用ch2cl2(3x30ml)提取。将组合的有机层用盐水(30ml)洗涤，经无水na2so4干燥并真空浓缩。残留物随后通过快速色谱法使用在氯仿中的10％甲醇作为洗脱剂来纯化。步骤a’：3-(羟基甲基)二苯甲酮如在所报道的文献中所述，3-(羟基甲基)二苯甲酮(10mmol)通过在caco3存在下使3-(溴甲基)二苯甲酮(12mmol)在thf:h2o(1:1)的混合物中回流而从3-(溴甲基)二苯甲酮中得到。步骤b’：与溴酸反应。在0℃下向3-(羟基甲基)二苯甲酮(1mmol，1当量)在dmf(10ml)和六甲基磷酰胺(hmpa)(1ml)的混合物中的冷溶液中加入少量的氢化钠(nah)(60％，在矿物油中)(1.2mmol，1.2当量)。在逐滴加入溶解于dmf(5ml)中的相应溴酸[n＝5、6、9](1.2mmol，1.2当量)之后，允许反应混合物搅拌20分钟。使反应物在室温下过夜并使用甲醇中止过量的nah。随后将反应物吸收在水(50ml)中并用etoac(3x40ml)提取。将组合的有机层用盐水(30ml)洗涤，经无水na2so4干燥并真空浓缩。残留物随后通过快速色谱法使用在氯仿中的10％甲醇作为洗脱剂来纯化。步骤c：形成酰氯。将来自步骤b和b’的二苯甲酮甲酸衍生物(0.5mmol)加到纯乙二酰氯(1ml)中并在70℃下搅拌2小时，此后将溶液冷却到室温并在氮气流下除去未反应的乙二酰氯。在减压下除去残留挥发物。步骤d：合成化合物db11-1(n＝4)、db12-6(n＝6)、db12-7(n＝7)、db11-2(n＝8)、db12-8(n＝9)、db12-9(n＝10)、db11-3(n＝14)将来自上文的所得粗酰基氯溶解于thf(1ml)中并加到胺(0.5mmol，1当量)在thf/naoac(饱和)(1:1，1ml)中的溶液中。将反应物有力地搅拌过夜，此后除去有机相。将水相用thf(2x1ml)进一步提取，且将有机相浓缩。残留物通过快速色谱法(梯度：从chcl3到在chcl3中的20％meoh)最后纯化以给出酰基化的目标化合物。实施例2αgalcer-二苯甲酮/cd1d复合物的合成合成α-galcer-二苯甲酮衍生物的基本方案示于图2中。通常，将重组的可溶性鼠科cd1d(mcd1d)在pbsph7.2中稀释到400μg/ml。将糖脂(即，α-半乳糖苷神经酰胺的二苯甲酮衍生物)溶解于100％dmso中以产生1mg/ml最后浓度且随后在含有0.1％tritonx-100的pbs中稀释到200μm。随后将糖脂悬浮液加热到80℃历时5分钟，涡旋30秒，在水浴超声器中超声处理5分钟，且最后涡旋30秒。随后加入等体积的cd1d和糖脂储备物以给出200μg/mlcd1d(约4μm)、100μm糖脂和0.05％tritonx-100的最后浓度且允许在室温下培育过夜(16小时)。将cd1d复合物转移到弱结合的96孔板(100μl/孔)中以便将蛋白质共价连接到在其配体结合位点中存在的糖脂。将在固定的λ365下发射的长波uv灯(schleider&schuell)置于样品水平面上方1英寸处并将复合物在冰上照射1小时。最后结果是cd1d蛋白质与αgalcer-二苯甲酮糖脂共价结合。实施例3有和没有糖脂配体的mcd1d的色氨酸荧光光谱试验与小鼠cd1d结合的糖脂的作用。mcd1d由于糖脂结合引起的荧光猝灭使用horibojobinyvonfluoromax-3荧光分光光度计测量且数据使用fluoressence软件分析。将蛋白质(0.1μm)与糖脂抗原(在4μm)下或配体赋形剂在1cm宽的石英样品池中混合到最终体积100μl，并将其置于已经设定在25℃下的光谱仪中。样品在λ295下激发且测量λ290-λ400的发射。对于荧光发射最大值没有发现波长的位移，但所有糖脂都引起各种水平的荧光淬灭，这指示配体结合引起可观察到的cd1d结构变化。结果示于图3中。这些结果显示，与其它二苯甲酮改性的糖脂(bpgc)相比较，db12-7诱发最大程度的淬灭，提示与所试验的其它糖脂相比较，与该糖脂具有较高的结合亲和性。尽管这指示db12-7为来自该组的最渴望的结合配体，但该分析并未提供关于由这些糖脂的结合形成的复合物是否产生对于由inkt细胞抗原受体和生物活性识别的适当结构的信息。实施例4nkt细胞的激活(用表达mcd1d的dc)激活的自然杀伤细胞基于分泌il-2的那些计算。具体地讲，将来自c57bl/小鼠的骨髓源树状细胞(bmdc)(10,000个细胞，在100μl培养基中)铺在96孔组织培养板的孔中并允许在37℃下附着到板上历时30分钟。随后将培养物在37℃下暴露以使得bpgc浓度在100μl中在5μg/ml和0.01μg/ml之间变化历时3小时。未被bmdc吸收的糖脂通过用培养基洗涤除去。为了检测由cd1d实现的bpgc递呈，加入inkt杂交瘤dn3a4-1.2(5000个细胞，在100μl体积中)且在37℃下培育18小时之后通过在上清液中分泌的il-2的水平检测刺激。结果示于图4中。这些结果显示db11-2在0.1μg/ml的低浓度下最有效地刺激inkt，且在该测定中在该组糖脂之中就生物活性而言db11-2是最有效的。db12-7诱发较低但仍然显著的il-2分泌。实施例5nkt细胞的激活(用表达hcd1d的希拉细胞)激活的自然杀伤细胞再次基于分泌il-2的那些计算。具体地讲，将板结合的人类cd1d转染的希拉细胞(10,000个细胞，在100μl培养基中)铺在96孔组织培养板中并允许在37℃下附着到板上历时30分钟。在37℃下将粘附希拉细胞用在100μl中在5μg/ml和0.01μg/ml之间的变化bpgc浓度处理历时3小时。未被细胞吸收的糖脂通过用培养基洗涤除去。为了检测由cd1d实现的bpgc递呈，加入inkt杂交瘤dn3a4-1.2(5000个细胞，在100μl体积中)且在37℃下培育18小时之后通过在上清液中分泌的il-2的水平检测刺激。结果示于图5中。这些结果证实db11-2和db12-8在由人类cd1d递呈时刺激inkt细胞，且db11-2和db12-8以0.1μg/ml的低浓度有效递呈。实施例6检测在有和没有uv激活的情况下板结合的mcd1d的配体结合亲和性(通过elisa使用mabl363)板结合的mcd1d的配体结合亲和性通过elisa使用mabl363测量以检测鼠科cd1d/αgalcer复合物。将elisa板在4℃下在pbsph8.2中用mcd1d(10μg/ml，30μl/孔)涂覆过夜。随后将上清液与任何未结合的蛋白质一起除去。装载糖脂(5μm，30μl/孔)并允许在25℃下培育过夜。再次除去上清液且将复合物用pbs洗涤三次以除去任何未结合的糖脂。对于经历uv激活的那些复合物，uv交联在溶液(30μl/孔pbs)中且在来自uv灯(rad-free长波uv灯，schleicher&schuell)的365nm的固定波长下进行。将uv灯放置在距样品1英寸并允许样品置于冰上1小时。随后允许经历uv激活的复合物和未经历uv激活的复合物都分解3天(i.除去上清液并加入200μl的pbs+0.05％tritonx-100(pbs-tx)；ii.在25℃下培育1天，iii.重复步骤i和步骤ii两次以上)，之后进行elisa以量化mabl363的结合。结果示于图6a-6b中。显示对于cd1d和复合物的亲和性的糖脂都可使用l363elisa检测。由于在pbs-tx中培育板结合的cd1d:gc复合物3天，所以未uv交联的糖脂配体显著分解(图6a)，而紫外交联的bpgc没有显著分解(图6b)。krn7000和7dw8-5没有紫外可激活的基团且因此两者在3天之后都分解，而与uv暴露无关。这些结果显示db12-8、db11-2和db12-9在该测定中具有最高水名的免疫活性复合物形成，并且这些复合物在uv暴露之后没有显示出显著的分解。实施例7检测在有和没有uv激活的情况下板结合的mcd1d的配体结合亲和性(inktdn3a4-1.2杂交瘤刺激测定)板结合的mcd1d的配体结合亲和性通过inktdn3a4-1.2杂交瘤刺激测定检测。在25℃下将mcd1d(10μg/ml)装载上糖脂(5μm)过夜。在4℃下在pbsph8.2中将elisa板用mcd1d:gc复合物(2.5μg/ml，30μl/孔)涂覆12-18小时。随后除去上清液且将复合物用pbs洗涤三次以除去任何未结合的糖脂和蛋白质。对于经历uv激活的那些复合物，uv交联在溶液(30μl/孔pbs)中且在来自uv灯(rad-free长波uv灯，schleicher&schuell)的365nm的固定波长下进行。将uv灯放置在距样品1英寸并允许样品置于冰上1小时。随后除去上清液且将复合物用pbs洗涤三次以除去任何未结合的糖脂和蛋白质。随后允许经历uv激活的复合物和未经历uv激活的复合物都分解3天(i.除去来自孔的任何残留的液体并加入200μl/孔的pbs+0.05％tritonx-100，ii.在25℃下培育24小时，iii.重复步骤i和步骤ii两次以上)。随后加入inkt杂交瘤dn3a4-1.2细胞(约30,000个细胞)并允许在37℃下培育24小时。复合物的inkt刺激活性由inkt分泌的il-2elisa确定。正如所料，在分解之后，7dw8-5不刺激inkt，但具有db12-7、db11-2、db12-8和db12-9的未交联的mcd1d复合物即使在分解之后也显示出一些(尽管降低的)inkt刺激，或许是因为该分解由于这些糖脂的高结合亲和性而不是绝对的。结果示于图7a-7b中。在uv交联之后inkt刺激测定的结果显示db12-8不仅有效地结合cd1d，其还比其它糖脂更好地刺激inkt杂交瘤。在此还证实db11-2为inkt杂交瘤dn3a4-1.2的第二佳的刺激剂。实施例8db12-8和7dw8-5复合物与mcd1d的直接比较(通过l363elisa检测)在25℃下在具有0.05％泰洛沙泊(tyloxapol)的pbsph8.2中将可溶性重组mcd1d蛋白质(10μg/ml)装上糖脂(5μm)过夜。在4℃下将mcd1d:gc复合物(10μg/ml，30μl/孔)涂覆到高结合elisa板上过夜。uv暴露和培育以允许经3天分解如在实施例6和7中所述进行。结果示于图8a-8b中。db12-8和7dw8-5两者显示对cd1d的亲和性且复合物可使用l363elisa检测。允许延长分解3天导致7dw8-5的信号几乎完全丢失，而与uv暴露无关。db12-8也几乎完全分解，但仅在非uv交联状态下，在365nm下uv暴露共价偶合mcd1d:db12-8复合物且因此在这种情况下没有观察到分解。实施例9db12-8和7dw8-5复合物与mcd1d.cea融合蛋白的直接比较(通过l363elisa检测)在25℃下在具有0.05％泰洛沙泊的pbsph8.2中将mcd1d.cea(10μg/ml)装载上糖脂(5μm)过夜，mcd1d.cea为与对肿瘤相关抗原cea具有特异性的单链fv抗体片段遗传融合的重组mcd1d蛋白质。在4℃下将mcd1d.cea:gc复合物(10μg/ml，30μl/孔)涂覆到高结合elisa96孔板的孔上过夜。uv暴露和培育以允许经3天分解如在实施例6和7中所述进行。结果示于图9a-9b中。db12-8和7dw8-5两者显示对cd1d的亲和性且复合物可使用l363elisa检测。允许延长分解3天导致7dw8-5的信号几乎完全丢失，而与uv暴露无关。db12-8也几乎完全分解，但仅在非uv交联状态下，在365nm下uv暴露共价偶合mcd1d.cea-db12-8复合物且因此在这种情况下没有观察到分解。结果指示在uv交联之后db12-8信号显著增加。在溶液中的复合物形成的规模扩大使用浓度增加10倍的蛋白质和糖脂进行且结果示于图9c-9d中。在25℃下在具有0.05％泰洛沙泊的pbsph8.2中将mcd1d.cea(100μg/ml)装载上db12-8(分别50μm)。将复合物稀释到10μg/ml并在4℃下涂覆到高结合elisa板(30μl/孔)上过夜。uv暴露和培育以允许经3天分解如在实施例6和7中所述进行。培育未交联的复合物3天引起od450减小约75％，而在3天之后没有检测到uv交联样品的od450降低。实施例10在注射未共价装载αgalcer的scd1d-抗-cea或与db12-8uv交联的scd1d-抗-cea之后细胞因子体内释放的直接比较。在3组小鼠的血清中干扰素γ(ifng)和干扰白细胞素-2(il-2)细胞因子释放的动力学和量值各自在用盐水或用30μg未共价装载在scd1d-抗-cea上的αgalcer或紫外交联的db12-8:scd1d-抗-cea复合物注射之后2小时、10小时和24小时确定。在诱发ifng和il-2释放方面，具有scd1d-抗-cea的共价连接的db12-8复合物的功效为未共价装载的融合蛋白的大致两倍。如在图10中所示，共价融合蛋白引起ifng的较久持续时间的释放。实施例11在用与scd1d-抗-cea融合蛋白共价连接的db12-8重复刺激inkt细胞时持续产生ifnγ。用装载αgalcer的scd1d刺激的重要生物学性质为在重复刺激之后持续产生ifng。这与用游离αgalcer刺激形成对比，如先前所述，用游离αgalcer刺激引起inkt细胞无反应力(美国申请公告2008/0254045a1号；stirnemann等，jclinicalinvest.118:994-1005,2008；其各自通过引用整体结合到本文中来)。重要的是证实该生物学性质通过共价连接的αgalcer-cd1d复合物保持。来自在实施例10中描述的实验的小鼠在第2天用与在实验起始时相同的试剂进一步再刺激且在第8天再次再刺激。在第三次注射之后1小时将小鼠处死并在固定并用cytofix/cytoperm(bd)透化之后用抗-ifng-apc将脾inkt细胞对于细胞内ifng染色。为了确定生成ifng的inkt细胞的百分数，将inkt细胞导通对于cd3-fitc和αgalcer-装载的cd1d四聚物-pe的阳性染色并在facscalibur上通过流式细胞术对于细胞内ifng的表达评分。如在图11中对于代表性小鼠所述，对照pbs处理的小鼠的小于1％的inkt细胞对于ifng染色，31％的用未共价相联的αgalcer-装载的scd1d-抗-cea刺激的小鼠inkt细胞和46％的用uv交联的db12-8:scd1d-抗-cea复合物刺激的小鼠inkt细胞对于细胞内ifng染色。这些结果证明，在用uv交联的db12-8:scd1d-抗-cea重复刺激之后由inkt细胞产生ifng至少如未共价相联的αgalcer-装载的scd1d-抗-cea复合物的情况一样持续。重要地，即使在多重注射之后，共价融合蛋白的增加的功效也与任何明显的毒性不相关。实施例12与scd1d-抗-cea融合蛋白共价连接的db12-8和未共价装载的αgc/scd1d-抗-cea融合蛋白的体内抗肿瘤活性。将四组c57bl/6小鼠或对于cea转基因的c57bl/6小鼠在侧腹用已经用人类cea(mc38-cea)稳定转染的7x105个mc38肿瘤细胞皮下移植。当肿瘤已经生长到约100mm3时，将小鼠用pbs(对照物)或等摩尔量的αgalcer(0.4μg)、未共价装载到scd1d-抗-cea融合蛋白上的αgalcer(40μg)或与scd1d-抗-cea融合蛋白共价连接的db12-8(40μg)各自以200μl体积静脉内注射治疗。治疗每4-5天重复，总共注射5次。每隔一天使用公式(长度x宽度x厚度)/2计量平均肿瘤体积。肿瘤生长的动力学(mm3)确定为在各组中所有小鼠的平均值。实施例13用于与scd1d-抗-cea融合蛋白共价连接的α-半乳糖苷神经酰胺进行体内mc38-cea肿瘤生长抑制。将3组的7只年龄和性别匹配的c57bl/6小鼠用已经被编码癌胚抗原(cea)的cdna转染的mc38肿瘤细胞移植。在移植后第7、11、15和20天用pbs、3μg的游离α-半乳糖苷神经酰胺(αgalcer)或摩尔当量的与scd1d-抗-cea融合蛋白共价连接的αgalcer(30μg)治疗小鼠。每2或3天用测径器测量肿瘤生长并使用测量结果来使用公式(长度x宽度x厚度)/2来计算肿瘤体积。在第24天将动物处死。如在图12中所示，用与scd1d-抗-cea共价连接的αgalcer治疗在抑制肿瘤生长方面比用pbs或αgalcer治疗显著更有效。如通过双向方差分析(anova)所确定，这些结果是显著的(p＝0.0079)。当前第1页1 2 3