本发明涉及用于筛选能够控制可在空调系统中引起难闻气味的微生物的抗微生物剂的方法和用于去除空调系统中的难闻气味的方法。
背景技术：
：洁净空气被认为是人类健康幸福不可或缺的成分，难闻气味或受污染的空气妨碍了怡人环境。例如，气密条件下不尽人意的室内空气质量由两大重要因素引起。一者是构成气密环境的结构(建筑或车辆)自身所产生的空气污染物，另一者是人类活动产生的气味或来自外部带入的材料的气味。用于建筑、车辆、火车、船舶、飞机等的空调系统是指出于调节空气的温度、湿度、流速和洁净度的目的而设计为降低室内温度和优化室内环境的系统。随着生活标准的改善，空调系统的使用逐渐增加。尽管空调系统的基本功能已有很大的改善，但在室内空气质量的环境方面仍然有许多问题待解决。已知空调系统特别是空调的气味成因是霉菌和细菌所产生的代谢物。然而，尚未具体鉴定出霉菌和细菌种类以及霉菌和细菌产生的物质和量。在空调系统中，通过鼓风机的所有空气通过蒸发器芯。在冷的制冷剂与空气之间热交换的过程中，在蒸发器芯的表面上由于温差而出现水凝结。当水持续凝结时，在蒸发器芯上产生有利于霉菌和细菌栖息和繁殖的环境。如果蒸发器芯上繁殖的霉菌和细菌暴露于外部空气中，作为微生物的代谢物产生微生物挥发性有机化合物(mVOC)。由此，当通过蒸发器芯的空气吹入室内时，在长期使用后室内可能因霉菌和细菌产生的挥发性有机化合物而暴露于难闻气味。在长期使用后，蒸发器芯的表面被生物膜覆盖，其包含细菌、细胞团和胞外聚合物(EPS)。EPS包括各种组分如蛋白质、多糖、聚糖醛酸、核酸、脂质等等。在蒸发器芯的表面上，各种细菌和霉菌利用生物膜作为营养物进行繁殖并产生各种微生物挥发性有机化合物(mVOC)作为代谢物，其已知是空调臭味的原因之一。虽然各类空气清新剂是市售的用于除去这种难闻气味，但它们未从根本上除去蒸发器芯上繁殖的霉菌和细菌而仅仅是暂时稀释令人不愉快的气味。此外，目前市售的抗微生物剂尚未被开发为特定地作用于蒸发器芯上繁殖的特定霉菌或细菌但也被使用，这是因为它们对一般病原体具有抗微生物作用。因此，迫切需要开发出可通过特定地抑制或防止在蒸发器芯上繁殖的霉菌和细菌的繁殖而制造怡人的室内空气环境的抗微生物剂和使用其用于除去难闻气味的方法。
背景技术：
部分的上述描述仅意在改善对本发明背景的理解，且不应被理解为承认上述技术为本发明所属
技术领域：
的普通技术人员知晓。技术实现要素：本发明的发明人致力于寻找一种有效地控制在空调系统中繁殖并引起难闻气味的微生物的方法。结果，发明人成功地筛选出12种在空调系统中繁殖、形成生物膜并引起难闻气味的微生物，并且已证实可通过控制其而显著抑制空调系统的难闻气味。因此，本发明涉及提供一种筛选针对在空调系统中引起难闻气味的微生物的抗微生物剂的方法，上述微生物选自解单端孢菌素微杆菌(Microbacteriumtrichothecenolyticum)、浅黄微杆菌(Microbacteriumflavescens)、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌(Methylobacteriumtardum)、耐辐射甲基杆菌(Methylobacteriumradiotolerans)、独岛鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasdokdonensis)、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种(Staphylococcushominissubsp.hominis)和沃氏葡萄球菌(Staphylococcuswarneri)。本发明还涉及提供在空调系统中引起难闻气味的微生物。本发明还涉及提供一种抑制在空调系统中引起难闻气味的微生物的生长的方法，其包括在空调系统中涂覆或喷洒抗微生物剂。本发明还涉及提供一种去除空调系统中的难闻气味的方法，其包括分离或杀灭在空调系统中引起难闻气味的微生物。本发明还涉及提供一种去除空调系统中的难闻气味的方法，其包括抑制在空调系统中引起难闻气味的微生物的生长。从以下详细说明、附图和权利要求，本发明的其它特征和方面将显而易见。在一方面，本发明提供一种筛选针对在空调系统中引起难闻气味的微生物的抗微生物剂的方法，其包括：(a)制备一种或多种在空调系统中引起难闻气味的微生物，所述微生物选自解单端孢菌素微杆菌、浅黄微杆菌、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌、耐辐射甲基杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌或者它们的培养物；(b)将样本与待分析的微生物接触；(c)测量微生物生长抑制或难闻气味产生的减少；和(d)当微生物生长受到抑制或者难闻气味产生减少时确定样本对微生物具有抗微生物活性。本发明的发明人致力于寻找一种有效地控制在空调系统中繁殖并引起难闻气味的微生物的方法。结果，发明人成功地筛选出12种在空调系统中繁殖同时形成生物膜并引起难闻气味的微生物，并且已证实可通过控制其而显著抑制空调系统的难闻气味。在本发明中，术语“空调系统”是指使得与外部环境完全或部分隔离的空间内部的空气维持怡人的温度、湿度、洁净度、流动等的系统。作为具体实例，隔离空间可以是与外部完全或部分隔离的室内空间，例如在建筑、车辆、火车、船只、飞机等内。作为具体实例，空调系统可以是空调。在空调系统中，通过鼓风机的所有空气经过蒸发器芯。在蒸发器芯的表面上，因温差持续使水凝结而产生有利于微生物生长的环境。结果，随着时间而形成生物膜。微生物将室内或室外空气中漂浮的各种物质作为营养物代谢并产生各种微生物挥发性有机化合物(mVOC)作为代谢物，其发出难闻气味。生物膜是附在膜内的一组活微生物。该膜保护微生物免受外部环境影响并提供营养物。该膜包括胞外聚合物(EPS)，其包括各种组分如蛋白质、多糖、聚糖醛酸、核酸、脂质等等。在蒸发器芯的表面上，各种微生物利用其作为营养物进行繁殖并产生发出难闻气味的代谢物。本发明的发明人已从蒸发器芯筛选出造成难闻气味的微生物并通过培养从形成菌落的微生物中分离出优势菌株。可根据相关领域中已知的各种方法来分离和培养优势菌株，并且可基于稀释比或形态学特征例如菌落的颜色、大小、形状等来进行筛选。优势菌株包括微杆菌(Microbacterium)菌属、甲基杆菌(Methylobacterium)菌属、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas)菌属或葡萄球菌(Staphylococcus)菌属的微生物，优选微杆菌属中的两个物种(解单端孢菌素微杆菌或浅黄微杆菌)、甲基杆菌属中的四个物种(Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌或耐辐射甲基杆菌)、鞘氨醇单胞菌属中的四个物种(独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi或Sphingomonasmelonis)或葡萄球菌属中的两个物种(人葡萄球菌人亚种或沃氏葡萄球菌)。这些微生物于2013年2月26日保藏在韩国微生物保藏中心(KoreanCultureCenterofMicroorganisms)并被给予以下保藏号：解单端孢菌素微杆菌HKMC-112(保藏号：KCCM11395P)、浅黄微杆菌HKMC-104(保藏号：KCCM11387P)、MethylobacteriumdankookenseHKMC-101(保藏号：KCCM11384P)、MethylobacteriumphyllosphaeraeHKMC-102(保藏号：KCCM11385P)、慢生甲基杆菌HKMC-103(保藏号：KCCM11386P)、耐辐射甲基杆菌HKMC-111(保藏号：KCCM11394P)、独岛鞘氨醇单胞菌HKMC-105(保藏号：KCCM11388P)、SphingomonasginsenosidimutansHKMC-106(保藏号：KCCM11389P)、SphingomonashumiHKMC-107(保藏号：KCCM11390P)、SphingomonasmelonisHKMC-108(保藏号：KCCM11391P)、人葡萄球菌人亚种HKMC-109(保藏号：KCCM11392P)和沃氏葡萄球菌HKMC-110(保藏号：KCCM11393P)。引起难闻气味的微生物可在工业上适用于多种目的。例如，可利用它们来开发能够抑制微生物生长的新型抗微生物剂或者通过鉴定微生物代谢物的化学特性而开发去除难闻气味的空气清新剂。此外，可利用它们通过对空调系统提供上述微生物无法生存的环境而从根本上去除难闻气味的成因。在本发明的筛选抗微生物剂的方法中使用的样本是确定其是否对微生物具有抗微生物活性的那些。例如，如果一特定样本对Methylobacteriumdankookense具有抗微生物活性，则该样本被筛选作为抗Methylobacteriumdankookense的抗微生物剂。优选地，通过本发明的筛选方法筛选出的抗微生物剂可对选自解单端孢菌素微杆菌、浅黄微杆菌、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌、耐辐射甲基杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌的一种或多种具有抗微生物活性。更优选地，其还可对其它微生物物种具有抗微生物活性。例如，一些抗微生物剂可对所有12种微生物物种具有抗微生物活性且另一抗微生物剂可对这些物种中的一种或多种完全没有抗微生物活性。此外，对所有12种微生物物种具有抗微生物活性的抗微生物剂可对不同的微生物具有不同的抗微生物活性(参见表8和表9)。在本发明的一个优选实施方式中，通过本发明的筛选方法筛选出的抗微生物剂可对选自解单端孢菌素微杆菌HKMC-112(保藏号：KCCM11395P)、浅黄微杆菌HKMC-104(保藏号：KCCM11387P)、MethylobacteriumdankookenseHKMC-101(保藏号：KCCM11384P)、MethylobacteriumphyllosphaeraeHKMC-102(保藏号：KCCM11385P)、慢生甲基杆菌HKMC-103(保藏号：KCCM11386P)、耐辐射甲基杆菌HKMC-111(保藏号：KCCM11394P)、独岛鞘氨醇单胞菌HKMC-105(保藏号：KCCM11388P)、SphingomonasginsenosidimutansHKMC-106(保藏号：KCCM11389P)、SphingomonashumiHKMC-107(保藏号：KCCM11390P)、SphingomonasmelonisHKMC-108(保藏号：KCCM11391P)、人葡萄球菌人亚种HKMC-109(保藏号：KCCM11392P)和沃氏葡萄球菌HKMC-110(保藏号：KCCM11393P)中的一种或多种具有抗微生物活性。在本发明的一个优选示例性实施方式中，待筛选的样本包括单一化合物、化合物混合物、动物或植物提取物、包含遗传信息的生物剂例如核苷酸、多肽等、以及化合物和生物剂的混合物。在另一方面，本发明提供在空调系统中引起难闻气味的微生物。引起难闻气味的微生物可优选是解单端孢菌素微杆菌，更优选是以保藏号KCCM11395P保藏的解单端孢菌素微杆菌HKMC-112。引起难闻气味的微生物可优选是浅黄微杆菌，更优选是以保藏号KCCM11387P保藏的浅黄微杆菌HKMC-104。引起难闻气味的微生物可优选是Methylobacteriumdankookense，更优选是以保藏号KCCM11384P保藏的MethylobacteriumdankookenseHKMC-101。引起难闻气味的微生物可优选是Methylobacteriumphyllosphaerae，更优选是以保藏号KCCM11385P保藏的MethylobacteriumphyllosphaeraeHKMC-102。引起难闻气味的微生物可优选是慢生甲基杆菌，更优选是以保藏号KCCM11386P保藏的慢生甲基杆菌HKMC-103。引起难闻气味的微生物可优选是耐辐射甲基杆菌，更优选是以保藏号KCCM11394P保藏的耐辐射甲基杆菌HKMC-111。引起难闻气味的微生物可优选是独岛鞘氨醇单胞菌，更优选是以保藏号KCCM11388P保藏的独岛鞘氨醇单胞菌HKMC-105。引起难闻气味的微生物可优先是Sphingomonasginsenosidimutans，更优选是以保藏号KCCM11389P保藏的SphingomonasginsenosidimutansHKMC-106。引起难闻气味的微生物可优选是Sphingomonashumi，更优选是以保藏号KCCM11390P保藏的SphingomonashumiHKMC-107。引起难闻气味的微生物可优选是Sphingomonasmelonis，更优选是以保藏号KCCM11391P保藏的SphingomonasmelonisHKMC-108。引起难闻气味的微生物可优选是人葡萄球菌人亚种，更优选是以保藏号KCCM11392P保藏的人葡萄球菌人亚种HKMC-109。引起难闻气味的微生物可优选是沃氏葡萄球菌，更优选是以保藏号KCCM11393P保藏的沃氏葡萄球菌HKMC-110。在另一方面，本发明提供抑制在空调系统中引起难闻气味的微生物的生长的方法，其包括在空调系统中涂覆或喷洒抗微生物剂。可用于本发明中的抗微生物剂可以是任何测定为或能够被测定为对选自解单端孢菌素微杆菌、浅黄微杆菌、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌、耐辐射甲基杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌的微生物中的一种或多种具有抗微生物活性或者对包含以上所列微生物中至少一种的微生物具有抗微生物活性的抗微生物剂。可将抗微生物剂涂覆或喷洒在空调系统中以抑制选自解单端孢菌素微杆菌、浅黄微杆菌、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌、耐辐射甲基杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌的一种或多种引起难闻气味的微生物的生长或者抑制包含以上所列微生物中至少一种的微生物的生长。可以以本领域已知的各种形式例如气体、液体、凝胶、悬浮液等涂覆或喷洒抗微生物剂。可在空调系统的内表面上或内部组件上部分地或完全地进行涂覆或喷洒。优选地，可以在空调系统中的蒸发器芯上进行涂覆或喷洒。可以在选自解单端孢菌素微杆菌、浅黄微杆菌、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌、耐辐射甲基杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌的一种或多种微生物或者包含以上所列微生物中至少一种的微生物已形成生物膜之后，或者在选自解单端孢菌素微杆菌、浅黄微杆菌、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌、耐辐射甲基杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌的一种或多种微生物或者包含以上所列微生物中至少一种的微生物形成生物膜之前，进行涂覆或喷洒。蒸发器芯可以由任意材料制成。优选地，蒸发器芯可以由铝、铝合金、铜或铜合金制成。在另一方面，本发明提供一种去除空调系统中的难闻气味的方法，其包括在空调系统中涂覆或喷洒抗微生物剂。可进行涂覆或喷洒以去除所有的或部分的难闻气味，或者在难闻气味产生之前进行涂覆或喷洒以防难闻气味。多种微生物在空调系统中繁殖。那些微生物可大致分为引起难闻气味的微生物和不引起难闻气味的微生物。因此，如果抗微生物剂仅特定作用于引起难闻气味的微生物或者对引起难闻气味的微生物之中所有或部分的优势物种的生长具有抑制活性，那么空调系统的难闻气味可以得到部分或完全改善。在另一方面，本发明提供一种去除空调系统中的难闻气味的方法，其包括分离或杀灭一种或多种在空调系统中引起难闻气味的微生物，所述微生物选自解单端孢菌素微杆菌、浅黄微杆菌、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌、耐辐射甲基杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌。可通过物理、化学或生物学方法部分或完全地分离或者杀灭上述微生物或者包含以上所列微生物中至少一种的微生物。物理方法可以是利用物理装置人为分离或杀灭上述微生物或者包含以上所列微生物中至少一种的微生物的方法。化学方法可以是利用针对上述微生物的抗微生物剂或灭菌器来分离或杀灭上述微生物或者包含以上所列微生物中至少一种的微生物的方法。生物学方法可以是利用对上述微生物有毒性的生物剂或者利用另一与上述微生物竞争生存的微生物来分离或杀灭上述微生物的方法。然而，本发明并不限于这些实例。在另一方面，本发明提供一种去除空调系统中的难闻气味的方法，其包括抑制一种或多种在空调系统中引起难闻气味的微生物的生长，上述微生物选自解单端孢菌素微杆菌、浅黄微杆菌、Methylobacteriumdankookense、Methylobacteriumphyllosphaerae、慢生甲基杆菌、耐辐射甲基杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonasginsenosidimutans、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌。本公开的特征和优点可总结如下：(i)本发明提供在空调系统中引起难闻气味的微生物。(ii)本发明还提供一种用于筛选能够控制上述微生物的抗微生物剂的方法。(iii)此外，本发明提供一种通过控制上述微生物而去除空调系统中的难闻气味的方法。(iv)可利用本发明的在空调系统中引起难闻气味的微生物来开发新型抗微生物剂，或者，利用它们通过鉴定微生物代谢物的化学特性来开发空气清新剂用于去除难闻气味。此外，可利用它们通过对空调系统提供上述微生物无法生存的环境而从根本上去除难闻气味的成因。附图说明图1显示取自发出难闻气味的旧车的蒸发器芯的样本。图2显示根据本发明的测试抗微生物活性的方法。图3显示在铝翅片上培养的优势无气味微生物的组合，其中铝是蒸发器芯的材料。具体实施方式将通过实施例更详细地说明本发明。以下实施例仅用于示例性目的，对于本领域普通技术人员而言明显的是，本发明的范围不限于实施例。实施例实施例1：筛选引起难闻气味的优势微生物1.发出难闻气味的旧车的准备和空调系统的分离为了鉴定在气密性环境例如车辆内部中引起难闻气味的成因，从在不同季节(冬季：二月-三月，夏季：六月-七月)发出难闻气味的10辆旧车分离出空调系统。接着，从蒸发器芯取得样本，预期在这些蒸发器芯之上形成有在空调系统中引起难闻气味的微生物的生物膜(表1)。表12.蒸发器芯样本的准备在使用蒸发器芯样本之前，将从发出难闻气味的旧车1-10分离出的蒸发器芯保存于4℃温度下并密封在聚乙烯袋中。为分离和培养微生物，使用灭菌的尖嘴钳从各蒸发器芯的随机部位包括前表面和后表面取5g样本(图1)。3.微生物的分离如下从取自蒸发器芯的样本分离微生物：1)将从蒸发器芯取得的样本混合并放入混合器中。2)将200mL灭菌的1x磷酸缓冲液(PBS)加至混合器。3)将混合的样本与PBS混合30秒。4)将混合器置于冰上1分钟。5)将步骤3)和4)重复两遍或更多遍。6)将所得的悬浮液在4℃的温度下于13000rpm离心3分钟。7)仅将上清液取出并转移到新管中。8)将经过取样的蒸发器芯表面用经上清液浸泡过的灭菌棉拭子擦拭几遍。9)将棉拭子的头部放入上清液中并使之涡旋。10)将在步骤6)中得到的沉淀和9)中得到的混合物进行混合并用作接种溶液。经由步骤1)～10)将微生物从车辆1-10的蒸发器芯中物理分离。4.引起难闻气味的微生物的分离和优势物种的筛选通过在异养平板上培养从空调中分离通常称为正常菌群的好氧异养细菌。将PTYG琼脂培养基和R2A琼脂培养基用作复合营养培养基，通过在28-30℃的温度下培养14天来分离正常细菌。通过向980mL蒸馏水添加0.25g蛋白胨(Difco)、0.25g胰胨(Difco)、0.5g酵母提取物(Difco)、0.5g葡萄糖(Difco)、30mgMgSO4(Sigma)、3mgCaCl2(Sigma)和15gBacto琼脂(Difco)，并在pH调整到7.0后在高压下于121℃的温度下灭菌15分钟，从而制备PTYG琼脂培养基。通过向980mL蒸馏水添加0.5g酵母提取物(Difco)、0.5g蛋白胨No.3(Difco)、0.5g酪蛋白氨基酸(Difco)、0.5g右旋糖(Difco)、0.5g可溶淀粉(Difco)、0.3g丙酮酸钠(Difco)、0.3g硫酸钾(Difco)、0.05g硫酸镁(Difco)和15gBacto琼脂(Difco)，并在pH调整到7.2后在高压下于121℃的温度下灭菌15分钟，由此来制备R2A琼脂培养基。为分离非优势细菌，通过在将培养基过滤灭菌到100ppm浓度后在50℃的温度下接种卡那霉素、氨苄青霉素或氯霉素来制备抗生素培养基。基于稀释率或形态学特征例如菌落的颜色、大小、形状等，按照如下步骤分离并培养优势菌株。1)从分离培养用培养基中分离霉菌和细菌。2)通过使用接种环向复合培养基接种来分离表现出不同形态的细菌。3)从接种的培养基选择显示出最佳生长状态的细菌培养物并对其传代培养。4)在使用手术刀去除菌丝尾部后，向复合培养基接种霉菌。5)从接种的培养基中选择显示出最佳生长状态的真菌培养物并对其传代培养。5.优势微生物的分离为准确地鉴定分离的微生物，如下进行16srRNA分析。a)基于REP-PCR图样分析的指纹分析(fingerprinting)REP-PCR是用于细菌染色体的结构分析的分子生物学指纹分析技术，其允许区分各个细菌菌株。如下通过REP-PCR分析遗传学表征。(1)细胞裂解1)将2.5μL的Lyse-N-GoPCR试剂(Thermo)添加至PCR管。2)在干净的工作台上，将菌落用移液管移取到管上。在移液管移动期间，小心操作从而所得溶液不变浑浊。3)根据制造商的说明书，在PCR仪上进行培养。(2)PCR反应使用如表2所述制备的PCR试剂，通过在93℃的温度下进行7分钟预变性并将92℃温度下1分钟变性、51.5℃温度下1分钟退火和65℃温度下8分钟延伸重复33次循环来进行PCR扩增，如表3所述。表2表3(3)凝胶电泳在将6x染料与样本以1:5的比率混合后，将PCR扩增的DNA片段加载在补充有EtBr的1.2-1.5％琼脂糖凝胶上。由于大部分PCR产物在100-1000bp的范围内，它们与100bp的梯状条带一起进行加载。之后，尽可能慢地(50V)进行电泳，从而使溴酚蓝和二甲苯蓝染料移动整块胶的半程。在胶上显示出相同DNA图样的菌株被认为是同一菌株。b)基于16SrRNA基因分析鉴定来自空调的优势细菌将16S核糖体核糖核酸(rRNA)基因用于细菌的遗传鉴定。通过REP-PCR鉴别出的细菌可以在属和种的水平上鉴定。(1)细胞裂解1)将5μL的Lyse-N-GoPCR试剂(Thermo)添加至PCR管。2)在干净的工作台上，将菌落用移液管移取到管上。进行移液使得所得溶液变得微浊。3)根据制造商的说明在PCR仪上进行细胞裂解(表4)。表4：裂解程序循环温度(℃)时间(秒)165302830365904971805860665180(2)16SrRNAPCR将下表5所示的除DNA和Taq以外的溶液的混合物(44.5μL)添加到上述的裂解液中(表5中50μL的总体积)。接下来，通过在94℃温度下进行5分钟预变性并将94℃温度下1分钟变性、55℃温度下1分钟退火和72℃温度下1分30秒延伸重复29个循环来进行PCR扩增，如表6所示。表5高压灭菌3°D.W.22μL10x缓冲液(Roche)5μLdNTP(Roche，2.5mM)5μLDMSO5μLBSA(10mg/mL)2.5μL27mf(20皮摩尔/μL)2.5μL1492r(20皮摩尔/μL)2.5μLDNA5μLTaq(Roche)0.5μL表6(3)PCR纯化如下使用QIAquickPCR纯化试剂盒来纯化16SrRNAPCR产物。1)将PCR产物加至5xPB缓冲液。2)将所得溶液转移到QIAquick柱。3)对于DNA结合，将溶液离心1分钟然后去除过滤的溶液。4)对于洗涤，将750μLPE缓冲液加入QIAquick柱并进行1分钟离心，然后去除过滤的溶液。5)进行1分钟离心。6)将QIAquick柱转移到新管中。7)对于DNA提取，加入30μLEB缓冲液，并使所得溶液静置1分钟。8)在进行1分钟离心后，在管中收集溶于EB中的DNA。为了观察所分离的微生物是否发出难闻气味，如下进行感官评价。1)将分离的微生物接种到液体营养培养基中。2)在28℃的温度下培养5-7天。3)将100μL在液体培养基中培养的微生物接种到固体营养培养基中。4)使用涂布器将接种的微生物均匀铺开。5)在28℃温度下在密封的陪替氏培养皿上培养微生物10天。由7人专家小组按5分制基于感官评价的平均值来筛选引起难闻气味的优势微生物。如下表7所示，通过16SrRNA分析总共鉴定出12种优势物种，并于2013年2月26日将它们保藏在韩国微生物保藏中心。表7：引起难闻气味的12种优势微生物的保藏号实施例2：评估抗微生物剂针对筛选的引起难闻气味的微生物的抗微生物活性1.实验步骤对多种市售的抗微生物剂对实施例1中筛选出的优势微生物的抗微生物活性进行评价。测试的抗微生物剂如下：抗微生物剂A：购自P&G韩国的织物除臭剂。抗微生物剂B：购自Paru公司的洗手液。抗微生物剂C：大批生产的含有45-50％甲醇、1-5％硫酸铬(CAS10101-53-8)、1-5％溴和水的抗微生物剂。抗微生物剂D：阳离子抗微生物剂(Parkerizing，日本)。抗微生物剂E：基于异噻唑啉酮的含有甲基异噻唑啉酮(CAS26172-55-4)、溴硝醇(CAS52-51-7)等的抗微生物剂(Parkerizing，日本)。如下评价抗微生物活性：1)准备灭菌滤纸。2)准备五种抗微生物剂(对照组：未用抗微生物剂处理，测试组：用抗微生物剂A、抗微生物剂B、抗微生物剂C、抗微生物剂D和抗微生物剂E进行处理)。3)将各抗微生物剂加至滤纸。4)将引起难闻气味的各微生物涂覆至营养培养基。5)将添加了抗微生物剂的滤纸置于涂覆有引起难闻气味的微生物的营养培养基上。6)在28-30℃的温度下培养微生物5天。7)测量生长抑制区。使用游标卡尺测量生长抑制区的直径，如图2所示。2.实验结果12种引起难闻气味的微生物物种的生长抑制区的直径测量结果示于表8中。表8：生长抑制区的直径(单位：mm)将阳离子抗微生物剂(抗微生物剂D)和基于异噻唑啉酮的抗微生物剂(抗微生物剂E)的抗微生物活性与大批生产的抗微生物剂(抗微生物剂C)的抗微生物活性进行比较，结果示于下表9中。表9：与大批生产的抗微生物剂的抗微生物活性相较的阳离子抗微生物剂和基于异噻唑啉酮的抗微生物剂的抗微生物活性如以上表8和表9所示，抗微生物剂A对慢生甲基杆菌、Sphingomonasginsenosidimutans、人葡萄球菌人亚种和沃氏葡萄球菌完全未表现出抗微生物活性。尽管不同于抗微生物剂A，抗微生物剂B对Sphingomonasginsenosidimutans显示出抗微生物活性，但其对耐辐射甲基杆菌未显示出抗微生物活性。此外，抗微生物剂C对慢生甲基杆菌未显示出抗微生物活性。相比之下，抗微生物剂D和E对所有12种微生物物种显示出抗微生物活性。然而，与抗微生物剂C相比，抗微生物剂D对浅黄微杆菌、独岛鞘氨醇单胞菌、Sphingomonashumi、Sphingomonasmelonis、沃氏葡萄球菌和解单端孢菌素微杆菌显示出更低的抗微生物活性。对于属于同一甲基杆菌菌属中的微生物，与抗微生物剂D相较，抗微生物剂E对Methylobacteriumdankookense和耐辐射甲基杆菌显示出更特异性的抗微生物活性，并且与抗微生物剂E相较，抗微生物剂D对Methylobacteriumphyllosphaerae和慢生甲基杆菌显示出更特异性的抗微生物活性。换言之，抗微生物剂对属于同一菌属的不同微生物显示出不同的抗微生物活性。实施例3：对去除了引起难闻气味的微生物的蒸发器芯的气味的评价为制备出其中引起难闻气味的微生物被去除或分离的蒸发器芯，将从栖息在蒸发器芯的优势菌株中排除了实施例1的引起难闻气味的微生物的无气味微生物组合在铝翅片上进行培养，其中铝是蒸发器芯的材料(表10，图3)。将在蒸发器芯上形成菌落但不引起难闻气味的优势物种选择作为无气味微生物并如下进行培养。1)将分离的无气味微生物接种到液体R2A培养基中。2)在28℃温度下培养微生物5-7天。3)制备于高压下在121℃温度下灭菌20分钟的铝翅片。4)用各抗微生物剂均匀涂覆铝翅片的表面。5)将涂覆的铝翅片置于陪替氏培养皿上。6)将1mL的无气味微生物培养物离心并弃掉上清液。7)在添加1mL的灭菌1xPBS后，将混合物再次离心。8)重复步骤7)两次。9)将经PBS洗涤的100μL无气味微生物培养物滴至铝翅片中央。10)在室温下干燥铝翅片。11)在将陪替氏培养皿密封后，于28℃下培养无气味微生物1月。结果，发现下表10中描述的所有组合不引起难闻气味。表10：在引起难闻气味的微生物被去除的蒸发器芯上栖息的微生物的气味从表10可见，可通过用化学方式或物理方式从栖息在空调系统的微生物去除引起难闻气味的微生物并提供不引起难闻气味的微生物组合，可以显著去除空调系统中产生的难闻气味。本发明已经参考其具体实施方式进行了详细描述。然而，本领域技术人员将意识到，在不背离本发明原理和精神的情况下可以在这些实施方式中做出多种变化和修改，本发明的范围由所附权利要求及其等价方式限定。本发明的在空调系统中引起难闻气味的微生物在工业上可适用于各种目的。例如，可利用它们来开发能够抑制微生物生长的新型抗微生物剂或者通过阐明微生物代谢物的化学性质来开发用于去除难闻气味的空气清新剂。此外，可利用它们通过对空调系统提供上述微生物无法生存的环境来从根本上消除难闻气味的成因。当前第1页1 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